苦参碱对TGF-β1诱导的人腹膜间皮细胞成纤维细胞生长因子2的调控作用

目的 研究苦参碱对成纤维细胞生长因子2(FGF-2)在人腹膜间皮细胞(HPMCs)上皮间充质转分化(EMT)中的调控作用。方法 将HPMCs分为三组(对照组、TGF-β1刺激组及0.8 mg/mL苦参碱+TGF-β1处理组);TGF-β1刺激组用含5 ng/mL TGF-β1的完全培养基,处理组用含0.8 mg/mL苦参碱和5 ng/mL TGF-β1的完全培养基,对照组用等量完全培养基。干预处理48 h后,采用转录组测序分析各组HPMCs细胞FGF-2的mRNA表达情况,最后采用蛋白免疫印迹和实时荧光定量PCR分别检测各组HPMCs细胞FGF-2蛋白和mRNA的表达情况。结果5 ng/mL TGF-β1刺激HPMCs细胞,发现其能上调FGF-2的蛋白和mRNA的表达水平(其中蛋白上调2.00倍,mRNA上调6.18倍),而苦参碱干预后能显著下调TGF-β1刺激后FGF-2的蛋白和mRNA的表达水平(其中蛋白下调1.77倍,mRNA下调4.30倍)。结论 苦参碱通过对成纤维细胞生长因子2发挥抑制作用,进而阻止成纤维细胞在腹膜聚集,最终防止腹膜纤维化的发生。     

Troglitazone对人腹膜间皮细胞TGF-β1 和纤维连接蛋白表达的影响

目的:研究过氧化物增生体激活受体γ(PPAR-γ)激动剂troglitazone(曲格列酮,TGZ)对高浓度葡萄糖刺激下体外培养的人腹膜间皮细胞(HPMCs)中TGF-β1和细胞外基质纤维连接蛋白(Fn)表达的影响.方法:采用胰蛋白酶消化法从人大网膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型.根据细胞增殖与毒性实验选择troglitazone的最佳浓度15 μmol/L,干预高浓度葡萄糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激下的人腹膜间皮细胞.采用逆转录多聚酶链式反应(RT-PCR)半定量检测HPMCs中PPAR-γ,TGF-β1以及Fn的mRNA表达;采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMCs培养液中TGF-β1蛋白质水平;Western印迹检测Fn蛋白质水平.结果:高糖(30 mmol/L D-葡萄糖)刺激可在mRNA和蛋白质水平明显上调HPMCs表达TGF-β1和Fn(P＜0.01),troglitazone干预高糖孵育的HPMCs,可使TGF-β1和FnmRNA和蛋白质的表达明显下调(P＜0.05).结论:Troglitazone能够明显抑制在高糖刺激下的HPMCsTGF-β1和Fn的表达,这可能为临床防治长期腹膜透析患者的腹膜纤维化提供一种较为有效的方法.     

腹膜间皮细胞在腹膜纤维化中的作用及机制研究进展

腹膜间皮细胞(PMCs)是腹膜组织的结构细胞,在腹膜纤维化(PF)的发生和发展过程中起着重要作用。PMCs损伤和凋亡是引发和促进PF增生的始动因素之一,其损伤后一方面导致腹膜结构发生改变,同时其分泌蛋白酶、炎性细胞因子及其他促纤维化因子,引起腹膜间质细胞的激活和基质重构,从而触发了PF的发生和发展。另外,PMCs在PF过程中的作用与上述因素及其他细胞(尤其是成纤维细胞)之间的相互作用有关。体外研究发现,PMCs在肿瘤坏死因子β1的诱导下可以向间充质细胞转化,但其在PF过程中所起的作用及分子机制尚有待进一步阐明。     

丹参酮ⅡA对腹膜透析液诱导的人腹膜间皮细胞转分化及致纤维化因子表达的影响

目的腹膜纤维化是长期腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)的常见并发症,也是透析不充分和退出PD的主要原因,研究表明丹参酮ⅡA能改善各种组织中的纤维化。文中研究丹参酮ⅡA磺酸钠注射液对在高糖腹膜透析液(peritonealdialysis fluid,PDF)诱导下体外培养的人腹膜间皮细胞(human peritoneal mesothelial cells,HPMCs)纤维化及其相关因子表达的影响。方法选择非尿毒症、非糖尿病择期手术患者的大网膜作为HPMCs的来源,将培养的细胞随机分成4组:对照组、PDF组、丹参酮1组(含丹参酮ⅡA浓度为50μmol/L的PDF组)、丹参酮2组(含丹参酮ⅡA浓度为100μmol/L的PDF组),同步培养72h后,应用间接免疫荧光法检测α平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达,实时荧光定量PCR检测E-cadherin、α-SMA、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、Ⅰ型胶原酶(CollagenⅠ)、转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、smad2、smad7 mRNA表达。结果免疫荧光法发现,丹参酮ⅡA能显著抑制高糖诱导的E-cadherin低表达和α-SMA高表达。Real-time-PCR发现,添加丹参酮ⅡA的PDF组α-SMA、FN、CollagenⅠ、TGF-β1、smad2 mRNA表达与PDF组比较显著下调(P<0.05);E-cadherin、smad7 mRNA表达显著上调(P<0.05)。结论在PDF中添加丹参酮ⅡA可显著减轻PDF导致的HPMCs转分化,从而抑制纤维化相关因子的表达。     

TGF-β1对大鼠腹膜间皮细胞转分化的影响及其机制

目的:研究转化生长因子(transforming growth factor β1,TGF-β1)对大鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells,RPMCs)转分化的影响,并探讨其可能的机制.方法:体外培养SD大鼠原代腹膜间皮细胞,静止24 h后,随机分为正常对照组和TGF-β1(10 μg/L)刺激组.用TGF-β1(10 μg/L)刺激RPMCs不同时间,分别用RT-PCR方法和Western免疫印迹法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、E-钙黏素、Ⅰ型胶原的mRNA和蛋白的表达.用Western免疫印迹法检测总RhoA的蛋白表达水平,活化的RhoA由膜蛋白提取试剂盒提取,并用Western免疫印迹法评估.结果:TGF-β1刺激RPMCs能导致E-钙黏素mRNA和蛋白表达下调;α-SMA,Ⅰ型胶原mRNA和蛋白表达上调,同时RhoA蛋白表达上调,呈时间依赖性.结论:TGF-β1诱导了大鼠腹膜间皮细胞转分化,其机制可能通过RhoA介导的信号通路.     

腹膜透析液对腹膜间皮细胞TLR2和TLR4表达的影响

目的：观察不同浓度葡萄糖（dextrose）腹膜透析液、艾考糊精（icodextrin）腹膜透析液对人腹膜间皮细胞 Toll 样受体2（TLR2）和 TLR4表达的影响。方法体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代（HMrSV5,DMEM ／F12培养基含10％胎牛血清）用于实验研究。 M TT 检测细胞活力,实验分为5组：阴性对照组、1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组、7．5％ icodextrin 组,应用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测 TLR2和 TLR4的表达水平。结果不同浓度 dextrose 腹膜透析液作用24 h 对腹膜间皮细胞 TLR2和 TLR4的表达无明显影响。作用48 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dex-trose 组 TLR2分别降低（5．5±2．8）％、（31．4±7．5）％、（54．9±1．9）％,TLR4分别降低（32．9±17．6）％、（47．7±13．5）％、（66．4±13．5）％;作用72 h ,1．50％ dextrose 组、2．50％ dextrose 组、4．25％ dextrose 组 TLR2表达分别降低（29．4±14．7）％、（38．9±9．9）％、（63．5±16．5）％,TLR4表达分别降低（59．5±16．8）％、（63．1±9．5）％、（79．2±14．0）％;7．5％ icodextrin 组TLR2和 TLR4表达与阴性对照组比较差异无统计学意义（P＞0．05）。结论 dextrose 透析液下调 HM rSV5 TLR2和 TLR4的表达;icodextrin 透析液对 TLR2和 TLR4的表达无显著影响。     

高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响

目的：观察高糖腹膜透析液对人腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β的影响。方法：体外培养人腹膜间皮细胞株第5～10代［HMrSV5,DMEM/F12培养基含10%（体积分数）胎牛血清］,观察1.5%、2.5%、4.25%（质量分数）葡萄糖腹膜透析液（dextrose）及线粒体呼吸链复合酶Ⅰ抑制剂鱼藤酮（rotenone）,线粒体呼吸链复合酶Ⅱ抑制剂噻吩甲酰三氟丙酮（thenoyltrifluoroacetone,TTFA）,线粒体呼吸链复合酶Ⅲ抑制剂抗霉素A（antimycin A）对细胞IL-1β表达的影响（免疫印迹）;通过小RNA干扰技术下调NLRP3的表达,免疫印迹分析4.25%高糖腹膜透析液作用下细胞IL-1β的表达;通过白藜芦醇（resveratrol,RSV）诱导自噬,3-甲基腺嘌呤（3-methyladenine,3-MA）、自噬相关蛋白5（autophagy related gene 5,ATG5）siRNA、自噬相关蛋白（Beclin1）siRNA抑制自噬,流式细胞仪分析细胞活性氧（reactive oxygen species,ROS）,免疫印迹分析IL 1β的表达。结果：对照组、1.5%高糖腹膜透析液、2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮（10 μmol/L）、抗霉素A（50 mg/L）、噻吩甲酰三氟丙酮（10 μmol/L）各组细胞上清IL-1β的相对表达依次为0、0.175±0.082、0.418±0.163、2.357±0.288、2.642±0.358、3.271±0.462、0.123±0.091,提示 2.5%高糖腹膜透析液、4.25%高糖腹膜透析液、鱼藤酮、抗霉素A作用细胞IL-1β表达明显升高,应用NLRP3 siRNA可阻断上述效应;此外,对照组、阴性对照siRNA（negative control,NC siRNA）、RSV（50 μmol/L,诱导自噬）、3 MA（10 mmol/L,抑制自噬）、ATG5 siRNA（抑制自噬）、Beclin1 siRNA（抑制自噬）各组总线粒体荧光强度分别为1.76±0.42、1.83±0.55、1.85±0.62、7.36±0.92、5.35±0.77、5.06±0.62,超氧化线粒体荧光强度分别为821.68±95.12、868.15±102.82、723.39±92.56、1 660.08±113.65、1 433.01±107.24、1 562.36±112.88,结合免疫印迹结果,提示抑制自噬可增强线粒体ROS产生和提高IL-1β表达,诱导自噬对ROS、IL-1β无明显影响。结论：长期应用高糖腹膜透析液,腹膜间皮细胞NLRP3-IL-1β持续激活,实时启动自噬可能成为干预NLRP3-IL-1β持续激活、延缓腹膜透析腹腔慢性炎症及腹膜纤维化的治疗靶点。     

pcDU_6质粒载体介导的TGFβ_1 shRNA抑制TGFβ_1在人腹膜间皮细胞中的表达

目的 :研究pcDU6质粒载体介导的转化生长因子β1短发夹RNA(shorthairpinRNA ,shRNA)对人腹膜间皮细胞 (HPMCs)转化生长因子 β1(TGFβ1)表达的影响。方法 :针对TGFβ1的以GGCC开始的 2 1碱基大小的片段 ,分别设计 2对寡核苷酸 ,形成双链后将其依次连入带有U6启动子的 pcDNA3.1( )载体 (命名为 pcDU6) ,2对DNA双链通过BamHI酶切位点连接后形成中间由 6碱基序列间隔的反向互补序列 ,构建成TGFβ1短发夹RNA的产生质粒。采用胰蛋白酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞 ,建立稳定的体外培养模型。用脂质体转染表达转化生长因子β1shRNA的pcDU6载体质粒和表达反义TGFβ1RNA的pcDNA3.1( )的载体质粒入 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS刺激下人腹膜间皮细胞。采用逆转录多聚酶链式反应 (RT PCR)半定量分析HPMC中TGFβ1mRNA的表达。采用双抗夹心法酶联免疫吸附实验检测HPMC培养液中TGFβ1蛋白质水平。结果 :HPMC在 4 .2 5 %D 葡萄糖和LPS的刺激下可明显上调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组较 pc DU6空载体组明显下调TGFβ1的表达 (P <0 .0 1)。pcDU6载体质粒介导的转化生长因子 β1shRNA干扰组间比较 ,差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;pcDNA3.1( )的载体质粒介导的反义RNA组与 pcDU     

腹膜透析流出液中人腹膜间皮细胞的培养及转分化特征

目的 建立从腹膜透析(PD)流出液中分离、培养人腹膜间皮细胞(HPMC)的方法,并检测上皮黏附连接蛋白E-cadherin、紧密连接蛋白claudin-1及间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达水平.方法 从25例持续不卧床腹膜透析(CAPD)患者PD流出液中分离HPMC,并在体外进行原代培养.根据开始透析的时间分为新开管组(10例)和透析半年以上组(15例).采用倒置相差显微镜、免疫组织化学染色和扫描电镜对培养的细胞进行鉴定;采用实时定量PCR检测细胞E-cadherin、claudin-1及α-SMA mRNA表达.结果 22例患者(新开管组10例,半年以上组12例)PD流出液分离的细胞在体外培养成活,经鉴定均具有HPMC的特征.实时定量PCR结果显示,半年以上组较新开管组分离的HPMC细胞E-cadherin、claudin-1 mRNA表达降低,α-SMA mRNA表达增高(P<0.05),提示出现了间充质细胞转分化(EMT).结论 该研究成功建立了PD流出液分离培养原代HPMC的方法,并证实长期PD患者HPMC存在EMT倾向.该研究的发现为进一步研究腹膜纤维化(PF)和超滤衰竭(UFF)提供了新的方法与实验依据.     

己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤和TGF-β1、FN分泌的影响

目的研究己酮可可碱对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞（HPMC）损伤和TGF-β1、FN分泌的影响。方法采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人腹膜组织中分离间皮细胞,并体外培养HPMC。采用自动生化分析仪检测培养液中乳酸脱氢酶（LDH）水平以示细胞损伤程度 ELISA法检测细胞培养液中TGF-β1、FN的水平。结果与单纯对照组相比,2.5%L-PDS致培养液中LDH水平明显增高（P〈0.01） 同时培养液中TGF-β1、FN蛋白质水平增加。在2.5%L-PDS刺激下,100μg/ml己酮可可碱与下调培养液LDH,提高MTT渗入量,并减少TGF-β1、FN蛋白质水平。结论己酮可可碱可拮抗乳酸盐腹膜透析液致HPMC损伤并下调TGF-β1和FN的表达。     

高糖对人腹膜间皮细胞生成活性氧的影响

[目的]研究不同浓度的葡萄糖对人腹膜间皮细胞（human peritoneal mesothelial cells,HPMCs）生成活性氧的影响。[方法]HPMCs体外培养并进行免疫组化鉴定,取第3代细胞用于实验。分别按照不同的实验要求将细胞分组。不同葡萄糖浓度干预组：①空白对照组;②1．5％葡萄糖组;③2．5％葡萄糖组;④4．25％葡萄糖组。不同作用时间组：①空白对照组;②2．5％葡萄糖组。两组细胞分别培养12、24、48h。应用流式细胞仪检测细胞对氧化剂敏感的2．7-二氢二氯荧光素（2’,7’-dichlorodihydrofluorescein,DCFH）发生氧化所产生的荧光量,从而间接的反映细胞内活性氧（reactive oxygen species,ROS）的水平,观察随葡萄糖浓度变化及不同作用时间对人腹膜间皮细胞产生活性氧的影响。[结果]（1）与空白对照组比较,高糖干预人腹膜间皮细胞后,其细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05）,并且随葡萄糖浓度升高而逐渐增高,其中4．25％葡萄糖组最高。（2）与空白对照组比较,随着时间的延长,高糖作用下细胞内平均荧光强度明显升高（P〈0．05）,培养48h其水平最高。[结论]高糖可刺激体外培养的人腹膜间皮细胞ROS的生成。     

人腹膜间皮细胞的分离培养

目的体外增减的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型,我们为此建立了一种改良消化法,以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮa2消化大网膜组织碎片,细胞悬液经１００目筛网滤过后进行培养;瑞士姬姆萨染色观察细胞形态,计算细胞纯度;免疫组化（ＡＢＣ法）监定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路长鹅卵石状,纯度达９５％以上。细胞表面标志监定显示角蛋白、波形蛋白抗     

高糖对人腹膜间皮细胞氧化应激的影响

目的 研究不同浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)氧化应激的影响.方法 HPMC体外培养并行免疫组化鉴定,取第2代细胞用于实验.将不同浓度葡萄糖干预HPMC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧(ROS)水平.分析不同浓度葡萄糖及不同作用时间对HPMC细胞活力及ROS水平的影响.结果 高糖明显抑制HPMC细胞活力(P＜0.05),随着葡萄糖浓度增加及作用时间的延长,抑制率呈上升趋势.高糖干预HPMC后,细胞内的平均荧光强度明显升高.结论 高糖导致细胞发生氧化应激,其对细胞的损伤作用可能与氧自由基生成过多及ROS蓄积有关.     

高糖对人腹膜间皮细胞氧化应激的影响

目的研究不同浓度葡萄糖对人腹膜间皮细胞(HPMC)氧化应激的影响。方法HPMC体外培养并行免疫组化鉴定,取第2代细胞用于实验。将不同浓度葡萄糖干预HPMC一定时间后,MTT比色法检测细胞活力;采用活性氧捕获剂双氢-乙酰乙酸二氯荧光黄(DCFH-DA)孵育细胞,通过流式细胞仪检测细胞内的荧光强度而测得细胞内活性氧(ROS)水平。分析不同浓度葡萄糖及不同作用时间对HPMC细胞活力及ROS水平的影响。结果高糖明显抑制HPMC细胞活力(P<0.05),随着葡萄糖浓度增加及作用时间的延长,抑制率呈上升趋势。高糖干预HPMC后,细胞内的平均荧光强度明显升高。结论高糖导致细胞发生氧化应激,其对细胞的损伤作用可能与氧自由基生成过多及ROS蓄积有关。     

乳酸盐腹膜透析液对人腹膜间皮细胞凋亡及bcl-2、bax表达和caspase-3活性的影响

目的： 探讨不同浓度乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)对腹膜间皮细胞(HPMC)凋亡和bcl-2、bax表达及caspase-3活性的影响。方法:采用酶消化法从人腹膜组织中分离间皮细胞,建立稳定的体外培养模型,分别用浓度为1.50%、2.50%和4.25%的L-PDS与HPMC共同培养,同时设对照组。采用流式细胞术检测HPMC凋亡,采用RT-PCR法测定bcl-2及bax mRNA的表达,采用免疫荧光法检测caspase-3的活性。结果:与对照组比较,L-PDS各组HPMC凋亡率增加,bcl-2 mRNA的表达降低,bax mRNA表达升高,caspase-3活性增加,上述指标变化中2.50%及4.25%L-PDS组与对照组比较差异有显著性(P<0.05),4.25%L-PDS组与2.50%L-PDS组比较差异也有显著性(P<0.05),而1.50%L-PDS组与对照组比较差异无显著性(P>0.05)。结论： L-PDS可诱导HPMC 凋亡,其机制可能是通过对bcl-2及bax mRNA表达的改变以及激活caspase-3活性而实现。     

几丁糖对高糖腹透液刺激大鼠腹膜间皮细胞TGF-β1表达的影响

目的 探讨高糖腹透液(4.25%)对大鼠二代腹膜间皮细胞TGF-β1表达的影响及几丁糖(chitosan)的干预作用.方法 取第2代鼠腹膜间皮细胞(rat peritoneal mesothelial cells, RPMC)(经细胞形态和免疫组化鉴定),随机分为4组(n=4),A组即对照组:DMEM/F12培养基培养;B组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液;C组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液+几丁糖1.2 mg/L;D组:DMEM/F12培养基中加入4.25%葡萄糖透析液+几丁糖0.4 mg/L.培养24 h收集细胞提取RNA,48 h收集细胞提取蛋白,RT-PCR检测腹膜间皮细胞TGF-β1 mRNA的表达.Western印迹检测TGF-β1的蛋白表达.结果 ①RPMC经高糖腹透液(4.25%)刺激后,TGF-β1 mRNA和蛋白的表达均上升,与0 h比较,TGF-β1 mRNA和蛋白的表达分别于24、48 h时达到高峰, A、B两组比较差异有统计学意义(P<0.05);②24 h时,几丁糖使TGF-β1 mRNA的表达下降明显(P<0.05),B组分别为A组的2.51倍、C组的2.13倍、D组的1.68倍,D组为C组的1.26倍且抑制程度与几丁糖浓度呈正相关(r=0.948, P<0.01).48 h时,几丁糖使TGF-β1的蛋白水平下降明显,B组分别为A组的1.85倍、C组的1.52倍、D组的1.24倍,D组为C组的1.23倍.C、D两组分别与B组比较差异有统计学意义(P<0.05),且抑制程度与几丁糖浓度呈正相关(r=0.831, P<0.05).结论 ①高糖腹透液可刺激RPMC TGF-β1 mRNA和蛋白表达上调;②几丁糖可抑制腹膜纤维化的中枢性因子TGF-β1表达的活性.     

人腹膜间皮细胞的分离培养

目的体外培养的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型,我们为此建立了一种改良消化法,以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化人大网膜组织碎片,细胞悬液经１００目筛网滤过后进行培养：瑞士姬姆萨染色观察细胞形态,计算细胞纯度：免疫组化（ＡＢＣ法）鉴定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状,纯度达９５％以上。细胞表面标志鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞ＣＤ４５抗原阴性,证实分离培养的确是ＨＰＭＣ。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离ＨＰＭＣ的方法。     

氨基胍对乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤及血管内皮生长因子表达的影响

目的 研究氨基胍(AG)对乳酸盐腹膜透析液(L-PDS)致人腹膜间皮细胞(HMrSV5)损伤及血管内皮生长因子(VEGF)表达的影响.方法 采用人腹膜间皮细胞株HMrSV5为体外实验模型,分为无血清DMEM培养液对照组、L-PDS组(2.5%L-PDS)、L-PDS+AG组(2.5%L-PDS+10 mmol/L AG)、单纯AG组(终浓度10 mmol/L).各组以上不同干预因素与HMrSV5细胞共孵育.MTT法检测各组细胞增殖、评估细胞活力,Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测VEGF蛋白及mRNA的表达.结果 MTT试验表明,L-PDS组OD值为(0.120±0.019),明显低于对照组的(0.298±0.031),差异有统计学意义(P<0.05);L-PDS+AG组OD值为(0.289±0.022),明显高于L-PDS组,差异有统计学意义(P<0.05).Western blot和RT-PCR结果均表明,与对照组比较,L-PDS组细胞中VEGF蛋白和mRNA表达明显增加,与L-PDS组比较,PDS+AG组VEGF蛋白和mRNA的表达明显减低,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 AG可拮抗乳酸盐腹膜透析液致人腹膜间皮细胞损伤并下调VEGF的表达.     

高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白的影响

目的研究高糖对人腹膜间皮细胞间隙连接蛋白（connexin43）表达的影响。方法分离培养人腹膜间皮细胞,细胞分为3组：正常糖组（含5．5mmol／L葡萄糖）、高糖组（含140mmol／L葡萄糖）和渗透压对照组（含5．5mmol／L葡萄糖加24．5mmol／L甘露醇）,培养24、48h后,应用Northernblot、Westernblot方法检测connexin43mRNA和蛋白质表达,比较3组之间的差异。结果正常糖组腹膜问皮细胞表达丰富的connexin43,高糖环境下培养的腹膜间皮细胞connexin43mRNA和蛋白质表达均较正常糖组显著下降（P〈0．05）。渗透压对照组与正常糖组之间无明显差异（P〉0．05）。结论高糖可抑制腹膜间皮细胞connexin43mRNA和蛋白质表达,可能为腹膜透析（PD）中腹膜间皮层完整性损伤的机制之一。     

不同浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞表达p21WAF1的影响

目的：观察不同浓度的葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞ｐ２１ＷＡＦ１表达的影响。方法：大鼠腹膜间皮细胞在含糖１３．８ｇ／Ｌ和３８．６ｇ／Ｌ的无血清培养基培养２４ｈ后,用流式细胞仪分析细胞周期分布,用ＲＴ－ＰＣＲ法测定ｐ２１ＷＡＦ１的表达水平。结果：经含糖１３．８ｇ／Ｌ和３８．６ｇ／Ｌ培养基培养２４ｈ后腹膜间皮细胞大多出现细胞肥大和停滞于细胞周期的Ｇ１期,以３８．６ｇ／Ｌ组明显。高浓度葡萄糖刺激ｐ２１ＷＡＦ１