国产冻干人凝血酶原复合物质量标准的研究

目的通过对国产人凝血酶原复合物 (PCC)质量的研究 ,建立与国际接规的质量标准。方法用人凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ (FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ )浓制剂国家标准品 ,采用一期法测定国内用不同原料制备的PCC中FⅡ、FⅦ、FⅨ、FⅩ的效价 ;用正常人血浆作标准 ,用凝固法检测PCC的总效价及PCC中的肝素。结果用血浆作原料提纯制备的PCC ,FⅣ的效价能达到 1 0IU/ml以上 ,FⅦ效价最低 ;用组分Ⅲ作原料 ,FⅣ活性损失很大 ,只有 2 / 7批次能达到 1 0IU/ml;而FⅦ效价最高。无论用何种原料 ,FⅡ和FⅩ活性均能保持在一定水平。结论从血浆中直接提纯制备PCC ,能有效地保持FⅣ活性 ,各项指标易达到国外同品种的质量标准     

第四批人凝血因子VIII国家标准品制备和标定

目的:建立经两步病毒灭活工艺制备的人凝血因子VIII国家标准品,以替代第三批人凝血因子VIII国家标准品。方法:按《中国药典》2010年版三部对人凝血因子VIII产品的生产工艺要求和质量标准,制备第四批人凝血因子VIII国家标准品(批号20100101),用WHO第七批人凝血因子VIII国际标准品(批号99/678),采用一期法进行协作标定,采用加速破坏试验进行稳定性考察。结果:批号20100101人凝血因子VIII国家标准品效价为12.1IU/支,稳定性好,其它项目指标均达到国家标准品的要求。结论:建立了符合国家标准品要求、并经病毒灭活的第四批人凝血因子VIII国家标准品。     

第二批人凝血酶国家标准品协作标定

目的协作标定第二批人凝血酶国家标准品。方法用世界卫生组织首批α 凝血酶国际标准品 (批号 :89/ 5 88)为标准 ,采用纤维蛋白原凝固法标定。并将标准品分别于 2 5℃、37℃、4 5℃保存 6个月 ,进行稳定性考查。结果第二批人凝血酶国家标准品的效价为 12 7IU/支 ,稳定性良好 ,其他项目符合国家标准品要求。结论已成功研制第二批人凝酶国家标准品 ,可以取代首批人凝血酶国家标准品。     

抗-HBs国家标准品的研制

目的：协作标定首批冻干抗-HBs国家标准品。方法：以首批抗-HBs国际标准品（17—2—77批号）为标准，采用放射免疫法标定我国抗-HBs国家标准品。结果：国家标准品（人免疫球蛋白）的效价为2．5IU·支^-1，抗-HBs国家标准品（人血浆）的效价为1．3IU·支^-1。将以上标准品按标示量加水溶解后于4℃放置9d和将冻于标准品分别置于4，23，45℃保存6个月，进行稳定性考察。研制的首批冻干抗-HBs国家标准品稳定性良好，其他项目符合国家标准品要求。结论：已制备首批抗-HBs国家标准品，并获得国家标准品批准文号。     

重组人淋巴毒素α衍生物活性测定国家标准品的研制

目的:建立重组人淋巴毒素α衍生物(rhLT α)生物学活性测定用国家标准品.方法:标准品按WHO重组细胞因子要求制备、检测,采用L929细胞毒法测定rhLT α的生物学活性,并以NBSB提供的国际标准品为标准,由2家实验室对rhITα国家标准品的效价进行协作标定.结果:rhLT α国家标准品经检定各项指标均符合要求,效价协作标定结果经统计学分析,均数的95%可信区间为4.21×104～4.52×104IU/支,单次测定的95%标准值范围为3.07×104～6.19×104IU/支.这批国家标准品效价确定为4.40×104IU/支.加速热稳定性实验表明活性在-20℃,4℃,25℃条件下20个月保持稳定.结论:该批rhLTα经协作标定,质量可靠,效价稳定,可作国家标准品使用.     

改良后的人凝血酶原复合物治疗凝血因子缺乏的有效性及安全性

目的 观察人凝血酶原复合物治疗凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ及Ⅹ单独或联合缺乏的有效性及安全性.方法 多中心、开放、自身对照研究方法,用目标值法(OPC)评价药品有效性.入选72例肝硬化伴凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ单独或联合缺乏患者,给予人凝血酶原复合物治疗,每12 h使用1次,连续使用3d.第2次输注凝血因子结束后1.5h及第6次输注结束后1.5h,检测凝血因子;用药结束后90 d,检测凝血因子抗体.结果 治疗后较基线,凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ及Ⅹ水平分别提高了61.4％,10.4％,16.1％,46.9％ (P ＜0.0001),其反应率(异常凝血因子治疗后恢复正常或与基线比提高30％患者比率)分别为100％,53.8％,76.1％,93.1％.其中,Ⅱ及Ⅹ反应率显著超过目标值75％(P＜0.0001);Ⅸ超过了目标值(P=0.511);Ⅶ没有达到目标值(P=0.001).治疗后凝血酶原时间平均缩短了1.4 s(P ＜0.0001).未发现严重不良反应.结论 人凝血酶原复合物可提高肝硬化患者凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ水平;降低凝血酶原时间;且安全性好.     

人凝血因子Ⅷ浓缩制剂治疗血友病甲的临床观察研究

目的：探究人凝血因子Ⅷ浓缩制剂治疗血友病甲的临床效果。方法：选取本院本科室2018年1月至2022年6月期间收治血友病甲患者60例进行临床资料回顾性分析。所有患者均实行人凝血因子Ⅷ浓缩制剂治疗,统计分析临床治疗有效性与安全性。与此同时,根据患者人凝血因子Ⅷ浓缩制剂使用剂量,将研究对象分为甲组(每次10IU/kg,每3天1次,属于小剂量用药)与乙组(15～30IU/kg,每7天3次,属于中剂量用药),观察比较两组临床治疗有效性与安全性。结果：60例患者治疗28d后临床总有效率100.00%;患者第一次输注24h人凝血因子Ⅷ活性水平、治疗28d生活质量评分均优于治疗前(P<0.05);抑制物产生阳性率3.33%,未见病毒学阳性病例,不良反应发生率8.33%,均为轻症。甲组临床治疗显效率93.33%、第一次输注24h人凝血因子Ⅷ活性水平(37.88±7.44)%、治疗28d生活质量评分(37.88±7.44)分,均优于乙组(P<0.05)。结论：血友病甲治疗中人凝血因子Ⅷ浓缩制剂具有确切疗效,安全性较好;小剂量用药与中剂量用药均可满足治疗需求,相对而言中剂量用药效果更明显,便于患...     

免疫测定用甲胎蛋白国家标准品的制备与定值

目的 制备并标定免疫测定用甲胎蛋白（AFP）国家标准品.方法 制备AFP国家标准品冻干品,以酶联免疫法（ELISA）、化学发光法（CLIA）及时间分辨荧光法（TRFIA）对AFP国家标准品进行联合定值,并以AFP国际标准物质做校准,以实现国际单位的溯源.对国家标准品的赋值不确定度进行评定,对均匀性和稳定性进行检验.结果 AFP国家标准品赋值为645 IU/支,不确定度为±43 IU,瓶间精度为1.75％;2～8℃储存16周,与-20℃常规储存比较,相对偏差不大于5.0％,长期稳定性考察18个月,测定值偏差不大于5.0％.结论 本研究制备的免疫测定用AFP标准品符合国家标准物质的要求.     

猪凝血因子Ⅹ及凝血因子Ⅹa的制备工艺研究

目的从猪血中制备猪凝血因子Ⅹ(FⅩ)及凝血因子Ⅹa(FⅩa)。方法采用柠檬酸钡吸附、硫酸铵分级沉淀、DEAE 纤维素离子交换色谱等方法制备FⅩ,并优化FⅩ的激活条件,从而制备FⅩa。通过SDS PAGE进行FⅩ和FⅩa的检测。结果建立了FⅩ和FⅩa的制备工艺,收率分别为每1ml血浆34,12 μg;采用胰蛋白酶激活FⅩ,激活条件为:0 .0 2 %酶浓度、pH 8.0、37℃下作用70min。结论此工艺操作简单,收率高,适合于规模化生产     

人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品的协作标定

目的协作标定人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品。方法用世界卫生组织提供的白喉抗毒素国际标准品(批号:9897/762)为标准,采用被动血凝法标定我国人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品,将待标品按标示量加水溶解后,置于4℃保存6个月和将冻干待标品分别置于4,25,37℃保存6个月,进行稳定性考查。结果人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品的效价为0.4 HAU/支,稳定性好,其他项目符合国家标准品要求。结论该批冻干人免疫球蛋白白喉抗体国家标准品可取代上批国家标准品。     

重组人凝血因子Ⅷ对凝血因子Ⅹa生成及血友病小鼠凝血功能的影响

目的探究在研重组人凝血因子Ⅷ(recombinant human coagulation factor Ⅷ, rhFⅧ)对凝血因子Ⅹa(coagulation factor Ⅹa, FⅩa)生成的促进效果, 并与已上市同类产品进行比较;进一步开展rhFⅧ对小鼠模型凝血功能影响的研究。方法分别在固定FⅧ、FⅩ、FⅨa中任意2个因子、改变第3个因子浓度时, 通过体外实验检测FⅩa活性, 测定在研rhFⅧ和市售FⅧ产品的FⅩa生成速率并比较。A型血友病模型小鼠(HA小鼠)尾静脉单次静脉注射在研rhFⅧ或市售rhFⅧ产品后, 检测小鼠凝血相关指标的变化。结果体外实验中, 与市售rhFⅧ产品ADVATE、血源性人FⅧ相比, 在研rhFⅧ在不同条件下均具有相似或更高的FⅩa生成速率。注射在研rhFⅧ后HA小鼠活化部分凝血活酶时间缩短(50和100 IU/kg剂量下分别为29.43和20.78 s), 具有剂量依赖性, 同剂量下与市售rhFⅧ产品Xyntha一致。结论在研rhFⅧ与市售rhFⅧ和血源性人FⅧ相比, 在体外具有相同的促FⅩa生成活性, 且在HA小鼠模型中促凝血效果得到了验证, 具备成药...     

人凝血酶原复合物的制备及临床应用

<正>人凝血酶原复合物(PCC)来源于健康人血浆,是一种具有凝血作用的血浆蛋白静脉注射制剂。PCC主要由维生素K依赖性的凝血酶原(FⅡ)、凝血酶原转化因子(FⅦ)、抗血友病乙型因子(FⅨ)和自身凝血酶原(FⅩ)等四种凝血因子组成。这些因子都是在肝中合成的糖蛋白。由于这四种凝血因子具有极其相似的相对分子质量和等电点、等理化性     

重组人粒细胞集落刺激因子生物学活性工作标准品的标定

目的用世界卫生组织 (WHO)粒细胞集落刺激因子 (G CSF)生物学活性国际标准品对所制备的重组人粒细胞集落刺激因子 (rhG CSF)生物学活性工作标准品以及惠尔血 针剂 75进行标定。方法用NFS 6 0细胞采用MTT法进行rhG CSF生物学活性的测定 ,(4 ,4)法计算测定结果。结果制备rhG CSF生物学活性工作标准品 3批 ,两批为冻干剂 ,与G CSF生物学活性国际标准品配方一致 ,一批为水剂 ,与惠尔血 针剂 75配方一致 ;用G CSF生物学活性国际标准品对其标定 ,结果依次为 3.0 6 2× 10 6、4.2 76× 10 6IU/支及 1.6 35× 10 7IU/ml,样品为1.880× 10 7IU/ml。标定结果的FL %分别为 5 .5 2 9%、4.2 91%、4.2 44 %及 5 .175 %。结论所标定的rhG CSF生物学活性工作标准品可用于rhG CSF生物学活性测定。     

尿促性素第三批国家标准品的标定

目的:制备和标定第三批尿促性素国家标准品。方法:用幼龄大鼠卵巢、精囊增重方法,第四批人尿FSH、LH国际标准品为标准标定第三批尿促性素国家待标品。结果:第三批尿促性素国家标准品的生物效价分别为FSH190IU,LH242IU/支。结论:已成功研制第三批尿促性素国家标准品,可以取代第二批绝经期尿促性素国家标准品,现已分发使用。     

第1批重组人绒促性素(生物测定用)国家标准品的制备与协作标定

目的:制备并标定第1批重组人绒促性素(recombinant human chorionic gonadotrophin, rHCG)国家标准品(生物测定用)。方法:以WHO第5批绒促性素国际标准品07/364效价为162 IU·瓶^-1作为标准,采用2020年版《中华人民共和国药典》四部1209绒促性素生物测定法,联合5个实验室对第1批rHCG待标品进行生物活性协作标定。对待标品原液进行了等电点、肽图、相对分子质量测定等结构确认。对待标品进行了紫外分光光度法蛋白含量测定、SEC-HPLC法纯度和聚体分析、RP-HPLC法氧化亚基分析等关键理化性质分析,并进行了稳定性考察。结果:,rHCG素待标品经协作标定,最终定值其生物效价为6 400 IU·瓶^-1;,rHCG素含量约为290μg·瓶^-1,SEC-HPLC纯度约为100%。结构确认结果符合要求;聚体、解离亚基、氧化亚基等各项理化指标符合规定;稳定性考察结果满足要求。结论:本批待标品可作为第1批rHCG国家标准品,以供rHCG及相关制剂的生物效价测定用,定值为6 400 ...     

链激酶第三国际标准品的标定

用英国国家生物标准品和对照品研究所（NIBSC）提供的链激酶第二国际标准品样品A标定另3个样品B，C，D，测得其效价分别为452．8，1046，1024IU／支，其中C，D实际是同一样品，拟作为链激酶第三国际标准品，NIBSC最终公布的标定值为1030IU／支。     

用传统层析法制备的高纯度人血浆因子Ⅸ:C浓制剂的性质

用因子IX复合物浓制剂(PCC)治疗血友病乙或因子IX缺乏症,由于PCC中含有维生素K依赖性凝血因子Ⅱ、Ⅶ和Ⅹ以及蛋白C、蛋白S、α-间胰酶抑制因子(ITI)、高分子量(HMW)激肽原、C4、C5和C9等,因而使用大剂量PCC可能会引起血栓形成和弥漫性血管内凝血.作者用血浆分离工厂提供的因子IX浓制剂,经二乙基氨乙基(DEAE)-Sephadex A-50和DEAE-Sepharose CL-6B层析,洗脱物用0.3%磷酸三正丁酯(TNBP)和1%吐温80于25℃处理6小时,以灭活     

人凝血因子Ⅷ制备工艺的优化

目的优化人凝血因子Ⅷ(FⅧ)原液制备工艺,提高FⅧ收得率及纯度。方法采用正交设计优化冷沉淀溶解工艺参数;探讨不同p H对冷沉淀溶解液酸性沉淀的影响,优化得到最佳酸性沉淀条件;通过对离子交换层析工艺的研究,得到离子交换层析的最佳上样流速及柱载量。结果冷沉淀溶解的最佳溶解工艺条件是溶解倍数为4倍、溶解温度为10℃、溶解时间为2 h;溶解液最佳酸性沉淀p H为7.2;离子交换层析的最佳上样流速为1.2 cm·min-1,每毫升凝胶对凝血因子Ⅷ的载量为80.1 IU·m L-1。结论通过对FⅧ原液制备工艺的优化,FⅧ收得率提高了约13%,比活性约提高了30 IU·mg-1。     

获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症7例临床分析

维生素K依赖性凝血因子包括凝血因子Ⅱ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、蛋白C、蛋白S，维生素K缺乏使得这些凝血因子的谷氨酸不能γ-羧基化，从而成为异常的不能参与凝血反应的因子，临床表现为凝血障碍，称维生素K依赖性凝血因子缺乏症，属于获得性凝血因子异常。成人维生素K依赖性凝血因子缺乏症是临床上不明原因出血的病因之一，极易漏诊误诊。本院近3年来诊治成人获得性维生素K依赖性凝血因子缺乏症7例，经维生素K1及输注血浆治疗均痊愈。为提高诊断治疗水平，现对其临床特点及实验室检查回顾分析如下。     

第5批绒促性素国际标准品协作标定

目的 确定第5批绒促性素国际标准品及其效价.方法 以第4批绒促性素国际标准品(编号75/589,Calibrated in International Units)与第1批完整体绒促性素国际参考试剂(编号99/688,Calibrated in Molar Units)为基准,英国国家生物制品检定所组织并邀请包括本实验室在内的来自全球10个国家的18个实验室,采用免疫测定法(包括免疫酶测定法、放射免疫测定法、荧光免疫测定法、酶联免疫吸附法、化学发光免疫测定法)和生物测定法(包括幼小白鼠子宫增重法、幼大白鼠精囊增重法)对第5批绒促性素国际标准品2个候选品(编号:07/364,96/608)效价进行协作标定;采用热加速降解方法研究其稳定性.结果与结论 英国国家生物制品检定所最终确定候选品(编号07/364)为第5批绒促性素国际标准品,其效价为177 IU·安瓿-1(0.39 nmol·安瓿-1),并具有良好的稳定性.