亚低温对家兔大脑中动脉梗塞模型脑组织bcl-2与Bax表达的影响

目的探讨脑室内低温对家兔大脑中动脉梗塞模型脑组织bcl-2与Bax表达的影响。方法选用4-6个月龄雄性家兔20只,随机分为对照组(37℃常温生理盐水)和低温组(22℃低温生理盐水),各10只。应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,进行脑室内穿刺低温液体灌注亚低温干预,24h后,参照Zea Longa及Bederson检查法进行评分。免疫组织化学方法和Western Blot方法检测各组脑组织bcl-2与Bax的表达,TUNEL方法检测细胞凋亡。结果兔神经病学体征评分以及动物行为观察发现,低温组评分明显优于常温组,P0.01。与对照组相比,常温组家兔脑组织的bcl-2表达显著升高,Bax的表达显著下降,P0.01。低温组的TUNEL染色凋亡细胞数明显低于常温组,P0.01。结论脑室内穿刺低温干预可能通过调节bcl-2与Bax的表达对急性脑梗塞家兔动物模型提供脑保护作用。     

亚低温对家兔大脑中动脉梗塞模型脑组织TNF-α与IL-1β表达的影响

目的探讨脑室内低温对家兔大脑中动脉梗塞模型脑组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与白介素-1β(IL-1β)表达的影响。方法选用4~6个月龄雄性家兔20只,随机分为对照组(37℃常温生理盐水)和低温组(22℃低温生理盐水),各10只。应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,进行脑室内穿刺低温液体灌注亚低温干预,24 h后,参照Zea Longa及Bederson检查法进行评分。免疫组织化学方法和Western blot方法检测各组脑组织TNF-α与IL-1β的表达。结果兔神经病学体征评分以及动物行为观察发现,低温组评分明显优于常温组(P0.01)。与对照组相比,低温组家兔脑组织的TNF-α与IL-1β的表达显著降低(P0.01)。结论脑室内穿刺低温干预可能通过调节TNF-α与IL-1β的表达对急性脑梗塞家兔动物模型提供脑保护作用。     

亚低温对家兔大脑中动脉梗塞模型脑组织MMP-2与MMP-9表达的影响

目的探讨脑室内低温对家兔大脑中动脉梗塞模型脑组织基质金属蛋白酶-2(MMP-2)与基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达的影响。方法选用4-6个月龄雄性家兔20只,随机分为对照组(37℃常温生理盐水)和低温组(22℃低温生理盐水),各10只。应用线栓法建立大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,进行脑室内穿刺低温液体灌注亚低温干预,24h后,参照ZeaL onga及Bederson检查法进行评分。免疫组织化学方法和Western Blot方法检测各组脑组织MMP-2与MMP-9的表达,伊文思兰染色法测定血-脑屏障通透性的变化。结果兔神经病学体征评分以及动物行为观察发现,低温组评分明显优于常温组;与对照组相比,低温组家兔脑组织的MMP-2与MMP-9的表达水平显著降低(P0.01)。低温组家兔的血-脑屏障通透性明显低于常温组。结论脑室内穿刺低温干预对急性脑梗塞家兔的脑保护作用可能与下调MMP-2与MMP-9的表达相关。     

贝沙罗汀对小鼠脑缺血再灌注损伤神经元的保护作用及机制

目的 探讨贝沙罗汀(Bexarotene)对脑缺血再灌注(CIR)损伤神经元的保护作用及机制。方法 将45只C57BL/6雄性小鼠随机分为假手术组、模型组及贝沙罗汀组(5 mg/kg),每组15只。采用线栓法建立短暂小鼠中动脉栓塞(t MCAO)模型,再灌注后通过神经行为学评分观察小鼠神经功能缺损情况; HE染色观察脑部皮层损伤侧神经元病理变化; TUNEL染色检测脑部皮层损伤侧神经元凋亡;免疫荧光染色检测损伤部位Cleaved Caspase-3表达; Western blot检测小鼠损伤脑组织中JNK信号通路相关蛋白P-C-Jun、P-JNK及Cleaved Caspase-3的表达情况。结果 与假手术组相比,模型组和贝沙罗汀组小鼠神经功能缺损明显较重(P 0. 05),皮层神经元损伤分级明显增加(P 0. 05),损伤部位TUNEL阳性细胞数及Cleaved Caspase-3的表达明显较高(P 0. 05),同时损伤侧小鼠脑组织JNK、C-Jun、Cleaved Caspase-3的蛋白表达水平显著上调(P 0. 05);与模型组相比,贝沙罗汀组小鼠神经行为学评分较低(P 0. 05),贝沙罗汀可有效阻止t MCAO后脑组织形态学的改变(P 0. 05),降低小鼠损伤侧脑组织TUNEL染色阳性细胞数及P-JNK、P-C-Jun、Cleaved Caspase-3蛋白表达水平(P 0. 05)。结论 贝沙罗汀对CIR神经元损伤具有保护作用,且该作用可能通过抑制JNK/Caspase-3信号通路的激活来实现。     

肝细胞生长因子对大鼠大脑中动脉梗塞后凋亡变化的实验分析

目的探讨大鼠大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion, MCAO)模型中肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor, HGF)对凋亡影响的作用。方法 62只SD大鼠随机分为Sham组、MCAO组及HGF组,MCAO组及HGF组均采取线栓法建立MCAO模型。各组大鼠分别采用行为学评分、TTC染色、免疫荧光、TUNEL染色、Western blot等方法检测大鼠行为学功能、梗塞面积及凋亡病理等变化。结果大鼠MCAO模型建立后HGF的受体c-Met表达升高;免疫荧光共染显示,c-Met在大鼠脑组织神经元中表达,HGF给药组梗塞面积较MCAO组减小且神经功能评分升高,TUNEL凋亡细胞在HGF给药组明显少于MCAO组。结论 HGF在大鼠脑梗塞后能经过c-Met受体产生抗凋亡作用,其可能是治疗脑梗塞机制之一。     

姜黄素对大鼠脑缺血再灌注海马神经元凋亡及PI3K信号因子表达的影响

目的探讨姜黄素对大鼠脑缺血再灌注致海马神经元凋亡及PI3K信号通路相关因子表达的影响。方法采用线栓法阻塞SD大鼠大脑中动脉(MCAO),建立大鼠局灶性脑缺血/再灌注实验模型,将40只SD大鼠随机分为假手术组(S组)、缺血/再灌注组(I/R组)和姜黄素处理组(C组);各组于再灌注后24h,大鼠放血处死,取静脉血分离血清,ELISA检测血清中炎症因子IL-6,TNF-a及脑损伤标志物S-100β的变化;另取脑组织,一部分浸泡福尔马林,HE染色观察脑组织变化,TUNEL法观察脑组织细胞凋亡情况;采用Western blot法检测海马P-PI3K、Akt和Caspase-3蛋白表达变化。结果姜黄素可以减轻大鼠脑缺血再灌注致海马神经元凋亡,降低血清中IL-6、TNF-a、S-100β含量,抑制脑组织中caspase-3、PI3K和Akt蛋白表达水平(P0.05)。结论姜黄素减轻缺血再灌注导致的脑损伤可能与PI3K信号通路相关。     

罗格列酮对实验性大鼠脑出血后细胞凋亡的影响

目的:探讨罗格列酮对大鼠脑出血(intracerebral hemorrhage,ICH)后血肿周围脑组织细胞凋亡的影响。方法:88只健康老龄雄性SD大鼠,随机分为假手术组8只,模型组40只,罗格列酮干预组40只,后2组又分为6 h、12 h、24 h、72 h、7 d 5个亚组,每组8只。采用大鼠股动脉新鲜自体不凝血50μl注入大脑纹状体基底节区复制脑出血模型,干湿重法检测脑组织含水量(water content of brain,BWC);原位末端标记法(TUNEL)检测大鼠脑细胞的凋亡情况;免疫组化法检测过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferators-activated receptors gamma,PPARγ)和半胱氨酸蛋白-3(Caspase-3)的表达情况。结果:(1)随着大鼠脑出血后时间的延长,ICH组BWC呈逐渐增高趋势,并在72 h达高峰。与模型组比较,罗格列酮干预组BWC均降低,组织水肿减轻(P0.05)。TUNEL染色结果显示凋亡细胞的数量与各位BWC的复化相一致。(2)免疫组化法检测结果显示:大鼠脑出血后72 h,Caspase-3凋亡相关蛋白的表达明显上调。罗格列酮干预后,与模型组相比,PPARγ高表达,同时Caspase-3表达和凋亡细胞数明显降低,差异有统计学意义(P0.05或P0.01)。结论:PPARγ激动剂罗格列酮可能通过抑制Caspase-3的表达,降低脑出血后脑组织的继发性凋亡损伤,对脑组织起保护作用。     

UCF-101对大鼠脑缺血再灌注损伤的神经保护作用

目的观察UCF-101对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经元凋亡及Caspase-9蛋白表达的影响,探讨UCF-101对缺血性脑损伤的神经保护作用。方法随机将大鼠分为假手术组、缺血再灌注组及UCF-101处理组。采用线栓法建立Wistar大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)2h再灌注模型,于再灌注后24h取脑,采用TTC法测梗死体积,TUNEL法检测神经元凋亡,免疫组化法观察脑组织神经元Caspase-9蛋白的表达。结果假手术组未见梗死现象,与假手术组比较,缺血再灌注组脑组织凋亡细胞数和Caspase-9的表达均明显升高(P0.05)。与缺血再灌注组相比,UCF-101处理组梗死体积明显缩小(P0.05),UCF-101处理组脑组织凋亡细胞数和Caspase-9的表达均明显减少(P0.05)。结论 UCF-101可能通过下调脑组织神经元Caspase-9蛋白的表达,抑制神经元的凋亡而发挥神经保护作用。     

丙泊酚预处理对大鼠脑缺血再灌注线粒体凋亡的影响及可能机制

目的 探讨丙泊酚预处理对大鼠脑缺血再灌注线粒体凋亡的影响及可能机制。方法 30只SD大鼠随机分为假手术组（Sham组）、局灶性脑缺血-再灌注大鼠模型组（CIRI组）和丙泊酚预处理组（P组）。再灌注24h后实行神经功能缺陷评分;HE染色观察脑组织损伤情况;免疫荧光检测观察MAP-2表达;TUNEL染色观察脑组织细胞凋亡情况;Western blot检测脑组织AIF、Cyt-C、cleaved caspase-3以及RhoA/ROCK2信号通路蛋白表达水平。结果 与Sham组比较,CIRI组和P组神经功能缺陷评分明显升高,脑损伤严重,MAP-2表达降低(P<0.05),细胞凋亡率升高,脑组织中AIF、Cyt-C、cleaved caspase-3,RhoA和ROCK2蛋白的表达水平均升高(P<0.05)。而与CIRI组比较,P组神经功能缺陷评分明显降低,并且脑损伤程度降低,MAP-2表达升高(P<0.05),细胞凋亡率降低,脑组织中AIF、Cyt-C、cleaved caspase-3、RhoA和ROCK2蛋白表达降低(P<0.05)。结论 丙泊酚通过抑制RhoA/...     

控制性低血压对兔脊髓不同节段前角神经元HIF-1α和Caspase-3表达的影响

目的观察控制性低血压对兔不同节段脊髓前角神经元HIF-1α和Caspase-3表达的影响。方法 24只健康雄性新西兰白兔随机均分为假手术对照组和控制性低血压组,用硝普钠调控的低血压水平构建兔脊髓缺血缺氧性损伤模型,Western blot检测各种动物脊髓颈、胸、腰节段HIF-1α和Caspase-3蛋白含量,TUNEL染色检测不同节段脊髓前角神经元的凋亡状况。结果 CH组颈、胸、腰段脊髓组织HIF-1α和Caspase-3的表达水平以及TUNEL染色的细胞凋亡指数均明显升高于Cont组相应脊髓节段(P0.01)。在CH组内,颈段脊髓组织HIF-1α的表达水平低于胸腰段脊髓(P0.05),而其Caspase-3蛋白的表达水平以及细胞凋亡指数则明显高于胸、腰段脊髓(P0.01)。结论控制性低血压水平明显导致各节段脊髓组织的缺血缺氧性损伤,且HIF-1α的表达与Caspase-3呈反相关;颈髓的损伤程度比胸、腰段脊髓严重,可能与颈段脊髓对缺血缺氧的敏感性有关。     

亚低温对脑缺血再灌注损伤的治疗作用及其机制的初探

目的 观察亚低温对脑缺血再灌注损伤的治疗效果,初步探讨其治疗机制.方法 本实验利用物理降温法,将术中大鼠体温维持在(32.0 ～ 33.0)℃,于缺血再灌注后选取5个时间点(6h、12h、24h、48h和72h)取材进行组织及基因学检测.结果 亚低温有降低脑缺血再灌注术后大鼠死亡率,同时亚低温对于缺血再灌注后的脑组织具有保护作用,基因芯片筛选出亚低温组与常温组表达量变化幅度较大的基因及通路.结论 亚低温能够降低脑缺血再灌注后的损伤,并通过免疫相关反应进行调节.     

局部亚低温对大鼠局灶脑缺血再灌注后神经营养因子-3表达的影响

目的：观察病变侧缺血至再灌期亚低温(32～33 ℃)对局灶脑缺血再灌注后梗死体积和神经营养因子-3(neurotrophin-3,NT-3)表达的影响。方法：采用改良线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型,随机分为假手术组、常温缺血组和亚低温缺血组,缺血30 min后应用负反馈控温半导体制冷块对大鼠病变侧给予亚低温治疗并持续至再灌期。处死大鼠前进行神经功能缺陷评分,氯化三苯四氮唑染色及计算机图像分析技术观察脑梗死体积,采用免疫组织化学方法检测NT-3表达,末端脱核苷酸转移酶介导的dUTP缺口标记技术观察神经细胞凋亡情况。结果：同常温缺血组相比,亚低温缺血组梗死体积明显减少,NT-3阳性细胞数量增加,凋亡的神经细胞明显减少(均P<0.05)。神经功能缺陷评分亚低温缺血组明显低于相应时间点常温缺血组(P<0.05或P<0.01)。结论：病变侧亚低温可通过增加脑缺血后NT-3的表达水平,抑制细胞凋亡而发挥脑保护作用。     

亚低温对构建脑梗死模型大鼠梗死区神经再生微环境的影响

BACKGROUND: Numerous studies have demonstrated that mild hypothermia has a better protective effect on neurons after cerebral infarction. OBJECTIVE:To investigate the effect of mild hypothermia on nerve regeneration microenvironment of infarcted area in rat models of cerebral infarction and analyze its possible effects on neural functional recovery after cerebral infarction. METHODS:Twenty out of 65 adult female Sprague-Dawley rats were randomly selected as the sham group. The remaining 45 rats were subjected to carotid artery ligation to establish rat models of cerebral infarction. Five rats were rejected because of modeling failure or death, the remaining 40 rats were randomly and evenly divided into cerebral infarction and mild hypothermia groups. The head temperature of rats in the cerebral infarction group was downregulated to (37±1) ℃ using a semiconductor refrigeration instrument. The rats were transferred to the room with the temperature of 25 ℃ after the operation. Brain hypothermia was also induced in rats from the mild hypothermia group. At 13.0-14.0 minutes after establishing rat models of cerebral ischemia, the head on the side of cerebral ischemia was tightly connected with the probe of the semiconductor refrigeration instrument. The refrigerator temperature was adjusted to 6-8 ℃, so as to make the temperature of brain tissue on the lesion side at 32.0-33.0 ℃ for 4 hours. RESULTS AND CONCLUSION:Compared with the cerebral infarction group, the BBB scores of rats in the mild hypothermia group were distinctly increased, and the volume of infarcted area decreased. At 1 day after modeling, the expression level of growth associated protein 43 mRNA in brain tissue of rats in the mild hypothermia group was close to that in the cerebral infarction group. At 2 weeks after modeling, the expression level of growth associated protein 43 mRNA in brain tissue of rats in the mild hypothermia group was significantly increased compared with that in the cerebral infarction group. These results suggest that mild hypothermia therapy can protect nerve cells against injury caused by cerebral infarction and promote the recovery of neurological function. Its underlying mechanism may be related to the up-regulation of the expression of growth associated protein 43 in ischemic penumbra.     

亚低温下脑缺血大鼠骨髓间充质干细胞迁移和梗死体积的变化

背景：关于亚低温运用到神经损伤修复领域的研究已有一些报道,但亚低温对神经干细胞在脑内移植迁移的影响还不太清楚。 目的：观察亚低温对移植入脑缺血大鼠侧脑室的骨髓间充质干细胞迁移及脑梗死体积的影响。 方法：采用Longa法永久性闭塞SD大鼠大脑中动脉制作局灶性脑缺血损伤模型,50只大鼠随机摸球法分为亚低温组、对照组、假手术组。亚低温组于移植前应用亚低温处理大鼠急性脑缺血损伤,对照组于移植前应用常温处理大鼠急性脑缺血损伤;假手术组大鼠麻醉后分离结扎右侧颈内总动脉。亚低温组和对照组在造模后24 h,在脑立体定向下经侧脑室注射移植用5-BrdU标记的骨髓间充质干细胞。经过5,14,21 d后用免疫组织化学方法检测各组大鼠脑组织BrdU阳性细胞数。 结果与结论：骨髓间充质干细胞移植第14天多数标记的骨髓间充质干细胞已经迁移至梗死灶周围,移植后亚低温组各时间点梗死灶周边皮质的BrdU阳性细胞数明显多于对照组(P < 0.05)。与对照组比较,亚低温组在移植前后各个时间点脑梗死体积均显著减小(P < 0.05)。提示移植前宿主亚低温处理可以促进骨髓间充质细胞的定向迁移,且脑梗死体积显著减小。     

黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑缺血/再灌注损伤海马神经元凋亡及相关基因表达的影响

目的 探讨黄芪皂甙Ⅳ联合骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植对缺血再灌注大鼠海马神经细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响.方法 实验动物随机分为假手术组、模型组、BMSCs组、BMSCs+黄芪组.采用线栓法建立大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)模型,BMSCs组、BMSCs+黄芪组分别于建模成功后3 h...     

不同脑温对树鼩局部脑缺血海马血管内皮细胞生长因子表达的影响

目的研究不同脑温（亚低温、常温及高温）对树鼩局部脑缺血海马CA1区内皮细胞生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）表达的影响,探讨缺血时脑温对VEGF表达的影响。方法建立光化学诱导树鼩皮层脑缺血模型,于缺血后6h采用局部恒温控温装置维持脑温在亚低温（31～32℃）、常温（36～37℃）和高温（39～40℃）三种不同温度状态持续1h。于缺血后24h及72h处死动物,用免疫组化染色方法染色及图像分析仪测定海马CA1区VEGF表达的不同强度。结果局部脑缺血后海马CA1区VEGF表达随温度的增加而减弱,亦随时间的延长而减弱;其中以72h时31℃组VEGF的表达下降最为明显（P〈0.01）。结论亚低温后处理将在脑缺血的早期发挥脑保护作用,其脑保护作用可能与亚低温能增强VEGF的表达有关。低温脑保护的意义在于延长脑缺血治疗时间窗。     

亚低温对缺氧缺血新生大鼠海马星形胶质细胞增殖和凋亡的影响

目的观察亚低温对新生大鼠海马星形胶质细胞增殖和凋亡的影响,以探讨亚低温对缺氧缺血脑损伤保护作用的机制。方法①体外实验：取3日龄大鼠海马脑片,培养至第4天用氧糖剥夺法制备标本,于33℃（亚低温组）和37℃培养48h（常温组）;对照组脑片不进行氧糖剥夺处理,37℃培养7d。采用免疫荧光染色方法观察培养脑片星形胶质细胞的活化和增殖。②体内实验：取7日龄大鼠,分手术组和假手术组。手术组永久性结扎左侧颈总动脉,然后置于含8%O2＋92%N2中缺氧2h,制备缺氧缺血模型,分为手术亚低温亚组和手术常温亚组。假手术组仅分离左侧颈总动脉,不结扎,不予缺氧处理,分为假手术常温亚组和假手术亚低温亚组。各组于术后3和7d处死取材,采用免疫荧光染色方法检测海马星形胶质细胞的活化、增殖和凋亡。结果①体外实验：氧糖剥夺后3d常温组较对照组胶质纤维酸性蛋白（GFAP）阳性细胞数量明显增多;亚低温组与常温组比较,GFAP阳性细胞数量明显减少。②体内实验：术后3和7d亚低温组GFAP阳性细胞数量较常温组显著降低,较常温对照组和亚低温对照组显著增高。GFAP与caspase-3免疫荧光双标记结果显示,术后3d常温组海马区84.5%GFAP阳性细胞表达caspase-3,亚低温组仅32.3%GFAP阳性细胞表达caspase-3,差异有统计学意义。结论亚低温能减轻新生大鼠缺氧缺血后海马星形胶质细胞的活化增殖和凋亡。     

亚低温对急性脑缺血再灌注大鼠TNF-α表达的影响

目的：探讨亚低温对大鼠急性脑缺血／再灌注损伤后神经功能及缺血脑组织中TNF—α表达的影响。方法：取健康成年雄性SD大鼠150只。随机均分为假手术组、脑缺血再灌注常温组、脑缺血再灌注亚低温组；根据再灌注时间不同，每组分别于再灌注8h，24h，3d，7d，30d各处死10只大鼠，并取其缺血脑组织，其中5只用于免疫组化染色，另外5只用于RT—PCR检测TNF—αmRNA。结果：脑缺血再灌注后，TNF—α阳性细胞数在再灌注1d时即达高峰，3d后迅速下降，再灌注7d时即降到较低水平，组间比较差异有统计学意义（P〈0．05）。TNF—α及其mRNA表达假手术组很弱，缺血再灌注后TNF—α及其mRNA在8h表达为顶峰，随后有所下降，但直到再灌注7d仍然保持相对高的表达水平，一个月基本恢复正常；其表达在亚低温组较常温脑缺血组有显著地下降（P〈0．05），但仍较假手术组高（P〈0．05）。结论：脑缺血再灌注损伤后TNF—α明显升高，应用亚低温可以降低TNF—α升高的程度；亚低温可以明显减少缺血再灌注后脑梗死的区域，并能明显改善缺血再灌注大鼠的神经功能。提示亚低温治疗对脑的保护作用有可能通过降低TNF—α水平来实现的。     

亚低温对大鼠缺血性脑损伤后SOCS3表达的影响

目的观察大鼠局灶性脑缺血再灌注后不同时间点细胞因子信号转导抑制因子-3(supressor of cytokine signaling 3,SOCS3)的表达情况及实施亚低温后的变化,进一步探讨亚低温的脑保护作用。方法线栓法制作大鼠大脑中动脉栓塞局灶性脑缺血再灌注模型,同时给予亚低温治疗。HE染色观察病理形态改变,免疫组化法检测SOCS3的表达,TUNEL法检测凋亡细胞。结果与假手术组相比,常温缺血组于再灌注3 h后SOCS3的表达开始增强,至24 h达高峰,7天时仍有表达;亚低温缺血组各时间点表达均明显高于常温缺血组(P<0.05);常温缺血组凋亡阳性细胞数随再灌注时间的延长而逐渐增多,至72h达高峰;亚低温缺血组各时间点的表达均明显少于常温缺血组(P<0.05)。结论脑缺血再灌注损伤后SOCS3的表达增强,亚低温可能通过促进SOCS3的表达发挥缺血后抗神经元凋亡的作用。