15d-PGJ_2对神经元氧糖剥夺/复氧损伤的影响

目的观察过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPAR-γ)激动剂15d-PGJ_2对神经元氧糖剥夺/复氧(OGD/R)损伤的影响,并探讨其可能的作用机制。方法采用原代培养的小鼠胎鼠大脑皮质神经元,建立OGD/R损伤模型。将培养的神经元细胞进行分组,Western blot检测各组神经元内LC3-1、LC3-Ⅱ、Bcl-2、Beclin1、AMPK、m TOR及p70S6K等蛋白的表达;MTT法检测细胞活性,乳酸脱氢酶(LDH)漏出率测定细胞毒性。结果 OGD/R损伤6 h、12 h及24 h后神经元LC3-Ⅱ、Beclin 1表达明显增高,而p62表达持续下降,神经元的生存率明显下降,LDH漏出率增加。15d-PGJ_2可显著降低LC3-Ⅱ和Beclin 1表达水平,改善神经元的生存率及降低LDH的漏出率。OGD/R后Bcl-2的蛋白表达水平均明显减少,而Beclin 1表达则显着增加。15d-PGJ_2预处理显著增加OGD/R 24 h的Bcl-2表达量。利用Bcl-2 siRNA或scRNA转染神经元细胞发现,Bcl-2 siRNA可消除15d-PGJ_2对OGD/R后各时间点的抑制效应。结论 15d-PGJ_2能够有效地对神经元OGD/R损伤起到保护作用,其机制可能是通过上调Bcl-2的表达进而抑制自噬的发生实现的。     

大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧模型的建立

目的 体外大鼠大脑皮质神经元氧糖剥夺/复氧试验模型的建立.方法 取 Wistar 大鼠乳鼠脑组织,采用过滤、消化、离心等技术获取大脑皮质神经元并培养,通过倒置显微镜、免疫细胞化学鉴定,采用MTT 法、酶学检查、光学显微镜等评价该模型.结果 (1)形态学、免疫细胞化学(NSE)鉴定所培养的细胞为神经元;(2)氧糖剥夺/复氧前后细胞形态结构变化显著,MTT 法及LDH释放测定均提示神经元损伤随氧糖剥夺时间呈时间依赖关系,与正常对照组有显著差异(P<0.05).结论 成功地建立体外大脑皮质神经元的氧糖剥夺/复氧模型.     

头孢曲松钠对大鼠脑皮质神经元氧糖剥夺损伤的保护作用及其机制

目的研究头孢曲松钠对大鼠脑皮质神经元氧糖剥夺(OGD)损伤的保护作用及其可能的机制。方法体外培养大鼠脑皮质神经细胞,分为正常对照组、氧糖剥夺(OGD)组和头孢曲松钠(CTX)预处理组。OGD组和CTX预处理组建立OGD模型。并检测各组的细胞活性、细胞谷氨酸转运体-1(GLT-1)mRNA表达、脑源性神经营养因子(BDNF)和白介素(IL)-6含量。结果与正常对照组比较,OGD组及CTX预处理组神经细胞活性减低,GLT-1 mRNA表达显著下调,细胞培养上清液中BDNF及IL-6含量显著增加(P<0.05～0.01);与OGD组比较,CTX预处理组神经细胞活性明显增加,GLT-1 mRNA表达上调,细胞培养上清液中BDNF含量增加(均P<0.01),IL-6含量无明显改变。结论 CTX预处理通过上调GLT-1和BDNF表达保护皮质细胞OGD损伤。     

瘦素对氧糖剥夺/复糖复氧后原代神经元的影响及相关机制北大核心CSCD

目的探讨瘦素预处理对原代培养神经元氧糖剥夺/复糖复氧(oxygen-glucose deprivation and reoxygenation,OGD/R)后的神经保护作用及相关机制。方法体外培养、纯化及鉴定Sprague-Dawley乳鼠皮层神经元,采用OGD/R模型,在体外模拟脑缺血/再灌注损伤。将培养7 d的神经元随机分为4组:正常组、OGD/R组、瘦素组和LY+瘦素组。采用细胞计数试剂测定细胞存活率;通过透射电镜观察各组神经元的内质网超微结构;应用细胞免疫荧光、蛋白印迹技术及RT-PCR法检测磷酸化蛋白激酶B(phsphorylated protein kinase B,p-Akt)及内质网应激相关蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose-regulated protein 78,GRP78)、C/EBP同源蛋白(C/EBP homologous protein,CHOP)和半胱氨酸蛋白酶12(cysteinyl aspartate specific proteinase 12,Caspase12)的表达。结果与OGD/R组比较,瘦素组细胞存活率明显升高(43.04%±1.17%vs.68.61%±1.42%,P<0.001),细胞的形态损伤与内质网肿胀明显减轻,p-Akt(0.65±0.10 vs.1.10±0.21,P<0.05)和GRP78(1.04±0.06 vs.1.57±0.19,P<0.01)表达显著增加,CHOP(1.00±0.21 vs.0.59±0.11,P<0.01)和Caspase12(1.20±0.10 vs.0.86±0.10,P<0.01)表达明显减少;与瘦素组比较,LY+瘦素组细胞存活率显著降低(68.61%±1.42%vs.51.97%±2.05%,P<0.001),细胞的形态损伤与内质网肿胀明显增加,p-Akt(1.10±0.21 vs.0.76±0.23,P<0.05)和GRP78(1.57±0.19 vs.1.19±0.18,P<0.05)表达减少,CHOP(0.59±0.11 vs.0.65±0.33,P<0.05)和Caspase12(0.86±0.10 vs.1.03±0.06,P<0.05)表达显著增加。结论瘦素对OGD/R诱导的神经元损伤具有神经保护作用,其可能机制是瘦素激活PI3K/Akt信号通路,减轻内质网应激,从而促进原代神经元存活。     

二氢杨梅素对小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤炎症反应的影响

目的观察二氢杨梅素(dihydromyricetin,DMY)对小鼠局灶性脑缺血再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)损伤后炎症反应的影响。方法雄性昆明种小鼠随机分为3组,即假手术组、I/R模型组及DMY(500 mg/kg)组。改良线栓法制备小鼠大脑中动脉阻塞/再灌注(middle cerebral artery occlusion/reperfusion,MCAO/R)局灶性脑缺血(3 h)再灌注(24 h)损伤模型。术前10 d开始灌胃给药,每天1次,并在缺血前1 h及再灌注后12 h各给药1次。再灌注24 h后取脑,免疫组织化学检测小胶质细胞标记物离子钙接头蛋白(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba1)和5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)表达;ELISA法检测缺血脑组织匀浆炎症因子TNF-α和5-LOX代谢物白三烯B4(leukotrienes B4,LTB4)、半胱氨酰白三烯(cysteinyl leukotrienes,CysLTs)含量。结果与模型组比较,DMY 500 mg/kg抑制小胶质细胞活化并降低TNF-α水平,降低缺血脑组织5-LOX蛋白表达并减少LTB4与CysLTs的产生(P0.05或P0.01)。结论 DMY可减轻局灶性脑I/R损伤炎症反应,与抑制5-LOX有关。     

蛋白酶抑制剂H89对神经元细胞氧糖剥夺再灌注后高尔基体形态及细胞凋亡的影响

目的探讨蛋白酶抑制剂H89对神经元细胞经氧糖剥夺再灌注损伤后高尔基体形态和细胞凋亡的影响。方法将体外常规培养的小鼠海马神经元细胞HT22分为对照组、模型组和H89干预组。模型组与H89干预组按再灌注时间点分6h、12h和24h三个亚组。采用MTT法检测细胞存活率;Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡;细胞免疫荧光技术观察高尔基体形态;Western blot技术检测GM130与GAAP蛋白表达。结果 H89干预组较模型组细胞活力有所上升,其中12h时间点(OD值0.1467±0.0090)与同期模型组比较,差异有统计学意义(P0.05)。H89干预组较模型组细胞凋亡率有所下降,但差异均无统计学意义(P0.05)。H89干预组在6h和12h时间点高尔基体碎裂程度较同期模型组稍有减轻。H89干预组GM130表达水平较模型组无显著升高(P0.05)。GAAP表达水平仅在24h时间点(灰度比值0.4066±0.0288)显著升高(P0.05)。结论 H89干预不能减轻神经元细胞经氧糖剥夺再灌注损伤后的高尔基体碎裂和细胞凋亡。     

缺血后处理抑制神经元凋亡减轻大鼠脑缺血再灌注损伤

目的研究缺血后处理(Ipost C)对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用及机制。方法通过手术前后局部脑血流多普勒检测,神经行为学测试和脑梗死面积评估等方法建立SD大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,在大脑中动脉闭塞100 min后立即予Ipost C干预。使用改良神经损害严重程度评分和转棒实验评估大鼠神经功能损伤程度,TTC染色测量脑梗死面积。Western blot分析凋亡相关蛋白表达(Bax、细胞色素C),透射电镜观察线粒体损伤和TUNEL评估缺血周边皮质的凋亡。结果相对于脑缺血再灌注,Ipost C能显著减少脑梗死面积,降低神经功能受损,改善脑缺血再灌注后的局部脑血流量。同时,Ipost C能减少线粒体的Bax转位及细胞色素C的释放,减轻线粒体损伤及缺血侧大脑皮质神经元的凋亡。结论 Ipost C抑制神经元凋亡,减轻脑缺血再灌注损伤,有可能成为急性缺血性脑卒中临床治疗中的新靶点。     

miR-132在氧糖剥夺诱导原代皮质神经元缺血损伤中的作用

目的探讨miR-132在氧糖剥夺诱导原代皮质神经元缺血损伤中的作用。方法体外培养原代皮质神经元细胞,构建氧糖剥夺(OGD/R)模型模拟缺血再灌注损伤。细胞随机分为假手术组(Sham)、OGD组、慢病毒对照组(LV-control)、miR-132低表达组(LV-anti-miR-132)、miR-132过表达组(LV-miR-132)。采用CCK-8、real-time PCR、Western blot等技术研究miR-132对OGD损伤原代皮质神经元的影响和机制。结果 miR-132在OGD诱导的缺血损伤模型中表达水平明显降低(P 0.05);在OGD诱导原代皮质神经元缺血损伤过程中,降低miR-132的表达,会加剧OGD损伤明显减少细胞活力;增加miR-132表达水平,会减轻OGD损伤提升细胞存活率。Western blot结果显示,过表达miR-132会上调突触相关蛋白Synapsin-1、PSD95蛋白表达水平。结论过表达miR-132通过上调突触相关蛋白Synapsin-1、PSD95的表达水平改善OGD诱导的缺血损伤,提高原代皮质神经元的存活率。     

糖氧剥夺再灌注对SH-SY5Y细胞焦亡的影响

目的 探讨细胞焦亡在糖氧剥夺诱导的人神经母细胞瘤细胞(Human neuroblastoma cells,SH-SY5Y)损伤中的作用。方法 用不同糖氧剥夺时间(0、3、6、12 h)处理SH-SY5Y细胞,然后进行再灌注24 h; Hoechst33342/碘化丙啶(Propidine iodide,PI)染色试剂盒观察细胞膜破裂情况; 原位末端标记法(Terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick-end labeling,TUNEL)/天冬氨酰特异性半胱氨酰蛋白酶-1(Cysteinyl aspartate specific proteinase 1,Caspase-1)共染检测细胞焦亡; 蛋白免疫印迹法检测焦亡相关指标[核苷酸结合寡聚化结构导致域样受体蛋白3(Nucleotide-binding oligomerization domain-like receptor protein 3,NLRP3)、Caspase-1、Pro-caspase-1、白介素-1β(Interleukin-1β,IL-1β),Pro-IL-1β]的表达水平; 使用Caspase-1抑制剂(Belnacasan,VX-765)处理糖氧剥夺/再灌注细胞模型,观察其对细胞焦亡的影响。结果 糖氧剥夺再灌注处理呈时间依赖诱导SH-SY5Y细胞损伤,并诱导细胞焦亡,焦亡相关指标(NLRP 3,Caspase-1,IL-1β)表达水平升高。VX-765可减轻糖氧剥夺再灌注诱导的SH-SY5Y细胞焦亡,降低焦亡相关指标(Caspase-1,Pro-IL-1β,IL-1β)的表达水平。结论 细胞焦亡在糖氧剥夺再灌注诱导的SH-SY5Y细胞损伤中起到重要作用。     

β-羟基丁酸对糖氧剥夺原代神经元的保护作用及其机制研究

目的探讨β-羟基丁酸(BHB)对SD大鼠神经元细胞缺氧损伤的保护作用及其机制。方法原代培养SD大鼠神经元细胞,不同浓度(2 m M、5 m M、10 m M、20 m M和50 m M)BHB预处理24 h,三气培养箱糖氧剥夺培养2 h,线粒体超氧化物探针检测细胞线粒体氧化应激状态,CCK8检测细胞活力变化,QPCR测Na+偶联单羧酸转运体1(SMCT1)、caspae3和Cytochrome C的m RNA表达,Western Blot测SMCT1、caspase3、细胞色素C(Cytochrome C)、ERK1/2和p-ERK1/2(T202/204)蛋白表达。结果 2 m M、5 m M和10 m M浓度BHB对神经元细胞活力无显著影响(P0.05),20 m M和50m M浓度BHB可致神经元活力显著降低(P0.05)。神经元缺氧培养后,活力降低(P0.05),线粒体氧化应激反应增强(P0.05),SMCT1的m RNA水平和蛋白水平显著降低(P0.05),caspase3与Cytochrome C的m RNA水平和蛋白水平明显增强(P0.05),ERK1/2的蛋白磷酸化水平降低(P0.05)。BHB预处理缺氧神经元,低浓度对细胞无明显影响(P0.05);浓度增至10 m M,相比单纯缺氧组,神经元活力显著改善(P0.05),线粒体氧化应激状态降低(P0.05),SMCT1的m RNA水平和蛋白水平显著增加(P0.05),caspase3与Cytochrome C的m RNA水平和蛋白水平明显降低(P0.05),ERK1/2的蛋白磷酸化水平升高(P0.05)。结论高浓度(20 m M)BHB对神经元细胞有毒性作用;低浓度(5 m M)BHB对糖氧剥夺的神经元细胞无明显作用;10 m M浓度的BHB预处理可增加SMCT1转运体的表达,通过启动ERK1/2信号通路,降低神经元线粒体的氧化应激,减少凋亡,从而对糖氧剥夺的原代神经元细胞发挥保护作用。     

氧化应激对脑缺血再灌注损伤后自噬调控机制

目的研究小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后早期自噬的变化和活性氧调控自噬的作用机制。方法线栓法制作小鼠短暂性大脑中动脉闭塞（tMCAO）模型56只,随机分成假手术组,对照组（仅建立tMCAO损伤）、tMCAO＋N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）组和tMCAO＋雷帕霉素组。Western blotting检测皮质和纹状体再灌注后不同时间点（再灌注后1、3、6、12、24 h）自噬相关蛋白LC3Ⅰ、LC3Ⅱ和Beclin-1的表达。双氢溴乙啶染色检测细胞内活性氧水平及对自噬活性的影响,免疫荧光染色观察NAC或雷帕霉素诱导下的自噬变化。2,3,5-氯化三苯四氮唑染色观察脑梗死面积的变化。结果与假手术组比较,缺血再灌注损伤后1 h Beclin-1开始升高,6 h LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达上调。与对照组对比,NAC条件下LC3Ⅱ/LC3Ⅰ和Beclin-1表达趋势明显升高。缺血再灌注损伤后1 h活性氧开始升高,给予NAC后表达下降。在NAC和雷帕霉素干预下,梗死面积缩小。结论小鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后自噬表达上调,活性氧水平升高,抗氧化剂可能通过激活细胞的自噬途径保护神经细胞,减小脑梗死面积。     

重复高压氧预处理对氧糖剥夺神经元保护作用的研究

目的研究重复高压氧预处理(HBO-PC)对新生鼠脑皮层神经元缺血损伤的影响。方法建立体外培养皮层神经元氧糖剥夺损伤模型,分为对照组(CON)和HBO-PC组(0.35 MPa,2 h)。通过形态学观察、甲基噻唑基四唑(MTT)比色微量分析、细胞凋亡检测和乳酸脱氢酶(LDH)测定等方法观察氧糖剥夺处理所导致的神经元损伤以及HBO-PC对这种损伤的影响。结果氧糖剥夺后24 h对照组与HBO组相比,细胞活性下降、光密度值明显降低、多数神经元出现凋亡、细胞LDH释放量明显增多(P<0.05)。结论氧糖剥夺可导致神经元出现损伤,而HBO-PC对这种损伤具有保护作用。     

AMPK对氧糖剥夺再灌注后小胶质细胞介导炎性反应的影响

目的：探讨氧糖剥夺再灌注（OGD／R）损伤后腺苷酸活化蛋白激酶（AM PK ）对小胶质细胞介导的炎性介质释放及信号传导的影响。方法培养BV2细胞株,应用OGD 6 h再灌注24 h建立缺血再灌注损伤离体模型,AICAR（5μmol／L、50μmol／L、100μmol／L）或 Compound C（0．1μmol／L、1μmol／L、10μmol／L）不同程度激活或抑制AMPK磷酸化,MTT法检测细胞活性,免疫印迹及ELISA方法,检测OGD／R后BV2细胞AMPK活性变化,以及对NF－κB信号通路中IκB磷酸化、TNF－α释放的影响。结果各浓度AICAR均能够促进OGD／R后BV2细胞存活（P ＜0．05）,抑制IκB磷酸化水平（P ＜0．05）,AICAR（100μmol／L）能够增加AMPK磷酸化水平（P ＜0．05）,抑制TNF －α的释放（P＜0．01）。而Compound C（10μmol／L）促进BV2细胞死亡（P＜0．01）,降低OGD／R后AMPK及IκB磷酸化水平（P ＜0．05）,促进 TNF －α释放（P ＜0．05）。结论 AMPK 磷酸化激活能够减轻OGD／R后BV2细胞介导的炎性损伤作用,而抑制AM PK磷酸化能够加重神经炎性反应。     

脑缺血再灌注后线粒体氧化应激损伤的动态变化

目的探讨脑缺血再灌注后线粒体氧化应激损伤的动态变化特点。方法利用线栓法制备大鼠大脑中动脉缺血模型,通过线粒体分离技术测定线粒体丙二醛、三磷酸腺苷、线粒体膜电位水平,应用Realtime PCR仪测定线粒体基因(线粒体DNA)拷贝数,分析脑缺血再灌注后不同时间点缺血周围皮质线粒体的氧化应激水平及线粒体失功能的动态变化特点。结果①缺血再灌注后线粒体丙二醛水平呈渐进性增高,6 h为(4.61±0.83)nmol·mg-1 prot,72 h达(6.94±0.96)nmol·mg-1 prot,均较对照组显著升高(P0.05);②缺血再灌注6 h后mtDNA拷贝数开始下降,24 h轻度回升,72 h显著下降水平为对照组的62%(P0.01);③脑缺血再灌注后6 h线粒体三磷酸腺苷水平即显著下降,24 h出现短暂升高,再灌后72 h下降水平为对照组的42%(P0.01);④荧光探针检测显示脑缺血再灌注后线粒体膜电位持续下降,再灌注后72h线粒体膜电位水平显著下降至对照组的43%(P0.01)。结论线粒体损伤随缺血再灌注时间延长而呈渐进性加重,氧化应激损伤是构成其损伤的主要因素。缺血后脑组织线粒体存在短暂的内源性代偿修复机制,但不足以逆转氧化应激对线粒体的持续损伤。     

Exendin-4抑制缺血再灌注损伤大鼠皮质神经元凋亡及可能机制

目的 探讨Exendin-4对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用及机制.方法 体外培养SD乳鼠皮质神经元并采用随机数字表法将其分为对照组(正常培养)、模型组(体外模拟缺血再灌注)、治疗组(建模前、建模中均给予Exendin-4).免疫荧光染色鉴定神经元纯度,RT-PCR检测胰高血糖素样肽-1受体(GLP-1R)mRNA表达,ELISA法检测神经元细胞内cAMP水平,MTT法测定神经元存活率,荧光染料Hoechest 33258检测神经元凋亡率,实时定量PCR检测干预后4～12 h C/EBP同源蛋白(CHOP)、生长抑制和DNA损伤基因34(GADD34)基因表达.结果 大鼠皮质神经元可体外纯化培养.皮质神经元存在活性GLP-1R.皮质神经元体外模拟缺血6 h再灌注12 h后,治疗组神经元凋亡率明显下降(分别为77.0%±5.3%和27.0%±3.5%,t=19.462,P＜0.01).体外模拟缺血再灌注损伤可诱导神经元CHOP mRNA、GADD34 mRNA表达增加.Exendin-4干预后CHOP mRNA表达明显增加,峰值提前,后期降至模型组水平(t4h=3.023,P4h=0.039;t8h=6.988,P8 h=0.002);GADD34 mRNA表达显著增加,峰值提前,干预4、8、12 h表达均明显高于对照组(t=11.036、26.098、11.709,P＜0.01).结论 Exendin-4对大鼠皮质神经元体外模拟缺血再灌注损伤具有保护作用,其机制可能为通过干预未折叠蛋白反应抑制损伤诱导的内质网相关性细胞凋亡.

Abstract：

Objective To investigate the effect of Exendin-4 (Ex-4) on ischemia/reperfusion (I/R) injury-induced apoptosis in primary rat cortical neurons and the possible underlying mechanisms.Methods Rat cortical neurons were cultured in vitro,identified by NES-immunohistological staining and immunofluorescence staining,and randomly divided into the following groups: control group,I/R group and Ex-4 group.RT-PCR was performed to establish the existence of active glucagon-like peptide-1 receptor (GLP-1R).ELISA was used to measure the neuronal cytoplasmic cAMP level. MTT was used to detect viability. Fluorescent DNA binding dye Hoechest 33258 was used to reveal apoptosis. C/EBP-homologous protein (CHOP) and growth arrest and DNA-damage-inducible gene 34 (GADD34) mRNAs were detected by real-time PCR. Results The apoptosis rate induced by ischemia 6 h/reperfusion 12 h was 77.0% ±5.3% and was decreased to 27.0% ± 3.5% after Ex-4 ( 0. 4 μg/ml ) treating ( t = 19. 462,P ＜ 0. 01 ).Levels of CHOP and GADD34 mRNA in cortical neurons increased since 4 h and peaked at 12 h after reperfusion. Ex-4 group showed a sharp elevation of levels of CHOP and GADD34 mRNA,peaking at 8 h reperfusion,and then tended to decrease.Conclusions Ex-4 has protective effect against rat cortical neurons injury induced by ischemia/reperfusion. The protective effect may be related to inhibition of ESR-related neuron apoptosis via regulation of unfolded protein response.     

HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制研究

目的探讨HT22细胞氧糖剥夺再灌注及Grasp65过表达干预后高尔基体的形态变化及其可能机制。方法利用小鼠海马神经元细胞系HT22为研究对象,HT22细胞经氧糖剥夺再灌注损伤及Grasp65过表达干预后,采用MTT法检测细胞存活率;Hoechest33258荧光染色法评估细胞凋亡;并应用细胞免疫荧光技术观察高尔基体的形态;应用Western blot技术检测GM130和GAAP蛋白的表达。结果氧糖剥夺再灌注可导致HT22细胞的活性显著降低(P0.05),凋亡率显著增高(P0.05);并可导致高尔基体形态的异常,随着再灌注时间的延长,高尔基体逐渐发生碎裂,尤其以再灌注12 h和24 h最为明显;GM130、GAAP的表达水平在氧糖剥夺再灌注后出现下降,特别是在再灌注12 h、24 h后出现了显著下降(P0.05)。过表达Grasp65后,HT22细胞在氧糖剥夺再灌注所致高尔基体碎裂出现减少(P0.05),碎裂程度减轻,同时GM130和GAAP的表达均显著增加(P0.05),HT22细胞的存活率大大提高(P0.05),凋亡率显著降低(P0.05)。结论缺血再灌注损伤的细胞模型中,同样发生了高尔基体的碎裂;过表达Grasp65可以减轻氧糖剥夺再灌注损伤所致的高尔基体碎裂,并可以减少HT22细胞的凋亡,其机制可能与上调GM130和GAAP的表达有关。     

左旋氨氯地平对成年大鼠神经干细胞氧/糖剥夺损伤的保护作用

目的 研究左旋氨氯地乎对成年大鼠神经干细胞氧/糖剥夺(OGD)损伤后细胞生长活力、增殖和凋亡情况的影响,探讨左旋氨氯地平对OGD后成年大鼠神经干细胞的保护作用.方法 制备成年大鼠海马神经干细胞OGD模型,按干预的左旋氨氯地平浓度分为4组:0mol/L组(即无干预对照组)、0.5 μmol/L组、1.0 μmol/L组、5.0 mol/L组.CCK-8法检测不同浓度左旋氨氯地平对OGD后成年大鼠神经干细胞生长活力的影响:Edu荧光染色法观察不同浓度左旋氨氯地平对OGD后成年大鼠神经干细胞增殖的影响:Annexin V-FITC/PI双染流式细胞仪检测OGD后成年大鼠神经干细胞的凋亡情况. 结果 OGD6 h后成功制备成年大鼠海马神经干细胞OGD模型.与无干预对照组比较,不同浓度左旋氨氯地平干预后成年大鼠海马神经干细胞的生长活力均明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05); 5.0 μmol/L左旋氨氯地平组OGD后神经干细胞增殖率明显增加,差异有统计学意义(P＜0.05)；1.0 μmol/L和5.0 μmol/L左旋氨氯地平组OGD后神经干细胞中凋亡细胞比例明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05). 结论 成年大鼠神经干细胞OGD模型中,左旋氨氯地平具有一定的抗OGD损伤的保护作用.     

lncRNA LINC01089对氧糖剥夺/复氧损伤后小胶质细胞极化的影响

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)LINC01089对小胶质细胞氧糖剥夺/复氧（OGD/R）损伤后表型和炎症反应的影响及其机制。方法 体外培养小鼠小胶质细胞B-V2细胞,OGD/R损伤后,转染lncRNA LINC01089过表达质粒及其空载质粒、沉默质粒siRNA及阴性对照,以及miR-449c-5p模拟物、抑制剂及其阴性对照寡核苷酸。采用qRT-PCR检测M1型小胶质细胞标记物iNOS mRNA和CD86 mRNA、M2型小胶质细胞标记物Arg1 mRNA和CD206 MRNA、lncRNA LINC01089、miR-449c-5p的表达水平;采用ELISA检测细胞上清液炎性因子的含量;采用免疫印迹法检测细胞STAT6蛋白表达水平。荧光素酶报告基因实验验证lncRNA LINC01089与miR-449c-5p以及miR-449c-5p与STAT6的靶向关系。结果 OGD/R损伤后,B-V2细胞lncRNA LINC01089表达水平显著下调,miR-449c-5p表达水平显著上调。荧光素酶报告基因实验结果显示,lncRNA LINC01089靶向负调控miR-449c-...     

氧糖剥夺/复氧损伤后星形胶质细胞iNOS的表达及胍丁胺的干预作用研究

目的 观察星形胶质细胞缺血再灌注损伤后iNOS的表达及胍丁胺的干预作用.方法 体外缺血再灌注诱导损伤原代培养的星形胶质细胞,检测培养液中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)漏出量,并利用流式细胞术检测细胞凋亡和/或坏死率,同时测定NO生成量和诱导型一氧化氮合酶(inducible NOS,iNOS)的表达.结果 胍丁胺显著提高缺血再灌注损伤细胞的存活率,降低细胞IJDH漏出量.流式细胞仪分析显示胍丁胺主要是降低细胞坏死率而对凋亡率则无显著性影响.与阳性对照组相比,胍丁胺显著降低星形胶质细胞缺血再灌注损伤引起的NO产量,同时也减少了iNOS表达.结论 胍丁胺对星形胶质细胞缺血再灌注损伤具有保护作用,其可能的作用机制是降低iNOS、抑制炎症因子NO合成,从而降低星形胶质细胞的炎症坏死.     

白藜芦醇预处理对神经干细胞氧糖剥夺损伤的保护作用

目的探讨白藜芦醇预处理对神经干细胞氧糖剥夺损伤的保护作用。方法用含有白藜芦醇的细胞培养基预培养神经干细胞1 h,更换低糖培养基后将细胞培养在缺氧培养盒内6 h进行氧糖剥夺实验(OGD);采用噻唑蓝(MTT)比色实验检测细胞活性;用LDH试剂盒测细胞培养基中乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果白藜芦醇预处理(PRC)组细胞MTT值高于对照组(n=7,P0.01),PRC组细胞培养基上清中LDH低于对照组(n=5,P0.01)。结论白藜芦醇预处理对神经干细胞氧糖剥夺损伤有保护作用。