人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响

目的:观察人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells,PBMCs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)增殖分化的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:建立人PBMCs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人外周血单个核细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果:3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为4.5×104及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组HPLFs细胞计数有显著性差异(P<0.05)。transwell共培养组与对照组相比,在3 d时,两组HPLFs分泌型ALP活性有显著性差异(P<0.05),5 d及7 d时差异尤其显著(P<0.01),tran-swell共培养组HPLFs分泌型ALP活性低于对照组。结论:人PBMCs能促进HPLFs的增殖,但抑制HPLFs分泌型ALP活性。     

成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞生物学特性的影响

[摘要] 目的 观察成骨细胞(osteoblast cells,OBs)对人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)生物学特性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法 建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察成骨细胞对人牙周膜成纤维细胞增殖和分化的影响。结果 3 d和5 d时,共培养组HPLFs细胞计数分别为3.5×10~4个/ml及7.5×10~4个/ml,均明显低于对照组HPLFs细胞计数,且差异有统计学意义(P<0.05)。HPLFs碱性磷酸酶(ALP)活性比较中,transwell共培养组HPLFs ALP活性高于对照组。在3 d时,差异有统计学意义(P<0.05),5 d及7 d时差异也有统计学意义(P<0.01)。结论 人OBs可能抑制HPLFs的增殖,促进HPLFs ALP活性。     

辛伐他汀对人牙周膜细胞增殖和分化的影响

目的:研究辛伐他汀对人牙周膜细胞增殖和成骨分化的影响.方法:将第4 代人牙周膜细胞在条件矿化培养液中诱导培养,同时加入不同浓度的辛伐他汀(10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L),噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)法检测细胞增殖情况,4-硝基苯基磷酸二钠盐(4-nitrophenyl phosphate,hexahydrate,PNPP)偶氮法检测碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)活性.结果:辛伐他汀各浓度组均能促进人牙周膜细胞的增殖和分化,其中10-8、10-7、10-6 mol/L组与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05),10-7 mol/L的辛伐他汀组促进细胞增殖和ALP活性的作用最明显.结论:适宜浓度的辛伐他汀可有效促进人牙周膜细胞的增殖和成骨分化.     

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目的探讨雷洛昔芬对体外分离培养的人牙周膜成纤维细胞的增殖及分化能力的影响。方法本研究于2012年10月至2013年6月在福建医科大学附属口腔医院进行。采用组织块法体外分离培养人牙周膜成纤维细胞,分别给予不同浓度的雷洛昔芬进行培养,以17β-雌二醇（10 nmol/L）为阳性对照,单纯DMEM培养液为空白对照。观察雷洛昔芬对人牙周膜成纤维细胞增殖及分化能力的影响。结果与空白对照组相比,17β-雌二醇及不同浓度雷洛昔芬（1~1000 nmol/L）可显著刺激人牙周膜成纤维细胞的增殖（P〈0.01）,雷洛昔芬最大促增殖浓度为10 nmol/L。17β-雌二醇及浓度为1~100 nmol/L的雷洛昔芬可显著提高人牙周膜成纤维细胞碱性磷酸酶的表达（P〈0.01）,但1000 nmol/L雷洛昔芬对细胞碱性磷酸酶的表达无明显促进作用（P〉0.05）。17β-雌二醇及不同浓度雷洛昔芬（10及100 nmol/L）可显著提高人牙周膜成纤维细胞体外矿化能力,与空白对照组相比差异有显著性（P〈0.05）。100 nmol/L雷洛昔芬对细胞体外矿化能力的作用最明显。结论雷洛昔芬可提高体外培养的人牙周膜成纤维细胞的增殖、分化及矿化能力。     

辛伐他汀对人牙周膜细胞成骨活性的影响

目的研究辛伐他汀对人牙周膜细胞成骨活性的影响。方法将第3代人牙周膜细胞在条件矿化培养液中诱导培养,同时加入不同浓度的辛伐他汀,将其分为A组（0 mol/L）、B组（1×10-9 mol/L）、C组（1×10-8 mol/L）、D组（1×10-7 mol/L）、E组（1×10-6 mol/L）,分别检测碱性磷酸酶活性、骨桥蛋白（OPN）表达,并对矿化结节进行计数。结果辛伐他汀各浓度组（1×10-9、1×10-8、1×10-7、1×10-6 mol/L）均能促进人牙周膜细胞的成骨分化和矿化,其中1×10-8、1×10-7、1×10-6 mol/L与对照组比较,差异有统计学意义（P<0.05）,1×10-7 mol/L的辛伐他汀组促进成骨活性的作用最明显。结论适宜浓度的辛伐他汀可以有效促进人牙周膜细胞的成骨活性。     

IL - 1β对人牙周膜成纤维细胞的增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的以体外培养的人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)为研究对象,观察IL-1β对HPLFs的增殖和碱性磷酸酶(ALP)表达的影响,旨在从细胞学水平探索IL-1β在牙周炎的发生、发展、及转归中的作用.方法取酶消化法培养的第6代细胞,随机分5个实验组及1个对照组,实验组分别加入含系列浓度IL-1β (0.1ng/ml、0.5ng/ml、1ng/ml、5ng/ml、10ng/ml) 的α- MEM培养液,对照组加入含1% FBS的α- MEM培养液,分别测定MTT和ALP活性;加入浓度为10ng/ml的 IL-1β的α- MEM培养液,观察IL - 1β对HPLFs的ALP活性影响的时间效应.结果MTT实验结果表明,不同浓度的IL-1β对HPLFs的增殖与对照组相比无显著差异(P>0.05); IL-1β对HPLFs的HPLFs活性有抑制作用,显著低于空白对照组(P<0.05);浓度为10ng/ml 的IL-1β作用于HPLFs,其 ALP活性显著低于空白对照组(P<0.05).结论IL-1β在牙周炎的早期阶段可能对HPLFs的增殖无显著影响; 但在牙周炎的修复过程中IL-1β可能通过抑制 HPLFs的 ALP活性,阻止HPLFs分化为成骨细胞,从而抑制牙周炎病灶区的骨性修复.     

辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:评价辛伐他汀对人牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响。方法:采用组织块法进行人牙周膜成纤维细胞的分离培养。在培养液中加入不同浓度的辛伐他汀,分为对照组(0 mol/L)和5个实验组(10-8、10-7、10-6、10-5和10-4mol/L),检测各组细胞增殖能力和碱性磷酸酶活性。通过矿化结节茜素红染色和RT-PCR,评价辛伐他汀对细胞成骨能力和成骨相关基因表达的影响。结果:辛伐他汀浓度为10-7mol/L时,细胞增殖能力显著提高(P﹤0.05)。辛伐他汀浓度为10-8、10-7、10-6和10-5mol/L时,细胞碱性磷酸酶活性均有显著增强(P﹤0.05),其中,10-7mol/L组增强作用最明显。茜素红染色显示,10-7mol/L辛伐他汀能促进细胞矿化结节形成;RT-PCR结果表明,辛伐他汀促进细胞碱性磷酸酶和骨形成蛋白-2基因表达呈时间依赖性增高。结论:10-7mol/L的辛伐他汀不仅有利于人牙周膜成纤维细胞增殖,而且促进其成骨分化和相关基因的表达。     

低氧对牙周膜成纤维细胞增殖和成骨分化的影响

目的:观察低氧对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament cells, PDLCs)增殖与成骨分化的影响。方法:体外培养鉴定人牙周膜成纤维细胞,分别用浓度为0、100、200、400 μmol/L的CoCl2作用于细胞,采用MTT法观察CoCl2对PDLCs增殖的影响,运用实时定量PCR和Western免疫印迹技术检测CoCl2模拟低氧对PDLCs成骨分化的影响。采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化染色结果证实,培养细胞为牙周膜成纤维细胞。200 μmol/L及400 μmol/L的CoCl2均能抑制PDLCs的增殖及碱性磷酸酶、RUNX2、Ⅰ型胶原的表达,并呈剂量依赖性。结论:氯化钴模拟的低氧环境对PDLCs增殖及成骨分化具有抑制作用。     

大蒜素对人牙周膜成纤维细胞的生物学作用

目的:探讨在不同浓度大蒜素作用下对体外培养的人牙周膜成纤维细胞(human periodontalligament cells,HPDLCs),增殖和总蛋白含量的变化。方法:体外培养人牙周膜成纤维细胞,分别经0(对照组),10-2,10-1,1,10,102,103mg/L浓度的大蒜素作用后,采用MTT法、考马斯亮蓝染色法,观察大蒜素对HPDLCs增殖、总蛋白含量影响。结果:大蒜素浓度在10-2、10-1、1 mg/L时对人牙周膜成纤维细胞增殖和总蛋白含量无明显影响;10、102、103mg/L时明显抑制人牙周膜成纤维细胞增殖和总蛋白含量,且其抑制作用随浓度增大而增强,103mg/L效应最大,呈明显的浓度依赖性(P<0.05)。结论:大蒜素能浓度依赖性抑制人牙周膜成纤维细胞的增殖和蛋白合成。     

地塞米松对体外培养的人牙囊细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同浓度地塞米松对体外培养人牙囊细胞增殖及分化的影响.方法:以不同浓度(0、10-10、10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L)地塞米松为诱导剂,进行四甲基偶氮唑蓝法(MTT法)检测和碱性磷酸酶(ALP)活性检测,评价细胞增殖和分化情况.结果:与空白对照组比较, 低浓度(10-10、10-9 mol/L)地塞米松对牙囊细胞增殖抑制不明显,高浓度(10-8、10-7、10-6 mol/L)的地塞米松明显抑制牙囊细胞的增殖(P<0.01).10-9、10-8、10-7、10-6 mol/L地塞米松可以增强牙囊细胞碱性磷酸酶的表达,有显著性差异(P<0.01),随着地塞米松浓度增加,碱性磷酸酶活性逐渐增强,不同浓度间具有显著性差异(P<0.05).10-8 mol/l的地塞米松作用于牙囊细胞,其碱性磷酸酶的表达,从第3 d开始升高,第7、9 d达到最高.结论:高浓度地塞米松抑制牙囊细胞的增殖.地塞米松能够升高体外培养的人牙囊细胞中碱性磷酸酶的活性,并呈现剂量依赖性,特定浓度的地塞米松对牙囊细胞碱性磷酸酶活性的影响随时间的延长而升高,呈现时间依赖性.     

牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱磷酶活性的影响

目的:观察人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblast cells,HPLFs)对成骨细胞(Osteoblast cells,OBs)细胞数量和碱磷酶活性的影响,为进一步探讨正畸牙齿移动的生物学机制奠定基础。方法:建立人OBs与HPLFs共培养系统,通过细胞计数及生化检测法观察人牙周膜成纤维细胞对成骨细胞细胞数量和碱性磷酸酶(alkalinephosphatase,ALP)活性的影响。结果:3d和5d时,共培养组OBs细胞计数分别为4.5×104及8.5×104,明显高于对照组,且两组分别与对照组OBs细胞计数有显著性差异(P<0.05)。transwell共培养组与对照组相比,在3d时,两组OBsALP活性有显著性差异(P<0.05),5d及7d时差异尤其显著(P<0.01),transw ell共培养组OBsALP活性低于对照组。结论:人HPLFs能增加OBs的细胞数量,但抑制OBsALP活性。     

人牙周膜成纤维细胞增殖与压力关系的初步观察

目的：在体外培养环境下观察压力对人牙周膜成纤维细胞（HPLF）增殖的影响。方法：取第4－6代培养的HPLF,应用可控压力细胞加载装置分别间断性施加30、60、90kPa的压力,分别在培养3、5、7d后用MTT法测定各组的A值。结果：HPLF在30、60、90kPa的压力培养环境下MTT反应的A值显著小于对照组,压力值越大,A值越小。结论：30、60、90kPa间断性压力显著抑制PLF细胞增殖,该抑制作用随压力值增大而增强。     

bFGF与米贝拉地尔对人牙周膜成纤维细胞增殖的调节

目的:研究成纤维细胞生长因子(bFGF,以下用B代表)与米贝拉地尔(Mibefradil,以下用M代表)这两种药物对人牙周膜成纤维细胞(HPLFs)增殖的调节作用。方法:B分10.0、20.0、30.0 μg/L 3种浓度(分别为B1、B2、B3),M分2.5、5.0、10.0 μmol/L 3种浓度(分别为M1、M2、M3),再按加药时间分为1 d组、2 d组和3 d组,用WST法检测两种药物单独使用和按先后不同顺序联合使用后HPLFs的增殖率。结果:两种药物单独使用可分别起到促进和阻滞细胞增殖的效果,但是B作用时间过长细胞表现为增殖受阻滞。其中,B3作用1 d组细胞增殖率最高(P<0.05),M2作用1 d组细胞增殖率最低(P<0.05)。M仅对加用B3的细胞有明显阻滞作用,与单独使用B3的细胞增殖率有显著性差异(P<0.05)。另外,只有B1不能改变细胞加用M后增殖受阻滞的现象。所有联合用药后的细胞增殖率均与正常细胞增殖率无统计学差异。结论:bFGF与Mibefradil单独使用有各自的最佳作用浓度和作用时间。除过度增殖状态外,HPLFs增殖状态很难受到阻滞,并且处于增殖受阻滞状态的细胞很容易恢复增殖状态,以维持HPLFs不断处于增殖平衡状态。     

血管内皮细胞对牙周组织细胞增殖的影响

目的：通过血管内皮细胞与牙周组织细胞复合培养模拟牙周组织再生环境,观察血管内皮细胞对牙周组织细胞增殖的作用规律,探讨血管内皮细胞对牙周组织修复再生的影响。方法：应用原代培养的血管内皮细胞,在Transwell嵌套中实现与人牙周膜成纤维细胞、牙龈成纤维细胞间的复合培养,分别于复合培养第2、4、6、8和10天,以细胞计数手段检测血管内皮细胞共存条件下2种牙周组织细胞的增殖情况,并与单独培养的2种牙周组织细胞作为对照,采用SPSS13.0软件包对数据进行统计学分析。结果：在血管内皮细胞存在条件下,2种牙周组织细胞的增殖速率均显著高于单独培养条件。血管内皮细胞存在时,牙周膜成纤维细胞增殖速率逐渐超越牙龈成纤维细胞(第6天起),并在第8天细胞数量上超过牙龈成纤维细胞,差异具有显著性(P<0.01)。结论：血管内皮细胞的存在,对牙周组织细胞的增殖具有促进作用,对牙周膜成纤维细胞增殖的促进作用显著高于牙龈成纤维细胞。     

机械压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响

目的:探讨不同力值和不同时间的压力对人牙周膜成纤维细胞增殖活力的影响。方法:采用细胞加载装置,对细胞分别施加0、0.25、0.5、1.0 MPa的压力30 min;施加1.0 MPa的压力,分别持续10、30、50 min,通过四唑盐比色实验(MTT法)检测细胞受力后6、12、18、24、30、36 h的OD值。结果:0.25、0.5 MPa组的OD值与对照组无显著性差异(P>0.05);1.0 MPa压力下,加载30 min和加载50 min组有显著性差异(P<0.05),表现为受力后6 h细胞OD值即明显降低,12 h进一步降低,与对照组相比差异均有统计学意义(P<0.05),24 h后细胞OD值与对照组无差异。结论:人牙周膜成纤维细胞的增殖活力和压力值以及压力作用时间存在一定的关系;细胞的增殖活力随着压力值的增加、压力作用时间的延长而有所降低,但这种影响是可逆的。     

脂联素对人牙周膜成纤维细胞的作用

目的:原代培养人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament cell,hPDLC),研究脂联素受体(adiponectinreceptor,Adipo R)在hPDLC中的表达情况,以及脂联素(adiponectin,ADP)对hPDLC增殖的作用。方法:收集因正畸需要而拔除的健康前磨牙10颗,玻片覆盖组织块法原代培养hPDLC,RT-PCR法检测分析AdipoR1和AdipoR2在hPDLC中的表达。使用不同浓度ADP(0,5,10,20ng/μL)刺激体外培养的hPDLC,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,分别测定第1、4、7天的细胞增殖活性。采用SSPS16.0软件包对数据进行统计学分析。结果:免疫组化显示,培养的细胞波形丝蛋白染色阳性,角蛋白染色阴性,证明体外原代培养细胞及传代细胞均为中胚层组织来源的hPDLC,且无上皮来源细胞混杂。琼脂糖凝胶电泳检测显示,Adipo R2在人牙周膜成纤维细胞中表达阳性。MTT法检测的生长曲线显示,随着ADP浓度的增加,细胞增殖活性增加。培养24h后,C、D组与对照组相比差异显著(P相似文献   

细胞外信号调节激酶1/2信号转导通路调控牙周膜细胞成骨分化的研究

目的：探索细胞外信号调节激酶（ERK）1/2信号转导通路是否参与调控牙周膜细胞的成骨分化。方法???取体外培养的第3代牙周膜细胞进行研究。实验分为空白对照组、成骨诱导组和实验组（在成骨诱导培养基中加入10?nmol·L－1?ERK1/2磷酸化的抑制剂PD98059）。培养1周和3周后通过定量聚合酶链反应（qPCR）、碱性磷酸酶（ALP）染色和茜素红染色检测其成骨能力。结果?成骨诱导可促进牙周膜细胞中ERK1/2的磷酸化。培养1周后,抑制ERK1/2的磷酸化可上调成骨标志物Runx2、ALP和骨钙蛋白（OCN）的表达,与成骨诱导组相比较,OCN的表达差异具有统计学意义（P<0.05）,Runx2、ALP的表达差异也具有统计学意义（P<0.01）。培养3周后,实验组牙周膜细胞成骨标志物Runx2、ALP和OCN的表达仍较成骨诱导组高,ALP染色和钙结节形成较成骨诱导组强,其中Runx2、ALP的表达差异具有统计学意义（P<0.05）,OCN的表达差异也具有统计学意义（P<0.01）。结论 ERK?1/2信号转导通路参与了调控体外培养的牙周膜细胞的成骨分化。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。