子痫前期滋养细胞信号转导异常的研究

近年来的研究发现滋养细胞浅浸润是子痫前期发生、发展的关键环节，细胞信号转导调节细胞的生物学活性，在子痫前期患者滋养细胞中发现多种信号转导通路发生异常，并影响滋养细胞的侵袭性，推测其可能在子痈前期发生、发展中发挥重要作用。对滋养细胞信号转导的深入研究，有助于整体上揭示子痫前期的发病机制，随着蛋白激酶用于药物开发的研究，也为子痫前期的治疗提供了新的治疗方向。     

子痫前期滋养细胞信号转导异常的研究

近年来的研究发现滋养细胞浅浸润是子痫前期发生、发展的关键环节,细胞信号转导调节细胞的生物学活性,在子痫前期患者滋养细胞中发现多种信号转导通路发生异常,并影响滋养细胞的侵袭性,推测其可能在子痫前期发生、发展中发挥重要作用。对滋养细胞信号转导的深入研究,有助于整体上揭示子痫前期的发病机制,随着蛋白激酶用于药物开发的研究,也为子痫前期的治疗提供了新的治疗方向。     

子痫前期患者与正常妊娠胎盘中HLA-G的差异表达研究

目的 探讨人类白细胞相关抗原G(HLA-G)在子痫前期患者与正常妊娠胎盘组织中的表达差异.方法 选取24例子痫前期患者胎盘组织(实验组)及15例正常早期妊娠人工流产绒毛组织(对照组),应用RT-PCR及Western蛋白印迹技术检测两组间HLA-G蛋白的表达差异.结果 子痫前期患者胎盘组织中HLA-G基因及蛋白表达均显著低于正常流产组,差异有统计学意义(P<0.01).q结论 HLA-G在胎盘组织中的低表达可能与子痫前期的发生有关.     

Fasl在重度子痫前期胎盘滋养细胞表达的研究

目的:通过比较正常孕妇与重度子痫前期患者胎盘滋养细胞表面Fasl(Pas配体)表达,进一步从分子免疫学角度探讨重度子痫前期的免疫病理机制。方法:用特异性的Fasl抗体对重度子痫前期患者胎盘滋养细胞表面Fasl进行免疫组化染色,并通过高清晰彩色病理免疫组化测量系统对其定量分析,与同孕周的正常孕妇进行比较。结果:Fasl主要表达于胎盘绒毛合体滋养细胞及细胞滋养细胞的胞浆及胞膜内。重度子痫前期组胎盘滋养细胞表面Fasl表达强度明显低于正常对照组,两者间差异有非常显著意义(P<0.01)。Fasl在重度子痫前期组胎盘的表达与新生儿出生体重、胎盘均有明显相关性。结论:胎盘滋养细胞表面Fasl表达减少,导致母胎间的免疫耐受的破坏,引起异常的免疫反应可能是妊高征发病的重要机制。诱导Fasl的产生或调节母胎间的免疫耐受,将为临床治疗重度子痫前期提供新的方向。     

子痫前期患者胎盘滋养细胞中TGF-β1与PLGF的表达及相关性

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)与胎盘生长因子(PLGF)在子痫前期患者胎盘滋养细胞中的表达及两者在发病机制中的作用。方法:采用免疫组化法检测30例正常妊娠及68例子痫前期患者TGF-β1与PLGF的表达强度。结果:重度子痫前期组TGF-β1的表达强度明显高于正常妊娠组、轻度子痫前期组(P<0.05),PLGF的表达强度明显低于正常妊娠组、轻度子痫前期组(P<0.05),TGF-β1与PLGF的表达在各组中呈负相关。结论:TGF-β1与PLGF不仅与子痫前期患者胎盘浅着床有关,并且还参与调节了子痫前期患者胎盘绒毛滋养细胞和血管内皮细胞的生长发育分化过程,并在疾病的发生、发展过程中发挥了重要作用。     

子痫前期胎盘组织G-蛋白偶联受体30表达及其对滋养细胞功能的影响

目的探讨G-蛋白偶联受体30(GPR30)在胎盘组织中的表达及其对滋养细胞的影响。方法收集宁波大学医学院附属医院收治的2018年2月—2020年2月正常产妇胎盘32例和子痫前期产妇胎盘28例,采用免疫组化方法检测各胎盘组织GPR30蛋白表达;同时选取HTR8/SVneo细胞,随机分为对照组、PE组、G1组及G15组,PE组细胞进行缺氧复氧处理,G1组和G15组分别给予GPR30激动剂G1和阻滞剂G15,采用Transwell法检测细胞侵袭能力,Western blot检测GPR30蛋白表达。结果正常胎盘组织GPR30蛋白相对表达量为(1.392±0.221),明显高于子痫前期胎盘组织(P<0.05);G1组侵袭细胞数为(154.44±16.70)个,明显高于对照组、PE模型组和G15组(P<0.05);G15组侵袭细胞数为(79.48±10.03)个,明显低于对照组(P<0.05),而高于PE模型组(P<0.05);G1组GPR30蛋白相对表达为(0.467±0.046),明显高于对照组、PE模型组及G15组(P<0.05);G15组GPR30蛋白相对表达为(0.289±10.03),明显低于对照组(P<0.05),而高于PE模型组(P<0.05)。结论子痫前期胎盘组织GPR30表达下调,其可能与滋养细胞侵袭能力下降有关,值得进一步研究。     

子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性

目的探讨子痫前期胎盘组织中层粘连蛋白α4链(LAMA4)蛋白表达量及其与滋养细胞侵袭、胎盘缺氧的相关性。方法收集2012年5月-2016年5月在该院接受治疗及分娩的子痫前期患者56例作为观察组;另选取同期进行产检及分娩的正常产妇50例作为正常对照组。根据胎盘组织中LAMA4蛋白表达中位数,观察组患者被分为高LAMA4蛋白组和低LAMA4蛋白组,每组各28例。采用Western-Blot法检测胎盘组织中LAMA4蛋白表达量;采用荧光定量PCR法检测胎盘组织中滋养细胞侵袭相关基因mRNA表达量;采用化学发光法检测脐血中胎盘缺氧相关指标含量。结果观察组胎盘组织LAMA4蛋白表达量低于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组、低LAMA4蛋白组胎盘组织中基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)、胎盘生长因子(PLGF)mRNA表达量低于正常对照组,可溶性fms-样酪氨酸激酶受体-1(sFlt1)mRNA表达量高于正常对照组,脐血胎盘缺氧指标,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)、缺氧诱导因子脯氨酸羟化酶-1(HPH-1)、瘦素含量均高于正常对照组(P0.05);高LAMA4蛋白组胎盘组织中MMP-9、VEGF、PLGFmRNA表达量高于低LAMA4蛋白组,sFlt1mRNA表达量低于低LAMA4蛋白组,脐血胎盘缺氧指标HIF-1α、HPH-1、瘦素含量低于低LAMA4蛋白组(P0.05)。结论子痫前期胎盘组织中LAMA4蛋白表达量减少,具体LAMA4蛋白表达水平与滋养细胞侵袭呈正相关,与胎盘缺氧程度呈负相关。     

肝细胞生长因子与子痫前期的研究进展

滋养细胞在子痫前期发病机制中起重要作用,肝细胞生长因子是最近发现的一种主要作用于上皮细胞的强有力的生长因子,因此许多学者提出其与子痫前期关系密切,可能在子痫前期发病中起重要作用。     

肝细胞生长因子与子痫前期的研究进展

滋养细胞在子痫前期发病机制中起重要作用，肝细胞生长因子是最近发现的一种主要作用于上皮细胞的强有力的生长因子，因此许多学者提出其与子痫前期关系密切，可能在子痫前期发病中起重要作用。     

Fas、Bcl-2与胎盘细胞凋亡的关系及在子痫前期发病中的作用

目的 探讨凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在胎盘滋养叶细胞中的表达及其意义,滋养叶细胞凋亡与Fas、Bcl-2两种蛋白的关系,从而于细胞凋亡的角度探讨子痫前期的发病机制.方法 用免疫组织化学SP法检测重度子痫前期患者20例,轻度子痫前期20例(试验组),同时选择同期正常晚孕妇女20例(对照组)做胎盘组织中Fas、Bcl-2蛋白的表达及滋养叶细胞凋亡检测.结果 细胞凋亡相关蛋白Fas、Bcl-2在子痫前期及正常孕妇胎盘组织中均有表达.Fas蛋白的表达在试验组明显高于对照组(P＜0.05),Bcl-2蛋白的表达在试验组低于对照组(P＜0.05);在试验组及对照组均可观察到细胞凋亡现象,在滋养层细胞(合体细胞滋养层及细胞滋养层)、间质细胞、血管内皮细胞胞浆及细胞核内均有表达,尤以合体细胞最多见.试验组细胞凋亡较对照组明显增多(P＜0.05).子痫前期时,Bcl-2与Fas蛋白的表达呈负性相关;Bcl-2蛋白表达与胎盘细胞凋亡呈负性相关,而Fas蛋白的表达与胎盘细胞凋亡呈正性相关(P＜0.01).结论 子痫前期的发病原因可能与胎盘滋养叶细胞凋亡及Bcl-2、Fas基因异常表达有关.     

缺氧对滋养细胞E-钙黏蛋白表达的影响

目的:了解在缺氧条件下,单层贴壁培养的滋养细胞系TEV-1中,E-钙黏蛋白(E-cadherin,E-cad)的表达在mRNA水平和蛋白水平变化情况,探讨缺氧环境对滋养细胞迁移能力的影响,深入了解缺氧环境诱发子痫前期发病的潜在分子机制。方法:体外贴壁培养的滋养细胞系(TEV-1),分别直接接种于24孔板进行细胞爬片和培养瓶内,分为常氧组和缺氧组。常氧组加新鲜DMEM/F12培养基,缺氧组加含终浓度为300μmol/L二氯化钴的培养基,然后在正常条件下(37℃,5%CO2)培养。两组细胞培养48 h后,分别收集细胞,采用Trizol法抽提mRNA,并进行RT-PCR,检测E-钙黏蛋白的mRNA表达水平;细胞爬片采用免疫组织化学法进行染色,检测E-钙黏蛋白的蛋白表达水平。统计数据分析两组差异性。结果:二氯化钴化学缺氧条件下培养后,滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白表达水平均较常氧对照组升高,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:缺氧环境可能导致滋养细胞E-钙黏蛋白的mRNA和蛋白的表达水平升高,由此降低了滋养细胞的迁移能力。这可能是缺氧造成胎盘浅着床、继而发生子痫前期的重要分子机制。     

乙酰肝素酶调控滋养细胞中细胞因子表达及其对滋养细胞作用的潜在分子机制预测

目的探究过表达滋养细胞中乙酰肝素酶(HPSE)对细胞因子表达的影响,并且初步预测HPSE对滋养细胞作用的潜在分子机制。 方法选择早孕期人绒毛膜滋养细胞株HTR8/SVneo为研究对象,并构建HPSE过表达稳定转染HTR8/SVneo滋养细胞株,纳入检验组,以及HPSE正常表达稳定转染HTR8/SVneo滋养细胞株,纳入对照组。采用细胞因子抗体芯片半定量检测,对检验组和对照组滋养细胞株中343种细胞因子的变化情况进行检测。应用Image J软件分析和找出差异细胞因子蛋白。采用Western blotting检测2组滋养细胞株中表达水平差异最大的细胞因子AXL受体酪氨酸激酶表达水平,以验证细胞因子抗体芯片半定量检测结果。通过STRING蛋白数据库构建蛋白相互作用关系网络,并应用The Database for Annotation, Visualization and Integrated Discovery (DAVID)在线生物信息学分析软件,进行基因本体(GO)功能富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)信号通路分析。 结果①细胞因子抗体芯片半定量检测结果显示,与对照组滋养细胞株相比,检验组滋养细胞株过表达HPSE后,其细胞因子表达下降,并且检验组与对照组滋养细胞株中细胞因子蛋白表达水平比值<0.666 7的细胞因子,即差异细胞因子共计15种,分别为AXL、细胞间黏附分子(ICAM)1、TEK受体酪氨酸激酶、尿激酶型纤溶酶原激活物受体(PLAUR)、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)2、基质金属蛋白酶(MMP)9、淋巴细胞激活基因(LAG)3、肿瘤坏死因子受体超家族成员(TNFRSF)1B、TNFRSF1A、细胞毒性和调节性T细胞分子(CRTAM)、TIMP4、人血小板反应蛋白(THBS)1、白细胞介素17受体B(IL17RB)、连接黏附分子样蛋白(AMICA)及C-C类趋化因子16(CCL16)。②Western blotting检测结果显示,检验组滋养细胞株中AXL蛋白表达水平明显低于对照组滋养细胞株,并且差异有统计学意义(t＝－6.931,P＝0.020),这与细胞因子抗体芯片半定量检测结果一致。③通过STRING蛋白数据库分析结果发现,HPSE可通过血管内皮生长因子(VEGF)A,肿瘤蛋白p53(TP53)和CD₄₄与MMP9产生关联,而MMP9又可直接或者间接与除LAG3、CCL16和IL17RB之外的其他12种差异细胞因子相关联,从而建立相互作用关系网络图。④细胞因子GO功能富集分析结果发现,差异细胞因子主要涉及细胞凋亡负调控和细胞外基质(ECM)分解等41个生物学过程。KEGG信号通路分析结果显示,差异细胞因子主要涉及癌症蛋白多糖信号通路和肿瘤坏死因子信号通路等6条信号通路。 结论过表达HPSE可调控滋养细胞中细胞因子的表达,可能通过MMP9参与的癌症蛋白多糖信号通路影响滋养细胞的生物学功能。本研究结果可为后续研究HPSE对滋养细胞相关疾病影响,提供研究方向和研究基础。     

子痫前期患者血清中sEng水平及胎盘中Endoglin表达的研究

目的:探讨子痫前期患者血清中的可溶性Endoglin(soluble Endoglin,sEng)以及胎盘中Endoglin蛋白的表达水平与子痫前期发病的关系及意义。方法:选择子痫前期患者40例和正常孕妇40例,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)夹心法检测两组孕妇血清中sEng的水平。应用免疫组化SP法测定子痫前期患者与正常妊娠妇女胎盘中Endoglin蛋白的表达。结果:①子痫前期组血清中sEng浓度为(7.38±1.78)ng/ml,正常妊娠组为(2.17±0.59)ng/ml,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。②子痫前期组胎盘组织中Endoglin的平均光密度为0.462±0.057,正常妊娠组为0.219±0.042,两组比较差异有统计学意义(P<0.01)。③血清sEng浓度与胎盘中Endoglin的表达水平(MOD值)呈明显的正相关。结论:sEng在子痫前期患者的外周血中呈现高表达状态;Endoglin蛋白在子痫前期胎盘中的表达增高;胎盘中Endoglin和血清中sEng可能参与子痫前期的发生和发展。     

子痫前期孕妇母血及脐血中基质金属蛋白酶-2表达的临床研究

目的:探讨基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与妊娠期高血压疾病子痫前期(PE)发病的关系。方法:采用明胶酶谱法检测14例正常晚孕妇女和38例PE孕妇母血和脐血血清中MMP-2及其酶原pro-MMP-2的水平。结果:PE组及对照组的母血及脐血中均有MMP-2及pro-MMP-2的表达。PE组母血中MMP-2水平显著升高(P<0.05),并随病情加重而增加。PE组母血pro-MMP-2、脐血中MMP-2及pro-MMP-2均无显著改变(P>0.05)。新生儿的结局与孕母血清中MMP-2水平具有一定相关性。结论:PE患者妊娠晚期MMP-2与滋养层侵袭能力下降关系不大,而PE母血中MMP-2的升高可能与血管内皮功能紊乱有关。MMP-2有望成为预测妊娠期高血压疾病严重程度及新生儿结局的一项生化指标。     

维生素C对缺氧诱导人滋养细胞凋亡的影响研究

目的:探讨外源性维生素C对缺氧诱导人滋养细胞凋亡的影响。方法:行实施人早孕期滋养细胞株TEV-1培养,经95%氮气处理30 min,行递增浓度的维生素C(0、1、5、50 ng/ml)继续孵育24 h后,各组细胞均应用噻唑兰(MTT)比色法、流式细胞术(FCM)法检测细胞增殖指数、凋亡率,同时利用黄嘌呤氧化酶法测定各组细胞超氧化物歧化酶(SOD)活性变化。结果:滋养细胞经缺氧诱导30 min后,与对照组相比,添加不同浓度组(1、5及50 ng/ml)维生素C对其增殖行为无明显影响。但维生素C具有增强滋养细胞SOD活性,减弱其凋亡程度的作用(P<0.05)。结论:维生素C能明显提高缺氧损伤滋养细胞的抗氧化能力,可能参与了妊娠的病理生理过程。     

E-选择素与子痫前期

目的:探讨E-选择素在子痫前期中的作用。方法:抽取2004年6月～2005年6月分娩的25例子痫前期患者为子痫前期组(轻度11例,重度14例);15例妊娠期高血压患者为妊高征组;分别取不同孕龄的45例正常孕妇,分为早孕组、中孕组及晚孕组各15例;另取正常育龄非妊娠妇女15例为对照组。空腹抽取肘静脉血,用ELISA法测定血浆可溶性E-选择素(sE-selectin)浓度。结果:子痫前期组血浆sE-选择素浓度(21.90±8.17)ng/ml,显著高于妊高征组(11.85±3.45)ng/ml,P<0.05;子痫前期组中重度子痫前期患者的sE-选择素浓度(25.50±7.12)ng/ml明显高于轻度子痫前期患者sE-选择素(17.32±3.96)ng/ml,P<0.05;子痫前期组的血浆sE-选择素浓度明显高于晚孕组(9.52+3.01)ng/ml,P<0.05;亦明显高于对照组(9.72±2.00)ng/ml,P<0.05。妊高征组sE-选择素浓度与晚孕组和对照组相比,无显著差异(P>0.05)。晚孕组与对照组比较,亦无差异,正常妊娠不同孕龄组之间的sE-选择素浓度相比,亦无统计学意义(P>0.05)。结论:血浆sE-选择素浓度与子痫前期的发展及病情严重程度呈正相关,子痫前期的发生、发展可能与内皮细胞活化、损伤和功能异常有关,sE-选择素是反应血管内皮活化的指标之一。     

重度子痫前期患者胎盘组织中miR-21的表达及其临床意义

目的:检测miR-21在重度子痫前期患者与正常孕妇胎盘组织中的表达差异。方法:收集2011年1月～2011年8月在江西省妇幼保健院产科行剖宫产的16例重度子痫前期患者和16例正常妊娠妇女的胎盘组织,通过实时荧光定量PCR技术检测胎盘组织中miR-21的表达水平。结果:miR-21在重度子痫前期患者胎盘组织中表达水平明显升高,为正常对照组表达水平的2.02倍(P<0.05)。结论:miR-21在胎盘组织中的表达水平可能与子痫前期的发生发展病理过程存在一定相关性。     

脂氧素A4对子痫前期患者脐静脉内皮细胞分泌内皮素-1的影响

目的:研究脂氧素A4(lipoxinA4,LXA4)对子痫前期患者脐静脉内皮细胞分泌内皮素-1(endothelin-1,ET-1)的影响。方法:取子痫前期患者和正常孕妇组脐带及脐静脉血清,分离并培养脐静脉内皮细胞(human umbilical veinendothelial cell,HUVEC),分为正常细胞对照组、子痫前期细胞组和LXA4药物干预组(1 nmol/L,10 nmol/L,100 nmol/L)。RT-PCR检测各组细胞ET-1mRNA水平;酶联免疫吸附试验检测各组细胞上清液中ET-1的分泌水平。结果:LXA4降低子痫前期患者HUVEC内ET-1mRNA基因表达水平(P<0.05),而对正常细胞组无影响(P>0.05);LXA4明显抑制子痫前期脐静脉内皮细胞分泌ET-1(P<0.01),对正常细胞亦无影响(P>0.05)。结论:LXA4抑制子痫前期脐静脉内皮细胞ET-1 mRNA表达及分泌,为临床应用LXA4治疗妊娠期高血压疾病提供重要的实验依据。     

子痫前期孕妇血清中VEGF表达的临床研究

目的:检测孕晚期正常妊娠及子痫前期孕妇血清血管内皮生长因子(VEGF)的水平,探讨VEGF与妊高征发病的关系。方法:采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测28例孕晚期健康孕妇(对照组)及35例子痫前期患者(子痫前期组)血清VEGF水平。结果:子痫前期组VEGF为(331·78±92·46)pg/ml,显著低于正常妊娠晚孕期水平(P<0·01)。随子痫前期病情加重,VEGF水平呈下降趋势(P<0·01)。结论:孕妇血清中VEGF的下降与子痫前期发病及病情进展有关。