AE-941抑制鼠视网膜新生血管的实验研究

目的探讨AE-941（CARTCELL卡特消）对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法将鼠龄为7天的Wistar幼鼠置于75％浓度的氧环境中连续生活5天，建立高氧诱导的血管增生性视网膜病变幼鼠模型。随机分为正常对照、给氧对照组及治疗组（幼鼠玻璃体腔内注射AE-9410．25mg，0．5μl，1mg／ml，对侧眼注射相同体积的生理盐水作为对照）。采用ADP酶组织化学法行视网膜铺片，了解视网膜血管改变；用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目，观察卡特消对视网膜新生血管形成的抑制情况。结果给氧对照组（鼠龄17天）可见视网膜血管分布紊乱、密度增高，大量的视网膜新生血管，组织切片上可见较多突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。治疗组视网膜血管分布规则、密度减少，突破内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少，两组差异有显著统计学意义（P〈0．001）。结论AE-941可以抑制视网膜新生血管形成，有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

Captopril抑制鼠视网膜新生血管的形成(英文)

目的:探讨Captopril对鼠视网膜新生血管形成的抑制作用。方法:将60只7d龄小鼠随机分为对照组(30只)和治疗组(30只),置于体积分数750±50mL/L高氧环境下饲养5d后回到正常空气环境中饲养,出氧箱后治疗组每天1次玻璃体腔内注射2.7mL/kg Captopril,对照组注射9g/L的氯化钠注射液2.7mL/kg,连续5d。两组小鼠均于17d处死并摘除眼球,采用ADP酶视网膜铺片、HE染色及免疫组织化学法分别观察视网膜血管的改变、计数视网膜新生血管内皮细胞核数及检测MMP-2、PEDF蛋白的表达。结果:治疗组与对照组相比视网膜血管分布规则、分支良好、新生血管密度减少,且突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目明显减少(P<0.05);治疗组MMP-2染色较对照组减弱,PEDF染色较对照组增强。结论:玻璃体腔内注射2.7mL/kg Captopril能够有效抑制高氧诱导下的小鼠视网膜新生血管形成, Captopril有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

反义VEGF对视网膜新生血管的干预研究

目的 将反义VEGF质粒用脂质体包裹注入视网膜新生血管模型小鼠眼中，观察其对新生血管的抑制作用。方法 将出生7d的C57BL／6J小鼠44只放入高氧环境中饲养，另外8只于空气环境中饲养。5d后出高氧环境，随机取36只分成3组。将质粒与脂质体以1：5(W／V)的比例混合，室温下静置30min。大剂量组玻璃体腔内注入质粒PCR3．1／Anti—VEGF121 0．085μg；小剂量组玻璃体腔内注入质粒PCR3．1／Anti—VEGF121 0．038μg；PCR3．1组玻璃体腔内注入质粒PCR3．1 0．053μg，之后空气环境饲养5d。解剖镜下视网膜铺片观察视网膜血管的分布情况；组织切片任意选取不包括视乳头的20张切片，计数突出内界膜位于视网膜表面的细胞核数；VEGF免疫组化染色阳性细胞。结果 视网膜铺片原中周部血管紊乱分布部位，血管分布均匀。而对照组(注射PCR3．1)则无变化。内皮细胞计数小剂量组、大剂量组较高氧组、对照组显著减少，在P17的VEGF在毛细血管的血管内皮细胞的表达均有显著降低，但程度上有差异。结论反义VEGF质粒对于视网膜新生血管的产生有抑制作用，在一定程度上减少了视网膜新生血管的产生。对血管内皮细胞表达VEGF有抑制作用。     

Captopril抑制鼠视网膜新生血管形成的实验研究

目的 探讨 captopril对鼠视网膜新生血管形成的抑制作用.方法 将60只7 d龄小鼠随机分为对照组(30只)和治疗组(30只),置于体积分数75%高氧环境下饲养5 d后回到正常空气环境中饲养,出氧箱后治疗组每天1次玻璃体腔注射captopril(2.7 mL·kg-1),对照组注射生理盐水注射液(2.7 mL·kg-1),连续5 d.2组小鼠均于17 d时处死并摘除眼球,采用视网膜铺片、HE染色及免疫组织化学法分别观察视网膜血管的改变、计数视网膜新生血管内皮细胞核数并检测基质金属蛋白酶-2蛋白的表达.结果 治疗组与对照组相比视网膜血管分布规则、分支良好、新生血管密度减少,且突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数治疗组为(5.39±1.32)个,对照组为(30.43±0.55)个,治疗组明显少于对照组(P＜0.05);治疗组基质金属蛋白酶-2染色较对照组减弱.结论 玻璃体腔内注入captopril能够有效抑制高氧诱导下的小鼠视网膜新生血管形成,captopfil有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效方法.     

FK228抑制鼠视网膜新生血管的实验研究

目的观察组蛋白去乙酰化酶抑制剂FK228对视网膜新生血管形成的抑制作用。方法将鼠龄为7d的C57BL／6J幼鼠置于75％体积浓度的氧环境中连续生活5d,建立高氧诱导的血管增生性视网膜病变幼鼠模型。随机分为正常对照组、给氧对照组及治疗组（幼鼠玻璃体腔内注射FK228250ng,对侧眼注射相同体积的二甲基亚砜溶液作为对照）。采用ADP酶组织化学法行视网膜铺片,了解视网膜血管改变;用组织切片观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数目,观察FK228对视网膜新生血管形成的抑制情况。结果给氧对照组（鼠龄17d）可见视网膜血管分布紊乱、密度增高,大量的视网膜新生血管,组织切片上可见较多突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。治疗组视网膜血管分布规则、密度减少,突破内界膜的内皮细胞细胞核数目明显减少,两组差异有统计学意义（P〈0．01）。结论FK228可以抑制视网膜新生血管形成,有望成为防治血管增生性视网膜病变的一种有效的方法。     

PEDF抑制鼠视网膜新生血管的实验研究(英文)

目的:观察PEDF对氧诱导的血管增生性视网膜病变动物模型视网膜新生血管的抑制作用。方法:40只7日龄的C57BL/6J新生鼠暴露在750mL/L高氧环境中,然后回到正常空气中建立氧诱导的血管增生性视网膜病变的动物模型。随机取1眼为实验眼,在出氧箱时(12d)玻璃体腔注射PEDF,另1眼为对照组,玻璃体腔注射PBS。所有小鼠均于17d处死,视网膜铺片,ADP酶染色观察视网膜血管情况。HE染色,在光学显微镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞细胞核数目。结果:与对照组相比,实验组视网膜血管分布规则,未见明显的无灌注区形成;实验组突破内界膜的内皮细胞细胞核数目(10.18±1.74)比对照组(38.89±2.98)明显减少(P<0.01) ;组织切片未见视网膜毒性及炎症反应。结论:PEDF能够有效抑制视网膜新生血管的生成。     

曲安奈德玻璃体腔注射对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用及机制

目的 观察曲安奈德(TA)玻璃体腔注射对氧诱导视网膜新生血管的抑制作用,探讨其作用机制.方法 7日龄C57BL/6新生小鼠48只,随机分为正常对照组、单纯高氧组、TA正常组及TA高氧组,分别为6、6、18、18只.单纯高氧组及TA高氧组建立氧诱导视网膜新生血管模型.选取TA正常组及TA高氧组小鼠1只眼,玻璃体腔注射20μg/μl的TA 2 μl;对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液(BSS)作为BBS正常组和BBS高氧组.小鼠17日龄时,各组作石蜡切片苏木精-伊红(HE)染色,观察并统计每张切片突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数.TA正常组、BSS正常组、TA高氧组及BSS高氧组作石蜡切片免疫组织化学染色,检测血管内皮生长因子(VEGF)、基质细胞衍生因子1(SDF-1)及CD14的平均吸光度[A,旧称光密度(OD)]值.并行荧光实时定量聚合酶链反应(PCR),检测VEGF及SDF-1的mRNA表达.结果 正常对照组、单纯高氧组、TA正常组、BSS对照组、TA高氧组及BSS高氧组突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数分别为0、675、0、0、110及688个.正常对照组较单纯高氧组明显减少,差异有统计学意义(t=30.62,P＜0.05).TA高氧组较BSS高氧组显著减少,差异有统计学意义(t=19.532,P＜0.05).TA正常组与BSS正常组VEGF、SDF-1及CD14平均A值比较,差异无统计学意义(t=0.161,0.284,0.223;P＞0.05).TA高氧组VEGF、SDF-1及CD14平均A值较BSS高氧组减少,差异有统计学意义(t=-2.264,-2.358,-4.897;P＜0.05).TA正常组与BSS正常组VEGF及SDF-1 mRNA表达比较,差异无统计学意义(t=-0.497,-0.709;P＜0.05).TA高氧组与BSS高氧组VEGF及SDF-1 mRNA表达比较,差异均有统计学意义(Z=-5.137,-4.411;P＜0.05).结论 玻璃体腔注射TA能有效抑制氧诱导视网膜新生血管形成,其抑制作用可能是通过降低VEGF及SDF-1的表达而实现.     

TERT基因siRNA抑制鼠视网膜新生血管形成的研究

目的 探讨小鼠端粒酶逆转录酶(TERT)小分子干扰RNA(siRNA)对小鼠视网膜新生血管形成的抑制作用,及其用于视网膜新生血管疾病治疗的可行性.方法构建TERT siRNA重组质粒pSIREN-mTERT-1和阴性对照质粒pStREN-mTERT-N.选择7 d龄C57BL/6J小鼠80只随机分为基因治疗组、阴性质粒组、高氧对照组及正常对照组,每组20只.前3组置于75%±2%高氧环境中生活5 d,然后回到正常氧环境中.于第12天出氧舱时,分别向基因治疗组、阴性质粒组两组小鼠玻璃体腔内注射上述两种质粒.正常对照组小鼠正常氧环境中饲养.高氧对照组和正常对照组不予玻璃体腔注射.第19天用2%Evens蓝灌注进行视网膜铺片,观察各组小鼠视网膜血管形态变化;反转录-PCR及Real-time PCR检测各组间TERT mRNA和新生血管相关基因的表达变化;组织切片观察并计数突破内界膜的血管内皮细胞数量.对数据采用单因素方差分析进行统计学比较.结果 荧光造影视网膜铺片显示,基因治疗组整个视网膜血管分布网基本正常,走形较自然,基本接近正常对照组,未见明显的新生血管丛及大片荧光渗漏,只在视网膜中周部及周边部见少许荧光渗漏,但较阴性质粒组及高氧对照组明显减少.阴性质粒组及高氧对照组视网膜血管紊乱,中周部血管迂曲,伴大片荧光渗漏.RT-PCR及实时PCR显示基因治疗组小鼠视网膜TERT mRNA表达为0.56±0.32,明显少于阴性质粒组及高氧对照组(P＜0.05).组织切片HE染色观察,基因治疗组仅见1处新生血管芽,偶见突出内界膜的细胞核;阴性质粒组及高氧对照组见散在突出内界膜伸向玻璃体腔的血管芽,内界膜下出现明显的血管内皮细胞增生;光镜下观察突破内界膜新牛血管内皮细胞计数,基因治疗组(14.62±1.70)较阴性质粒组(32.38±7.50)及高氧对照组明显减少,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 TERT特异的siRNA能有效地抑视网膜新生血管动物模鼎视网膜中视网膜新生血管的形成,可能会成为一种治疗视网膜新生血管疾病的新方法.     

阻断促红细胞生成素抑制小鼠视网膜新生血管生成

目的：建立C57 BL/6小鼠氧致血管增生性视网膜病变模型( oxygen induced retinopathy, OIR),探讨阻断促红细胞生成素( Erythropoietin, EPO )对视网膜新生血管的抑制作用。
　　方法：取鼠龄7 d ( P7)的健康C57 BL/6小鼠置于75%±2%氧气浓度的密闭氧舱中5d,鼠龄12d (P12)时返回正常空气环境以建立氧诱导鼠视网膜新生血管模型;新生小鼠于P12~P16隔日给予玻璃体腔内注射0.5μL含有25ng(A组),50ng(B组),250ng(C组)可溶性EPO受体的PBS液以及不含EPO受体的PBS液( D组)。于P17时分批处死各组小鼠,小鼠眼球以4%多聚甲醛固定,制成病理切片,进行视网膜组织形态病理学观察计数突破内界膜新生血管细胞核数,了解视网膜新生血管增生程度。
　　结果：计数病理切片突破内界膜新生血管细胞核数目,各组玻璃体内EPO受体注射组较PBS注射组新生血管细胞核数明显减少,差异有统计学意义(P<0.01)。并且各不同浓度EPO受体组间新生血管细胞核计数差异亦有统计学意义(P<0.01),随着EPO受体浓度增高,突破内界膜新生血管内皮细胞数减少。
　　结论：可溶性EPO受体玻璃体腔内注射能够阻断EPO的促新生血管生成作用,有望成为治疗眼部新生血管性疾病的新方法。     

奥曲肽抑制视网膜新生血管形成的实验研究

目的　探讨生长抑素类似物奥曲肽对视网膜新生血管形成的影响及其治疗作用。方法　将鼠龄7d的小鼠40只随机分为5组,每组8只。正常对照组于正常空气环境中饲养,不予任何处理;其他4组置于氧箱中饲养。实验组分别皮下注射奥曲肽20和50μg·kg-1·d-1,实验对照组皮下注射等量PBS,连续用药5d,高氧组不注射奥曲肽。将鼠龄17d的小鼠处死,摘除眼球制作标本,进行组织病理学及电镜观察。光镜下观察并计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数。原位杂交法检测生长抑素受体2(SSTR2)在视网膜上的表达。电镜下观察视网膜组织超微结构的改变。结果　正常对照组标本HE染色几乎未见突破内界膜的血管内皮细胞核,高氧组和实验对照组可见较多的突破内界膜的血管内皮细胞核,而实验组的数目明显少于高氧组和实验对照组。SSTR2原位杂交染色可见正常对照组、高氧组、实验对照组视网膜神经节细胞层、内核层及血管内皮细胞SSTR2强阳性表达,实验组呈弱阳性表达,其中大剂量实验组的表达更弱于小剂量实验组。电镜下可见缺氧引起小鼠视网膜视细胞层的破坏,奥曲肽治疗后,视网膜超微结构的损害明显好转。结论　奥曲肽能有效抑制视网膜新生血管的形成,在一定程度上可预防缺氧造成的视网膜超微结构的损害。     

Bevacizumab抑制高氧诱导新生小鼠视网膜新生血管的实验研究

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的单克隆抗体Bevacizumab(Avastin)对视网膜新生血管的抑制作用.方法 80只7 d龄清洁级C57BL/6小鼠随机分为4组,即空白对照组、高氧实验组、小剂量实验组和大剂量实验组,建立高氧诱导新生小鼠产生视网膜新生血管的动物模型,分别对小剂量实验组和大剂量实验组行玻璃体注射Bevacizumab(25 g·L-1)0.5μL、1.0μL,免疫组织化学染色法观察VEGF在视网膜各层的表达,应用CD31计算突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数,评价该药对视网膜新生血管的抑制作用.电镜观察该药对视网膜超微结构的影响.结果 VEGF在各组视网膜中均有表达,在高氧组表达明显增加,两给药组表达相对较弱,空白对照组最弱.空白对照组、高氧实验组、小剂量实验组及大剂量实验组突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数分别为(0.20±0.42)个、(16.80±6.05)个、(3.90±1.52)个、(5.10±2.88)个,统计学处理结果表明两给药组分别与高氧实验组比较差异均有显著统计学意义(P均<0.01),而两给药组之间差异无统计学意义(P>0.05).透射电镜检查显示两给药组视网膜超微结构与高氧实验组相比损伤较轻.结论 Bevacizumab能有效抑制视网膜新生血管的形成,并在一定程度上对缺氧造成的视网膜超微结构的损伤具有预防作用.     

MMP-2和VEGF在视网膜新生血管中的表达及意义

目的探讨基质金属蛋白酶-2（MMP-2）和血管内皮生长因子（VEGF）在视网膜新生血管中的表达及意义。方法取C57BL/6J小鼠60只,随机分为高氧组和正常组,各30只。以高浓度氧诱导小鼠建立视网膜新生血管模型。采用ADP酶视网膜铺片、苏木精-伊红染色及免疫组织化学法分别观察视网膜血管的改变、计数视网膜新生血管内皮细胞数并检测MMP-2、VEGF蛋白的表达。结果高氧组视网膜可见大量新生血管形成;突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数为（33.51±2.55）个,与对照组相比差异有统计学意义（t=9.345,P〈0.05）。高氧组与对照组比较,MMP-2、VEGF蛋白在神经节细胞层、内丛状层、内核层和突破视网膜内界膜的新生血管中高表达,且二者表达呈正相关（r=0.825,P〈0.05）。结论MMP-2、VEGF共同促进视网膜新生血管的形成,且二者可能具有协同作用。     

高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型中端粒酶逆转录酶的表达变化

目的 研究高氧诱导视网膜新生血管模型中小鼠端粒酶逆转录酶(TERT)基因表达水平是否有变化,为进一步研究视网膜新生血管疾病的预防和治疗提供新的靶点.方法 实验研究.选取7 d龄C57BL/6J新生小鼠32只,分高氧组和对照组,每组16只.高氧组小鼠以密闭氧箱内以75%±2%氧浓度饲养5 d后置于正常氧浓度环境中,正常对照组小鼠于正常氧环境中饲养.于小鼠生后12、14及19 d时分别取高氧组和对照组小鼠各2只(4只眼),经尾静脉行2%伊文思蓝溶液灌注并做视网膜铺片,荧光显微镜下观察视网膜新生血管的形成情况.高氧模型组和正常对照组生后19 d幼鼠3只,行HE染色,光学显微镜下观察视网膜血管形态,观察突破内界膜的内皮细胞核数.取生后19 d高氧组和对照组小鼠,分别取其视网膜组织并提取总RNA,反转录成cDNA后行反转录PCR,2%琼脂糖凝胶电泳并照相.提取视网膜总RNA,反转录成cDNA后(同RT-PCR),配制荧光定量实时PCR反应体系(总计20μl),在60℃检测荧光信号,分析图像.分别取高氧模型组和正常对照组P19小鼠行眼球切片,常规处理后TERT抗体孵育37℃ 60 min,HRP酶标二抗孵育30 min,DAB显色,中性胶封片,镜下观察并照相.结果高氧诱导模型小鼠牛后12 d眼底后极部出现大片无灌注区,生后14 d眼底后极部出现新牛血管迂曲、渗漏等视网膜血管病变.生后17～19 d视网膜新生血管形成达到高峰.正常小鼠视网膜组织切片HE染色基本看不剑突出内界膜的血管芽及血管管腔,内界膜下视网膜内的血管内皮细胞核散在分布、数量较少;高氧组见大量突出内界膜伸向玻璃体腔的血管管腔及血管芽,内界膜下视网膜内也有大量血管内皮细胞增生.19 d高氧模型组小鼠视网膜TERT及bFGF mRNA表达较同日龄正常对照组小鼠明显提高,二者差异有统计学意义(F=8.575,5.667;P＜0.05).生后19 d实时PCR检测高氧模型组小鼠视网膜TERT mRNA表达较同日龄正常对照组小鼠明显上调,差异有统计学意义(F=173.104,P＜0.05).生后19 d高氧诱导小鼠视网膜新生血管模型中视网膜新生血管TERT表达阳性,同日龄对照组新生小鼠视网膜血管TERT表达阴性.结论高氧诱导视网膜新生血管小鼠模型中端粒酶逆转录酶和新生血管形成相关因子表达水平明显上调,可能会成为视网膜新生血管疾病预防和治疗的新靶点.(中华眼科杂志,2009,45:199-205)     

肾素(原)受体小干扰RNA对小鼠视网膜新生血管抑制作用的研究

目的 观察肾素(原)受体(PRR)小干扰RNA(siRNA)对小鼠视网膜新生血管的抑制作用及机制.方法 实验研究.将小鼠分为6组:A～E组建立高氧诱导视网膜新生血管动物模型,其中A～D组分别给予PRRsiRNA质粒、对照质粒、PRRsiRNA质粒联合氯沙坦治疗和氯沙坦治疗,E组不予任何治疗,F组为空白对照组.各组分别于P17时处死小鼠,用视网膜铺片、HE染色方法观察视网膜新生血管生长情况.用免疫印迹法检测各组PRR及ERK1/2的表达情况.用实时PCR方法检测A、B、E、F组中TGF-β1的表达.采用单因素方差分析(LSD法)比较各组视网膜新生血管及PRR、ERK1/2和TGF-β1表达的差异.结果 视网膜灌注铺片显示A、C和D组视网膜新生血管较E组和B组明显减少(F=17.218,P=0.000).A、C和D组突破内界膜的血管内皮细胞数分别为4.47±1.96、4.49±2.53和5.94±2.54,明显少于E组(32.73±6.38)和B组(21.04±5.39).免疫印迹法检测结果显示E组17 d时PRR表达明显高于F组;A组和C组PRR水平明显低于E组,而B组和D组PRR水平与E组相比差异无统计学意义(F=14.584,P=0.000).E组P17时活化的ERKI/2水平明显高于F组;A、C和D组ERK1/2的活化率均明显低于E组;其中A组和C组降低更明显,与D组相比差异有统计学意义(F=11.177,P=0.000).实时PCR结果显示E组小鼠视网膜TGF-β1 mRNA表达水平明显高于F组,A组表达明显降低,而B组与E组无差异(F=12.468,P=0.002).结论 PRR与肾素(原)结合后可独立激活ERK1/2通路,促进视网膜新生血管的生长.PRRsiRNA可明显降低PRR的表达量,减少ERK1/2通路的激活,达到治疗新生血管的目的.

Abstract：

Objective To observe the inhibit effect of (pro)renin receptor siRNA on mice retinal neovascularization, and investigate its possible mechanism. Methods Experimental study. 72 new born C57BL/6J mouse were randomly divided into six groups: group A to group E were exposed to hyperoxia, and then returned to normoxia to induce retinal neovascularization. Group A were treated with PRR siRNA plasmid, group B with control plasmid, group C with PRR siRNA and Losartan, and group D with Losartan.Group E were not treated. Group F was control group. Mouse were sacrificed at postnatal day 17, retinal perfusion stretched preparation and HE dyeing method were used to observe the status of retinal neovascularization. PRR expression and the activation of extracellular regulated protein kinases 1/2(ERK1/2) were detected by Western Blot. And Real Time PCR was used to detect the expression of transforming growth factor-β1 (TGF-β1) in group A, B, E and F. Analysis of one way variance (LSD) was used and statistical difference was considered significant at a P value less than 0. 05. Results The mouse treated with PRR siRNA, Losartan and combind therapy could significantly reduce retina neovascularization and vessel leakage compared with oxygen-induced retinopathy group and control plasmid group. Average counts of vascular endothelial cells which break through the inner limiting membrane performed at postnatal day 17 in PRR siRNA group (4. 47 ± 1.96), Losartan group (5.94 ± 2. 54) and combind therapy group(4. 49 ± 2. 53)were significantly lower than oxygen-induced retinopathy group (32. 73 ± 6. 38) (P＜0. 05) and control plasmid group(21.04 ±5. 39). Western Blot showed that PRR protein express in hyperxia induced group was significantly higher than normal (P=0. 007). After treated with PRR siRNA or combind therapy, the expression of PRR protein was significantly lower than hyperxia induced group (P＜0. 05). There are no significantly differences between control plasmid group, Losartan group and hyperxia induced group (P＞0. 05). The activated ERK1/2 lever in hyperxia group was significantly higher than normal (P=0. 003).After treated with PRRsiRNA, Losartan or combind therapy, activated ERK1/2 lever was significantly lower than hyperxia induced group (P＜0. 05). And the effect of PRR siRNA group and combind therapy group seems more obviously, compared with Losartan group, the difference was significantly (P＜0. 05). Real Time PCR showed that the lever of TGF-β1 in hyperxia group was significantly higher than normal (P=0. 001). After treated with PRR siRNA, the TGF-β1 was significantly reduced (P=0. 004), and there was no significantly difference between control plasmia group and hyperxia induced group (P=0. 222) .Conclusions PRR combined with prorenin or renin could activate ERK1/2 signal transduction passageway,and promote cell proliferation, differentiation and migration, thus promote retinal neovascularization. PRR siRNA could obviously reduce PRR expression, inhibit ERK1/2 signal transduction passageway activation,and diminish retianl neovascularizatior.     

血管内皮生长因子受体KDR基因胞外段1-3区基因转染抑制氧诱导小鼠视网膜新生血管的研究

目的 评价脂质体介导的血管内皮生长因子受体KDR基因胞外段1-3区(KDRn3)基因转染抑制氧诱导的视网膜新生血管的效果.方法 选1周龄C57Bl/6N小鼠置于氧浓度为75%±2%的氧箱中5 d.回到正常环境中诱导视网膜新生血管模型.在小鼠离开氧箱的当日,向转染组小鼠玻璃体腔注射脂质体pEGFP-N1/KDRn3复合物1 μl;脂质体对照组注射等量脂质体;空白对照组小鼠注射等量PBS.回到正常环境中后5 d,采用视网膜铺片及视网膜冰冻切片在激光共聚焦显微镜下观察绿色荧光蛋白在视网膜的表达;采用荧光标记的右旋糖酐血管灌注下视网膜铺片方法观察视网膜新生血管的分布并测量无灌注区面积;组织学切片观察比较突破视网膜内界膜的血管内皮细胞数量.多组比较采用方差分析,有统计意义后进行两两比较的q检验.结果 转染组视网膜铺片见视网膜局部散在点状绿色荧光信号,空白对照组与脂质体对照组未见绿色荧光信号;视网膜冰冻切片见转染组视网膜神经节细胞层、内核层部分细胞胞质内见绿色荧光表达,空白对照组与脂质体对照组视网膜各层未见绿色荧光表达;视网膜铺片观察可见空白对照组与脂质体对照组在无灌注区边缘均可见新生血管芽及荧光渗漏,转染组见新生血管芽明显减少,生后第17天A、B、C 3组新生血管模型小鼠各组视网膜无灌注区面积分别为(1.33±0.49)、(2.75±0.70)、(2.12±0.35)mm2,组间比较差异有统计学意义(F=17.61,P＜0.01＝.正常对照组及A、B、C组视网膜表面突破内界膜的血管内皮细胞核计数分别为0.20±0.51、13.58±2.48、23.05±3.40及21.70±2.89,组间比较差异有统计学意义(F=1085.25,P＜0.05＝.结论 pEGFP-N1/KDRn3基因转染可不同程度抑制氧诱导C57,Bl/6J小鼠视网膜新生血管的生长.

Abstract：

Objective To evaluate the effect of liposome mediated plasmids KDRn3 injected into the vitreous to inhibit experimental retinal neovascularization. Methods One-week-old C57BL/6N mice were exposed to 75% ± 2% oxygen for 5 days, then returned to the room air to induce retinal neovascularization. Cationic liposome mediated KDRn3 comp-lex (1 μl) was injected into the vitreous in the treatment group. PBS 1 μl or liposome were injected in the control group. The pEGFP-N1/ KDRn3 expression was observed by using fluorescence microscope. Retinal neovascularization was evaluated by counting the number of vascular endothelial cell nuclei on the vitreal side of the inner limiting membrane of the retina and measuring the areas of non-perfusionsin in central retina. Results KDRn3 protein was expressed both in the ganglion layer and in the inner layer. Retinal wholemount preparation of retinal neovascular animal model showed that prominent neovascular tuft and fluorescein leakage and large areas of non-perfusionsin in central retina. Fewer neovascular tufts and fewer areas of non-perfusionsin could be seen after pEGFP-N1/KDRn3 injection. There were statistic differences between control group and pEGFP-N1/ KDRn3 injecting group with the number of vascular endothelial cell nuclei on the vitreal side of the inner limiting membrane of the retina(0. 20 ±0. 51, 13. 58 ±2. 48,23. 05 ±3. 40,21. 70 ± 2. 89;F = 1085. 25, P ＜ 0. 05 ) and the areas of non-perfusionsin in central retina [(1. 33 ± 0. 49 ) , ( 2. 75 ± 0. 70 ) , ( 2. 12 ± 0. 35) mm2; F = 17. 61 , P ＜ 0. 01] . Conclusion pEGFP-N1/KDRn3 gene transfer can inhibit retinal neovascularisation in C57Bl/6J mice of ischaemia-induced retinal neovascularisation on some extent.     

抗血管内皮生长因子单克隆抗体Bevacizumab抑制氧致视网膜病变模型鼠新生血管

目的 观察抗血管内皮生长因子单克隆抗体Bevacizumab 对氧致视网膜病变模型鼠视网膜新生血管的抑制作用。 方法 7日龄C57BL/6J幼鼠90只，数字表法随机分为4组：1 组15只，为正常对照组；2组15只，为给氧对照组；3组30只，为大剂量Bevacizumab治疗组 ；4组30只，为小剂量Bevacizumab治疗组。其中，2、3、4组置于氧浓度（75±2）%的容器内连续饲养至12日龄，再置于正常空气下饲养。第12天3、4组幼鼠玻璃体腔分别注射Bevacizumab 2、1 μl，对侧眼注射相同体积的平衡盐溶液作为对照。二磷酸腺苷酶染色法进行 视网膜铺片,了解视网膜血管改变；视网膜切片染色，计数小鼠视网膜新生血管内皮细胞核数；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测血管内皮生长因子（VEGF） mRNA的表达。 结果 与给氧对照组比较, Bevacizumab治疗组视网膜血管分布规则、密度减少,突破视网膜内界膜的内皮细胞核数目明显减少(P＜0.001),但不同剂量治疗组间比较，差异无统计学意义 (P＞0.05) ；给氧组无论是否采用Bevacizumab治疗，也不论Bevacizumab剂量大小，其VEGF的mRNA表达 量比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论 抗VEGF单克隆抗体Bevacizumab能有效抑制氧致视网膜病变模型鼠视网膜新生血管的形成，可能成为治疗氧致视网膜病变等早产儿视网膜病变的一种新方法。 （中华眼底病杂志，2008，24：184-188）     

CCN1在氧诱导小鼠视网膜新生血管形成中的表达及意义

目的:研究富含半胱氨酸蛋白61(CCN1/Cyr61)在氧诱导小鼠视网膜新生血管(retinal neovascularization,RNV)中的表达及意义,探讨特异性抑制CCN1对RNV形成的抑制作用。方法:取C57BL/6J小鼠200只,随机分为对照组、高氧组、高氧对照组和CCN1治疗组,每组各50只。高氧对照组和CCN1治疗组分别玻璃体腔内注射空载体质粒和CCN1siRNA表达质粒。ADP酶视网膜铺片观察视网膜血管形态,HE染色计数突破视网膜内界膜的新生血管内皮细胞核数,免疫组织化学、Western blot和RT-PCR法检测CCN1蛋白及mRNA的表达情况。结果:高氧组和高氧对照组视网膜可见大片无灌注区和大量突破内界膜的新生血管内皮细胞核(25.25±1.26个;23.12±1.16个),CCN1治疗组较高氧组和高氧对照组的无灌注区及新生血管内皮细胞核数(8.47±1.15个)明显减少。高氧组和高氧对照组较对照组相比,CCN1蛋白及mRNA表达显著增高,CCN1治疗组较高氧组和高氧对照组显著减弱,均有统计学意义(均为P<0.05)。结论:CCN1的异常表达可能与RNV形成密切相关,特异性抑制CCN1能有效抑制RNV的形成,为预防和治疗ROP提供新的思路及对策。     

Tenomodulin抑制氧诱导视网膜病变小鼠模型新生血管形成的研究

目的探讨Tenoinodulin（TeM）蛋白对C57BL／6J小鼠早产儿视网膜病变模型（ROP）视网膜新生血管形成的抑制作用。方法将60只7d龄C57BL／6J幼鼠随机分为高氧组（ROP组）、正常对照组各15只和TeM组30只。将ROP组小鼠置于体积分数（75％±2％）的高氧环境中5d,随后回到正常氧环境中饲养5d;对照组小鼠饲养在正常氧环境中;TeM组是将鼠1只眼玻璃体腔内注射1μg TeM,对侧眼注射PBS作为对照,然后置于体积分数（75％±2％）的高氧环境中饲养5d,之后返回正常氧环境中。17d时处死全部小鼠,收集各组眼球。视网膜荧光素灌注铺片观察视网膜血管的改变、计算视网膜无灌注区的面积;计数突破内界膜的内皮细胞数反映视网膜血管增生情况,观察TeM蛋白对视网膜新生血管形成的抑制作用及对视网膜可能的毒性反应;Western blot检测TeM蛋白在视网膜内的表达。结果与高氧组（2．94±0．55）mm^2。及TeM组中对侧眼注射PBS（2．83±0．46）mm^2的视网膜铺片中央非灌注区面积（mm^2）相比,注射TeM的视网膜铺片（0．44±0．26）mm^2,其中央非灌注区面积差异有统计学意义（P〈0．01）;每个视网膜切面突破内界膜的内皮细胞核数（10．57±2．95）与前二者（44．93±6．78、41．07±7．31）比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。注射TeM的视网膜冰冻切片未见炎症反应和细胞毒性破坏。Western blot检测结果显示注射TeM的视网膜呈阳性表达,注射PBS的视网膜未出现条带反应,TeM的相对分子质量约为16000。结论TeM可有效抑制视网膜新生血管的形成,预示着TeM在预防和治疗眼部新生血管方面具有潜在的作用。     

氧诱导视网膜病变鼠模型血管内皮 生长因子mRNA的表达

目的分析氧诱导视网膜病变动物模型血管内皮生长因子（VEGF）基因的调节规律，阐明早产儿视网膜病变（ROP）新生血管形成的可能机制。方法将36只7 d 龄C₅₇BL/6J幼鼠暴露在（75±2）% 浓度的高氧状态下5 d，随后在正常氧环境下5 d，作为氧诱导模型组；另24只同日龄幼鼠作为正常对照组。采用荧光素血管灌注及视网膜铺片法观察视网膜血管形态；半定量逆转录-聚合酶链反应(RP-PCR)观察各组VEGF mRNA的变化。结果氧诱导模型的视网膜血管形态特征为高氧状态下表层和深层血管的中心区出现无灌注，相对低氧状态下2 d后开始出现新生血管，其部位在中周部。RF-PCR结果显示，VEGF的表达与眼内新生血管的发生存在明确的时空对应关系，即高氧状态下，VEGF mRNA转录下降，相对低氧状态下，VEGF mRNA过度转录。结论缺氧是视网膜新生血管发生的主要原因；高氧之后的相对低氧使VEGF表达增加，可能会降低ROP新生血管的发生。(中华眼底病杂志,2005,21:292-295)