细胞增殖和凋亡在卵巢癌发病中的作用

目的为阐明细胞增殖和凋亡在卵巢癌发病中的作用提供依据,选用卵巢肿瘤组织标本进行不同病变中细胞增殖和凋亡分析研究.方法用免疫组化ABC方法对47例卵巢肿瘤包括良性肿瘤、交界性肿瘤和卵巢癌组织中的细胞增殖抗原(PCNA)和凋亡基因bcl-2进行了检测,并用形态学方法进行凋亡细胞分析.结果PCNA增殖指数随着病变加重而增高,且相互病变之间这些标志物的变化经方差分析有显著性差异(P＜0.05),凋亡指数在良性肿瘤和交界性肿瘤均显著高于正常组织和卵巢癌组织.结论细胞增殖指数与卵巢组织病变相一致,细胞增殖是卵巢癌发生发展的一个重要因素.细胞凋亡在癌变中作用需进一步研究.     

细胞增殖和凋亡在卵巢癌发病中的作用

目的 :为阐明细胞增殖和凋亡在卵巢癌发病中的作用提供依据 ,选用卵巢肿瘤组织标本进行不同病变中细胞增殖和凋亡分析研究。方法 :用免疫组化 ABC方法对 47例卵巢肿瘤包括良性肿瘤、交界性肿瘤和卵巢癌组织中的细胞增殖抗原(PCNA)和凋亡基因 bcl-2进行了检测 ,并用形态学方法进行凋亡细胞分析。结果 :PCNA增殖指数随着病变加重而增高 ,且相互病变之间这些标志物的变化经方差分析有显著性差异 (P<0 .0 5) ,凋亡指数在良性肿瘤和交界性肿瘤均显著高于正常组织和卵巢癌组织。结论 :细胞增殖指数与卵巢组织病变相一致 ,细胞增殖是卵巢癌发生发展的一个重要因素。细胞凋亡在癌变中作用需进一步研究     

MicroRNA-582-5p在HBV感染中的作用及分子机制研究

目的　探究微小RNA-582-5p（microRNA-582-5p, miR-582-5p）在HBV感染中的作用及分子机制。方法　通过miRNA芯片筛选出miR-582-5p作为研究对象。分别通过过表达和抑制内源性miR-582-5p表达的方法,研究其对HBV DNA、HBV RNA、HBeAg、HBsAg等HBV复制和表达相关指标的影响。在分子机制研究中,双荧光素酶报告基因检测miR-582-5p对HBV启动子和增强子的影响,生物信息学预测miR-582-5p的靶基因,分别使用实时定量PCR（quantitative real-time PCR, qRT-PCR）和Western blot检测miR-582-5p对靶基因NOTCH1 mRNA和蛋白表达的影响。最后检测HBV相关蛋白表达对miR-582-5p的影响。结果　qRT-PCR结果表明miR-582-5p随着HBV复制水平升高而逐渐降低。miR-582-5p抑制HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBsAg的表达。miR-582-5p能抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性,miR-582-5p能直接靶向HBV促进因子NOTCH1,抑制其mRNA和蛋白表达。HBx蛋白抑制miR-582-5p的表达。结论　miR-582-5p通过抑制HBV S2 promoter和HBV EnhancerⅠ的活性或靶向抑制HBV促进因子NOTCH1而抑制HBV复制和表达;同时,HBV的复制与表达抑制miR-582-5p的表达。     

膳食雌激素影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的:探讨膳食中常见的两种环境类雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)影响人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的分子生物学作用机制。方法:MCF-7细胞在DMEM培养液(含10%胎牛血清)中进行常规传代培养,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含5%活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养5d,收集细胞,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或75ml培养瓶,32×10-9mol/LZEA和75×10-6mol/LGS对细胞分别处理72h,用半定量RT-PCR技术观察GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2及baxmRNA表达的影响,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果:与溶剂对照组相比,75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h可显著提高baxmRNA表达而抑制bcl-2和PCNAmRNA的表达,随后的免疫组化实验也证实了这一结果;ZEA的作用效应则与GS相反。结论:膳食雌激素GS和ZEA可通过影响细胞增殖和凋亡相关调节基因PCNA、bcl-2和bax表达而调节人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡作用。     

血清miRNA-21-5p、miRNA-122-5p表达水平对绝经后骨质疏松性髋部骨折的诊断价值评价

目的 分析miRNA-21-5p、miRNA-122-5p表达水平对绝经后骨质疏松性髋部骨折的诊断价值。方法 选取本院于2020年1～12月收治的60例患者分为四组进行研究。分析miRNA-21-5p、miRNA-122-5p水平变化并分析其对疾病的反映情况。结果 四组的miRNA-21-5p、miRNA-122-5p并无明显差异(P>0.05);骨质疏松性髋部骨折组水平明显高于正常组;且其对疾病的诊断准确率明显更高。结论 miRNA-21-5p、miRNA-122-5p能够对骨质疏松等疾病进行预测及诊断,可作为骨质疏松性髋骨骨折的诊断指标。     

miRNA-192在乳腺癌组织中的表达

目的 比较乳腺癌组织和癌旁正常组织中miRNA-192的表达是否有差异及其与病理类型和病变进展之间的关系.方法 通过整群抽样的方法选取19例乳腺癌患者手术切除的乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织,采用TRIzol法提取标本组织的总RNA,利用SYBR Green实时荧光定量PCR方法对miRNA-192进行定量检测,比较乳腺癌组织和癌旁正常乳腺组织miRNA-192的表达是否有差异.结果 miRNA-192在乳腺癌组织中表达量(△Ct值)为10.58±3.78,在正常乳腺组织的表达量(△Ct值)为11.16±3.40,差异无统计学意义.经Spearman相关分析,乳腺癌组织中的miRNA-192表达倍数(2-△△Ct值)与患者年龄、肿瘤大小、淋巴结转移、妊娠次数、肿瘤分期、生产次数、孕激素分泌无相关关系,仅与雌激素分泌呈负相关(P＜0.01);经逐步法线性回归分析,以miRNA-192表达倍数为因变量时,各临床资料变量均未进入回归方程.结论 乳腺癌患者癌组织及癌旁正常乳腺组织中miRNA-192的表达无明显差别.     

miR-423-5p参与AMI大鼠心肌细胞凋亡的机制研究

目的探讨miR-423-5p对急性心肌梗死(AMI)大鼠心肌细胞凋亡的影响及其机制。方法采用冠状动脉左前降支结扎法建立AMI大鼠模型,将其随机分为模型组、阴性组和干扰组,另设只开胸穿针不做冠状动脉结扎的假手术组,每组7只;采用Real-time PCR检测各组心肌组织中miR-423-5p的表达水平,心脏彩超检测各组大鼠的心脏功能,TCC法检测各组大鼠的心肌梗死面积,TUNEL法检测各组心肌细胞的凋亡指数,Western blot检测Cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达水平。结果与假手术组相比,模型组和阴性组中miR-423-5p表达水平、左室收缩末期内径(LVDS)、左室舒张末期内径(LVDD)和Bcl-2蛋白表达水平均降低,而左室长轴缩短分数(FS)、左室射血分数(LVEF)、心肌细胞凋亡指数、心肌梗死面积和Cleaved caspase-3、Bax蛋白表达水平均明显升高(P0.05);与模型组和阴性组相比,干扰组中上述指标变化明显逆转(P0.05)。结论 miR-423-5p可通过下调Cleaved caspase-3、Bax和上调Bcl-2表达抑制AMI大鼠心肌细胞凋亡,改善心脏功能,从而减轻AMI。     

微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

p38丝裂原活化蛋白激酶信号通路在多菌灵致小鼠睾丸支持细胞增殖抑制和凋亡中的作用

目的通过建立多菌灵致小鼠睾丸支持细胞(TM4)损伤模型,探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路在多菌灵致小鼠TM4细胞增殖抑制和凋亡中的作用。方法将TM4细胞分别暴露于0(对照)、1、2、5、10、20μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用CCK-8法检测细胞存活率。将TM4细胞分别暴露于0(对照)、5μmol/L多菌灵溶液和10μmol/L SB203580抑制剂溶液及10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵溶液染毒48 h,采用碘化丙啶(PI)染色法检测细胞周期,采用Annexin V/PI双标法检测TM4细胞凋亡,采用Western blot法检测细胞P38 MAPK和p-P38 MAPK蛋白的表达水平。结果与对照组比较,5、10、20μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率均下降,差异有统计学意义(P0.01);且随着多菌灵暴露浓度的升高,TM4细胞的存活率呈下降趋势。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的存活率升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组TM4细胞的存活率无明显改变。与对照组相比,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率增加,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的凋亡率无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的凋亡率下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞G_1/G_0期细胞所占比例降低,而G2/M期和S期细胞所占比例升高,差异均有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组各期细胞所占比例均无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞仅G_2/M期细胞所占比例下降,差异有统计学意义(P0.01)。与对照组比较,5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平升高,差异有统计学意义(P0.01);而10μmol/L SB203580抑制剂组的p-P38 MAPK蛋白表达水平无明显改变。与5μmol/L多菌灵组比较,10μmol/L SB203580+5μmol/L多菌灵组TM4细胞的p-P38 MAPK蛋白表达水平下降,差异有统计学意义(P0.01)。各组TM4细胞的P38 MAPK蛋白表达水平间比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论多菌灵通过激活p38 MAPK信号通路抑制TM4细胞增殖,并诱导细胞凋亡及周期阻滞,从而造成细胞损伤。     

miRNA-373在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的探讨miRNA-373在乳腺癌组织、乳腺纤维腺瘤组织及正常乳腺组织中的表达差异,分析其表达水平与患者临床病理特征的相关性及意义。方法选取2014年4-9月该院手术收集的乳腺癌组织、正常乳腺组织及乳腺纤维腺瘤组织标本各20例。Trizol法分别提取总RNA,特异性茎环法逆转录为cDNA。并运用实时荧光定量PCR法检测miRNA-373在上述3种组织中的表达情况,并进行临床病理特征的相关性分析。结果 miRNA-373在乳腺癌中的表达量(2.68±2.49)明显高于乳腺纤维腺瘤组织(1.11±0.93)和正常乳腺组织(1.07±0.80),差异有统计学意义(P0.05);乳腺纤维腺瘤与正常乳腺组织比较,差异无统计学意义(P0.05)。乳腺癌组织中miRNA-373的高表达与患者肿块大小、腋窝淋巴结转移相关(P0.05),而与患者年龄、TNM分期无关(P0.05)。结论 miRNA-373在乳腺癌中表达上调,miRNA-373表达与乳腺癌患者肿块大小、腋窝淋巴结转移有关,可能发挥类似促癌基因的作用。miRNA-373可作为乳腺癌诊断、治疗方案及预后判断的生物学标记。     

TPX2基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的机制研究

目的探讨Xklp2靶蛋白(TPX2)基因调控p38MAPK信号通路抑制乳腺癌细胞增殖及促进凋亡的影响及机制。方法 Western blot检测乳腺癌组织及癌旁组织中TPX2基因的表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA1和TPX2-siRNA2转染人乳腺癌MCF-7细胞,未转染任何siRNA作为对照组,Western blot检测转染后各组细胞中TPX2蛋白表达;siRNA-NC、TPX2-siRNA转染细胞48 h后,CCK8实验检测细胞增殖;流式细胞仪检测细胞凋亡;Western blot检测Cleaved caspase3、p38、p-p38蛋白表达。结果 TPX2在乳腺癌组织的蛋白表达显著高于癌旁组织(P<0.01);TPX2-siRNA1组和TPX2-siRNA2组细胞中TPX2蛋白表达显著低于对照组(P<0.01),TPX2-siRNA2组的抑制效果更明显,选择作为后续研究;siRNA-NC组的细胞存活率、细胞凋亡率及Cleaved caspase3、p-p38蛋白表达与对照组差异无统计学意义(P>0.05),TPX2-siRNA组细胞存活率及p-p38蛋白表达显著低于对照组,细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),p38蛋白表达在三个组间差异无统计学意义(P>0.05)。结论 TPX2基因在乳腺癌组织中高表达,抑制TPX2的表达可降低细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与p38MAPK信号通路有关。     

miR - 93 - 5p抑制呼吸道合胞病毒感染支气管上皮细胞凋亡和炎症反应的机制研究

目的 研究miR - 93 - 5p是否通过靶向Mg2+/Mn2+依赖性蛋白磷酸酶1A（PPM1A）基因抑制呼吸道合胞病毒（RSV）感染的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应。方法 将人支气管上皮细胞16 - HBE分为NC组、RSV组、miR - NC+RSV组、miR - 93 - 5p + RSV组、si - NC + RSV组、si - PPM1A + RSV组、pcDNA - NC + RSV组、pcDNA - PPM1A + RSV组、miR - 93 - 5p + pcDNA - NC + RSV组、miR - 93 - 5p + pcDNA - PPM1A + RSV组,利用脂质体Lipofectamine 2000进行miR - NC、miR - 93 - 5p、si - NC、si - PPM1A、pcDNA - NC、pcDNA - PPM1A的转染,并以RSV感染细胞。应用实时荧光定量PCR检测miR - 93 - 5p和PPM1A mRNA表达,western blot测定PPM1A、Cleaved - caspase - 3蛋白表达,ELISA分析TNF - α、IL - 6和IL - 1α分泌,流式细胞仪评估细胞凋亡。生物信息学预测与荧光素酶活性检测验证miR - 93 - 5p对PPM1A的靶向调控。结果 与NC组比较,RSV组细胞16 - HBE中miR - 93 - 5p表达量减少,PPM1A mRNA和PPM1A蛋白、Cleaved - caspase - 3蛋白表达量、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌和细胞凋亡率增加。miR - 93 - 5p + RSV组细胞16 - HBE中Cleaved - caspase - 3蛋白水平、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌和细胞凋亡率低于miR - NC + RSV组。miR - 93 - 5p靶向调控PPM1A的表达。与si - NC + RSV组比较,si - PPM1A + RSV组细胞16 - HBE中Cleaved - caspase - 3蛋白水平、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌和细胞凋亡率降低,而pcDNA - PPM1A + RSV组结果与之相反。与miR - 93 - 5p + pcDNA - NC + RSV组比较,miR - 93 - 5p + pcDNA - PPM1A + RSV组提高细胞16 - HBE的Cleaved - caspase - 3蛋白水平、TNF - α、IL - 6、IL - 1α分泌、细胞凋亡率。上述差异均有统计学意义（均P＜0.05）。结论 miR - 93 - 5p通过靶向PPM1A基因,抑制RSV感染的支气管上皮细胞凋亡和炎症反应。     

miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭和转移中的作用机制研究

目的探讨miR-125a-5p在人乳腺癌细胞侵袭与转移中的作用机制。方法采用荧光定量PCR检测人乳腺细胞MCF-10A和乳腺癌细胞中miR-125a-5p的表达量,利用瞬时转染技术将过表达质粒转染到MDA231中,检测miR-125a-5p质粒在乳腺癌MDA231、MCF-7细胞中的转染效率,利用趋化运动实验与Transwell侵袭试验检测趋化运动能力和运动能力。结果人乳腺癌淋巴结转移、组织分期及雌激素受体均与miR-125a-5p表达水平有关,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-125a-5p在MDA231和MCF-7中表达量较MCF-10A中低,差异有统计学意义(P<0.05);MDA231与MCF-7相比,MDA231中表达量更低,差异有统计学意义(P<0.05)。GAB2在MDA231/miR-125a-5p细胞组的表达量低于MDA231组和MDA231/NC组,差异均有统计学意义(P<0.05);在AntimiR-125a-5p/MCF-7组中的表达量高于AntiNC/MCF-7和MCF-7组,差异均有统计学意义(P<0.05)。穿过基质胶...     

cdk5、p35和p53基因在砷诱导的神经细胞凋亡中的改变

目的 研究cdk5、p35和p53基因表达量在As2O3诱导的神经细胞凋亡中的改变,为探讨As2O3神经毒性的机制提供基础资料.方法 将原代培养的大鼠神经元分为未处理对照组,DMSO溶剂对照组,1、5、10 μmol/L As2O3染毒组,分别用1、5、10 μmol/L As2O3溶液染毒,未处理对照组只加入培养液.染毒8h后,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测神经细胞活力,用流式细胞仪检测神经细胞凋亡率,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测cdk5、p35、p53基因的表达.结果 1、5、10 μmol/L As2O3染毒组神经细胞活力抑制率分别为16.77％、19.72％、27.81％.与未处理对照组和溶剂对照组相比,5和10μmol/L As2O3染毒组细胞凋亡率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05).各染毒组cdk5、p35、p53基因的表达量随着染毒剂量的增加而升高,各组间p35基因表达量的差异无统计学意义(P＞0.05);cdk5和p53基因表达量的组间差异有统计学意义(P＜0.05),5和10 μmol/L As2O3染毒组cdk5基因表达量明显高于未处理对照组和溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);1、5和10 μmol/L As2O3染毒组p53表达量明显高于未处理对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);其中10 μmol/L As2O3染毒组p53基因表达量明显高于DMSO溶剂对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 cdk5、p35和p53可能参与了As2O3诱导的神经细胞凋亡过程.     

微小RNA-140-5p靶向EGR-2基因调控胃癌细胞增殖凋亡的作用研究

目的 探讨microRNA-140-5p(miRNA-140-5p)在胃癌患者组织中的表达及其对癌细胞增殖、凋亡的影响。 方法 收集2017年5月到2018年5月杭州市肿瘤医院住院的100例胃癌患者的组织样本,利用荧光定量PCR检测miRNA-140-5p在胃癌组织和癌旁组织中的表达并分析其临床意义。采用CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染法分析miRNA-140-mimics、miRNA-140-inhibitor对人胃癌细胞系BGC-823增殖和凋亡的影响,以及检测其对胃癌细胞TGF-β、ERK1、Smad2、IGF-1R、PI3K、Ras、AKT、MAPK、Ki67基因表达的影响。采用生物信息学、Western Blotting、双荧光素酶报告实验等方法预测并验证miRNA-140-5p的下游靶基因。 结果 胃癌患者癌组织中miRNA-140-5p的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.001);ROC曲线示miRNA-140-5p诊断胃癌的曲线下面积为0.803(95%CI:0.723～0.851);与对照组相比,miRNA-140-mimics组中的细胞增殖率明显降低而凋亡率升高(均P<0.05);TGF-β,ERK1,Smad2,IGF-1R,PI3K,Ras,AKT,MAPK mRNA表达,以及Ki67蛋白表达明显下调(P<0.05);Targetscan数据库预测和双萤光素酶检验结果发现早期生长反应蛋白2(EGR2)是miRNA-140-5p的下游靶基因之一,较于空白对照组,miRNA-140-mimics组中EGR2含量降低(P<0.001)。 结论 miRNA-140-5p在胃癌组织中表达下调,可能通过靶向EGR2来调控胃癌细胞的增殖与凋亡, miRNA-140-5p有可能成为胃癌诊断和新型生物治疗的靶点。     

下调ZEB2对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响

目的分析下调E盒结合锌指蛋白2(ZEB2)对乳腺癌细胞增殖和凋亡的影响。方法用ZEB2 siRNA慢病毒和siRNA对照慢病毒感染乳腺癌细胞,应用real-time PCR和Western blot法测定ZEB2水平,应用CCK8法检测细胞增殖活性,应用流式细胞术检测细胞凋亡情况,应用Western blot检测细胞中糖调节蛋白78(GRP78)、CCAAT/增强子结合蛋白同源蛋白(CHOP)、钙激活中性蛋白酶2(Calpain 2)及剪切型Caspase-3(Cleaved Caspase-3)蛋白水平。结果对照组和siRNA对照组ZEB2 mRNA和蛋白水平,24、48、72及96 h的OD值比较差异均无统计学意义(均P0.05)。ZEB2 siRNA组ZEB2 mRNA和蛋白水平,24、48、72及96 h的OD值均显著低于对照组(均P0.05)。对照组和siRNA对照组乳腺癌细胞凋亡率,乳腺癌细胞中GRP78、CHOP、Calpain 2及Cleaved Caspase-3蛋白水平比较差异均无统计学意义(均P0.05),ZEB2 siRNA组乳腺癌细胞凋亡率,乳腺癌细胞中GRP78、CHOP、Calpain 2及Cleaved Caspase-3蛋白水平均显著高于对照组(均P0.05)。结论下调ZEB2可以通过内质网途径诱导乳腺癌细胞凋亡,抑制乳腺癌细胞的增殖活性,为ZEB2治疗乳腺癌的临床应用提供了依据,为研究ZEB2在乳腺癌发生中的作用机制奠定了基础。     

5-氟尿嘧啶对绒癌JAR细胞凋亡的作用机制

目的:探讨5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)对人类绒毛膜癌细胞株JAR细胞凋亡的作用机制。从分子水平分析绒癌细胞凋亡及凋亡抑制基因XIAP在此凋亡过程中的作用。方法:RT-PCR法检测5-FU对JAR细胞XIAP mRNA表达的影响。结果:5-FU在0～40μg/ml范围内可以呈剂量依赖性下调XIAP基因mRNA的表达,在40～80μg/ml范围内,随着5-FU剂量的增加,下调能力有所减弱,XIAP的表达反而有所增强。结论:5-FU诱导绒癌细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用机制之一,5-FU诱导细胞凋亡的机制可能与XIAP mRNA的表达有关。     

RNA干扰NGAL基因表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响机制研究

目的分析RNA干扰中性粒细胞相关载脂蛋白(NGAL)基因的表达对乳腺癌细胞增殖凋亡的影响及机制。方法利用蛋白质印迹(Western Blot)方法检测乳腺癌组织及人乳腺癌MCF-7、T47D和MDA-MB-231细胞株中NGAL的蛋白表达;小干扰RNA(siRNA)-NC及NGAL-siRNA转染人乳腺癌MCF-7细胞,未转染任何siRNA作为对照组,检测转染48 h后各组细胞中NGAL的蛋白表达情况;利用细胞计数试剂盒(CCK8)方法检测细胞的增殖情况;利用流式细胞仪检测细胞的凋亡;利用Western Blot方法检测活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、磷脂酰肌醇-3(PI3K)、丝氨酸苏氨酸激酶(AKT)及磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶(p-AKT)的蛋白表达情况。结果乳腺癌组织中NGAL的蛋白表达显著高于癌旁组织(P0.05),NGAL于乳腺癌MCF-7细胞中的蛋白表达最高,选择其作为后续研究;siRNA-NC组NGAL、Cleaved Caspase-3、PI3K及p-AKT蛋白表达和细胞存活率及凋亡率与相应的对照组比较差异无统计学意义(P0.05),而NGAL-siRNA组NGAL、PI3K和p-AKT蛋白表达及细胞存活率均显著低于相应的对照组(P0.05),NGAL-siRNA组的细胞凋亡率及Cleaved Caspase-3蛋白表达均显著高于相应的对照组(P0.05)。结论 NGAL基因在乳腺癌组织及细胞中高表达,抑制NGAL基因的表达会显著降低细胞增殖及促进细胞凋亡,其机制与PI3K/AKT信号通路的调控有关。     

miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用

目的 探索miR-199b-5p在骨肉瘤中的预测和诊断作用。方法 运用RT-PCR方法检测骨肉瘤患者组织中miR-199b-5p和DRAM的表达水平;利用生物信息学预测工具预测miR-199b-5p的靶基因;分析DRAM与miR-199b-5p的表达关系。结果 miR-199b-5p在组织中有表达,和癌旁正常组织相比,肿瘤组织中的miR-199b-5p表达水平显著升高(P < 0.05);miR-199b-5p与患者的性别、发病年龄、病变部位、肿瘤分型和分期无明显关系(P > 0.05)。研究还发现DRAM在各种组织中均有表达,而DRAM mRNA表达在两者中无明显差异,DRAM与miR-199b-5p呈负相关的表达关系。结论 本研究表明miR-199b-5p可以作为骨肉瘤一个诊断标志物,而DRAM可能是miR-199b-5p的调控靶基因。