异丙酚调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭影响的机制研究

目的探讨异丙酚通过调控miR-212-5p/TRPV6轴对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭影响和机制,为临床诊治卵巢癌奠定理论基础。方法不同浓度的异丙酚[(0μM (μmol/L)、0.125μM、0.25μM、0.5μM和1.0μM]作用SKOV3细胞48 h后,MTT实验检测细胞活力,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR和Western blot检测miR-212-5p、TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达变化。同时,构建抑制miR-212-5p表达的SKOV3细胞株,进行上述实验检测相应指标。双荧光素酶实验和Western blot验证miR-212-5p和TRPV6的靶向关系。结果异丙酚呈浓度依赖性地抑制SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭,抑制TRPV6、Cyclin D1、MMP2和MMP9蛋白的表达,促进miR-212-5p的表达。抑制miR-212-5p表达可减轻异丙酚处理对SKOV3细胞的增殖、迁移和侵袭的抑制作用。TRPV6是miR-212-5p的靶基因,miR-212-5p可负性调控TRPV6的表达。沉默TRPV6可部分逆转抑制miR-212-5p表达对异丙酚处理的卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭的影响。结论异丙酚通过上调miR-212-5p表达,抑制TRPV6表达,从而抑制卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭。     

LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p调控卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性分子作用机制

目的 探讨LncRNA TUG1通过调控miR-196b-5p表达对卵巢癌细胞凋亡和放射敏感性的影响及其潜在的作用机制。方法 运用qRT-PCR和Western blot检测卵巢癌细胞株SKOV3、HO8910、OVCAR3和正常卵巢上皮细胞HOSE中miR-196b-5p和TUG1的表达水平。双荧光素酶报告基因分析法验证TUG1可能的靶基因。建立TUG1抑制表达、miR-196b-5p过表达及si-TUG1和anti-miR-196b-5p共转染的SKOV3细胞株,流式细胞术检测细胞凋亡率。采用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞不同剂量X射线照射后的存活情况,曲线拟合计算不同剂量辐射后各放射生物学参数。结果 正常卵巢上皮细胞HOSE相比,卵巢癌细胞SKOV3、HO8910及OVCAR3中miR-196b-5p的表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05),TUG1的表达显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。miR-196b-5p是TUG1的靶基因。TUG1抑制表达或miR-196b-5p过表达均促进SKOV3细胞凋亡,差异有统计学意义(P<0.05)并增加其放射敏感性,差异有统计学意义(P<0.05)。抑制miR-196b-5p表达可部分逆转抑制TUG1表达对SKOV3细胞促进凋亡和增强放射敏感性作用。结论 TUG1可负性调控miR-196b-5p的表达,抑制TUG1表达,可促进卵巢癌细胞凋亡,增加细胞放射敏感性。     

miR-627-3p靶向调控CK2β对上皮性卵巢癌细胞增殖凋亡 侵袭的影响及机制研究

目的 探讨miR-627-3p靶向调控CK2β对上皮性卵巢癌细胞增殖、凋亡、侵袭的影响及潜在的作用机制。方法 采用qRT-PCR和Western blot检测正常卵巢上皮细胞HOSE和卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2及OVCAR3中miR-627-3p和CK2β的表达；采用双荧光素报告基因实验验证miR-627-3p和CK2β之间的靶向关系；建立miR-627-3p过表达及miR-627-3p和pcDNA-CK2β共转染的SKOV3细胞株，采用CCK-8法检测细胞活性，采用流式细胞术检测细胞凋亡率，采用Transwell法检测细胞侵袭能力。结果 HOSE组、SKOV3组、ES-2组及OVCAR3组miR-627-3p的表达水平分别为(1.00±0.12)、(0.21±0.04)、(0.41±0.07)及(0.32±0.06),差异有统计学意义(F=183.037,P<0.05)。与正常卵巢上皮细胞HOSE相比，卵巢癌细胞株SKOV3、ES-2及OVCAR3中miR-627-3p表达显著降低，CK2β表达显著增加，差异均有统计学意义(均P<0.05);CK2β是miR-627...     

miR-22在卵巢癌中的表达及其分子机制研究

目的:检测miR-22在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-22调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法:运用qRT-PCR检测66例卵巢癌及相应癌旁正常组织中miR-22的表达改变;构建异黏蛋白(metadherin,MTDH)3’UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-22对MTDH 3’UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-22 mimics转染卵巢癌细胞SKOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-22对SKOV3细胞生长增殖的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-22在66例卵巢癌组织中表达下调;在双荧光素酶报告检测显示,miR-22能特异性地与MTDH 3’UTR结合,抑制其荧光素酶活性。Western blot结果显示,过表达miR-22或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-22或干扰MTDH可抑制人SKOV3细胞的生长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-22通过靶向调控MTDH的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

洛铂对卵巢癌细胞SKOV3增值抑制及对bax、bcl-2凋亡基因表达的影响

目的:研究洛泊作用于浆液性卵巢癌细胞SKOV3后其对凋亡基因bcl-2和bax表达的影响。方法:体外培养卵巢癌细胞SKOV3,用MTT比色法检测洛铂对SKOV3细胞株的增殖抑制作用,流式细胞仪检测凋亡相关蛋白bax、bcl-2的表达。结果:体外培养的卵巢癌SKOV3细胞经不同浓度的洛泊处理后细胞生长明显受到抑制,洛泊作用于卵巢癌SKOV3细胞可诱导细胞的凋亡,同时随着洛铂浓度的增加,bax基因的表达增加,而bcl-2表达减少。结论:卵巢癌SKOV3细胞对洛泊具有药物敏感性,洛泊可诱导卵巢癌细胞的凋亡,bax蛋白的表达增加和bcl-2蛋白表达的减少可能是洛泊诱导卵巢癌细胞的凋亡机制之一。     

miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖 迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-369-3p和COL11A1对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭及凋亡的影响,并分析其分子机制。方法实时定量PCR(qRT-PCR)检测正常卵巢上皮细胞IOSE80和卵巢癌细胞SKOV-3中miR-369-3p、COL11A1 mRNA的水平,在卵巢癌SKOV-3细胞中转染miR-369-3p模拟物和pcDNA-COL11A1以过表达miR-369-3p、COL11A1,CCK8法和Transwell实验分别检测卵巢癌SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭能力,蛋白印迹实验(Western blot)检测细胞中COL11A1、Cyclin D1、p21、MMP-2及MMP-9蛋白水平,双荧光素酶报告系统验证miR-369-3p与COL11A1的调控关系。结果与正常卵巢上皮细胞IOSE80(1.00±0.05、1.01±0.08及0.28±0.03)相比,卵巢癌细胞SKOV-3中的miR-369-3p水平(0.41±0.04)显著降低,COL11A1 mRNA(3.26±0.31)和蛋白(0.64±0.06)水平显著升高,差异均有统计学意义(t=21.083、27.643及16.100,P0.05)。过表达miR-369-3p可降低Cyclin D1、MMP-2及MMP-9蛋白表达量,提高p21表达量,降低细胞OD值、迁移及侵袭细胞个数;miR-369-3p靶向负调控COL11A1的表达;过表达COL11A1可逆转miR-369-3p过表达对SKOV-3细胞增殖、侵袭及迁移的影响。结论 miR-369-3p通过靶向COL11A1调控SKOV-3细胞增殖、迁移及侵袭。miR-369-3p是卵巢癌潜在分子靶点。     

沉默CLU抑制宫颈癌细胞增殖与促进凋亡的作用机制

目的研究CLU对宫颈癌细胞增殖凋亡的影响,并探讨其作用机理。方法采用qRT-PCR法检测宫颈癌细胞C33a、SiHa和人正常宫颈细胞CRL2614中的CLU mRNA表达; Western blot检测宫颈癌细胞C33a、SiHa和人正常宫颈细胞CRL2614中CLU的蛋白表达;将pc DNA 3. 1-CLU、pc DNA 3. 1、sh CLU和sh Con以脂质体转染C33a细胞,Western blot检测转染细胞的CLU、p53、Bax和Bcl-2蛋白表达; qRT-PCR检测转染细胞的CLU、p53、Bax和Bcl-2的mRNA表达; ELISA实验检测转染细胞Cytc release和MMP。结果与人正常宫颈细胞CRL2614相比,宫颈癌细胞C33a、SiHa中CLU高表达,且过表达CLU促进C33a细胞增殖并抑制凋亡,沉默CLU抑制C33a细胞增殖并促进凋亡。沉默CLU的C33a细胞可上调促凋亡蛋白p53、Bax和Bcl-2的表达,并促进Cytc release、抑制MMP下调线粒体膜电位。结论沉默CLU可抑制宫颈癌细胞增殖、促进凋亡,可能与上调促凋亡蛋白表达和下调线粒体膜电位有关,可为宫颈癌的预防和治疗提供新靶标。     

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的 探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织.使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达.体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组.在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达.结果 卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05).miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05).结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控V EG F-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关.     

慢病毒介导HMGN5基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其机制研究

目的观察慢病毒介导的高迁移率族核小体结合域5(HMGN5)基因沉默对卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,并对其机制进行初步探讨。方法 RT-qPCR法检测人卵巢上皮细胞株IOSE及4株不同卵巢癌细胞中HMGN5的表达情况,将HMGN5 shRNA慢病毒载体转染至人卵巢癌细胞SKOV3中,RT-qPCR和Western blot检测SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达情况,MTT法检测沉默HMGN5基因对细胞增殖能力的影响,划痕实验检测沉默HMGN5基因对细胞迁移能力的影响,Transwell实验检测沉默HMGN5基因对细胞侵袭能力;Western blot检测SKOV3细胞中PCNA、MMP-9、Wnt1和β-连环蛋白(β-catenin)蛋白表达水平。结果与卵巢上皮细胞株IOSE相比,HMGN5在卵巢癌细胞株SKOV3、A2780、HO-8910、Caov3中的表达明显升高(P<0.05)。与Blank组和NC组相比,sh-HMGN5组SKOV3细胞中HMGN5 mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力均明显下降(P<0.05),细胞中PCNA、MMP-9、Wnt1和β-catenin蛋白表达水平明显下调(P<0.05)。结论沉默HMGN5可能通过阻碍Wnt/β-catenin信号通路的激活抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移和侵袭能力。     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。     

靶向p38反义寡核苷酸-脂质体复合物对人卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响

目的:探讨p38反义寡核苷酸(p38 anti-ODN)对卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖的影响。方法:培养卵巢癌细胞株(CAOV3),以MTT比色法及克隆形成实验测定p38 anti-ODN抑制卵巢癌细胞株CAOV3增殖的作用。免疫印迹法测定p-p38、Cyclin D1及p21waf/cip1表达。免疫沉淀法纯化蛋白并p38试剂盒测定p38活性。结果:MTT实验及克隆分析法均显示p38 anti-ODN明显抑制CAOV3细胞增殖、p-p38表达、下调Cyclin D1表达,同时上调p21waf/cip1表达。结论:p38反义寡核苷酸可以抑制卵巢癌细胞株(CAOV3)增殖,其机制与影响p38通路及下游CyclinD1、p21waf/cip1表达有关;干预p38通路是基因治疗卵巢癌的重要途径之一。     

ERK1/2通路抑制剂PD98059影响卵巢癌细胞SKOV3增殖、侵袭能力的研究

目的:探讨MAPK/ERK信号传导通路抑制剂PD98059对卵巢癌细胞SKOV3的增殖、侵袭能力的影响。初步探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗卵巢癌的可能性。方法:体外培养人上皮性卵巢癌细胞SKOV3,采用CCK-8细胞增殖方法检测卵巢癌细胞SKOV3增殖情况,Western blot检测p-ERK蛋白表达,Transwell细胞侵袭实验检测SKOV3细胞的侵袭能力。结果:CCK-8法显示PD98059在一定范围内能够明显抑制卵巢癌细胞SKOV3的增殖,其作用具有时间依赖性及浓度依赖性,PD98059有效浓度为25μmol/L,在此有效浓度作用下有效时间为24h;Western blot法检测结果显示PD98059能够下调pERK1/2,即抑制ERK1/2磷酸化,从而使得ERK1/2信号传导途径失活;Transwell细胞侵袭实验结果显示PD98059在一定浓度范围内能抑制卵巢癌细胞SKOV3的侵袭与转移能力。结论:PD98059可以通过抑制ERK1/2信号途径,抑制人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的增殖、侵袭转移。     

lncRNA SNHG3靶向调控miR-340对卵巢癌细胞上皮间质转化的影响

目的 探究长链非编码RNA小核仁RNA宿主基因3(lncRNA SNHG3)对卵巢癌细胞恶性生物学行为的调控机制。方法 体外培养人卵巢癌细胞株(SKOV3、A2780、SW626和OVCAR3)和正常卵巢上皮细胞(HOSEpiC),将对数生长期的OVCAR3细胞分为对照组、si-NC组、SNHG3沉默组、miR-NC组、miR-340-5p过表达组、SNHG3沉默+anti-miR-NC组、SNHG3沉默+anti-miR-340-5p组。RT-qPCR检测细胞中lncRNA SNHG3、miR-340-5p表达;双荧光素酶实验验证SNHG3和miR-340-5p的调控作用;CCK-8法、划痕实验和Transwell小室实验检测各组细胞增殖、迁移、侵袭能力;Western blot检测各组细胞中上皮间质转化(epithelial mesenchymal transformation, EMT)相关蛋白[E-钙粘蛋白(E-cadherin)、N-钙粘蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(VIM)]表达。裸鼠成瘤实验检测沉默SNHG3的OVCAR3细胞体内生长情况;免疫组织化学法和RT-...     

NDRG2基因过表达影响卵巢癌细胞生物学功能的研究

目的构建N-myc下游调节基因2 (NDRG2)过表达质粒,研究NDRG2基因影响卵巢癌细胞增殖、凋亡及侵袭等生物学行为的作用。方法 NDRG2过表达质粒载体感染卵巢癌细胞,从而实现NDRG2基因的在卵巢癌细胞中的过表达。之后通过CCK8试验观察卵巢癌细胞的生存能力及平板克隆形成试验观察卵巢癌细胞的增殖能力。流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期。结果质粒转染后,Q-PCR检测NDRG2基因特异过表达。Q-PCR试验观察NDRG2过表达质粒瞬时转染后NDRG2基因表达情况,与空载体组相比,NDRG2过表达转染组卵巢癌细胞NDRG2基因表达水平明显升高(OVCAR-3、SKOV3、CAOV3卵巢癌细胞t值分别为48.000、28.667、29.784,均P0.05)。CCK8检测、平板克隆试验结果显示过表达NDRG2基因显著抑制OVCAR-3、SKOV3及CAOV3细胞生长(t=22.928、13.797、10.332;χ~2=5.530、4.060、4.230,P0.05),并促使上述3种卵巢癌细胞周期停滞于G1期。结论通过真核表达载体使细胞NDRG2基因的过表达,可以明显抑制OVCAR-3、SKOV3及CAOV3细胞的生长和增殖。     

GRP78在蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用

目的:探讨葡萄糖调节蛋白78(GRP78)在蛋白酶体抑制剂诱导卵巢癌细胞凋亡中的作用。方法:对3种卵巢癌细胞系SKOV3、A2870和CAOV3分别设空白对照组和不同蛋白酶体抑制剂处理组;对SKOV3细胞分别转染GRP78小干扰RNA(siRNA)和随机序列核酸siRNA组。利用蛋白酶体抑制剂MG132(5μmol/L)、PSI(20nmol/L)和EPOX(10nmol/L)作用3种细胞系,实时定量PCR和Western blot检测各组细胞GRP78 mRNA和蛋白表达。MTT和流式细胞术检测细胞活力和凋亡率。结果:各种蛋白酶体抑制剂均增加卵巢癌细胞中GRP78mRNA和蛋白表达水平。当GRP78siRNA靶向沉默GRP78表达后,蛋白酶体抑制剂作用后SKOV3细胞活力明显降低。结论:GRP78诱导表达干扰蛋白酶体抑制剂抗卵巢癌活性;沉默GRP78基因表达可提高蛋白酶体抑制剂对卵巢癌细胞的杀伤作用。     

miR-150-5p在卵巢癌中的表达及其生物学功能研究

目的探讨微小RNA-150-5p(miR-150-5p)在卵巢癌组织中的表达水平及其通过磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路对卵巢癌细胞增殖和凋亡能力的影响。方法选取2016年4月—2018年12月于武警上海总队医院妇科就诊的82例卵巢癌患者作为研究对象,患者年龄22～65周岁,平均(43.5±6.8)岁。采用qRT-PCR检测病变组织及其相应癌旁组织中miR-150-5p的表达水平。以人卵巢癌SKOV3细胞株作为空白对照组,转染miR-150-5p抑制剂的人卵巢癌SKOV3细胞株作为miR-150-5p抑制剂组,转染阴性对照质粒的人卵巢癌SKOV3细胞株作为阴性对照组,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,生物信息学网站Targetscan预测miRNA-150-5p与PI3K的靶向结合情况,荧光素酶试验验证miR-150-5p与PI3K的靶向关系,Western blotting检测Cleaved caspase-3、PI3K、Akt、磷酸化蛋白激酶B(Phosphorylated protein kinase,p-Akt)p-Akt蛋白的表达。结果 82例卵巢癌患者病变组织及相应癌旁组织中miR-150-5p的相对表达水平分别为(1.64±0.10)和(0.99±0.08),差异有统计学意义;空白对照组和阴性对照组中miR-150-5p的表达差异无统计学意义,miR-150-5p抑制剂组中miR-150-5p的相对表达量为(0.11±0.03),明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组24 h、48 h和72 h细胞增殖率的差异分别为(9.61±1.32)%、(24.54±3.61)%和(33.78±3.72)%,同一时间点均明显低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义。空白对照组和阴性对照组48 h细胞凋亡率的差异无统计学意义,而miR-150-5p抑制剂组的细胞凋亡率为(16.65±2.93)%,明显高于空白对照组[(0.74±0.10)%]和阴性对照组[(1.79±0.21)%],差异有统计学意义。荧光素酶报告基因分析证实miR-150-5p与PI3K存在靶向结合位点。miR-150-5p抑制剂组PI3K、p-Akt蛋白表达低于空白对照组和阴性对照组,差异有统计学意义;Cleaved caspase3蛋白表达高于空白对照组和阴性对照组(P0.01);结论 miR-150-5p在卵巢癌中作促癌基因,其调控作用可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

特异性沉默hTERT基因表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及p53、p21的表达的影响

目的探索特异性沉默hTERT基因表达对卵巢癌细胞增殖凋亡及p53和p21表达的影响,为临床诊治提供参考依据。方法采用分子克隆技术构建表达hTERTshRNA的载体,特异性沉默hTERT基因表达;WestenBlot法、MTT比色法、流式细胞仪检测抑制hTERT基因表达对卵巢癌细胞p53表达及其增殖和凋亡的影响。结果pSIREN-hTERTshRNA转染有效阻抑A2780细胞中hTERT蛋白表达,抑制率为77%;随着A2780细胞中hTERT蛋白表达降低,p53和p21表达均明显增加;与空白对照及转染pSIREN-Con对照质粒相比,pSIREN-hTERT转染的A2780细胞生长速度明显降低;pSIREN-hTERT转染48hA2780细胞凋亡率为(26.76±7.42)%,明显高于对照质粒pSIREN-Con转染组(3.73±0.78)%及空白对照组(1.33±0.15)%。结论hTERTshRNA重组质粒可特异性抑制卵巢癌细胞hTERT的表达,诱导细胞增殖抑制和凋亡,且可能与上调p53和p21的表达有关。     

薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及机制研究

目的 研究薏苡仁油对卵巢癌SKOV3细胞凋亡的作用及其机制.方法 采用不同浓度薏苡仁油作用于卵巢癌SKOV3细胞,MTT法观察薏苡仁油对SKOV3细胞存活率的影响.采用Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色、DNA Ladder检测、流式细胞仪检测薏苡仁油对SKOV3细胞凋亡的影响.Western blotting检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Capase 3、8、9的表达情况.结果 与对照组相比,400μg/mL和500μg/mL薏苡仁油浓度可在处理后24 h、48 h和72 h显著降低SKOV3细胞存活率(t值4.635～5.231,P<0.05),其作用随着时间的延长而增加.薏苡仁油低浓度50μg/m L、100μg/m L、200μg/m L作用于卵巢癌SKOV3细胞48h诱导凋亡效果较好.薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,Hoechst33342/PI染色、AO/EB染色均可见典型的凋亡小体.不同浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL组薏苡仁油作用于SKOV3细胞48h后,与对照组相比较,细胞凋亡均显著增多(t值分别为2.536、3.012、4.908,P<0.05),其中200μg/m L组细胞总凋亡率高达(27.10±5.42)％.与对照组相比较,薏苡仁油浓度50μg/mL、100μg/mL、200μg/mL作用于SKOV3细胞48h后,Bax、Caspase 3、Caspase 8、Caspase 9蛋白表达均显著增高(t值2.436～5.709,P<0.05),Bcl-2蛋白表达显著下降(t值2.357～4.304,P<0.05).结论 薏苡仁油可诱导卵巢癌细胞株SKOV3凋亡,其机制可能与下调抑制凋亡蛋白Bcl-2、上调促凋亡蛋白Bax、Caspase 3、8、9的表达水平有关.薏苡仁油有可能抑制卵巢癌细胞的扩散、转移.     

G6PC在体外对卵巢癌细胞生长的作用及其对卵巢癌细胞周期的影响

目的探索在G6PC在体外对卵巢癌细胞生长的作用及其对卵巢癌细胞周期的影响,评价G6PC在卵巢癌治疗中可能存在的潜力。方法利用shRNA稳定转染技术及G6PC特异性抑制剂(4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐)在OVCAR3人卵巢癌细胞株中抑制G6PC的表达。通过Western blotting及qRT-PCR技术检测shRNA的沉默效果以及4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐对G6PC的抑制作用以及CDKN1B、CDK2蛋白水平改变。检测阻断G6PC前后细胞糖代谢中关键酶糖原合成酶(GYS1)、糖原磷酸化酶(PYGL)以及关键代谢产物糖原水平的改变。对G6PC从基因水平及药物水平进行阻滞后,通过结晶紫实验、Transwell实验和软琼脂实验检测细胞增殖、迁移侵袭和非停泊性生长能力的改变,评价G6PC对卵巢癌细胞生长的影响。最后利用流式细胞技术对shG6PC对卵巢细胞周期、凋亡的影响作进一步探究。结果体外shRNA沉默G6PC后,卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭和非停泊性生长能力降低。在抑制卵巢癌细胞生长方面,应用20μM的G6PC特异性抑制剂(4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐)可以达到与基因水平阻断相似的效果。阻断G6PC后,胞内GYS1及PYGL发生改变,细胞内糖原累积,提示细胞糖异生功能的损伤。G6PC沉默引起了CDKN1B编码蛋白p27磷酸化水平增加。在细胞周期实验中,沉默G6PC使G1/S期卵巢癌细胞比例上升,卵巢癌细胞更多停滞于G1期。而在细胞凋亡方面G6PC抑制组与对照组并无显著差异。结论通过shG6PC和4,5,6,7-四氢噻吩[3,2-C]吡啶盐酸盐对G6PC进行抑制可影响卵巢癌细胞的糖代谢,同时降低了肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭以及非停泊性生长的能力。G6PC沉默可使CDKN1B磷酸化蛋白的水平升高。CDKN1B蛋白磷酸化水平升高可能是导致细胞趋于停滞在G1期的原因。