凋亡及凋亡相关因子在胎儿生长受限胎盘滋养细胞中的表达

目的　研究胎儿生长受限（fetal growth restriction,FGR）胎盘滋养细胞的凋亡及凋亡相关因子Fas、Fasl的表达及意义。方法　收集2014年3月至2017年3月大连市妇女儿童医疗中心剖宫产分娩的胎盘,正常妊娠晚期（对照组）、FGR（实验组）,各50例。采用TUNEL法检测两组胎盘滋养细胞的凋亡,计算凋亡指数。采用免疫组化S-P法检测凋亡相关因子Fas、Fasl的表达。结果　对照组、实验组均可见胎盘滋养细胞的凋亡,凋亡指数AI分别为（17.64±6.97）%及（56.48±7.98）%,差异有显著性意义（P<0.05）。实验组Fas表达高于对照组,实验组Fasl表达低于对照组,差异均有显著性意义（P<0.05）。实验组AI与Fas表达呈正相关（r=0.634,P=0.000）,与Fasl呈负相关（r=-0.940,P=0.000）。结论　凋亡相关因子Fas、Fasl可能共同通过诱导胎盘滋养细胞的凋亡参与FGR的发病。     

妊娠期肝内胆汁郁积症患者胎盘细胞凋亡及调控基因的研究

通过观察妊娠期肝内胆汁郁积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡及其调控基因P53、bcl-2、bax在胎盘中的表达,探讨细胞凋亡基因在胎盘凋亡中的作用。方法采用光镜检查、原位末端标记法(TUNEL)和免疫组化法对32例ICP患者的胎盘组织中的P53、bcl-2、bax及凋亡指数进行检测,并以18例正常妊娠妇女的胎盘组织作为对照。结果①ICP患者胎盘发生梗死率明显高于正常妊娠组;②ICP患者胎盘细胞中细胞滋养层细胞、合体滋养层细胞、蜕膜细胞及绒毛间质细胞的凋亡指数分别为:42.72±23.73;45.34±21.97;23.03±27.10;34.13±22.49,明显高于正常妊娠组的9.80±9.06;11.20±8.39;4.33±7.69;5.53±7.65,P<0.01。③调控基因P53、bcl-2、bax的表达在两组中无显著性差异。结论①ICP患者胎盘组织中梗死及细胞凋亡明显增加,提示ICP患者围生儿不良结局可能与胎盘组织凋亡水平升高有关;②ICP患者胎盘组织的细胞凋亡是非P53依赖型,并与bcl-2、bax的表达无关。     

细胞凋亡调控蛋白bcl-2/bax与子宫内膜异位症关系探讨

目的探讨子宫内膜异位症(EMS)患者内膜细胞中bcl-2及bax蛋白含量变化及其对EMS发病的影响。方法采用免疫组化ABC法检测30例EMS患者(实验组)和20例对照组女性不同月经周期的内膜细胞bcl-2及bax蛋白含量。结果对照组bcl-2表达增生期明显高于分泌期(P<0.01),实验组在位内膜增生期bcl-2表达明显高于分泌期(P<0.01),且明显高于同期对照组(P<0.01);实验组异位内膜增生期bcl-2表达与分泌期比较差异无显著性,与实验组在位内膜相近(P>0.05),但明显高于对照组(P<0.01)。实验组在位内膜分泌期bax表达高于增生期(P<0.01),但较同期对照组下降(P<0.05);实验组异位内膜分泌期bax的表达高于增生期,差异有显著性(P<0.05),但分泌期却明显低于同期实验组在位内膜(P<0.01)。结论EMS患者的内膜细胞具有与正常内膜不同的增殖凋亡特性。bcl-2/bax可作为判断子宫内膜异位活性的指标之一。     

妊娠期肝内胆汁淤积症患者胎盘细胞凋亡的研究

目的 研究妊娠期肝内胆汁淤积症(ICP)患者胎盘细胞凋亡与胆酸水平的关系,初步探讨ICP患者胎儿预后不良的原因.方法 采用原位末端标记法(TUNEL)检测ICP组和正常妊娠组胎盘细胞凋亡指数,免疫组织化学方法检测两组凋亡基因bax、bcl-2和caspase-3的表达水平,通过对细胞凋亡指数和凋亡相关基因的检测,了解胎盘细胞的凋亡情况,探讨ICP患者发生胎儿预后不良是否与胎盘细胞凋亡有关.结果 ICP组胎盘细胞凋亡率明显高于正常妊娠组(P＜0.05),且促进细胞凋亡基因bax、caspaae-3表达增加,抑制细胞凋亡基因bcl-2表达降低;随着胆酸水平的升高,bax/bcl-2比例升高,细胞凋亡增加.结论 ICP患者存在胎盘细胞过度凋亡现象,并与血清胆酸水平有相关性;胎盘细胞过度凋亡使胎盘功能减退,导致胎儿预后不良.     

神经元凋亡与颞叶癫痫患者海马硬化的关系

目的:探讨神经元凋亡与颞叶癫痫患者海马硬化的关系。方法:取24例颞叶癫痫患者手术切除标本,用光镜、电镜及原位末端标记(TUNEL)方法检测神经细胞凋亡;应用免疫组化方法检测细胞凋亡相关基因表达产物bcl-2、bax及P53蛋白的表达。结果:对照组患者光镜、电镜检查及TUNEL染色均未发现凋亡的神经细胞;癫痫组患者光镜检查及TUNEL染色未发现凋亡的神经细胞,但在电镜检查的8例标本中,3例有少量早期凋亡征象的神经元。免疫组化染色结果表明,对照组患者脑组织内bcl-2蛋白无表达,癫痫组患者脑内bcl-2蛋白表达明显增强(P<0.01);bax蛋白在癫痫组与对照组中均微弱表达,两者差异无统计学意义(P>0.05);P53蛋白在对照组中无表达,在癫痫组中表达明显增强(P<0.05)。结论:神经元凋亡部分参与了癫痫患者海马硬化的形成。bcl-2、P53蛋白在这一过程中可能发挥了作用。     

胎盘细胞凋亡与早产流产关系研究

目的 研究早产流产与胎盘细胞凋亡关系及其可能机制。方法 随机选取正常妊娠足月分娩胎盘30例,早产胎盘30例,流产胎盘30例,取胎盘组织制备单细胞悬液,FCM检测胎盘细胞的凋亡率;DNA琼脂糖电泳检测胎盘细胞的凋亡特征性DNA条带;westernblot检测细胞凋亡相关蛋白表达。结果 早产和流产胎盘细胞的凋亡率,明显高于正常妊娠分娩的胎盘细胞的凋亡率(P＜0.05);同时琼脂糖凝胶电泳出现典型的凋亡细胞DNA梯形条带,伴随着bcl-2蛋白表达下调,bax、cyt-c、caspase-9和caspase-3蛋白表达上调,bcl-2/bax比值下降。结论 早产流产可能与胎盘细胞启动线粒体途径凋亡密切相关。     

神经酰胺对人内皮细胞凋亡及bax、bcl-2表达的影响

目的 观察外源性神经酰胺(C2-ceramide)对内皮细胞凋亡及相关基因bax和bcl-2表达变化的影响.方法 原代培养人脐静脉血管内皮细胞,加药组加入终浓度分别为5、12.5、25、50 μmol/L的C2-ceramide,对照组加入体积分数为0.1%的无水乙醇.采用TUNEL法检测细胞凋亡,用RT-PCR、Western blot技术对bax mRNA、bcl-2 mRNA及蛋白表达进行分析.结果 加药组内皮细胞的凋亡阳性率显著高于对照组(P＜0.05),且具有时间和剂量依赖性;加药组bax mRNA及蛋白的表达较对照组显著升高(P＜0.05),bcl-2 mRNA及蛋白的表达较对照组则显著降低(P＜0.05).结论 外源性神经酰胺通过上调bax及下调bcl-2表达水平,改变bax/bcl-2值,从而诱导内皮细胞凋亡.     

体外受精-胚胎移植67例患者卵巢颗粒细胞bcl-2、bax蛋白表达与妊娠结局的关系

目的 探讨卵巢颗粒细胞中凋亡相关蛋白bcl-2、 bax的表达与妊娠结局的关系. 方法 选择67例适合进行体外受精-胚胎移植(IVF-ET)手术的不孕症患者,通过免疫组织化学方法 检测卵泡液中卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2和bax的表达率.同时分析其与优质胚胎数和妊娠结局的关系. 结果 IVF-ET患者优质胚胎≥2个组与无或优质胚胎<2个组其颗粒细胞bc1-2蛋白及ba x 蛋白阳性率比较,差异有统计学意义.临床妊娠组与非临床妊娠组其颗粒细胞bc1-2蛋白及 bax蛋白阳性率比较,差异有统计学意义. 结论 卵巢颗粒细胞凋亡相关蛋白bcl-2、bax的表达与优质胚胎数有关,研究卵巢颗粒细胞的bcl-2、bax蛋白表达可以预测IVF-ET妊娠结局.     

压力对大鼠纯化视网膜神经节细胞中bcl-2、bax及p53mRNA表达的影响

目的通过检测不同压力下纯化培养的大鼠视网膜神经节细胞(Retinal ganglioncells,RGCs)中bcl-2,bax,p53mRNA表达情况,了解压力对视网膜神经节细胞凋亡的影响.方法用SD系大鼠脑源性星型胶质细胞同化培养液双界面法[1]培养羊抗鼠Thy1.1单克隆抗体纯化的SD系大鼠RGCs;在纯化培养的RGCs上分别施加0,20mmHg,40mmHg,60mmHg和80mmHg气压,培养24h及48h后TUNEL法检测各组细胞的凋亡,原位杂交检测细胞中bcl-2,bax及p53mRNA的表达.结果纯化的RGCs培养12h及24h用羊抗鼠FITC-Thy-1.1单克隆抗体进行鉴定阳性,纯度为97%.传三代后星型胶质细胞用胶质纤维酸性蛋白(GFAP)单克隆抗体标记和鉴定阳性.培养24h组TUNEL法检测对照组极少数细胞凋亡,20mmHg组见较多细胞凋亡,随着压力的增高细胞凋亡数增多,凋亡指数增高;与对照组相比差异均有显著性.培养48h组压力≥20mmHg各组较相同压力培养24h组凋亡指数增高,差异有显著性(P＜0.05).压力≥40mmHg时bcl-2 mRNA表达逐渐减少,压力≥20mmHg时bax及p53 mRNA表达则逐渐增加;与对照组相比均有显著性差异(P＜0.05).结论高于20mmHg压力时间超过24h可激活体外培养的视网膜神经节细胞的相关凋亡基因导致细胞的凋亡.     

退变腰椎间盘组织中细胞凋亡及相关基因bcl-2和bax表达的研究

目的:探讨腰椎间盘退变的发病机制。方法:采用原位DNA片段末端标记和免疫组织化学方法,检测40例退变腰椎间盘组织及10例正常腰椎间盘组织细胞凋亡状态及凋亡相关基因bcl-2和bax蛋白的表达。结果:40例退变腰椎间盘组织凋亡指数(AI)均值为70.51,bcl-2蛋白阳性细胞百分比为10.12％,bax蛋白阳性细胞百分比为54.56％。10例正常腰椎间盘组织AI均值为20.02,bcl-2蛋白阳性细胞百分比为53.46％,bax蛋白细胞百分比为10.54％。两组间AI均值、bcl-2蛋白表达、bax蛋白表达差异均有显著性意义(P均<0.05)。bcl-2蛋白表达越弱,bax蛋白表达越强,凋亡细胞数越多。结论:bcl-2和bax蛋白均参与了腰椎间盘组织中细胞凋亡的调节,并在腰椎间盘退行性变发生和发展中发挥着重要作用。