丙烯腈对大鼠神经胶质细胞凋亡、增殖及基因表达的影响

目的 研究丙烯腈(acrylonitrile,ACN)对大鼠神经胶质正常细胞(DI TNC1)和大鼠神经胶质肿瘤细胞(C6细胞)的生长、凋亡、增殖及相关基因表达的影响.方法 ACN作用于DI TNC1和C6细胞的浓度是25、50和75μg/ml,对于细胞生长、凋亡和增殖实验,作用时间是24 h;对于微点阵(microarray)试验,作用时间分别是4、24 h.结果 25、50和75μg/ml ACN作用DI TNC1后,DNA合成指数降低,分别为对照的93.1%、81.3%和74.9%,细胞凋亡指数增加,分别为对照的118%、122%和143%;C6细胞的DNA合成指数和凋亡指数在ACN作用后基本没有变化;cyclin和p53等细胞增殖和凋亡相关基因的表达也有一定的变化.结论 ACN抑制了DI TNC1细胞的增殖和促进了其凋亡,对C6细胞的凋亡和增殖没有变化.     

特异性沉默hTERT基因表达对卵巢癌细胞增殖、凋亡及p53、p21的表达的影响

目的探索特异性沉默hTERT基因表达对卵巢癌细胞增殖凋亡及p53和p21表达的影响,为临床诊治提供参考依据。方法采用分子克隆技术构建表达hTERTshRNA的载体,特异性沉默hTERT基因表达;WestenBlot法、MTT比色法、流式细胞仪检测抑制hTERT基因表达对卵巢癌细胞p53表达及其增殖和凋亡的影响。结果pSIREN-hTERTshRNA转染有效阻抑A2780细胞中hTERT蛋白表达,抑制率为77%;随着A2780细胞中hTERT蛋白表达降低,p53和p21表达均明显增加;与空白对照及转染pSIREN-Con对照质粒相比,pSIREN-hTERT转染的A2780细胞生长速度明显降低;pSIREN-hTERT转染48hA2780细胞凋亡率为(26.76±7.42)%,明显高于对照质粒pSIREN-Con转染组(3.73±0.78)%及空白对照组(1.33±0.15)%。结论hTERTshRNA重组质粒可特异性抑制卵巢癌细胞hTERT的表达,诱导细胞增殖抑制和凋亡,且可能与上调p53和p21的表达有关。     

低剂量辐射诱导小鼠生精细胞凋亡及p53基因表达的适应性反应

目的研究低剂量X射线照射诱导小鼠睾丸生精细胞凋亡及p53基因表达的适应性反应。方法通过不连续泛影葡胺密度梯度离心法分离睾丸组织不同种类生精细胞，采用碘化丙啶荧光探针标记细胞，流式细胞术检测各类生精细胞凋亡，免疫组化法观察生精细胞p53蛋白表达。结果当1．0、2．0或3．0Gy（攻击剂量，D2）照射前6h给予75mGy（诱导剂量，D1）预照射时明显减轻D2对精原细胞和精母细胞的凋亡损伤作用，而对精子细胞和精子影响不明显。当D2照射前6h给予D1预照射时明最减少精原细胞和精母细胞p53基因表达阳性率，而对精子细胞和精子影响不明显。结论低剂量X射线照射可选择性诱导小鼠睾丸精原细胞和精母细胞凋亡的适应性反应，并与D1和D2间隔时间及D2剂量有关。同时，可诱导精原细胞和精母细胞p53基因表达的适应性反应，推测其在低剂量辐射诱导生精细胞凋亡适应性反应分子机制中起重要的调控作用。     

锌对HL-60细胞凋亡及p53等基因表达影响

目的研究微量元素锌在体外对HL-60细胞凋亡的作用机制。方法HL-60细胞常规培养24h，分为对照组、四吡啶甲基乙二胺N，N，N＇，N＇-tetrakis（2-pyridylmethyl）ethylenediamine（TPEN）处理组、TPEN＋ZnSO4组。以细胞形态学改变、流式细胞仪和DNA凝胶电泳分析为凋亡观察指标，并用mRNA狭缝杂交和Western-blot测定细胞凋亡相关基因的改变。结果细胞内Zn^2＋减少可诱导人髓性细胞白血病细胞系HL-60凋亡，引起bcl-2、c-myc mRNA及蛋白的表达降低，补充ZnSO4（终浓度为20μmol／L）可改善上述现象。结论细胞内Zn^2＋减少诱导HL-60细胞凋亡过程与细胞内下调bcl-2、c-mvc基因的表达有关。     

硒对氟所致细胞凋亡及p53基因的影响

目的 研究硒对慢性氟中毒大鼠肝肾细胞凋亡及相关基因的影响。方法 对饮高氟水(100mg／L)及高氟加不同浓度硒饲料(2．3mg／kg)大鼠饲喂4个月后，取其肝肾组织进行透射电镜形态学观察、DNA凝胶电泳及流式细胞术观察各组细胞凋亡情况，同时检测肝肾细胞凋亡的相关基因p53。结果 与对照组相比，高氟及氟加硒组．肝肾细胞凋亡率及p53显著增加，氟加硒组肝肾细胞凋亡率明显低于单纯加氟组。结论 高氟可诱导细胞凋亡，硒可拮抗氟引起的细胞凋亡，且p53参与了细胞凋亡的调控。     

酒精性股骨细胞凋亡及其p53等基因的表达

目的　探讨细胞凋亡抑癌基因 (p5 3)和细胞凋亡抑制基因 (Bcl 2 )基因在酒精性股骨头缺血性坏死骨细胞凋亡中的作用。方法　家兔 6 0只 ,随机分为 2组。灌胃法建模 ,实验组给予含乙醇 5 0 %的烈性白酒 8ml/ (kg·d) ,对照组给予等量生理盐水 ,1～ 6个月分批处死。原位末端标记法 (TUNEL法 )检测骨细胞凋亡 ,免疫组化检测 p5 3和Bcl 2基因表达。结果　第 2 ,3,6个月 ,实验组出现大量骨细胞凋亡 ,以软骨下区最为明显 ,骨细胞凋亡数明显高于对照组 (P <0 0 1) ;两组间骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数、p5 3基因阳性细胞数均有显著性差异 (P <0 0 1) ,实验组骨细胞Bcl 2基因阳性细胞数与细胞凋亡数成明显负相关性 (r=- 0 75 ,P <0 0 1) ,实验组骨细胞 p5 3基因阳性细胞数与细胞凋亡指数呈明显正相关性 (r=0 6 8,P <0 0 1)。结论　酒精性ANFH中骨细胞存在明显凋亡现象 ,且受 p5 3基因上调与Bcl 2基因下调影响 ,p5 3与Bcl 2共同调节骨细胞凋亡。     

氯化甲基汞对大鼠脑神经细胞凋亡及P^53基因表达的影响

选用Ｗｉｓｔａｒ系雄性大鼠,经皮下注射给予１０ｍｇ／Ｋｇ体重氯化甲基汞（ＣＨ３ＨｇＣｌ）,连续７天,第１５天取其脑组织,利用细胞和分子生物学技术进行ＤＮＡ电泳和流式细胞术（ＦＣＭ）分析。实验结果,染毒组大鼠脑组织ＤＮＡ电泳呈现特征性梯形电泳带;ＦＣＭ分析染毒组大鼠脑神经细胞的凋亡率、Ｐ５３基因表达率显著高于对照组（Ｐ＜０．０５）。结果表明：ＣＨ３ＨｇＣｌ以诱导凋亡方式导致脑神经细胞损伤,Ｐ５３基因参与ＣＨ３ＨｇＣｌ诱导脑神经细胞凋亡的基因调控过程。     

新疆阿魏菇提取物对不同肿瘤细胞p53、fas基因表达的调节

目的 从细胞凋亡角度探讨新疆阿魏菇提取物抗肿瘤机制。方法 采用肿瘤细胞体外培养技术及RT—PCR技术，观察阿魏菇不同剂量的水提物及醇提物对体外培养的四种肿瘤细胞p53及fas基因表达的影响。结果 以β—actin的表达及表达量作为内对照，四种类型肿瘤细胞均出现不同程度的p53基因、fas基因表达水平的上调。结论 受试物可能通过诱导促进肿瘤细胞凋亡基因(p53基因、fas基因)的转录及表达，从而发挥抗肿瘤作用。     

MYCT-1基因特异的siRNA对GES-1细胞凋亡,增殖及细胞周期的影响

目的探讨沉默MYCT-1基因对GES-1细胞凋亡、细胞周期及细胞增殖的影响。方法采用siRNA转染GES-1细胞后分别应用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测其对细胞凋亡的影响,应用PI单染流式细胞术分析对细胞周期的改变,应用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测siRNA对细胞增殖的作用。结果siRNA转染GES-1细胞后,与对照细胞相比,细胞凋亡率明显增高(P<0.05);细胞增殖率降低(P<0.05),细胞周期检测表明细胞停滞于S期(P<0.05)。结论MYCT-1基因维持一定的表达水平对于正常细胞生长调控是必需的,MYCT-1基因对细胞周期的调控主要体现在S期向G1期的转变过程。     

金雀异黄酮对结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响

目的观察植物雌激素金雀异黄酮(GS)对人结肠癌细胞HT-29增殖及凋亡的影响,并初步探讨其分子生物学作用机制。方法采用MTT比色法和流式细胞术检测GS对HT-29细胞增殖活力和细胞周期分布的影响;CellDeathELISA和流式细胞术从不同方面检测GS对HT-29细胞凋亡的影响;RT-PCR和Western-blot技术检测GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2和baxmRNA和蛋白质表达的影响。结果与对照组相比,在15~120μmol/L浓度范围内,GS能够抑制HT-29细胞增殖活力;降低S细胞分布比例,将细胞周期滞留在G2/M期;显著性诱导HT-29细胞凋亡(>30μmol/L,P<0.05),并呈现出良好的剂量-效应关系。检测GS对PCNA、bcl-2和bax表达的影响显示,GS能够抑制PCNA和bcl-2mRNA和蛋白质表达,对bax的表达则表现出促进作用。结论GS通过诱导HT-29细胞凋亡而抑制其增殖活力,这些效应与PCNA、bcl-2和bax的表达变化有关。这些资料可为结肠癌的早期预防提供膳食干预新途径,并为临床新药的开发提供新方案。     

胎儿生长受限胎盘组织中细胞凋亡与增殖

目的:通过对胎儿生长受限患者的胎盘组织细胞凋亡和增殖指数的测定,从细胞增殖与凋亡的角度阐述导致胎儿生长受限发生、发展的病理机制。方法:研究对象来自于2007年2月~2009年2月在该院分娩的胎儿生长受限患者31例(FGR组)和正常足月分娩30例(对照组)的胎盘组织。应用TUNEL法及SP法定量测定各种细胞的凋亡指数及增殖指数。结果:两组胎盘各细胞成分均有凋亡发生,细胞凋亡在两组中均以蜕膜细胞和合体滋养细胞为主。胎儿生长受限组〔合体滋养细胞凋亡指数(36.4±9.2)%,蜕膜细胞凋亡指数(40.2±7.5)%〕与对照组相比〔合体滋养细胞凋亡指数(23.3±5.0)%,蜕膜细胞凋亡指数(28.4±8.2)%〕凋亡明显增多,差异有统计学意义(P0.01)。在胎儿生长受限组细胞滋养细胞内有一定量的增殖细胞核抗原表达〔细胞滋养细胞增殖指数(25.1±5.9)%〕,和对照组相比〔细胞滋养细胞增殖指数(17.2±5.8)%〕细胞增殖明显,差异有统计学意义(P0.01)。结论:在胎儿生长受限及正常晚孕的胎盘中均存在凋亡现象。胎儿生长受限患者胎盘中合体滋养细胞及蜕膜细胞凋亡较正常晚孕明显增多,且细胞滋养细胞表现为明显增生,这可能是引起FGR发生、发展的重要病理过程。     

肢体移植排斥反应中细胞凋亡及致死基因表达

目的探讨同种异体肢体移植急性排斥反应时细胞凋亡及致死基因Fas、Fas配体(FasL)表达的作用及其意义。方法建立近交系SD大鼠与wistar大鼠间原位异体肢体移植模型。实验观察组为异基因组，SD大鼠为供体，Wistar大鼠为受体；对照组为同基因移植组，在Wistar大鼠之间移植。分别进行左腿原位移植术。术后第1，3，5，7d分别取移植肢体组织进行病理学检查及电镜扫描，采用原位末端标记法(TUNEL)检测移植肢体中的凋亡细胞，免疫组化方法检测移植肢体中Fas、FasL表达的变化。结果实验组大鼠在术后发生由轻到重的急性排斥反应，对照组无明显排斥现象。实验组的移植物细胞凋亡数均明显高于对照组，凋亡细胞主要分布在血管内皮细胞及皮肤基底层细胞；术后第7d因严重排斥使小血管广泛栓塞。异基因肢体移植组的移植物中Fas／FasL表达增高，并与病理学检查及细胞凋亡程度一致。结论Fas、FasL介导的血管内皮细胞凋亡在大鼠异基因肢体移植急性排斥反应中发挥重要作用，可作为判断移植肢体预后及监测排斥反应的重要指标。     

细胞凋亡与肿瘤的发生

细胞凋亡是一种凋亡相关基因调控的自身程序化死亡,是细胞有序而协调激活凋亡刺激基因和凋亡抑制基因双向共同调控的过程.随着细胞凋亡研究的深入,人类逐渐认识到细胞凋亡与肿瘤的发生密切相关,并成为当今研究热点之一.     

p38丝裂原活化蛋白激酶与细胞凋亡关系研究

p38丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路除了参与基因转录调控外,p38 MAPK还参与细胞凋亡、细胞因子生成、细胞骨架重构等生物事件并发挥作用,被认为是细胞信息传递的交汇点和共同通路。本文就p38 MAPK的特征和作用、p38 MAPK信号转导途径与细胞凋亡的关系及相关研究方法进行了综述。     

镉对16HBE细胞凋亡及Bal-2、Bax基因表达影响

目的探讨镉恶性转化人支气管上皮细胞(16HBE细胞)过程中细胞凋亡状况以及Bal-2和Bax表达变化。方法采用流式细胞术和实时荧光定量PCR法检测16HBE细胞、氯化镉恶性转化16HBE 细胞不同阶段(第5、15、35 代细胞及成瘤细胞)的细胞凋亡和 Bal-2和Bax基因mRNA表达情况。结果16HBE细胞和恶性转化细胞系第5、15、35 代细胞及成瘤细胞的凋亡率分别为0.65%、1.14%、1.87%、3.78%和4.93%;细胞的Bal-2和Bax的mRNA表达量分别为(9.067±0.155)、(8.183 ±0.206)、(5.971±0.015)、(4.533±0.030)、(4.863±0.066)和(5.973±0.026)、(6.012±0.112)、(6.659±0.028)、(7.032±0.045)、(7.519±0.022),随着转化代数增加,Bal-2 mRNA表达量逐渐降低,Bax的mRNA表达量逐渐上升,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论氯化镉恶性转化16HBE细胞过程中能引起细胞凋亡,抑止Bal-2基因的表达和上调Bax基因表达。     

早期胃癌细胞凋亡及增殖细胞的表达

目的探讨早期胃癌中细胞凋亡、增殖在胃癌发生及形态形成中所起的作用。方法应用较敏感且特异性较强的TdT酶介导的生物素化dUTP缺口末端标记(Tunel)技术及免疫组织化学染色SP法分析研究了51例早期胃癌细胞凋亡增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。结果(1)凋亡细胞在癌旁组织较为多见,为5.6%～29.3%,凋亡指数AI=13.19±6.68,而在早期胃癌中,凋亡细胞明显减少,为1.5%～16.0%,凋亡指数下降,AI=7.45±3.25,P<0.005,PCNA增殖指数在癌旁组织(PI=29.86±15.33)明显低于早期胃癌(PI=61.64±15.64);(2)肠型胃癌的凋亡指数(AI=7.86±3.47)明显高于弥漫型胃癌(AI=4.63±1.94),而PCNA增殖指数则相反,结果分别为59.03±10.66,68.20±14.49,P<0.05;(3)隆起型胃癌的凋亡指数(AI=9.60±3.51)明显高于凹陷型胃癌(AI=4.95±1.91),P<0.005,PCNA增殖指数则隆起型胃癌明显低于凹陷型胃癌,P<0.005。结论胃癌的发生与癌细胞过度生长及凋亡受抑有关;肠型胃癌较弥漫型胃癌净细胞增加少,所以肠型胃癌生长缓慢;早期胃癌的形态形成可能与肿瘤的增殖活动、细胞凋亡有关。     

血管内皮生长因子与卵巢癌细胞凋亡的关系

目的:探讨血管内皮生长因子(VEGF)在卵巢癌中的表达及其与细胞凋亡的关系。方法:分别采用免疫组织化学SP法和TUNEL检测VEGF在45例卵巢癌中的表达及细胞凋亡情况。结果:45例卵巢癌中VEGF阳性表达率为86.7%(39/45)。卵巢癌组织中60%(27/45)细胞凋亡为阳性,40%(18/45)细胞凋亡为阴性。卵巢癌细胞凋亡阴性组中VEGF强阳性表达率88.9%(16/18)高于细胞凋亡阳性组40.7%(11/27),P=0.039。结论:VEGF抑制肿瘤细胞凋亡,促进肿瘤生长、局部侵袭及远处转移。     

苦参碱联合奥沙利铂对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡及p53蛋白表达的影响

目的探讨苦参碱(Ma)联合奥沙利铂(OXA)对人结肠癌SW620细胞增殖、凋亡、细胞周期分布及p53蛋白表达的影响。方法用不同浓度的Ma,OXA和两药联用分别处理人结肠癌细胞SW620,采用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测定药物对细胞的增殖抑制率,流式细胞术检测用药后细胞周期分布和细胞凋亡率,蛋白质免疫印迹(Western blot)检测p53蛋白的表达情况。结果 Ma,OXA单用和联用均能抑制SW620增殖(P0.05),呈时间-浓度依赖性,且两药联用对人结肠癌细胞SW620的增殖抑制率明显高于单用(P0.05);OXA可在一定程度上诱导细胞凋亡(P0.05),与Ma联用后,诱导细胞凋亡作用明显增强(P0.05);OXA能够使细胞阻滞于G2/M期(P0.05),联用Ma对G2/M期的阻滞作用更加明显(P0.01);OXA作用SW620细胞后p53蛋白表达增强(P0.05),联合Ma作用SW620细胞后p53蛋白表达上调较单用明显增强(P0.05)。结论 Ma和OXA均可抑制人结肠癌SW620细胞的增殖,诱导细胞的凋亡,二者联合应用具有协同作用,可提高OXA化疗的敏感性,该作用可能与提高细胞内p53蛋白的表达有关。     

宫颈上皮内瘤变病灶内高危型HPV与增殖、凋亡基因表达的相关性

目的探讨宫颈上皮内瘤变(CIN)病灶内高危型HPV(HR-HPV)与增殖、凋亡基因表达的相关性,为宫颈癌的早期诊断提供理论依据。方法收集2014年5月-2016年12月在天门市第一人民医院经宫颈锥形切除及病理活检确诊为CIN的组织及同期因良性疾病接受子宫全切除术的正常宫颈组织,检测HR-HPV的感染情况及增殖基因、凋亡基因的表达量。结果CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期组织中HR-HPV的阳性率显著高于正常宫颈组织,且CIN级别越高,HR-HPV的阳性率越高。CINⅠ期、CINⅡ期、CINⅢ期组织中cyclin B、cyclin D1、cyclin E、MCM7、c FLIP、Survivin、Bcl-2、Livin的mRNA表达量显著高于正常宫颈组织,PTEN、Fas、Fas L、DAPK1、p16INK4A的mRNA表达量显著低于正常宫颈组织,且CIN级别越高,cyclin B、cyclin D1、cyclin E、MCM7、c FLIP、Survivin、Bcl-2、Livin的mRNA表达量越高,PTEN、Fas、Fas L、DAPK1、p16INK4A的mRNA表达量越低。HR-HPV阳性的CIN病灶中cyclin B、cyclin D1、cyclin E、MCM7、c FLIP、Survivin、Bcl-2、Livin的mRNA表达量显著高于HR-HPV阴性的CIN病灶,PTEN、Fas、Fas L、DAPK1、p16INK4A的mRNA表达量显著低于HR-HPV阴性的CIN病灶。结论 CIN病灶内HR-HPV感染能够增加增殖基因及抗凋亡基因的表达、减少促凋亡基因的表达。     

姜黄素对TK6细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用研究

目的 :　观察姜黄素 (curcumin)对人的类淋巴母细胞 TK6细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用 ,为进一步探讨其抗诱变、抗肿瘤的机制和开发利用提供理论依据。方法 :　姜黄素处理TK6细胞 ,采用 MTT比色分析法、3 H- Td R掺入法和细胞周期测定以及细胞超微结构观察和流式细胞分析。结果 :　 2 0 μmol/L的姜黄素处理细胞 2 4 h,即可产生显著的细胞增殖抑制作用和凋亡诱导作用 ,且有剂量和时间依赖性。姜黄素引起细胞的凋亡主要在细胞周期的 DNA合成期 (S期 ) ,将细胞周期阻滞在静止期和 DNA合成前期 (G0 /G1期 )。结论 :　姜黄素对 TK6细胞具有显著的增殖抑制作用和凋亡诱导作用。