治疗冠心病常用中药对CYP450酶系及转运体影响的研究进展

冠心病患病率及死亡率逐年上升,已成为威胁人民健康的主要病因之一。目前中西药物联用是治疗冠心病的主要形式,药物间代谢性相互作用引起的安全性及有效性问题也日益受到关注。本文针对临床上常用的治疗冠心病中成药,按照辨证分型从CYP450酶系和转运体的角度探讨与西药可能发生的潜在代谢性药物相互作用。     

艾迪注射液对体外人和大鼠肝微粒体中CYP450酶的抑制作用

目的研究艾迪注射液(斑蝥、人参、黄芪等)对体外人和大鼠肝微粒体中细胞色素P450(CYP450)酶的抑制作用,并比较种属差异性,评价其发生药物相互作用的可能性。方法在肝微粒体孵育体系中,将艾迪注射液分别与混合探针底物(非那西丁/CYP1A2、氯唑沙宗/CYP2E1、右美沙芬/CYP2D6、奥美拉唑/CYP2C19、甲苯磺丁脲/CYP2C9、咪达唑仑/CYP3A4、睾酮/CYP3A4)共同孵育,UPLC-MS/MS检测各探针底物的代谢物生成量,采用Graph Pad v5.0软件计算半数抑制浓度(IC50)。结果艾迪注射液对人和大鼠肝微粒体中CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6、CYP2C19和CYP2C9的IC50值在4.101%~10.07%范围内,对人和大鼠肝微粒体中CYP3A4(咪达唑仑)的IC50值分别为169.6%和9.133%,对CYP3A4(睾酮)的IC50值分别为8.472%和49.25%。结论艾迪注射液对CYP1A2、CYP2E1、CYP2D6、CYP2C19、CYP2C9和CYP3A4有不同程度的抑制作用,其中CYP3A4具有明显的种属差异性。     

丹参注射液对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶体外抑制作用

目的评价丹参注射液在体外对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)亚型酶活性的影响。方法将丹参注射液分别与5种CYP450亚型酶(CYP1A2、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6、CYP3A4)的特异性探针底物非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、右美沙芬与大鼠肝微粒体进行孵育,采用UPLC-MS/MS法测定对应5种代谢产物对乙酰氨基酚、4-羟基甲苯磺丁脲、5-羟基奥美拉唑、右啡烷、N-去甲右啡烷的含有量并计算其IC50。结果丹参注射液对CYP1A2、CYP3A4的IC50值均大于100μg/m L,对CYP2C9、CYP2C19和CYP2D6的IC50值分别是3.32、16.44、0.30μg/m L。结论丹参注射液对CYP1A2、CYP3A4没有抑制作用,但对CYP2C19和CYP2C9分别有弱和中等抑制作用,对CYP2D6表现出强抑制作用。     

谷红注射液对CYP450酶的抑制和诱导作用的体内外研究

目的 考察谷红注射液对体外及体内细胞色素P450(cytochrome P450,CYP450)酶的影响。方法 人肝微粒体“Cocktail”探针底物法进行体外酶抑制实验,检测7种探针底物代谢产物的相对生成量,计算半数抑制浓度（half inhibitory concentration,IC50）,评估谷红注射液（0.05%～10%）对7种CYP450亚酶抑制作用。人原代肝细胞体系进行体外酶诱导实验,分别检测酶活性及其m RNA表达水平,评估谷红注射液对CYP450酶诱导作用。采用整体动物法进行体内酶活性实验,检测7种特异性探针底物血浆药物浓度,评估谷红注射液（0.9、3.6 mL/kg）对大鼠7种CYP450亚酶活性的影响。结果 谷红注射液对人肝微粒体CYP1A2、CYP2B6、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的IC50值分别为1.98%、7.95%、2.85%、5.39%、4.92%、7.76%和3.41%,均大于0.5%（理论临床最大血药浓度值）;人原代肝细胞CYP1A2、CYP2B6和CYP3A4 mRNA表达增加>2倍,且前两者呈浓...     

HPLC-MS-MS法测定大鼠血浆中6种CYP450探针药物及甘草对CYP450酶活性的影响

目的: 建立高效液相色谱-二级质谱联用(HPLC-MS-MS)法同时测定大鼠血浆中6种细胞色素P450(CYP450)探针药物,即非那西丁、甲苯磺丁脲、奥美拉唑、酒石酸美托洛尔、氯唑沙宗和睾酮,并用于体内评价甘草对CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1,CYP3A4酶活性的影响. 方法: 采用汉邦C₁₈柱(2.0 mm×150 mm,5 μm),流动相为甲醇-0.1%甲酸水溶液(70:30),流速为0.2 mL·min^-1,柱温35℃.电喷雾离子化,检测方式为多反应离子监测.大鼠分为2组,分别ig生理盐水和甘草提取液,连续10 d,于第11天给予大鼠探针药物,用HPLC-MS-MS法测定6种探针药物的血药浓度,并分析比较其药动学参数. 结果: HPLC-MS-MS方法的灵敏度、精密度、回收率及稳定性良好.甘草能明显诱导大鼠体内CYP1A2,CYP2C9,CYP2C19,CYP2D6,CYP2E1的活性,抑制 CYP3A4的活性. 结论: 本法简便、准确,适用于甘草或其他药物对CYP450同工酶活性的研究.     

11批生脉注射液的质量考察

目的：对11批生脉注射液进行质量考察。方法：采用高效液相色谱法测定生脉注射液中的人参皂苷Rg1，Re的含量。结果：人参皂苷Rg1的回归方程A=1674763X＋18802。r=0．9996；人参皂苷Re的回归方程A=1255032X＋16807，r=0．9995。平均回收率为人参皂苷Rg1 102．0％，RSD为2．9％。人参皂苷Re101．6％，RSD为3．00％。结论：人参皂苷的测定方法稳定，可行，可用于检验生脉注射液，作为评价该制剂的质量标准。     

清开灵注射液及其主要成分黄芩苷和栀子苷对人肝微粒体CYP450酶6种亚型的体外抑制作用研究

 目的 研究清开灵注射液及其主要成分黄芩苷和栀子苷对人肝微粒体CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的体外抑制作用。方法 采用液相色谱-串联质谱法（LC-MS/MS）同时测定对乙酰氨基酚、6α-羟基紫杉醇、4-羟基双氯芬酸、4-羟基美芬妥英、右啡烷、1-羟基咪达唑仑和6β-羟基睾酮,分别代表CYP1A2、CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4的活性;清开灵注射液、黄芩苷、栀子苷和7种混合探针底物在人肝微粒体中共同孵育,并计算其IC₅₀值表示对CYP450酶的抑制程度。结果 在人肝微粒体体外孵育体系中,清开灵注射液对CYP1A2的IC₅₀值为0.6%,对其他亚型的IC₅₀值从1.1%到6.0%;黄芩苷和栀子苷对CYP450酶6种亚型的IC₅₀值均大于100 μmol·L-1。结论 在正常剂量下,清开灵注射液对人肝微粒体CYP1A2可能有抑制作用,对人肝微粒体CYP2C8、CYP2C9、CYP2C19、CYP2D6和CYP3A4无明显抑制作用;黄芩苷和栀子苷对CYP450酶6种亚型均无抑制作用。     

HPLC法测定生脉注射液和注射用生脉中五味子醇甲

目的 建立生脉注射液和注射用生脉中五味子醇甲的测定方法 .方法 采用反相高效液相色谱法.色谱柱:Kromasil C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈-水(50:50);体积流量:1.0 mL/min;检测波长:218 nm;柱温:25℃;进样量:10μL.结果 五味子醇甲线性范围为2.98～29.8 μg/mL(r=0.999 6),生脉注射液和注射用生脉中五味子醇甲的平均回收率分别为98.9%、98.2%,RSD分别为0.79%、1.1%(n=9).结论 本法操作简便、结果 准确,适合这两种制剂中五味子醇甲的测定.     

黄芩苷对大鼠和人肝微粒体CYP450酶的抑制作用

目的:观察黄芩苷对大鼠/人肝微粒体细胞色素P450(CYP450)酶活性的抑制作用,比较种属差异性,评价其发生药物相互作用的可能性。方法:通过采用体外肝微粒体温孵体系结合特异性探针底物的方法,结合应用LC-MS/MS检测各探针底物的代谢物的生成量,质谱检测条件为电喷雾离子化(ESI)源,选择性反应监测(SRM)扫描方式,色谱分离条件为ZORBAX Eclipse-plus C₁₈色谱柱(2.1 mm×100 mm,3.5 μm),流动相甲醇-0.1%甲酸水溶液梯度洗脱,流速0.2 mL·min^-1,计算半抑制浓度(IC₅₀)。结果:黄芩苷对大鼠肝微粒体CYP450酶7种亚型均无抑制作用,而对人肝微粒体CYP1A2,CYP2C19和CYP2E1有较弱的抑制作用,IC₅₀分别为39.72,40.91,32.83 μmol·L^-1。结论:黄芩苷对CYP450酶的抑制作用存在种属差异性,是人CYP1A2,CYP2C19,CYP2E1的弱抑制剂,临床静脉用药时,应注意可能因CYP450酶抑制引起的药物相互作用。     

近年中药对CYP450酶系影响的研究进展

药物在机体内的生物转化主要由肝细胞内滑面内质网上的肝药酶催化,其中的细胞色素P450(CYP450)同工酶是催化药物进行氧化、还原、水解等代谢作用的重要的酶系.     

尿毒清颗粒对CYP450与P-gp体外影响的初步研究

[目的] 初步考察尿毒清颗粒(NDQ)对重组人细胞色素P450(CYP450)和P糖蛋白(P-gp)的体外影响.[方法] 1)使用 Promega P450-GloTM Screening System,通过荧光发光原理来检测NDQ组?抑制剂组对重组CYP450的IC₅₀(半数抑制浓度)值,比较NDQ组与抑制剂组IC₅₀来评价NDQ对重组人CYP1A2?CYP2D6?CYP3A4?CYP2C19,CYP2C9的抑制作用.2)使用BD ATPase Assay Kit,通过发光法检测NDQ组?空白对照组P-gp三磷酸腺苷(ATP)酶活性,比较NDQ组?空白对照组ATP酶活性来评价NDQ是否为重组人P-gp 的底物或抑制剂.[结果] 1)NDQ组与抑制剂组IC₅₀值(g/L)如下,CYP1A2: 17.47?3.37×10^-6;CYP3A4:33?4.181 3×10^-5; CYP2C9:10.39?1.056×10^-3; CYP2D6:13.98 ?2.245 9×10^-6;CYP2C19:9.251?1.442×10^-3.2)NDQ组的P-gp ATP酶的活性为16.39 nmol/(mg·min),空白对照组的ATP酶活性为4.72 nmol/(mg·min).[结论] 1)NDQ组IC₅₀大于对应抑制剂组IC₅₀, NDQ对重组人CYP1A2?CYP2D6?CYP3A4?CYP2C19?CYP2C9基本没有抑制作用.2)NDQ组ATP酶活性高于空白组并差异有统计学意义,NDQ可能为重组人P-gp的抑制剂或底物.     

红花注射液对大鼠细胞色素P450 2D6亚型的抑制作用

目的研究红花注射液对大鼠细胞色素P450 2D6亚型(CYP2D6)的影响。方法利用探针药物右美沙芬(DM),高效液相色谱法测定各实验组(对照组,红花注射液0.9、1.8、3.6 mL/kg组)大鼠体内尿液中与体外肝微粒体温孵系统中DM的代谢率,考察红花注射液对大鼠CYP2 D6活性的影响。结果体内实验和体外实验中,红花注射液1.8和3.6 mL/kg组DM的代谢率均明显低于对照组(P<0.05、0.01);抑制实验中,体外肝微粒体温孵系统中红花注射液组和西咪替丁组DM的代谢率明显低于空白组(P<0.05);含红花生药量为30 mg/mL时红花注射液组DM的代谢率与西咪替丁(0.6 mg/mL)时DM的代谢率相近,抑制能力相当;红花注射液的IC50为10.64 mg/mL。结论红花注射液对大鼠CYP2D6有显著的抑制作用。     

生脉拆方注射液中人参皂苷Rb1药代动力学研究

目的:研究生脉拆方系列注射液人参皂苷Rb1在Beagle犬体内的药代动力学.方法:采用拉丁方实验设计和交叉试验,应用LC/MS/MS分析方法测定Beagle犬血浆中人参皂苷Rb1浓度,并用DAS ver 2.1软件计算其药代动力学参数.结果:人参皂苷Rb1线性范围为0.002 36～9.45 μg/L,方法回收率在73.31%～100.12%,日内、日间RSD值均小于15%.4种生脉拆方注射液(生脉、参麦、参味、红参注射液)中人参皂苷Rb1药代动力学参数t1/2如下:(45.63±11.85)、(40.48±11.76)、(32.31±12.60)和(28.37±8.87)h.结论:该法简便、灵敏、特异,适用于血浆中人参皂苷Rb1浓度测定;4种注射液中人参皂苷Rb1在Beagle犬体内药代动力学行为均符合三房室模型;复方与单方注射液的人参皂苷Rb1的t1/2有显著性差异(P<0.05),表明复方配伍影响其在体内药代动力学行为,显示了药物间相互作用.     

体内、体外相结合评价CYP2E1酶活性的方法学研究

目的:以氯唑沙宗(chlorzoxazone,CZX)为"探针药物",建立一种快速、准确的体内、体外相结合评价细胞色素P450 2E1(cytochrome P450 2E1,CYP2E1)酶活性的HPLC-DAD检测方法。方法:体内实验为大鼠静脉注射CZX,剂量20 mg.kg-1,按时间点眼眶取血,检测CZX与其代谢产物6-羟基氯唑沙宗(6-hydroxy chlorzoxazone,6-OHCZX)的血浆药物浓度。体外实验为不同浓度CZX与大鼠肝微粒体温孵后,检测温孵体系中6-OHCZX的浓度,计算酶动力学参数来评价CYP2E1酶的活性。采用Agilent Extend-C18色谱柱(6 mm×100 mm,5μm),以非那西丁为内标,流动相为乙腈-0.6%乙酸水溶液,流速1.0 mL.min-1,紫外检测波长290 nm,柱温30℃。结果:体内、体外实验结果发现CZX,6-OHCZX的线性范围、日内和日间精密度、相对回收率、稳定性均符合生物样品的检测要求。结论:大鼠血浆及肝微粒体温孵体系中的其他内源性物质不干扰待测物的测定。该方法快速、稳定、灵敏度高,适合CZX及其代谢产物6-OHCZX的测定。     

黄独素B的体外代谢通路及其代谢产物研究

目的基于体外代谢模型对黄独素B的代谢稳定性、主要CYP450代谢酶表型及其代谢产物进行研究。方法黄独素B分别在人肝微粒体(HLM)和大鼠肝微粒体(RLM)中共同孵育,采用UPLC-MS/MS检测孵育液中剩余的黄独素B含量,分析其在HLM和RLM中的代谢稳定性。利用10种重组人CYP450酶(1A1、1A2、1B1、2A13、2A6、2B6、2D6、2C9、2C19、3A4)分别与黄独素B共同孵育,确定其代谢酶表型,结合大鼠离体肝灌流模型对黄独素B的主要代谢酶表型进行确认。此外,分别对HLM和RLM孵育体系中的黄独素B代谢产物进行定性分析,考察黄独素B在HLM和RLM中代谢产物的区别。结果在HLM和RLM中,黄独素B的转化率分别为37%、59%,经HLM和RLM代谢的体外半衰期(t1/2)为97.4、52.3 min,推算得到的HLM和RLM中的固有清除率(CLint, in vivo)为8.23、23.9 mL/(min·kg),肝清除率(CLh)为5.89、16.8 mL/(min·kg),由此可知黄独素B在RLM体系中的代谢转化速率较HLM中快。黄独素B体外代谢酶表型结果可知其I相代谢是由多个CYP同工酶介导的,包括3A4、2C19、2C9、1A13及1A1,其中CYP3A4对黄独素B的代谢起主导作用;肝灌流实验结果显示,随着酮康唑给药剂量的增加,对肝脏中CYP3A4的抑制作用增强,黄独素B在肝脏中的代谢减少,在灌流液中的剩余量增加,印证了CYP3A4对黄独素B的代谢作用。此外,2种肝微粒体孵育后的黄独素B都只产生了1个代谢产物(M1),为黄独素B去甲基化产物。结论黄独素B在RLM中的代谢转化速率较HLM中快。黄独素B的主要代谢酶表型为CYP3A4,其在HLM和RLM中产生的代谢物均为去甲基化产物。     

生脉注射液中木脂素类化学成分的分析研究

 目的 探讨生脉注射液中木脂素类化学成分分析方法。 方法 以五味子中间体化学成分研究为基础,采用液相色谱-质谱联用技术对8家生产企业的生脉注射液样品进行化学成分指认。 色谱条件：Agilent 6320 Ion Trap LC/MS液相色谱离子阱质谱联用仪,色谱柱Waters symmetry shield TM RP18（4.6 cm×25 cm,5 μm）,流动相：乙腈-10 mmol·L^-1醋酸铵水溶液,检测波长203 nm;质谱参数：nebulizer：2 kPa;dry gas：12 mL·min^-1;dry temp 350 ℃;碰撞电压：1.0 V;正离子扫描模式。结果 通过比较五味子中间体及8家生产企业的生脉注射液样品发现,五味子中间体主要成分为木质素类,其中8家生产企业共有成分为五味子醇甲、戈米辛D,戈米辛J,当归酰戈米辛Q。 结论 建立了生脉注射液中木脂素类成分的检查方法,为研究注射剂物质基础及统一制法提供实验依据。     

基于LC-MS/MS技术研究黄芩苷在脑、血微透析探针体内外回收率

为进一步研究黄芩苷的入脑行为及脑细胞间液药代动力学,对黄芩苷在脑、血微透析探针的体内外回收率及其稳定性进行了研究。采用LC-MS/MS测定脑、血微透析液中黄芩苷的浓度,计算探针回收率;分别采用增量法、减量法考察不同流速(0.50,1.0,1.5,2.0,3.0μL·min~(-1))对探针体外回收率的影响;采用增量法考察不同浓度(50.00,200.0,500.0,1 000μg·L~(-1))、探针使用次数(0,1,2)对体外回收率的影响;采用减量法考察在大鼠体内探针回收率稳定性及流速对回收率的影响,并与体外结果进行比较。在同一浓度下,黄芩苷的脑、血探针体外回收率均随着流速的增加而降低;在同一流速下,探针回收率与黄芩苷的浓度无关;使用后并经过恢复处理的脑、血探针,在使用2次后,探针的回收率没有明显的变化;增量法和减量法所测得的体外回收率基本相同;减量法测得的体内回收率与体外结果相近,且脑、血探针体内回收率在10 h内的稳定性均良好。研究结果表明减量法能够作为研究黄芩苷体内回收率的测定方法,微透析技术能够用于黄芩苷在脑细胞间液药代动力学、血液药代动力学的同步研究。     

半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝脏 CYP450酶活性的影响

目的:研究半夏泻心汤及不同配伍组对大鼠肝微粒体CYP450亚型酶的影响,从肝脏代谢角度评价半夏泻心汤组方的合理性。方法:将大鼠随机分为全方组、辛开组、苦降组、甘补组及空白对照组,分别灌胃水煎液,运用肝微粒体体外温孵法,对探针底物进行孵育,并结合超高效液相检测方法,测定各探针底物代谢产物的含量,计算代谢速率,以反映各给药组的肝微粒体CYP2C6,CYP2E1,CYP3A1/2亚型酶活性。结果:与空白组相比,全方组,苦降组对各亚型酶均起抑制作用(P<0.01);辛开组对CYP2C6有抑制作用(P<0.01),而对CYP2E1和CYP3A1/2无显著抑制作用;甘补组对CYP2C6和CYP2E1亚型起抑制作用(P<0.01),而对CYP3A1/2无抑制作用。结论:全方对大鼠肝微粒体CYP450酶起抑制作用,比较各配伍组间差异,苦降组抑制作用较其他配伍组显著。     

Inhibitory effects of curcumenol on human liver cytochrome P450 enzymes

Curcumenol, one of the major components of Zedoary turmeric oil, has been widely used to treat cancer and inflammation. As an antibiotic or anticancer drug, curcumenol is highly likely to be used in combination with various synthetic drugs in most cases, thus it is necessary to evaluate potential pharmacokinetic drug‐drug interactions induced by curcumenol. In this study, the inhibitory effects of curcumenol on seven CYP isoforms were investigated, and the results demonstrated that only CYP3A4 was strongly inhibited (IC₅₀ = 12.6 ± 1.3 μM). Kinetic analysis showed the inhibition type was competitive with K_i value of 10.8 μM. Time‐ and NADPH‐dependent inhibitions were also investigated to show curcumenol is not a mechanism‐based inhibitor. Employing these in vitro data and maximum plasma concentration of curcumenol in human predicted from beagle dog's in vivo pharmacokinetic data, the change in AUC of victim drugs was predicted to be 0.4%, which suggested that curcumenol may be safely used without inducing metabolic drug‐drug interaction through P450 inhibition. Nevertheless, due to the limited pharmacokinetic data available for curcumenol in humans, it is still not possible to evaluate its potential clinical effects on human patients from in vitro data. Thus, the magnitude of drug‐drug interaction (DDI) induced by curcumenol warrants further investigation. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.