miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路对Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转化的作用机制研究

目的探讨miR-7-5p对Ⅱ型肺泡上皮细胞(A549细胞)间质转化的影响及其作用机制。方法10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,利用实时荧光定量PCR(Quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)检测细胞中miR-7-5p和RelA的表达量,Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin、N-cadherin和Vimentin的表达量;过表达或下调miR-7-5p后,Transwell实验检测miR-7-5p对A549细胞侵袭的影响;细胞划痕愈合实验检测miR-7-5p对A549细胞迁移的影响;Western blot检测miR-7-5p对A549细胞内E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达和NF-κB通路的影响;TargetScan预测miR-7-5p和RelA的靶向关系,双荧光素酶报告基因实验分析miR-7-5p和RelA之间的关系;RT-qPCR和Western blot检测过表达或下调miR-7-5p对RelA的影响。检测下调RelA表达后,A549细胞的侵袭、迁移和EMT能力。结果10 ng/mL TGF-β1处理A549细胞12 h、24 h和48h后,E-cadherin表达明显下调(P<0.01),N-cadherin和Vimentin表达明显上调(P<0.01),miR-7-5p表达明显降低(P<0.01),RelA表达明显升高(P<0.01)。过表达miR-7-5p抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT,p-TAK1/TAK1和NF-κB p-p65/NF-κB p65比值明显降低,下调miR-7-5p则起到促进作用;miR-7-5p靶向且负调控RelA表达;下调RelA抑制了A549细胞侵袭、迁移与EMT。结论miR-7-5p调控NF-κB/RelA信号通路促进A549细胞的上皮间质转化。     

S-腺苷甲硫氨酸抑制miR-34a依赖的肺癌转移的作用

目的探讨S-腺苷甲硫氨酸抑制miRNA-34a依赖的肺癌转移机制。 方法选取肺癌细胞A549,分别采用0、50、100、200、500 μM的S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAMe)刺激A549细胞并检测miR-34a以及下游STAT3信号通路的表达情况,同时检测不同刺激条件下A549细胞的侵袭转移情况;实时荧光定量(real-time fluorescence quantification, qPCR)检测miR-34a、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin、Vimentin的mRNA表达水平;Western Blot实验检测STAT3、p-STAT3、β-actin的表达水平;Transwell实验检测A549细胞的侵袭能力变化。 结果随着SAMe浓度的增加,miR-34a的表达水平呈梯度增加,与对照组相比,经t检验分析,差异有统计学的意义(P<0.05);Western Blot实验显示,与对照组相比,500 μM SAMe刺激后,下游的p-STAT3蛋白水平下降,总STAT3和内参蛋白β-actin水平不变;qPCR结果显示,随着药物浓度的增加,表皮蛋白E-cadherin、α-catenin的mRNA水平上升,间质蛋白N-cadherin、Vimentin的mRNA水平下降;Transwell实验显示经50、100、200、500 μM的SAMe刺激后,A549细胞的侵袭转移抑制率分别为18.70%、31.24%、47.66%、58.46%,与对照组相比,经t检验分析,差异有统计学的意义(P<0.05)。 结论SAMe可通过抑制miR-34a依赖的下游STAT3信号通路抑制肺癌细胞的侵袭转移,提示SAMe在肺癌侵袭转移过程中发挥重要作用。     

Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响

目的探讨Six1对甲状腺癌细胞侵袭迁移的影响。方法甲状腺癌BCPAP细胞转染Six1小干扰RNA(Six1 siRNA)和小干扰RNA阴性对照(siRNA control),采用细胞划痕实验检测细胞迁移,Transwell小室检测细胞侵袭,Western印迹检测Six1、神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏附素(E-cadherin)蛋白表达。结果转染siRNA control后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin、E-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比无变化。转染Six1 siRNA后的BCPAP细胞迁移率、侵袭细胞数目及细胞中Six1、N-cadherin蛋白表达水平与没有转染的BCPAP细胞相比明显降低,而E-cadherin蛋白水平明显升高。结论敲低Six1可能通过影响E-cadherin、N-cadherin表达抑制甲状腺癌细胞侵袭迁移。     

水通道蛋白4对肺癌细胞A549迁移能力的影响及其作用机制研究

目的探讨水通道蛋白4(AQP4)对肺癌细胞迁移能力的影响。方法选取肺癌A549细胞株,采用AQP4小干扰RNA(siRNAs)进行转染,采用Transwell法检测肿瘤细胞迁移能力,采用蛋白质印迹(Western blotting)法检测上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)、神经型钙黏蛋白(N-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达水平,同时分析其对上皮间质转化(EMT)的影响。结果敲降AQP4可抑制肺癌细胞A549迁移能力及EMT,上调E-cadherin表达水平并下调N-cadherin和Vimentin表达水平(P0.05)。结论抑制AQP4表达可有效降低肺癌细胞A549迁移能力并抑制EMT,推测促进EMT可能是AQP4的主要分子作用机制。     

Garcinone C对鼻咽癌细胞衰老、迁移和侵袭功能的影响及作用机制研究

目的 探讨Garcinone C对鼻咽癌细胞衰老、迁移和侵袭功能的影响及作用机制。方法 Garcinone C处理鼻咽癌细胞HONE1,通过β-半乳糖苷酶染色检测衰老细胞。应用Transwell实验检测Garcinone C干预对鼻咽癌细胞HONE1、HK1迁移、侵袭能力的影响。应用Western blot实验检测鼻咽癌细胞HONE1、HK1上皮间充质转化(EMT)标志蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、金属蛋白酶组织抑制剂2(TIMP2)蛋白表达水平,以及铁死亡相关蛋白铁蛋白重链1(FTH1)、胱氨酸转运体蛋白xCT的表达水平。结果 经Garcinone C处理后,HONE1细胞衰老率上升(P<0.05),HK1和HONE1细胞迁移和侵袭能力下降(P<0.05)。Garcinone C干预可上调HONE1、HK1细胞E-cadherin和TIMP2蛋白的表达水平(P<0.05),下调N-cadherin和FTH1、xCT蛋白的表达水平(P<0.05)。结论 Garcinone C可能通过抑制鼻咽癌细胞的迁移、侵袭,并...     

miR-26b-5p靶向VEGF抑制非小细胞肺癌A549细胞增殖、迁移和侵袭的机制研究

目的 探讨miR-26b-5p对非小细胞肺癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法 培养人正常肺上皮细胞BEAS-2B和非小细胞肺癌细胞A549,通过qPCR检测BEAS-2B和A549细胞中miR-26b-5p和VEGF mRNA的表达水平。通过Western Blot检测BEAS-2B和A549细胞中E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白的表达水平。生物信息学预测VEGF与miR-26b-5p的靶向关系。使用脂质体法将NC-mimic和miR-26b-5p-mimic转染A549细胞,通过CCK8法、EDU实验检测miR-26b-5p对细胞生长的影响;通过划痕实验和Transwell侵袭实验检测miR-26b-5p对细胞迁移和侵袭的影响;通过Western Blot检测对E-cadherin、Vimentin和VEGF蛋白表达的影响。结果 与BEAS-2B细胞相比,在A549细胞中,miR-26b-5p表达水平显著下降(P<0.05),VEGF的mRNA和蛋白表达水平显著上升(P<0.05),E-cadherin蛋白的表达水平显著下降(P<0....     

瞿麦对肾癌细胞增殖、凋亡、侵袭和迁移的调控

目的研究中药瞿麦对人肾癌细胞786-0增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响及其作用机制。方法体外培养人肾癌786-0细胞,用不同浓度的瞿麦处理后,运用MTT检测瞿麦对肾癌细胞增殖活性的影响,运用流式细胞术检测瞿麦对肾癌细胞凋亡率的影响,运用qRT-PCR检测瞿麦对肾癌细胞中凋亡相关基因Bax和Bcl-2 mRNA表达水平的影响,运用Transwell侵袭实验检测瞿麦对肾癌细胞侵袭能力的影响,运用细胞划痕实验检测瞿麦对肾癌细胞迁移能力的影响,运用Western印迹检测瞿麦对肾癌细胞中上皮间质转化相关蛋白钙黏附蛋白E(E-cadherin)、神经性钙黏附素(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)表达水平的影响。结果瞿麦能够抑制肾癌细胞增殖,诱导肾癌细胞发生凋亡,上调肾癌细胞中Bax的表达,下调Bcl-2的表达;抑制肾癌细胞的侵袭能力;抑制肾癌细胞的迁移能力;有效降低肾癌细胞N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平,上调E-cadherin水平,且均呈浓度依赖性,差异均有统计学意义(均P0.05)。结论瞿麦在体外能够抑制肾癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,有效抑制肾癌细胞体外侵袭和迁移能力;其作用可能与上调Bax蛋白水平,下调Bcl-2、N-cadherin、Vimentin蛋白水平,上调E-cadherin水平相关。     

葛花解酲方对肝癌细胞增殖、侵袭、迁移、凋亡及上皮间质转化的影响

目的 探讨葛花解酲方含药血清对肝癌细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的影响及其可能的作用机制。方法 以稳定高表达、高侵袭的HepG2肝癌细胞为体外研究模型,用不同浓度的葛花解酲方含药血清进行干预。CCK8法检测含药血清对HepG2细胞增殖的抑制作用,Transwell法观察含药血清对HepG2细胞的迁移和侵袭能力的影响,Western印迹法检测HepG2细胞中上皮型钙黏蛋白(E-cadherin)和神经型钙黏蛋白(N-cadherin)表达水平。结果 CCK8法检测结果显示含药血清可显著抑制HepG2细胞的增殖,抑制作用呈时间和剂量依赖性(P<0.05)。不同浓度的含药血清可显著抑制HepG2细胞的迁移和侵袭,显著下调肝癌细胞中N-cadherin的表达,显著上调E-cadherin的表达(P<0.05)。结论 葛花解酲方含药血清能抑制肝癌细胞的侵袭、迁移,其作用机制可能与抑制上皮间质转化有关。     

IGF-1经AKT通路对人肺癌A549细胞增殖、侵袭与转移的影响

目的探究胰岛素生长因子(IGF)-1能否经蛋白激酶B(AKT)信号通路调节人肺癌A549细胞的增殖、侵袭与转移。方法体外培养人肺癌A549细胞融合至70%～80%,经无血清饥饿过夜,分为对照组、LY294002组、IGF-1组和IGF-1+LY294002组,继续饥饿培养48 h。噻唑蓝(MTT)法、细胞划痕实验和Transwell实验检测A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力;Western印迹法检测磷酸化(p)-AKT、AKT、基质金属蛋白酶(MMP)-9、小鼠双微体扩增基因(MDM)2和上皮型钙黏附蛋白(E-cadherin)蛋白表达。结果与对照组相比,IGF-1组可明显促进细胞增殖,加速细胞迁移与侵袭,并伴有p-AKT、MMP-2、MDM2蛋白表达增加及E-cadherin蛋白表达降低(P0.05);AKT通路特异性抑制剂LY294002可显著抑制上述作用。结论 IGF-1可能经AKT信号通路上调MMP-9、MDM2蛋白表达并抑制E-cadherin蛋白表达,进而促进人肺癌A549细胞的增殖、侵袭与转移。     

剑叶凤尾蕨乙醇提取物调控LOXL1-AS1抑制肺癌细胞增殖、迁移、侵袭

目的探讨剑叶凤尾蕨乙醇提取物对肺癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响和分子机制。方法采用不同浓度(3、6、12 mg/ml)的剑叶凤尾蕨乙醇提取物处理A549细胞,细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞增殖活力;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力;Western印迹检测细胞周期蛋白(Cyclin)D1、p21、E钙黏附蛋白(E-cadherin)和基质金属蛋白酶(MMP)-2的表达水平;qRT-PCR检测类赖氨酰氧化酶1反义RNA1(LOXL1-AS1)的表达水平。将LOXL1-AS1小干扰RNA(si-LOXL1-AS1)转染A549细胞,抑制LOXL1-AS1表达后,采用上述方法检测细胞增殖活力和迁移侵袭能力变化。将LOXL1-AS1过表达载体(pcDNA3.1-LOXL1-AS1)转染A549细胞,经6 mg/ml的剑叶凤尾蕨乙醇提取物处理后,采用上述方法检测细胞活力和迁移侵袭能力变化。结果剑叶凤尾蕨乙醇提取物可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭能力,抑制LOXL1-AS1、CyclinD1和MMP-2表达,促进p21和E-cadherin表达(P<0.05),并呈一定的剂量依赖性(均P<0.05)。抑制LOXL1-AS1表达可抑制A549细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制CyclinD1和MMP-2表达,促进p21和E-cadherin表达(P<0.05)。过表达LOXL1-AS1可逆转剑叶凤尾蕨乙醇提取物对A549细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。结论剑叶凤尾蕨乙醇提取物通过下调LOXL1-AS1抑制肺癌细胞的增殖、迁移和侵袭。     

Epithelial mesenchymal transition of non-small-cell lung cancer cells A549 induced by SPHK1

Objective:To explore the effect and molecular mechanism of SPHK1 in the invasion and metastasis process of non-small-cell lung cancer cells(A549).Methods:Recombinant retrovirus was used to mediate the production of A549/vector,A549/SPHK1,A549/scramble,and A549/SPHK1/RNAi that stably expressed or silenced SPHK1.The invasion and migration capacities of A549 cells overexpressing or silencing SPHK1 were determined using Transwell invasion assay and scratch wound repair experiment.The protein and mRNA expression levels of E-cadherin,fibronectin,vimentin in A549/vector,A549/SPHK1,A549/scramble,A549/SPHK1/RNAi were detected with Western blot(WB) and quantitative PCR(QPCR) methods,respectively.Results:Transwell invasion assay and scratch wound repair experiments showed that over-expression of SPHK1 obviously enhanced the invasion and migration capacities of A549 cells.WB and QPCR detection results showed that,the expression of E-cadherin(a molecular marker of epithelial cells) and fibronectin,vimentin(molecular markers of mesenchymal cells) in A549 cells was upregulated after overexpression of SPHK1;while SPHK1 silencing significantly reduced the invasion and metastasis capacities of A549 cells,upregulated the expression of molecular marker of epithelial cells,and downregulated the expression of molecular marker of mesenchymal cells.Conclusions:SPHK1 promotes epithelial mesenchymal transition of non-small-cell lung cancer cells and affects the invasion and metastasis capacities of these cells.     

葛根素对人肝癌细胞HepG2侵袭与迁移能力的影响

目的探索葛根素对人肝癌细胞HepG2侵袭与迁移能力的影响及其相关分子机制。方法将人肝癌细胞HepG2分为两组,实验组用60μg/ml、30μg/ml的葛根素进行培养,对照组用加入等体积的葛根素溶解剂二甲基亚砜(DMSO)的培养基培养;利用细胞划痕实验检测两组细胞的迁移能力;利用Transwell小室检测两组细胞的侵袭能力;通过蛋白免疫印迹检测波形蛋白(vimentin)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶2/9(matrix metalloproteinase2/9,MMP2/9)。结果人肝癌细胞HepG2在经过葛根素培养后,细胞划痕的愈合能力下降,Transwell小室细胞的侵袭能力下降;E-cadherin表达上升(P<0.05),vimentin、MMP2和MMP9的表达下调(P<0.05)。结论葛根素通过上皮细胞间质转化(EMT)途径导致人肝癌细胞HepG2侵袭转移能力下降。     

非诺贝特联合顺铂对A549细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响

目的 探索过氧化物酶体增殖因子激活受体α激动剂非诺贝特联合顺铂对人肺癌A459细胞上皮—间质转化及迁移侵袭能力的影响.方法 在体外分别采取单用非诺贝特,顺铂及两者联合干预A549细胞48h后,MTT比色法检测非诺贝特联合顺铂对A549细胞增殖的影响,细胞划痕实验和侵袭小室法检测对A549细胞迁移及侵袭运动能力的影响,RT-PCR和Westem blot实验检测上皮—间质转化相关因子E-cadherin的表达变化.结果 与阴性对照组相比,非诺贝特和顺铂单用与联合均能抑制A549细胞的增殖,减弱A549细胞的迁移侵袭运动能力,同时上调E-cadherin mRNA及蛋白水平的表达,其联合组的效果优于单用组(P＜0.05).结论 非诺贝特联用顺铂能够抑制A549细胞的生长,降低A549细胞的迁移侵袭运动能力,阻止A549细胞发生上皮—间质转化,其机制可能与增加E-cadherin的水平相关.     

miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力的实验研究

目的探讨miR-302a对胃癌BGC-823细胞上皮间质转化(EMT)、侵袭和迁移能力的影响和机制。方法在胃癌BGC-823细胞中转染miR-302a mimics,CCK-8测定细胞增殖变化,Transwell小室测定迁移和侵袭,Western blotting检测E-cadherin、Vimentin、N-cadherin蛋白表达。靶基因预测软件预测E2F1可能为miR-302a的靶基因,荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。在胃癌BGC-823细胞中共转染pcDNA 3.1-E2F1和miR-302a mimics,按照上述方法测定细胞增殖、侵袭、迁移和E-cadherin、Vimentin、N-cadherin、E2F1蛋白表达水平。结果miR-302a mimics降低胃癌BGC-823细胞增殖、侵袭和迁移能力,下调细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达水平,促进细胞中E-cadherin蛋白表达。miR-302a靶向负调控E2F1表达。pcDNA 3.1-E2F1能够提高miR-302a mimics条件下胃癌BGC-823细胞中E2F1蛋白表达水平,促进细胞增殖、侵袭和迁移,促进细胞中Vimentin、N-cadherin蛋白表达,减少细胞中E-cadherin蛋白表达。结论miR-302a靶向E2F1抑制胃癌BGC-823细胞EMT并降低细胞侵袭和迁移能力。     

miRNA-126靶向抑制A549细胞迁移和侵袭能力的研究

目的研究microRNA-126（miR-126）对非小细胞肺癌（NSCLC）细胞迁移和侵袭能力的影响。方法利用脂质体介导法将十勾建的miR126过表达质粒转染至NSCI．C细胞株A549细胞（A549／miR-126组）,并设空质粒转染组（A549／MOCK组）和空白对照组（A549组）。利用RT-PCR技术检测3组细胞中EGFI。7（miR126的靶标）的表达水平,采川细胞划痕实验观察细胞迁移能力差异,采用Transwell小室法分析3组细胞侵袭能力的差异。结果RT—PCR检测A549／miR-126组、A549／MOCK组和A549组细胞中EGFI。7mRNA分别为2．32±0．088、1．43±0．026和1．00±0．000,差异有统计学意义（P〈0．01）;细胞划痕实验显示A549／miR—126组、A549jM（）CK组和A549组细胞平均迁移距离分别为3．0μm、2．65μm和0．5μm,平均抑制率分别为0、11．25％和83．75％,差异有统计学意义（P〈O．05）;Transwell小室实验显示,A549／miR126组24hr侵袭细胞数为（28．6±2．322）个,36h侵袭细胞数为（29．2±3．7683）个,A549／M（）CK组24h为（49．8±3．7014）个,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论miR-126可上调EGFL7mRNA的表达,并可能通过表达产物EGFI。7蛋白抑制A549细胞的迁移和侵袭能力。     

血小板促进肺癌细胞A549增殖与迁移的体外实验研究

目的探讨外周血血小板对肺腺癌A549细胞增殖和迁移力的影响。方法将从健康人外周血中分离到的血小板与A549细胞共培养,采用CCK-8实验检测A549细胞的增殖情况,Transwell实验检测细胞的迁移能力。结果共培养1 h,镜下可见血小板向瘤细胞聚集。血小板可增强A549细胞的增殖力,并存在一定的剂量依赖性,共培养时间对瘤细胞增殖力的影响与血小板的加入量有关(P<0.05)。与血小板共培养的A549细胞数穿透Transwelll小室基底膜的数量(128.6±16.0)明显多于A549单独培养组(84.4±12.0),差异有统计学意义(P<0.05)。结论血小板可诱导肺腺癌A549细胞的增殖和迁移,血小板有望成为治疗肺癌的靶点。     

HBx基因对HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移的影响

目的探究HBx基因对HepG2.2.15细胞侵袭、迁移及主要组织相容性复合体(MHC)Ⅰ类链相关基因A(MICA)-A5.1表达的影响。方法体外培养HepG2.2.15细胞系(插入HBV全基因组并持续表达的HepG2细胞),随机分为对照组、HBx过表达质粒组、HBx空载质粒组、HBx siRNA组、HBx siRNA阴性对照组,分别转染质粒及siRNA后,以CKK-8法分别检测24 h、48 h后细胞增殖情况,筛选合适药物作用时间;以Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测各组细胞侵袭迁移能力;以免疫印记法检测HBx、MICA-A5.1蛋白和上皮间质转化标志蛋白E-cadherin、Vimentin的表达;以酶联免疫吸附法检测各组细胞培养基中sMICA水平。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用SNK q检验。结果与对照组比较,24 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为8.268、4.365,P值分别为<0.001、0.036);48 h后,HBx过表达质粒组细胞活力升高,HBx siRNA组细胞活力降低,差异均有统计学意义(q值分别为12.680、7.523,P值均<0.001)。与对照组比较,HBx过表达质粒组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均升高,E-cadherin表达降低(q值分别为9.427、6.697、10.500、5.042、22.740、15.720、5.258,P值均<0.05);HBx siRNA组细胞HBx、MICA及Vimentin蛋白表达、细胞培养基中sMICA水平、迁移细胞数目、侵出Transwell小室的细胞数目均降低,E-cadherin表达升高(q值分别为8.133、8.828、7.616、7.673、5.391、7.694、6.226,P值均<0.05)。结论HBx基因调控HepG2.2.15细胞MICA-A5.1表达及侵袭、迁移,上调该基因可促进MICA-A5.1表达,增强HepG2.2.15细胞侵袭转移能力。