云南省非结核分枝杆菌流行状况及病原谱分析

目的 分析云南省非结核分枝杆菌（NTM）流行状况及NTM病原谱和优势菌群,为云南省NTM的有效防治提供参考依据,以适应临床诊治工作需求。方法 对云南省2009、2013—2015年收集的5 406例临床分离分枝杆菌进行结核分枝杆菌复合群（MTC）与NTM鉴别,对鉴定为NTM的菌株进行菌种鉴定。结果 在5 406例临床分离分枝杆菌中共鉴别出NTM菌株87株,其中非结核分枝杆菌患者以男性为主,40岁以上患者多见。20~39岁患者占所有患者的18.39%,40岁以上占80.46%;患者的民族以汉族为主（占80.46%）,其次是彝族（8.05%）。优势流行的菌种前4位为胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌、鸟分枝杆菌、偶发分枝杆菌,肺结核高中低疫情地区NTM分离率差异有统计学意义,且肺结核疫情与NTM分离率呈负相关。结论 云南省NTM分离率低,肺结核疫情高的地区非结核分枝杆菌分离率低,反之则高,地区差异明显,因此应加强NTM流行状况监测,同时结合优势菌种优化诊治流程,为临床早诊断、早治疗提供帮助。     

重庆市流行非结核分枝杆菌菌种鉴定及感染人群特征

目的 了解重庆地区非结核分枝杆菌（NTM）流行的优势菌种和NTM感染人群的特征。方法 回顾分析2016年7月—2017年12月在重庆市公共卫生医疗救治中心就诊,并经分枝杆菌菌种PCR-反向点杂交法鉴定为NTM和NTM混合感染的患者资料。结果 95例NTM感染病例,单一NTM感染共 80例,其中快生长分枝杆菌（RGM）2种,脓肿分枝杆菌31例（38.75%）,偶发/猪分枝杆菌14例（17.50%）;慢生长分枝杆菌（SGM）5种,胞内分枝杆菌25例（31.25%）,鸟分枝杆菌5例（6.25%）,戈登分枝杆菌3例（3.75%）,堪萨斯分枝杆菌2例（2.50%）;分枝杆菌混合感染共15例,其中TB和NTM 混合感染11例, NTM混合感染4例。单一NTM感染病例中,男性多于女性,胞内分枝杆菌感染者男性比例最高。而NTM混合感染者中,性别比例均接近1∶1。单一NTM感染者主要集中于20~<30岁和40~<60岁之间,而TB和NTM混合感染者在30~<50岁之间最多。脓肿分枝杆菌感染者主要在20~59岁之间,胞内分枝杆菌感染者主要分布于40~<79岁之间,偶发/猪分枝杆菌的患者集中于60岁以下。结论 重庆市NTM的主要流行优势种类以脓肿分枝杆菌和胞内分枝杆菌为主,感染者男性多于女性,以20~<30岁和40~<60岁之间最多,对于不同种类的NTM,感染者的年龄分布和性别比例有所不同。     

2013—2021年杭州某综合医院非结核分枝杆菌肺病流行状况分析

目的 分析杭州市结核病定点诊治医院2013—2021年非结核分枝杆菌（nontuberculosis mycobacteria,NTM）肺病的流行状况,为杭州市该病的临床防治诊疗及流行病学提供依据。方法 收集2013—2021年浙江大学医学院附属杭州市胸科医院结核科及呼吸与危重症医学科收治的疑似肺结核患者,经抗酸杆菌涂片及BACTEC MGIT960确诊为分枝杆菌感染,采用实时荧光聚合酶链反应（polymerase chain reaction,PCR）检测结核分枝杆菌复合群（Mycobacterium tuberculosis complex,MTB）与NTM的菌群鉴定,对鉴定为NTM的菌株采用HAIN基因分型鉴定法及DNA微阵列技术进行菌种鉴定,并对感染者的相关资料进行总结分析。结果 2013—2021年,从37 520例疑似肺结核患者标本中分离出NTM菌株1257株,检出率从2013年的0.8%上升到2021年的6.7%。患者中男性占50.76%,女性占49.24%。年龄分布上,60~79岁的中老年患者最多,占55.0%。2013年检出3种NTM菌种,分别是胞内分枝杆菌、脓肿分枝杆菌和龟/脓肿分枝杆菌;2021年菌种分布达13种,前三位分别是胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌。结论 2013—2021年杭州地区NTM检出率持续升高,感染人群以男性、60~79岁的中老年为主,感染菌种以胞内分枝杆菌、龟/脓肿分枝杆菌和鸟分枝杆菌为主。     

应用基因芯片检测分枝杆菌在关节结核早期诊断中的临床应用

目的 探讨基因芯片技术对关节结核的早期临床诊断价值.方法 抽取关节疾病108例患者的关节积液,应用基因芯片技术对关节积液进行分枝杆菌的检测及其菌种鉴定,并将结果与传统的抗酸染色法进行比较.结果 108例关节疾病中,确诊为结核性关节炎59例.基因芯片法显示结核分枝杆菌阳性51例,阳性率86.44％ (51/59);非结核分枝杆菌感染8例,阳性率7.41％ (8/108);2例复合阳性.抗酸染色显示阳性5例,阳性率8.47％(5/59),该5例基因芯片法也阳性.基因芯片法和抗酸染色法的结核分枝杆菌阳性检出率有统计学差异(P＜0.01).非关节结核49例基因芯片法检测结核分枝杆菌均阴性,特异度为100％.结论 基因芯片技术对鉴别结核分枝杆菌及非结核分枝杆菌分型具有快速、敏感、特异性高的特点,在关节结核早期诊断和治疗上具有重要临床价值.     

非结核分枝杆菌感染的实验诊断应用进展

<正>非结核分枝杆菌(nontuberculous mycobacteria,NTM)是指除结核分枝杆菌复合群(人型、牛型、非洲、坎纳和田鼠分枝杆菌)及麻风分枝杆菌以外的其他分枝杆菌。NTM常存在于自然环境中,迄今为止已发现有150余种[1],多数为腐生菌,其中少数可使人和动物致病。     

PCR方法鉴定结核分枝杆菌临床分离株

目的:用3对引物PCR扩增的方法对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.方法:将3对特征性的结核分枝杆菌标记基因:MPT40基因、α抗原基因和IS6100插入序列,分别放入PCR体系中,在各自的退火温度下进行PCR扩增,通过对扩增产物的不同带型进行分析,对结核分枝杆菌临床分离株进行菌种鉴定.结果:用3对引物PCR扩增的方法可将各种类型的结核分枝杆菌以及结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌鉴别开.结论:3对引物PCR扩增的方法是一种有效的结核分枝杆菌菌种鉴定的方法,可用于结核分枝杆菌与非结核分枝杆菌以及各种类型的结核分枝杆菌的区分.     

非结核分枝杆菌肺病分析

目的：了解非结核分枝杆菌（nontuberculous mycobacteria,NTM）肺病流行情况及耐药特点。方法：收集2003年9月～2006年5月门诊痰菌阳性标本,按《全国结核病细菌学检验规程》的要求,用改良罗氏法进行痰结核菌培养、菌种鉴定和药物敏感性试验。结果：非结核分枝杆菌分离率为10.3%,35岁以上分离率高于35岁以下人群,性别无明显差异。耐药率达100%,明显高于结核分枝杆菌,耐多药率51.7%,与结核分枝杆菌无明显差异。结论：非结核分枝杆菌在肺病患者中分离率高,且多耐药,因此对难治性肺病患者进行菌株鉴定及药敏试验非常重要。     

脊柱结核脓液中结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定

目的：利用脊柱结核术中所取得的脓液进行结核分枝杆菌的培养及菌种鉴定，以了解脊柱结核感染菌种病源学的情况，为其病源学及耐药性方面的进一步研究做工作基础准备。方法：将脊柱结核病灶中的脓液经前处理后接种于改良罗氏培养基上，4～8周后观察结果和脓液涂片检查。结果：1．43份脊柱结核脓液中，应用改良罗氏法培养出临床分离株13株，阳性率为30．1％；2．涂片阳性者培养的阳性率较高；3．化疗时间短、时间在两月以内者，其培养的阳性率较高；结论：脊柱结核感染HIV阴性者的菌种以人型为主。     

基因芯片技术对非结核分枝杆菌肺病的诊断价值

目的 探讨基因芯片法对非结核分枝杆菌（NTM）肺病的诊断价值。方法 选择河南省胸科医院2020年9月至2021年3月收治的高度疑似肺结核患者200例进行回顾性分析。200例患者均行荧光支气管镜,同时采取管镜下灌洗液标本,对灌洗液标本进行基因芯片检测。以MGIT 960液体培养[对硝基苯甲酸（PNB）]为参照,分析基因芯片方法对NTM检测的敏感度、特异度和检测结果。结果 200例患者中,基因芯片法鉴定出NTM阳性22例（11.0%）,结核分枝杆菌复合群（MTC）阳性154例（77.0%）,MTC阴性24例（12.0%）。其中22例NTM中,11例胞内分枝杆菌病（50.0%）,9例脓肿分枝杆菌病（40.9%）,1例堪萨斯分枝杆菌（4.5%）,1例鸟分枝杆菌（4.5%）;MGIT960液体培养（PNB）培养出NTM 23例（11.5%）,MTC 152例（76.0%）,阴性25例（12.5%）。以MGIT 960液体培养试验结果为参考标准,基因芯片法检测出NTM的敏感度为86.9%(20/23),特异度为98.9%(175/177),两者有较高一致性。而基因芯片可以分出菌型,所用时间更短。结...     

2003～2008年非结核分枝杆菌感染趋势及耐药分析

目的 了解非结核分枝杆菌(NTM)的感染趋势及耐药情况.方法 对2003～2008年收集的2 978例分枝杆菌感染标本用对硝基苯甲酸鉴定NTM,采用绝对浓度法进行NTM抗结核药物敏感性试验.结果 2 978例结核分枝杆菌感染标本分离出NTM 137株,NTM检出率4.60%;2003年NTM检出率最低为3.07%,2008年检出率最高为5.61%,NTM感染率有逐年上升的趋势.大多数NTM对常用的抗结核药物呈高度耐药,其中耐药率最高的是利福平达94.89%,其他依次为对氨基水杨酸(92.70%)、异烟肼(91.97%)、链霉素(90.51%)、乙胺丁醇(68.61%)、氧氟沙星(4.96%).结论 我院NTM检出率呈逐年上升趋势,其对抗结核药物耐药率较高.     

老年机械通气患者非结核分枝杆菌肺病的临床分析（附4例报告）

目的：探讨应用机械通气的老年患者非结核分枝杆菌（NTM）肺病的临床特征。方法回顾性分析解放军总医院4例老年机械通气合并NTM肺病患者的病历资料,并复习相关文献。结果4例患者均合并慢性阻塞性肺疾病、特发性间质性肺炎、支气管扩张症等慢性肺部基础病,确诊前均曾被疑诊为肺结核。临床症状无特异性,均有发热和咯痰,1例合并痰中带血。胸部CT表现多样,呈结节影、片状实变影和胸腔积液等,未出现典型的结节支气管扩张型和纤维空洞型征象。分枝杆菌培养均可见快速生长分枝杆菌,菌种鉴定1例为龟分枝杆菌,3例为脓肿分枝杆菌。1例脓肿分枝杆菌肺病患者接受药物治疗,其余3例因多器官功能障碍而未行抗分枝杆菌治疗,4例均死于多器官功能衰竭。结论 NTM是导致老年呼吸机相关肺炎的病原菌,感染症状无特异性,典型NTM肺病影像特征并不常见。对痰抗酸杆菌染色阳性的老年机械通气患者应重视NTM的培养和菌种鉴定。     

基因芯片快速检测分枝杆菌技术辅助诊断小儿结核病的临床研究

目的：探讨基因芯片快速检测分枝杆菌技术在辅助诊断小儿结核病方面的临床研究。方法方便选取2014年7月-2015年7月住于该院的经临床、放射线疑诊0~14岁肺结核77例为观察对象,采用晶芯@结核病分子诊断系统对观察对象痰标本进行检测,将检测结果与最终诊断相比较,并与罗氏痰培养结核菌法、痰涂片找结核菌、DNA检测、PPD试验、结核抗体、对INH\RFP耐药性及对非结核分枝杆菌菌种鉴定结果进行对比,分别计算各检测方法的灵敏度和特异度,从而判断基因芯片技术在诊断儿童结核病可行性、敏感、快速。结果重症结核感染17例,其中有9例(11.69%)为血行播散型肺结核,7例(9.09%)合并有结核性脑膜炎,1例(1.3%)合并骨结核。检测异烟肼耐药相关基因,基因芯片法和罗氏培养法比较χ2=2.286,P=0.515,Kappa=0.604,检测利福平耐药相关基因,基因芯片法和罗氏培养法比较χ2=58.77,P<0.05,Kappa=0.587。基因芯片法与罗氏培养法、PPD试验、结核DNA、结核抗体、痰涂片多重比较,χ2=64.91,P<0.05。结果基因芯片法可以快速检测结核分枝杆菌,与罗氏培养法检测结核分枝杆菌拥有中等一致性,其快速、无创,可以用于辅助诊断小儿结核病。     

台州地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的流行病学调查

目的 了解台州地区临床流行的结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因的表型,为临床有效地治疗结核病提供依据。方法 回顾性分析2015 年8 月至2020 年11 月送检于台州恩泽医疗中心（集团）恩泽医院的482 株临床分离的结核分枝杆菌菌株,采用DNA 微阵列芯片法对利福平耐药相关基因rpoB、异烟肼耐药相关基因katG及inhA 基因进行特异性检测。结果 482 例结核分枝杆菌中利福平耐药基因检测出rpoB 野生型367 例,突变型115 例,其中突变型以rpoB531（C→T）突变为主,检出55 例;检出异烟肼耐药基因katG 和inhA 基因型均为野生型的372 例,突变型110 例,katG 基因突变型中katG315（G→C）突变和katG315（G→A）突变分别是91 例和12 例,inhA 基因突变型只有inhA-15（C→T）突变16 例。2020 年利福平基因耐药率增加到38.46%,异烟肼基因耐药率在6 年间没有明显增长。结论 台州地区结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药基因型以野生型为主,但利福平基因耐药率呈上升趋势。     

艾滋病与非结核分枝杆菌的双重感染研究进展

非结核分枝杆菌（non-tuberculous mycobacterium,NTM）感染是指除了结核分枝杆菌复合群和麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌引起的感染。属于条件致病菌,常见于有基础疾病和存在免疫缺陷的患者,最好发于HIV感染者,被认为是引起艾滋病患者发生常见机会性感染的病原菌之一,尤其常见于CD4⁺T细胞小于50个/μL的艾滋病患者。近年来,由非结核分枝杆菌引起的感染在全球各地的报道呈现明显上升趋势,严重威胁着人类尤其是艾滋病患者的健康。由于NTM感染的相关临床症状、体征以及影像学表现等缺乏典型,容易被误诊为结核感染,且病死率高。故了解NTM的病原学分类、感染途径、HIV患者感染NTM后两者之间的相互作用机制,以及该病相关临床表现、实验室诊断方法和目前关于该病的治疗方法等显得至关重要,因此本综述就上述内容的研究进展做一概述。     

基因芯片快速鉴定分枝杆菌菌种方法的建立

目的：利用基因芯片技术,建立一种能快速、准确鉴定分枝杆菌菌种的方法,并验证其临床应用价值。方法根据23种分枝杆菌基因序列设计特异性探针并制作基因芯片,通过PCR‐反向点杂交鉴定23种分枝杆菌标准菌株、9种非分枝杆菌和103株分枝杆菌临床分离株的菌种。结果应用基因芯片技术检测23种分枝杆菌标准菌株和9种非分枝杆菌菌株,特异性为100％。103株临床分离株经鉴定87株为结核杆菌复合群（MTC）;16株为非结核分枝杆菌（NTM）,其中脓肿分枝杆菌5株、胞内分枝杆菌3株、鸟分枝杆菌3株、偶发分枝杆菌2株,以及堪萨斯分枝杆菌、海分枝杆菌、戈登分枝杆菌各1株。103株临床分离株鉴定结果与测序法完全一致,该方法最低检出限为103copy／mL。结论采用基因芯片技术能快速鉴定分枝杆菌菌种,并区分MTC和NTM,具有简便快速及准确性、特异性、灵敏度高的优点。     

丙硫乙烟胺抗结核分枝杆菌临床耐药界限的研究

目的通过测定丙硫乙烟胺（Th）对128株临床分离的结核分枝杆菌的最低抑菌浓度（MIC）,分析MIC与既往Th的用药史及经过含Th方案治疗的疗效相关性,以期确定Th的临床耐药界限。方法住院的结核病患者128例,留取痰或体液进行结核分枝杆菌培养、药敏试验及MIC测定,并系统观察47例肺结核患者接受Th治疗方案的痰菌阴转率,各组间率的比较用x^2检验。结果（1）既往未接受Th药物治疗的临床分离株中,MIC=2．5μg／mL者占72．5％,MIC≤5．0μg／mL者占77．5％;（2）既往曾接受Th药物治疗的临床分离株中,MIC〉5．0μg／mL者占96．4％;（3）如以MIC≥5．0μg／mL为临床耐药界限。MIC〈5．0μg／mL与MIC≥5．0μg／mL比较,3、6、12个月患者痰菌阴转率分别为53．6％、75．0％、82．1％及≥5．0μg／mL 3、6、12个月患者痰菌阴转率分别为53.6%,75.0%,82.1%及15．8％,31．6％、42．1％,两组比较差异均有非常显著性（P〈0．01）。结论（1）曾接受Th药物治疗的结核病患者分离株MIC显著高于未接受Th治疗的患者,随着用药时间的延长,MIC随之升高;（2）根据MIC与临床疗效分析结果,提示采用MIC≥5．0μg／mL为临床耐药界限为宜;（3）既往曾接受Th药物治疗的结核病患者,应进行Th的药敏试验,并坚持合理、联合用药的原则,防止耐药株的产生。     

结核分支杆菌ESAT6蛋白的表达、纯化及抗原性研究

目的：获得重组ESAT6蛋白,研究其免疫学特性,评价其在结核病血清学诊断中的价值。方法：分别用生理盐水和卡介苗免疫小鼠8周后,以结核分支杆菌接种小鼠。应用基因工程技术表达、纯化ESAT6蛋白,分别以结核分支杆菌PPD或纯化的rESAT6蛋白为抗原,通过ELISA方法及结核病一步法检测小鼠或人血清中抗结核抗体。结果：重组质粒pET24b-ESAT6在大肠杆菌BL2（DE3）细胞内以包涵体形式存在,分子量约6kDa,每100ml培养菌可获得约18mg纯化的重组蛋白。生理盐水和卡介苗免疫小鼠血后血清中抗ESAT6抗体无区别。结论分支杆菌攻击后,两组小鼠血清中抗ESAT6抗体均明显升高,但只有卡介苗组小鼠抗体水平超过平均值＋2标准误。以33例正常人血清的OD值＋2S为正常界限值,33例正常人和32例结核病人血清一步法和PDD、rESAT6 ELISA检测抗结核抗体的特异性和敏感性分别为：一步法87.9%(29/33),65.6%(21/32),PPD93.9%(31/33),62.5%(20/32);rESAT6 97%(32/33),18.2%(4/32)。结论：pET24b-ESAT6大肠杆菌工程菌能以包涵形式高效表达重组ESAT6蛋白,卡介苗免疫对血清中ESAT6抗体无影响,结核病人血清中抗ESAT6抗体阳性率低,rESAT6纯化蛋白可作为结核病血清学诊断的混合抗原之一。     

应用DNA芯片法检测耐多药结核分枝杆菌的研究

目的应用DNA芯片技术快速检测耐多药结核菌的常见突变位点,初步评价其临床应用价值。方法以结核分枝杆菌标准株H37RV为对照,应用基因芯片技术、聚合酶链反应-单链构象多态性技术、聚合酶链反应-直接测序技术检测46株耐多药结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB基因。结果 46例耐多药菌株中,应用基因芯片检测出katG基因突变28株,检出率为60.9%(28/46);检测出rpoB基因突变37株,检出率为80.4%(37/46);同时检测出二者突变共25株,检出率为54.3%(25/46)。结论基因芯片技术操作简单、检测快速,对异烟肼、利福平耐药基因检出率较高,可作为临床耐药检测的辅助手段。     

广东省结核病流行菌株研究

目的：从分子流行病学的角度探讨广东省结核分支杆菌菌株流行的分布。方法：构建广东省74株临床分离的以RFLP为基础的结核分支杆菌的IS6110 DNA指纹图谱技术，确诊结核分支杆菌菌株的流行分布。结果：24．3％（18／74）的结核菌株的IS6110 DNA指纹相似值在1－0．65之间，鉴定结果为它们均是“北京家族”结核分支杆菌菌株。结论：广东省结核菌株流行主要存在着遗传关系接近，在基因水平上相关程度较高的“北京家族”结核分支杆菌菌株，且该家族菌株正以一定的比例在我省流行。