微小核糖核酸-371a-5p靶向调控X相关凋亡抑制蛋白在滋养层细胞凋亡和复发性流产中的作用分析

目的探讨微小核糖核酸-371a-5p(miR-371a-5p)靶向调控X相关凋亡抑制蛋白(XIAP)在滋养层细胞凋亡、复发性流产中的作用。方法滋养层JEG-3细胞经过细胞培养、转染后,分为空白组(Control)、阴性对照组(ND)、miR-371a-5p mimics组及miR-371a-5p inhibitor组。实时荧光定量PCR检测miR-371a-5的表达观察滋养层细胞凋亡能力,免疫印迹(Western blot)检测XIAP、含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(caspase-3)表达,采用实时荧定量PCR检测XIAP、caspase-3基因。结果Control组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.50±0.09),NC组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.44±0.05),miR-371a-5p mimics组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.23±0.08),miR-371a-5p inhibitor组miR-371a-5p mRNA表达水平为(1.86±0.05),miR-371a-5p mimics组表达低于Control、NC、miR-371a-5pinhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组表达高于Control、NC、miR-371a-5p mimics组(F=31.759,P<0.05)。Control组转染48 h后细胞凋亡率为(1.74±0.04)%,NC组转染48 h后细胞凋亡率为(1.76±0.06)%,miR-371a-5p mimics组转染48 h后细胞凋亡率为(3.51±0.09)%,miR-371a-5p inhibitor组转染48 h后细胞凋亡率为(1.33±0.16)%,滋养层细胞转染48 h后miR-371a-5p mimics组细胞凋亡率高于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组低于NC、Control及miR-371a-5p mimics组(F=47.027,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组XIAP相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组XIAP相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=33.541,P<0.05)。miR-371a-5p mimics组caspase-3相对表达量低于NC、Control及miR-371a-5p inhibitor组;miR-371a-5p inhibitor组caspase-3相对表达量高于miR-371a-5p mimics、NC及Control组(F=43.728,P<0.05)。结论miR-371a-5p靶向调控XIAP参与滋养层细胞凋亡的过程,在复发性流产起到重要作用。     

miR-21通过负调节CYLD表达促进宫颈癌增殖

目的研究微小RNA-21(miR-21)在宫颈癌(CC)中的表达,探讨其下调对CC细胞增殖的作用及可能机制。方法选取2016年01月至2018年06月进入内蒙古自治区人民医院救治的56例CC患者和健康志愿者67例,收集56例CC患者外周血、癌组织与癌旁组织,67例健康志愿者外周血,计算CC患者的肿瘤尺寸,采用实时定量PCR检测CC患者和健康志愿者外周血中HPV16、HPV18、miR-21含量,CC组织及癌旁组织中miR-21含量;采用Pearson相关性分析miR-21与HPV16、HPV18相关性;qRT-PCR检测宫颈正常上皮细胞H8,CC细胞系C4-I、C4-II、Hela、SiHa、C33A、Caski和MS751细胞及miR-21抑制剂(inhibitor)干预Hela细胞24 h后miR-21的表达;CCk-8法检测miR-21抑制剂(inhibitor)对H8、Hela、C4-I和Caski细胞增殖影响; Western blot检测miR-21抑制剂(inhibitor)对Hela和Caski细胞CyclinD1、CyclinE、CDK4、CDK6和CYLD表达的影响;qRT-PCR检测miR-21抑制剂(inhibitor)对Hela和Caski细胞CCND1、CCNE、CDK4、CDK6和CYLD mRNA的影响。结果 CC患者外周血HPV16、HPV18和miR-21含量明显高于健康志愿者,癌组织比癌旁组织高表达miR-21(P0.05);CC患者组织和外周血中miR-21含量与HPV16、HPV18和肿瘤尺寸呈明显正相关(P0.05);CC细胞系C4-I、C4-II、Hela、SiHa、C33A、Caski和MS751细胞比宫颈正常上皮细胞H8高表达miR-21;miR-21抑制剂(inhibitor)显著抑制Hela中高表达的miR-21且抑制Hela、C4-I和Caski细胞增殖(P0.05),而不影响宫颈正常上皮细胞H8(P0.05);miR-21抑制剂(inhibitor)显著抑制Hela和Caski细胞CyclinD1、CyclinE、CDK4蛋白和mRNA表达(P0.05),上调CYLD蛋白和mRNA表达(P0.05),对Caski细胞同时抑制CDK6蛋白和mRNA(P0.05),而Hela细胞的CDK6蛋白和mRNA无明显影响(P0.05)。结论 CC组织与癌旁细胞高表达miR-21,其通过抑制CYLD蛋白介导癌细胞周期阻滞促进细胞增殖。结果提示miR-21可能与CC发生发展有关,其可能成为与HPV16、HPV18相似的CC诊断指标,且参与肿瘤生长。     

miR-203a-3p靶向调控VEGF-C表达对卵巢癌恶性生物学特征的影响

目的 探究miR-203a-3p通过靶向调控血管内皮生长因子C(VEGF-C)表达影响卵巢癌细胞增殖、迁移和侵袭的机制.方法 收集2019年2月至10月在清华大学第一附属医院就诊的20例卵巢癌患者手术切除的癌组织及对应癌旁组织.使用实时荧光定量聚合酶链式反应检测20例手术切除的卵巢癌组织及对应癌旁组织中miR-203a-3p的表达.体外培养SKOV3细胞,将miR-203a-3p和pc-VEGF-C单独或者共同转染于SKOV3细胞,实验分为:Control组、miR-203a-3p组、pc-VEGF-C组和miR-203a-3p+pc-VEGF-C组.在miRNA靶向数据库TargetScanHuman中,对miR-203a-3p与VEGF-C的靶向关系进行预测,并利用双荧光素酶报告基因实验对其靶向关系进行验证;利用克隆形成实验检测各组SKOV3细胞的克隆形成率以观察其体外增殖活性,并利用Western blot实验检测增殖标志蛋白PCNA相对表达水平;利用划痕实验检测各组24h内划痕愈合率以观察其迁移能力;Transwell实验检测侵袭能力;Western blot检测侵袭、迁移相关蛋白表达.结果 卵巢癌组织中miR-203a-3p表达(0.47±0.10)较正常癌旁组织中miR-203a-3p表达(0.99±0.09)显著下调(t=17.112,P<0.05).miR-203a-3p与VEGF-C存在可结合的位点,相比Control组,miR-203a-3p组VEGF-C蛋白相对表达水平、荧光素酶活性显著降低(q值分别为12.430、5.047,P<0.05);miR-203a-3p组卵巢癌细胞克隆形成率、PCNA蛋白相对表达水平均显著降低(q值分别为11.773、12.246,P<0.05);miR-203a-3p组单位面积细胞侵袭数和细胞愈合率均显著降低(q值分别为6.258、5.325,P<0.05);miR-203a-3p组E-cadherin表达显著升高,Vimentin、N-cadherin表达均显著降低(q值分别为4.082、7.746、7.570,P<0.05).结论 miR-203a-3p可以通过靶向调控V EG F-C表达抑制卵巢癌细胞增殖、侵袭和迁移,其机制可能与抑制增殖相关蛋白和调控上皮间质化过程相关.     

miR-22在卵巢癌中的表达及其分子机制研究

目的:检测miR-22在卵巢癌组织的表达改变,明确miR-22调控卵巢癌细胞生长的分子机制。方法:运用qRT-PCR检测66例卵巢癌及相应癌旁正常组织中miR-22的表达改变;构建异黏蛋白(metadherin,MTDH)3’UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告检测观察miR-22对MTDH 3’UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-22 mimics转染卵巢癌细胞SKOV3,以MTDH siRNA为阳性对照,采用Western blot检测其对MTDH蛋白表达水平的影响;然后采用MTT法检测高表达miR-22对SKOV3细胞生长增殖的影响。结果:qRT-PCR检测结果显示,miR-22在66例卵巢癌组织中表达下调;在双荧光素酶报告检测显示,miR-22能特异性地与MTDH 3’UTR结合,抑制其荧光素酶活性。Western blot结果显示,过表达miR-22或干扰MTDH可抑制MTDH蛋白的表达。MTT检测发现,过表达miR-22或干扰MTDH可抑制人SKOV3细胞的生长,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:miR-22通过靶向调控MTDH的表达而抑制卵巢癌细胞的生长。     

miR-218对胃癌细胞增殖及周期影响的研究

目的 探讨miR-218对胃癌细胞增殖及细胞周期的影响.方法 将miR-218 mimics转染胃癌细胞株SGC-7901和MGC-803细胞,以无关序列(Scramble mimics)作为阴性对照.采用qRT-PCR技术验证miR-218 mimics转染细胞中miR-218的表达水平;通过细胞计数法及MTS[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2氢-四唑,内盐]法观察miR-218过表达对胃癌细胞增殖的影响;采用流式细胞术观察miR-218过表达对胃癌细胞周期的影响.结果 转染miR-218 mimics胃癌细胞中miR-218的表达量较对照细胞显著升高.过表达miR-218的胃癌癌细胞增殖速度明显减慢(P＜0.05).通过流式细胞术分析细胞周期发现,过表达miR-218的胃癌细胞阻滞于G1期.结论 miR-218能抑制胃癌细胞生长增殖,阻止胃癌细胞周期进程,它可能在胃癌的发生发展中发挥重要作用.     

miR-150基于PI3K/Akt信号通路调控乳腺癌细胞生物学特性的研究

目的探讨miR-150在乳腺癌组织中的表达,明确miR-150通过PI3K/Akt信号通路对乳腺癌细胞的增殖和凋亡能力的影响。方法 RT-PCR检测miR-150在乳腺癌组织和癌旁组织中的表达,将miR-150 inhibitors和阴性对照转染至人乳腺癌细胞系MCF-7,以空脂质体作为对照,RT-PCR检测转染结果,转染后培养48 h,MTT法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡能力,蛋白免疫印迹法检测Cleaved caspase3、PI3K、AKT、p-AKT蛋白的表达。结果乳腺癌组织中miR-150的表达量显著高于癌旁组织(P0. 01);空白对照组和阴性对照组中miR-150的表达差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组中miR-150的表达明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组增殖率差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞增殖率明显低于对照组(P0. 01);空白对照组和阴性对照组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量比较差异无统计学意义(P0. 05),而miR-150-SiRNA组细胞凋亡率和Cleaved caspase3蛋白相对表达量均明显高于对照组(P0. 01); PI3K、p-AKT蛋白表达在空白对照组和阴性对照组间比较差异无统计学意义(P0. 05),miR-150-SiRNA组PI3K、pAKT蛋白表达显著低于对照组(P0. 01)。AKT蛋白在3组间比较差异无统计学意义(P0. 05)。在乳腺癌细胞中加入PI3K/Akt信号通路抑制剂LY294002,作用48 h,细胞增殖和凋亡结果与miR-150-SiRNA组一致。结论 miR-150在乳腺癌中高表达,干扰miR-150的表达能够显著抑制乳腺癌细胞系MCF-7的增殖,并通过上调Cleaved caspase来促进细胞凋亡,其调控作用可能与PI3K/AKT信号通路有关。     

miR-32与PTEN在宫颈癌中表达关系

目的：研究宫颈癌中miR-32与PTEN之间的关系。方法：通过qRT-PCR检测miR-32、Western blot检测PTEN在宫颈癌组织和癌旁宫颈组织中的表达,并分析PTEN表达与宫颈癌发病的关系;miR-32 mimics、inhibitors、阴性对照序列（NC）,分别转染宫颈癌Hela细胞,qRT-PCR检测miR-32,Western blot检测PTEN表达。结果：宫颈癌组织中miR-32高表达,而癌旁组织中miR-32低表达;宫颈癌组织中PTEN低表达,而癌旁组织中高表达,差异均有显著性意义（P＜0.05）。miR-32表达下调后,导致PTEN表达增高,提高miR-32表达后,PTEN蛋白水平下调。结论：miRNA-32和PTEN与宫颈癌发生发展有关,PTEN可能是miR-32的靶基因。     

miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及机制

目的 探讨miR-155对喉鳞状细胞癌Hep2细胞增殖影响及具体机制。方法 采用miR-155 NC和miR-155 inhibitor转染Hep2细胞,realtime-PCR法检测转染效果,细胞计数盒-8（CCK-8）法检测不同转染时间（12、24、36、48、60、72 h）细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Western blot检测Hep2细胞中细胞周期蛋白A1（cyclin A1）、cyclin D1、磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B/叉形头转录因子（Foxo3a）信号通路相关蛋白表达量。结果 miR-155 inhibitor组中miR-155表达量（0.34±0.03）明显低于miR-155 NC组（1.25±0.10）,且转染24、36、48、60、72 h后,miR-155 inhibitor组Hep2细胞活力明显低于miR-155 NC组;与miR-155 NC组比较,miR-155 inhibitor组Hep2细胞凋亡率明显提高,细胞周期阻滞于G1期,cyclin A1、cyclin D1、PI3K、p-AKT表达下调,Foxo3a表达上调,差异均有统计学意义（均P<0.01）。结论 miR-155表达下调可降低Hep2细胞活力、增加细胞凋亡率,其机制可能与miR-155调控PI3K/AKT/Foxo3a信号通路有关。     

miR-214对HepG2细胞增殖及细胞周期影响

目的 探讨miR-214对HepG2细胞增殖及细胞周期的影响。方法 Realtime-PCR法检测肝癌细胞株SMMC-7721、HepG2、SK-Hep-1、Huh 7、Hep3B及正常肝细胞L-02中miR-214表达量,并利用脂质体转染miR-214 NC及miR-214 mimics,采用Realtime-PCR法检测转染效果;采用MTT法、流式细胞术分别检测miR-214对肝癌细胞活力、凋亡及细胞周期影响;蛋白印迹（WB）检测miR-214对肝癌细胞中细胞周期蛋白D1（cyclinD1）,细胞周期蛋白依赖性激酶4（CDK4）,生存素（survivin）及增值细胞核抗原（PCNA）表达影响。结果 miR-214在肝癌细胞SMMC-7721、SK-Hep-1、Huh 7、Hep3B、HepG2中表达量[分别为（1.25±0.10）、（1.43±0.10）、（0.95±0.09）、（0.98±0.01）、（0.82±0.08）]明显低于正常肝细胞L-02（2.52±0.23）,其中HepG2中miR-214表达量最低。miR-214 mimics组HepG2细胞中miR-214表达量（2.38±0.23）明显高于miR-214 NC组（0.83±0.08）,miR-214 mimics组HepG2细胞活力（0.37±0.03）明显低于miR-214 NC组（0.78±0.07）;与miR-214 NC组比较,miR-214 mimics组HepG2细胞凋亡率明显升高,细胞周期阻滞于G1期,cyclinD1、CDK4、survivin及PCNA表达量下调,差异均有统计学意义（P<0.01）。结论 上调miR-214表达可抑制肝癌细胞增殖,其机制可能与调控细胞周期相关蛋白表达水平有关。     

miR-216a通过下调CAPN6抑制宫颈癌细胞增殖并促进细胞凋亡的研究

目的 探讨微小RNA-216a(miR-216a)对宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响及作用机制。方法 收集2019年5月至2021年5月于河北北方学院附属第一医院行手术治疗的82例宫颈癌患者的宫颈癌组织和癌旁正常组织,用实时荧光定量PCR(qRT-RCR)法检测组织中miR-216a和钙激活中性蛋白酶6(CAPN6)表达。转染miR-216a模拟物(miR-216a mimic)、CAPN6小干扰RNA(si-CAPN6)或共转染miR-216a mimic与CAPN6过表达质粒(pcDNA-CAPN6)至宫颈癌HeLa细胞。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡,蛋白质印迹法检测CAPN6、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Cleaved Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白(Bax)的蛋白表达情况,并进行统计分析。结果 宫颈癌组织中miR-216a mRNA相对表达量明显低于癌旁正常组织(t=52.968,P<0.05),而CAPN6 mRNA和CAPN6蛋白相对表达量均明显高于癌旁正常组织(t值分别为2...     

miR-103对鼻咽癌SUNE1细胞生物学行为的影响

目的 探讨miR-103对鼻咽癌SUNE1细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响。方法 采用脂质体转染试剂将miR-103 mimic、miR-103 NC、miR-103 inhibitor瞬时转染至SUNE1细胞,RT-PCR检测miR-103的转染效率,CCK-8实验检测其细胞增殖能力,Transwell实验检测细胞的迁移能力和侵袭能力,流式细胞术检测其细胞凋亡能力,Western blot检测相关蛋白表达水平。结果 与SUNE1组相比,miR-103 mimic组的miR-103表达量升高,miR-103 inhibitor组的miR-103表达量降低;在48 h和72 h时,miR-103 mimic组细胞生长速率均明显升高,miR-103 inhibitor组生长速率明显降低;miR-103 mimic组细胞迁移能力和侵袭能力均显著提升,而miR-103 inhibitor组均显著减弱;在miR-103 mimic组中vimentin蛋白的表达升高、PARP-1蛋白的表达降低,在miR-103 inhibitor组中vimentin和cyclinD1蛋白的表达降低,PARP-1蛋...     

卵巢癌患者血清miR-210、miR-126与临床病理特征及预后关系探讨

目的:研究卵巢癌患者血清微小RNA-210(miR-210)和微小RNA-126(miR-126)表达水平及其与患者临床病理特征及预后的关系。方法:选取102例本院确诊的卵巢癌患者作为观察组,另选取同期本院健康体检的女性志愿者102例为对照组。采用qRT-PCR法检测两组血清miR-210、miR-126相对表达量,根据检测中位值将miR-210、miR-126分为高表达组与低表达组,观察其与患者临床病理特征的关系,受试者工作特征曲线(ROC)法分析miR-210、miR-126表达对卵巢癌的预测价值,Kaplan-Meier分析卵巢癌患者生存,logistic多元回归分析影响卵巢癌发生的危险因素。结果:与对照组相比,观察组血清miR-210表达水平升高,miR-126表达水平降低(P0.05);miR-210、miR-126均与患者淋巴结转移、FIGO分期、分化程度及糖类抗原125水平相关,且miR-210与组织类型相关(P0.05);miR-210、miR-126的曲线下面积分别为0.789、0.836,敏感度分别为96.6%、67.8%,特异度分别为51.2%、95.4%;miR-210低表达组无生存进展期(PFS)、总体生存时间(OS)均高于高表达组,miR-126高表达组PFS、OS均高于低表达组(P0.05);miR-210、miR-126均为影响卵巢癌发生的独立危险因素。结论:卵巢癌患者的血清miR-210上调表达, miR-126下调表达,均与卵巢癌发生发展有关,均可能作为临床诊断、监测病情及评估预后的重要指标。     

卵巢癌患者外周血miR-31表达量与血清肿瘤标志物、基质金属蛋白酶的相关性研究

目的研究卵巢癌患者外周血miR-31表达量与血清肿瘤标志物、基质金属蛋白酶(MMPs)的相关性。方法选取2015年3月-2018年12月宁波市妇女儿童医院手术切除并经术后病理诊断的卵巢癌患者24例作为卵巢癌组,同期在该院体检的健康志愿者24例作为对照组。采集外周血及卵巢癌组织、癌旁组织,抽提miRNA后测定miR-31的表达量;采集血清并测定肿瘤标志物、MMPs的含量。结果卵巢癌组外周血中miR-31的表达量均明显低于对照组(P0. 05),卵巢癌组织中miR-31的表达量均明显低于癌旁组织(P0. 05),且卵巢癌患者外周血中miR-31的表达量与卵巢癌组织中miR-31的表达量呈正相关关系(P0. 05)。卵巢癌组患者血清中CA50、CA125、CA199、组织多肽抗原(TPA)、MMP2、MMP7、MMP9、MMP10的含量均明显高于对照组(P0. 05),且与外周血中miR-31的表达量呈负相关关系(P0. 05)。结论卵巢癌患者外周血miR-31的低表达与病灶内miR-31表达量的下调相关且能反应肿瘤标志物、MMPs的变化。     

miR-378对卵巢癌细胞增殖能力的影响

目的探究微小RNA378(miR-378)与c-Myc表达的关系及其与卵巢癌细胞增殖能力的影响。方法培养对数生长期人卵巢癌细胞系SKOV3,慢病毒转染法外源性上调SKOV3细胞中miR-378的表达作为实验组,同时转染空白载体作为对照组,Taqman实时荧光定量PCR(RT-q PCR)技术检测两组细胞miR-378及c-Myc mRNA表达水平,免疫印迹实验(Western Bolt)检测两组细胞c-Myc蛋白表达水平,CCK-8实验检测两组细胞增殖能力的情况,克隆形成实验检测两组细胞克隆形成能力的情况。结果实验组miR-378的表达水平显著高于对照组细胞(P0.001);实验组c-Myc mRNA表达水平显著低于对照组细胞(P0.05);实验组c-Myc蛋白表达水平同样显著低于对照组细胞(P0.05);实验组细胞增殖能力在48及72h时显著低于对照组细胞(P0.05);实验组细胞克隆形成能力显著低于对照组细胞(P0.01)。结论 miR-378可能通过抑制原癌基因c-Myc的表达,介导卵巢癌细胞增殖能力的下调。     

多聚胞嘧啶结合蛋白2在卵巢癌中的表达及对卵巢癌细胞增殖的影响

目的探讨多聚胞嘧啶结合蛋白2[poly(c)-binding protein 2, PCBP2]在卵巢癌组织中的表达情况,以及PCBP2对卵巢癌细胞增殖能力的影响。方法采用免疫组织化学方法检测80例卵巢癌组织中PCBP2蛋白的表达情况。通过RNA干扰技术沉默PCBP2基因的表达,采用MTT法检测卵巢癌SKOV3细胞株的增殖能力。结果卵巢癌组织中PCBP2的阳性表达显著高于癌旁正常组织,差异有统计学意义(P0.05)。在下调PCBP2表达后,卵巢癌SKOV3细胞的增殖能力显著下降,差异有统计学意义(P0.05)。结论 PCBP2在卵巢癌组织中高表达,PCBP2对卵巢癌细胞的增殖具有促进作用。     

miR-454-3p调控肺癌细胞活性及对CBX7蛋白表达的影响

目的:探究miR-454-3p对肺癌细胞活性的调控及对CBX7蛋白表达的影响。方法:体外培养正常肺上皮细胞293T细胞和人肺癌细胞A549细胞,把肺癌A549细胞分为三组,空白组、miR-NC组(转染miR-NC)和miR-454-3p组(转染miR-454-3p mimics),用CCK-8法检测三组细胞增殖情况;用...     

微RNA-22在甲状腺乳头状癌中的表达及与化疗敏感性的关系

目的 研究微RNA(miRNA,miR)-22在甲状腺乳头状癌组织、血清和细胞系中的表达及其与化疗敏感性的关系.方法 收集21例临床确诊为甲状腺乳头状癌病例资料、组织、血清样本,同时收集21例健康体检者和21例甲状腺结节患者血清样本作为对照,采用实时荧光定量聚合酶链式反应的方法检测miR-22在癌组织、癌旁组织、血清、人甲状腺正常细胞系和人甲状腺乳头癌细胞系中的表达并进行统计学分析,利用生物信息学软件预测miR-22的靶基因及参与的信号通路.结果 miR-22在癌组织中的表达显著低于癌旁组织,在癌患者血清中的表达显著高于健康体检者和甲状腺结节患者,在癌组织中的表达与血清中表达呈负相关(r=-0.851,P＜0.01).miR-22在T3～T4期癌组织中的相对表达量为0.45±0.08,低于T1～T2期的0.61±0.18(t=-2.809,P＜0.01),在N-期癌组织中的相对表达量为0.64±0.16,高于N+期的0.48±0.10 (t=2.789,P＜0.01);在T3～T4期患者血清中的相对表达量为12.76±1.60,高于T1～T2期的9.91±2.74(t=2.806,P＜0.01);在化疗高敏感组患者癌组织中的相对表达量为0.71±0.14,高于化疗低敏感组的0.42±0.13(t=4.575,P＜0.01).利用生物信息学软件预测SIRT1和HMGB1为miR-22的靶基因,其参与细胞内吞作用、肌动蛋白细胞骨架调节、丝裂原活化蛋白激酶和癌症等多个信号通路.结论 miR-22在甲状腺乳头状癌组织和细胞系中的表达量显著降低,且与肿瘤T、N分期和化疗敏感性有关,但在血清中的表达量显著升高;miR-22参与多个信号通路,可能通过靶向调控SIRT1和HMGB1影响甲状腺乳头状癌的发生发展.     

MiR-106b通过靶向BTG3调控非小细胞肺癌的增殖与细胞凋亡

目的探讨MiR-106b通过靶向BTG3调控非小细胞肺癌的增殖与细胞凋亡行为及其作用机制。方法 qPCR检测非小细胞肺癌和癌旁正常组织、不同细胞株中miR-106b的表达情况;双荧光素酶报告基因检测miR-106b与BTG3的相互作用;MTT细胞增殖实验检测miR-106b对非小细胞肺癌细胞增殖能力的影响;流式细胞术实验检测miR-106b对非小细胞肺癌细胞凋亡行为的影响;Transwell侵袭实验检测抑制miR-106b后非小细胞肺癌细胞侵袭能力的变化;免疫组化检测裸鼠瘤体内BTG3的表达情况。结果与癌旁正常组织相比,非小细胞肺癌组织中miR-106b表达明显增高;非小细胞肺癌细胞A549中miR-106b的表达水平最高;miR-106b能与BTG3的3’UTR特异性结合,调控BTG3的表达活性;抑制miR-106b的表达后非小细胞肺癌细胞增殖侵袭的能力相对减弱;抑制miR-106b的表达后,荷瘤小鼠的肿瘤体积和重量都明显减小,且BTG3蛋白的表达相应降低。结论 miR-106b在非小细胞肺癌的发生发展过程中起重要作用,可以通过靶向调节BTG3的表达影响非小细胞肺癌细胞的增殖和凋亡。     

CPEB4沉默对宫颈癌Siha细胞的增殖、迁移和侵袭的影响

目的探讨胞质聚腺苷酸化物结合蛋白4 (CPEB4)在宫颈癌中的表达及其对宫颈癌Siha细胞增殖、迁移和侵袭的影响。方法采集本院2017年5月—2018年5月42例宫颈癌患者手术切除的癌变组织及其正常癌旁组织,采用实时定量PCR和Western blot方法检测宫颈癌及其癌旁组织中CPEB4的表达;采用siRNA转染沉默宫颈癌Siha细胞中CPEB4的表达,CCK-8法检测细胞增殖,Transwell检测细胞迁移和侵袭,Western blot检测P53、Twist1的蛋白表达。结果与癌旁组织相比,宫颈癌组织中CPEB4 mRNA和蛋白表达均显著上调;转染CPEB4 siRNA的Siha细胞增殖活性减弱,迁移和侵袭能力均显著下降(P0.05),且细胞中P53蛋白表达上调、Twist1蛋白表达显著下调(P0.05)。结论 CPEB4在宫颈癌中高表达,可能通过调控P53和Twist1的表达影响宫颈癌细胞的增殖、迁移与侵袭,有望成为宫颈癌诊断标志物及潜在的治疗靶点。     

miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响及机制

目的探讨miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞凋亡的影响以及潜在的作用机制。方法设置miR-con组、miR-219a-5p组、anti-miR-con组、anti-miR-219a-5p组、miR-219a-5p+pcDNA组、miR-219a-5p+pcDNA-SMC4组、miR-con+SMC4-WT组、miR-con+SMC4-MT组、miR-219a-5p+SMC4-WT组、miR-219a-5p+SMC4-MT组,转染均用脂质体法。qRT-PCR检测miR-219a-5p和SMC4 mRNA表达水平;Western Blot检测蛋白表达;MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞凋亡;双荧光素酶报告基因检测实验检测荧光活性。结果相较于人正常皮肤细胞HaCaT,皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2、Colo-16、SCL-1中SMC4 mRNA和蛋白表达水平显著升高,miR-219a-5p表达水平显著降低(P<0.05)。过表达miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡;促进Caspase-3蛋白表达,抑制Cyclin D1蛋的表达;抑制Wnt/β-catenin信号通路激活。miR-219a-5p靶向负调控SMC4的表达,转染SMC4野生型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性显著降低(P<0.05);而转染SMC4突变型表达载体的HSC-2细胞荧光素酶活性差异不显著。且过表达miR-219a-5p,SMC4表达水平显著降低;抑制miR-219a-5p表达,SMC4表达水平显著升高。过表达SMC4能逆转miR-219a-5p对皮肤鳞状细胞癌细胞HSC-2的增殖抑制和凋亡促进的作用。结论 miR-219a-5p可抑制皮肤鳞状细胞癌细胞增殖,诱导细胞凋亡,其机制可能与Wnt/β-catenin及SMC4信号通路有关,将为皮肤鳞状细胞癌的预防和治疗提供新靶点。