长脉冲超声联合脂质体微泡溶解微血栓的体外实验研究

目的评价长脉冲超声联合脂质体微泡造影剂溶解微血栓的疗效。方法构建评价溶栓效能的体外循环系统,通过造成200~300μm的微血栓阻塞于滤网来模仿体内的微循环栓塞。然后治疗组给予脂质体微泡加超声治疗15min,超声频率1MHz、声压1.5MPa、脉冲间隔3s,包括100、1 000、5 000 3种周期,对照组给予超声照射但无声学微泡。结果治疗组溶栓的效果随着脉冲的延长而增加,且对应的惯性空化效应强度也随之增加。1 000和5 000周期组的溶栓率显著高于单纯超声组(P均<0.01)。结论长脉冲超声联合脂质体微泡能实现良好的溶栓效果,且在一定范围内溶栓的效果随着脉冲的延长而增加。惯性空化可能是长脉冲超声介导微泡溶栓的重要机制之一。     

血管内超声导管联合微泡增强尿激酶溶栓的实验研究

目的探讨EKOS■超声导管联合血栓内注射微泡增强尿激酶体外溶栓治疗效果。方法采用水听器法测量EKOS■超声导管峰值负压。将90份体外牛血血栓样本根据其实验方法随机分为6组,分别为:超声+微泡+尿激酶联合组(联合组)、超声+尿激酶组(US+UK组)、超声+微泡组(US+MB组)、超声组(US组)、尿激酶组(UK组)和对照组,每组15份,称取各组溶栓前后的血栓质量,计算并比较其溶栓率。对溶栓处理后各组血栓行HE染色并于光镜下观察红细胞和纤维蛋白的分布情况。结果EKOS■超声导管的峰值负压在0.4~6.4 MPa,呈无规律动态变化。联合组溶栓率为(41.9±4.5)%,与US+UK组(42.0±3.3)%接近,均显著高于其余各组,差异均有统计学意义(均P<0.05);US+MB组溶栓率为(28.4±3.3)%,UK组为(27.8±3.1)%,两组比较差异无统计学意义,但均高于US组(23.9±3.0)%和对照组(17.5±3.7)%,差异均有统计学意义(均P<0.05)。光镜下见联合组和US+UK组与EKOS■超声导管接触处的血栓较多崩解,红细胞分布较其余各组更稀疏。结论EKOS■超声导管可明显提高尿激酶对体外牛血血栓的溶栓率,在此基础上增加微泡对溶栓率无明显提高。     

不同声学微泡对超声介导体外基因转染的作用

目的探讨超声介导基因转染时,不同声学微泡[脂质体微泡(LM)和SonoVue微泡]对体外基因转染的作用及其安全性。方法将红色荧光蛋白基因(DsRed)和LM加入培养的Hela细胞,后行超声辐照(US),对其他4种不同类型的细胞系(HepG_2、Ishikawa、MCF-7和B16-F10)行超声处理,并与PEI介导的基因转染进行比较分析,运用荧光显微镜、流式细胞术评估基因转染率和细胞损伤。结果培养的细胞经LM和超声辐照联合处理后(P+UTMI)),HepG_2、MCF-7的基因转染率略优于Sono Vue微泡转染时(P0.01),且未发现显著的细胞损伤;不同细胞类型对超声的反应性不同。与非辐照组相比,转染率和死亡率均有不同程度的增加。结论声学微泡对超声介导的体外基月转染有显著的增效作用,为基因治疗提供一种新颖、高效、安全的非病毒基因转染方法。     

超声和超声微泡造影剂的溶栓作用

急性脑卒中是临床常见的严重急症，主要分为缺血性卒中和出血性卒中。目前对缺血性卒中治疗的主要方法是药物溶栓，早期快速的溶栓治疗能挽救生命，恢复生理功能。但由于治疗时间窗的限制和一些并发症的出现，如出血、血管再闭塞等，其疗效令人不甚满意。自近年发现超声作用可以促进血栓溶解以来，对超声及微泡造影剂溶栓作用的研究日益深入，     

靶向和非靶向微泡联合尿激酶超声溶栓的电镜表现

目的 比较靶向和非靶向微泡联合尿激酶超声溶栓的电镜表现。方法 将精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸片段（RGDS）与尿激酶（UK）以及超声微泡（SonoVue）通过机械振荡法,制备成靶向微泡。于30只新西兰大白兔单侧股动脉制备在体混合性血栓,并分为单纯超声辐照组（US组）、超声辐照+非靶向微泡造影剂+UK组（US+M+UK组）、超声辐照+靶向微泡造影剂+UK组（US+RGDS+UK组）。通过超声及多普勒血流仪观察溶栓效果,然后对股动脉离体标本行HE染色,并观察电镜表现。结果 溶栓20 min后,与US组和US+M+UK组比较,US+RGDS+UK组血流量明显恢复（P均<0.05）,US组与US+M+UK组比较差异无统计学意义（P均>0.05）。US+M+UK组HE染色显示管腔内充满血栓,血小板梁呈颗粒状、不致密,扫描电镜示粗大束状的胶原纤维上疏松附着少量细小纤维蛋白丝,大部分断裂;透射电镜示血栓大部分溶解为空泡状,可见白细胞或血小板降解的碎片。US+RGDS+UK组HE染色显示血栓完全溶解;扫描电镜示血栓的纤维网状结构被破坏,纤维蛋白完全的溶解;透射电镜示血栓降解为高电子密度的颗粒。结论 血栓结构的空泡化、纤维蛋白网架结构完全崩解和纤维蛋白的完全溶解是靶向微泡和UK联合溶栓的主要电镜改变。     

超声联合微泡对不同凝龄富血小板血栓和富红细胞血栓的溶栓效果

目的 探讨超声联合微泡对不同凝龄富血小板血栓（PRT）和富红细胞血栓（ERT）的溶栓效果。方法 分别于体外和大鼠体内颈总动脉制备不同凝龄的PRT和ERT。离体及在体实验均分为4组,即离体PRT 3 h组、离体PRT 24 h组、离体ERT 3 h组、离体ERT 24 h组及在体PRT 3 h组、在体PRT 24 h组、在体ERT 3 h组、在体ERT 24 h组;分别于体外循环装置和大鼠颈总动脉血栓模型中进行超声联合微泡溶栓实验,并采集超声图像。行病理组织学检查以验证血栓成分。离体实验主要分析溶栓后管腔横截面积增加百分比及溶栓率,在体实验主要分析溶栓后血管再通率及颈总动脉血流速度。结果 溶栓治疗后,离体及在体实验显示：PRT 3 h组与ERT 3 h组管腔横截面积增加百分比[（121.12±13.21）% vs （130.09±15.34）%]、溶栓率[（39.83±7.09）% vs （42.14±5.17）%]、血管再通率（83.33% vs 91.67%）及颈总动脉血流速度[（0.21±0.02）m/s vs （0.22±0.01）m/s]差异均无统计学意义（P均>0.05）。PRT 24 h组与ERT 24 h组比较、PRT 24 h组与PRT 3 h组比较、ERT 24 h组与ERT 3 h组比较,管腔横截面积增加百分比、溶栓率、血管再通率、颈总动脉血流速度均下降（P均<0.05）。与ERT 24 h组比较,PRT 24 h组管腔横截面积增加百分比、溶栓率、血管再通率及颈总动脉血流速度均下降（P均<0.05）。结论 超声联合微泡对溶解离体及在体大鼠颈总动脉PRT和ERT的效果随血栓凝龄的增加而下降,且以PRT为著。     

超声微泡血栓助溶效应研究进展

<正>迄今为止,超声造影剂(ultrasound contrast agent,UCA)的研究和应用已经走过了30余年历史。从UCA的早期发展历史不难看出,只有利用包膜微泡造影剂在谐振频率场中表现出的     

超声联合微泡溶解体外血栓声像图改变与病理对照研究

目的观察超声联合微泡对体外血栓溶栓治疗后的声像图变化,对照病理结果,探讨溶栓治疗后血栓声像图与病理改变之间的关系。方法将DiO荧光分子探针标记脂膜微泡,联合1 MHz治疗超声进行血栓溶栓治疗10 min。分组:单纯超声辐照组;单纯微泡组;超声联合微泡组。对各组溶栓治疗后血栓进行超声显像并计算溶栓率。血栓标本HE染色后光镜下观察,微泡治疗组血栓制成冷冻切片在荧光显微镜下观察。结果超声联合微泡组溶栓率(29.51±5.17)%与单纯超声组(24.13±3.93)%、单纯微泡组(21.73±2.78)%比较差异显著(P<0.01,P<0.01)。超声显示治疗前血栓呈均质弱回声团块,溶栓治疗后单纯超声组血栓呈不均质弱回声伴内部少数强光点;单纯微泡组表面可见较多强光点,内部仍呈低回声;超声联合微泡组血栓呈不均质强回声团块。光镜下单纯超声组血栓内部可见几个小裂隙,而单纯微泡组血栓内结构较均一,未见裂隙,超声联合微泡组可见血栓表面空泡和内部不规则裂隙。荧光显微镜下显示单纯微泡组血栓表面呈明亮荧光带,内部几无荧光颗粒分布,超声联合微泡组血栓表面呈更为宽大明亮荧光带,内部的荧光颗粒分布较密集。结论溶栓治疗后血栓的超声声像图改变与病理学结果关系密切。     

携尿激酶靶向微泡造影剂的体外溶栓实验研究

目的 制备携尿激酶及精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸-丝氨酸(RGDS)的靶向溶栓造影剂,并研究其对体外血栓的溶解作用.方法 通过直接连接法将尿激酶、RGDS连接到造影剂声诺维上.制备血块,分为4组,分别注入生理盐水、声诺维、尿激酶及所制备的造影剂,计算处理前后的血块质量差,算出溶栓率,进行统计学分析.结果 荧光显微镜及流式细胞仪检测结果均显示,声诺维成功携带了尿激酶及RGDS,携带率分别为(72.3±9.4)%、(64.6±10.2)%.加入所制备的携药造影剂组溶栓前后血块质量改变显著,差异具有统计学意义,血栓溶解率(18.4±3.2)%.结论 携尿激酶及RGDS的靶向溶栓造影剂成功制备.所制备的造影剂在体外具有血栓溶解作用.     

治疗超声介导微泡造影剂对体外血栓的助溶研究

目的运用本科自制脂膜氟烷超声造影剂“脂氟显”结合治疗超声对组织纤溶酶原激活物(tissue-plasminogen activator,t-PA)助溶体外血栓的有效性进行研究。方法取健康人全血制成质量约200~300mg血栓,频率1MHz治疗超声结合“脂氟显”和t-PA进行溶栓治疗。计算治疗前后的血栓质量,得到溶栓率,进行统计学分析。结果组间比较溶栓率超声+t-PA+“脂氟显”组(50.05±6.59)%与单纯超声辐照(24.14±3.93)%、单纯t-PA组(35.66±3.34)%、超声+t-PA组(41.85±4.78)%及超声+“脂氟显”组(29.51%±5.17)%间差异均有十分显著性意义(P<0.01);超声+“脂氟显”组与单纯超声辐照组间比较差异有显著性意义(P<0.05)。结论微泡超声造影剂在治疗超声介导下对t-PA助溶体外血栓有显著效果。     

超声波增强TPA溶栓效果的体外实验

目的评价在体外实验条件下，超声波辐照对组织型纤溶酶原激活物（TPA）溶栓效率的促进作用。方法取健康人全血标本54份．37C恒温水浴孵育2h后形成体外血栓。样本被分为1μg／mlTPA组、5μg／ml μl TPA组、超声辐照组、TPA＋超声组与对照组。前4组血栓分别给予单纯给予1μg／mlTPA、单纯5μg／mgTPA；频率2MHz，声强1．8W／cm。的脉冲超声波辐照；对照组无任何处理。各组处理时间10min。计算并比较各组溶栓率。结果单用或联用TPA与超声辐照组的溶栓率均显著高于对照组（P〈50．01）且联用组显著高于任一单用组（P〈0．01）。结论超声波不仅有直接溶栓作用，还能促进TPA的药物溶栓作用。联用超声波与TPA溶栓可以在降低药量的同时提高药效，降低出血性并发症的发生，有较高的潜在临床应用价值。     

低能量治疗性超声促进药物溶栓的实验研究

通过应用低能量治疗性超声对全血细胞血栓和纤维蛋白血栓的体外实验研究，结果显示：低能量治疗性超声能够促进药物溶栓的效果，与单用药物溶栓比较，效果可提高３２．５９～３９．３１％，并用对形成３天的血栓也有效；超声促进药物溶栓的效果与超声强度和超声处理的时间成正比（ｒ＝０．７０，０．９１）；药物浓度增加与超声助溶全血细胞血栓成正比（ｒ＝０．９０）与纤维蛋白血栓并不成正比。     

Ultrasound with Microbubble Contrast Agent and Urokinase for Thrombosis

This study was aimed at assessing the effects of urokinase (UK) in combination with ultrasound and microbubbles in in vitro and in vivo thrombolytic therapy for the treatment of deep vein thrombosis (DVT). Thrombi with formation times of 1, 3, 7, 14 and 21 d were used for thrombolysis. Forty-five adult mongrel dogs were used to evaluate thrombosis in vivo. Both in vitro and in vivo analyses revealed that UK?+?microbubbles had the best effect among the combinations. Thrombolysis <7 d was more effective at a thrombolysis rate of about 50%, but the thrombolytic effect of thrombi >7 d was poor at thrombolysis rates <30%. Ultrasound?+?UK significantly increased the thrombolysis rate of thrombi <7 d. These results suggest that the combination of ultrasound with microbubble contrast agents and UK may have a synergistic effect on thrombolysis.     

体外超声波溶解血栓实验及血栓凝龄对溶栓效应的影响的研究

以超声波及／或尿激酶对健康人静脉血形成的不同凝龄体外血栓行溶栓实验。结果显示，超声波具有优于尿激酶的溶栓效应（Ｐ＜０．０５）并可强化尿激酶的溶栓效应。超声波加用尿激酶较单纯超声波溶栓效果更佳（Ｐ＜０．０５）。超声波的溶栓效应与血栓凝龄有关，血栓愈陈旧，则超声波溶栓效应愈差（单纯超声波组ｒ＝－０．７４１，ｎ＝９６；超声波加尿激酶组ｒ＝－０．８０２，ｎ＝９６）。结论为，超声波具有肯定的溶栓效应和强化尿激酶溶栓效应，血栓形成时间愈短，超声波溶栓效果愈佳     

Noninvasive Thrombolysis Using Pulsed Ultrasound Cavitation Therapy – Histotripsy

Clinically available thrombolysis techniques are limited by either slow reperfusion (drugs) or invasiveness (catheters) and carry significant risks of bleeding. In this study, the feasibility of using histotripsy as an efficient and noninvasive thrombolysis technique was investigated. Histotripsy fractionates soft tissue through controlled cavitation using focused, short, high-intensity ultrasound pulses. In vitro blood clots formed from fresh canine blood were treated by histotripsy. The treatment was applied using a focused 1-MHz transducer, with five-cycle pulses at a pulse repetition rate of 1 kHz. Acoustic pressures varying from 2 to 12 MPa peak negative pressure were tested. Our results show that histotripsy can perform effective thrombolysis with ultrasound energy alone. Histotripsy thrombolysis only occurred at peak negative pressure ≥6 MPa when initiation of a cavitating bubble cloud was detected using acoustic backscatter monitoring. Blood clots weighing 330 mg were completely broken down by histotripsy in 1.5 to 5 min. The clot was fractionated to debris with >96% weight smaller than 5 μm diameter. Histotripsy thrombolysis treatment remained effective under a fast, pulsating flow (a circulatory model) as well as in static saline. Additionally, we observed that fluid flow generated by a cavitation cloud can attract, trap and further break down clot fragments. This phenomenon may provide a noninvasive method to filter and eliminate hazardous emboli during thrombolysis. (E-mail: adamdm@umich.edu)     

微泡增强超声助溶兔股动脉血栓的实验研究

目的 探索自制脂膜微泡对超声助溶兔股动脉血栓的增强效果。 方法 对16只股动脉血栓模型兔进行分组溶栓，包括正常对照组、阳性对照组、单纯超声组及超声联合微泡组，采用CDFI、X-线血管造影进行再通率检测和血流再通情况评分，并进行病理光镜检测，比较各组溶栓效果。 结果 血管再通率显示阳性对照组无1例再通，单纯超声组溶栓治疗后血管再通率为25％，血流评分仅达Ⅰ级；超声联合微泡组血管再通率为87．5％，血流评分超过Ⅱ级。单纯超声组与超声联合微泡组再通率比较，差异有统计学意义（P〈0．05）。光镜下股动脉血栓呈完全梗阻型并以红细胞成分为主，伴部分纤维蛋白；单纯超声治疗后血栓内部结构部分变疏松；超声联合微泡治疗后股动脉管腔大部分溶通，仅残留少量附壁血栓。 结论 超声微泡能显著增强治疗超声对兔股动脉血栓的助溶作用。     

超声辐照和SonoVue微泡在介导hAng-1基因体外转染时的作用和量效关系探讨

目的 探讨超声辐照和SonoVue微泡分别使用和联用在介导hAng-1基因体外转染过程中的作用以及辐照强度和微泡浓度对转染效率和细胞活性的影响.方法 实验分四组A组:单纯超声辐照+质粒组;B组:微泡+质粒组;C组:超声辐照+微泡+质粒组和空白对照组D组. C组内转染参数分别设置为超声照射强度0.5、1.0 、1.5和2.0 W/cm~2,微泡浓度5%、10%、20%、30%和40%.将连接有eGFP-C_3-hAng-1质粒的SonoVue微泡对293T细胞进行转染,48 h后检测各组基因转染效率和细胞存活率. 结果转染48 h后C组转染效率最高,荧光阳性细胞数最多,强度最大;A组转染效率很低,见少量荧光表达;B、D组无明显基因转染发生.随着超声照射强度和微泡浓度的增加,基因转染效率会逐步升高,具有统计学意义.微泡浓度大于20%、超声照射强度超过1.5 W/cm~2后基因转染效率不再升高甚至降低,细胞死亡率显著增高(P<0.01).结论 SonoVue微泡介导外源基因转染必须联合超声辐照才能获得较好的转染效率.对于hAng-1基因和SonoVue微泡,选择声强1.5 W/cm~2,微泡浓度20%是相对最佳转染条件.