中药天花粉蛋白增强诱导CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量和功能的初探＊

目的 探讨中药天花粉蛋白（Trichosanthin，Tk）增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）数量和功能的作用。方法 研磨6-8周C57BL/6小鼠脾脏，裂解红细胞后得到单个脾脏淋巴细胞悬液，按5×10⁵/mL细胞密度均匀接种在圆底96孔板，设空白组、对照组（增殖体系：1 μg·mL^-1 anti-CD3/28 mAb）、三个不同诱导方案组，培养7天后收集细胞运用流式细胞术检测CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例以此确定最佳诱导方案；将低浓度Tk（0.25、0.5、1 μg·mL^-1）作用于诱导体系，7天后采用流式检测Tk对CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞比例的影响；Annexin V-PI染色法检测细胞凋亡情况；Western blotting法测定各组中Treg细胞特异性转录因子Foxp3蛋白表达情况；实时荧光定量 PCR法检测转录因子Foxp3和细胞因子TGF-β、IL-10、IL-6、IFN-γ基因水平的表达；酶联免疫吸附法（ELISA）测定各组细胞培养上清中分泌IFN-γ和IL-10的浓度。结果 与对照组相比，添加TGF-β（5ng·mL^-1）诱导小鼠脾脏淋巴细胞生成Treg的数量和比例最高，此诱导方案最佳（P < 0.01）；与诱导组相比，低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺Treg细胞数量和比例，呈剂量依赖性（P < 0.01），且Tk需在诱导体系下发挥作用，单加不能诱导生成Treg细胞，此浓度Tk无细胞毒性；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组Treg特异性转录因子Foxp3蛋白和基因表达水平均显著上调（P < 0.01），II型辅助性T细胞（Th2）分泌的炎症抑制因子IL-10、TGF-β基因表达不同程度上调，反之，I型辅助性T细胞（Th1）分泌的促炎因子IFN-γ、IL-6基因表达呈相反趋势下调（P < 0.01）；与对照组相比，诱导组和低浓度Tk组细胞上清中分泌的IL-10浓度显著增加，IFN-γ浓度明显降低（P < 0.01）。结论 低浓度中药天花粉蛋白可显著增强诱导CD4⁺CD25⁺Foxp3⁺调节性T细胞，上调Foxp3和Th2型炎症抑制因子IL-10、TGF-β的表达，下调Th1型促炎因子IFN-γ、IL-6的表达，从而发挥免疫抑制功能。     

生津润燥方治疗干燥综合征及调控CD4+CD25+Foxp3T细胞/Th17机制研究

  目的：研究生津润燥方对免疫诱导干燥综合征模型小鼠外周血CD4⁺CD25⁺ Foxp3T细胞(Treg细胞)及Th17细胞水平的影响,同时观察腺体受累的改善状况和外周血淋巴细胞亚群的变化。  方法：雄性BABL/C小鼠分为空白组,模型组,硫酸羟氯喹组,生津润燥方高、中、低剂量组。除空白组外,其余各组小鼠采用免疫诱导法建立干燥综合征小鼠模型。各组采取相应干预措施。采用流式细胞术检测模型小鼠外周血中CD4⁺、CD8⁺、CD4⁺CD25⁺ Foxp3T细胞及Th17细胞水平,并测定模型鼠唾液、泪液分泌量;治疗的末期,观察下颌腺的组织形态学改变。  结果：与空白组比较,模型组第1周到第4周小鼠唾液和泪液流量均显著降低(P<0.05);与模型组比较,生津润燥方各剂量组第2、3、4周小鼠唾液流量和泪流量升高(P<0.05)。与空白组比较,模型组Th17淋巴细胞水平升高(P<0.05)。与模型组比较,生津润燥方各剂量组分别可升高CD8⁺T淋巴细胞水平,降低Th17淋巴细胞水平,升高小鼠Treg细胞水平,差异有统计学意义(P<0.05)。组织形态学观察显示,生津润燥方可抑制模型组小鼠颌下腺间质的淋巴细胞浸润。  结论：生津润燥方通过调节干燥综合征小鼠淋巴细胞的应答作用,从而能改善SS小鼠的症状。     

基于内质网应激探讨扶正解毒方联合5-Fu对胃癌荷瘤小鼠术后复发及转移的影响

目的 研究扶正解毒方联合5-氟尿嘧啶（5-Fu）对胃癌荷瘤小鼠术后复发转移的抑制作用，并通过肿瘤微环境中CD4⁺ T细胞，CD8⁺ T细胞，调节性T（Treg）细胞含量的改变，内质网应激途径及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（Akt）/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）通路，探讨其可能的分子机制。方法 40只615小鼠随机分为模型组，扶正解毒方（25 g·kg^-1）组，5-Fu（25 mg·kg^-1）组，联合组（扶正解毒方25 g·kg^-1+5-Fu 25 mg·kg^-1），每组各10只，将小鼠前胃癌细胞（MFC细胞）接种于左后肢内侧爪垫下，通过手术切除移植瘤建立术后复发模型。苏木素-伊红（HE）染色法观察术后复发胃癌荷瘤小鼠肺转移病理形态的改变；流式细胞术检测复发瘤中CD4⁺/CD8⁺ T值及脾脏中Treg细胞［CD4⁺，CD25⁺，叉头框蛋白P3（FOXP3）⁺细胞］的含量；蛋白免疫印迹法（Western blot）及免疫组化法（IHC）检测内质网应激相关蛋白［葡萄糖调节蛋白78（GRP78），肌醇需求酶1α（IRE1α），激活转录因子6（ATF6），蛋白激酶R样内质网激酶（PERK）］含量，以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果 与模型组比较，联合组复发抑制率明显升高（P<0.05）；各治疗组复发瘤重均明显降低（P<0.05）；各治疗组肺转移数均降低，转移率均有所降低，联合组肺转移总数最少，转移率最低，但差异无统计学意义；扶正解毒方组、联合组CD4⁺/CD8⁺ T值明显升高（P<0.05），Treg细胞含量明显降低（P<0.05）；5-Fu组Treg细胞含量明显升高（P<0.05）。IHC结果显示，与模型组比较，各治疗组ATF6蛋白表达明显下降（P<0.05，P<0.01），IRE1α表达明显下降（P<0.05），Akt表达显著下降（P<0.01）；5-Fu组及联合组mTOR表达明显下降（P<0.05）。Western blot结果显示，与模型组比较5-Fu组GRP78表达明显下降（P<0.05），5-Fu组及联合组PI3K，磷酸化Akt（p-Akt），mTOR表达明显下降（P<0.05）。结论 扶正解毒方联合5-Fu可以抑制荷瘤小鼠术后复发转移，机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR的信号通路，下调内质网应激，改善肿瘤免疫抑制微环境有关。     

加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤及T细胞免疫调节作用

目的 探讨加味当归贝母苦参丸对H22肝癌荷瘤小鼠抑瘤及T细胞免疫调节作用,为加味当归贝母苦参丸联合免疫检查点抗体治疗肝癌提供依据。方法 建立H22肝癌荷瘤小鼠模型,随机分为模型组、顺铂组、加味当归贝母苦参丸低、中、高剂量组（4、8、16 g·kg^-1·d^-1）,连续给药14 d,第15天处死小鼠。给药第0、4、8、12、15天测量肿瘤体积;称取瘤重、计算胸腺指数和脾指数;将脾脏淋巴细胞与H22肝癌细胞共培养,细胞增殖与活性检测（CCK-8）法检测肿瘤细胞增殖抑制率;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测脾脏和肿瘤组织中程序性细胞死亡蛋白-1（PD-1）、淋巴细胞活化基因-3（LAG-3） mRNA的表达情况;免疫组织化学法（IHC）检测脾脏和肿瘤组织中CD4⁺、CD8⁺ T细胞数量及PD-1、LAG-3蛋白的表达情况。结果 给药后第8天,各给药组肿瘤体积较模型组均有不同程度下降,第15天肿瘤体积和瘤重均较模型组显著降低（P<0.01）,其中顺铂组下降最为明显。与模型组、顺铂组比较,加味当归贝母苦参丸中、高剂量组胸腺指数显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各用药组脾脏指数均明显升高（P<0.05,P<0.01）,其中顺铂组升高最为显著;与模型组、顺铂组比较,加味当归贝母苦参丸各组脾脏、肿瘤组织中CD4⁺、CD8⁺ T细胞数量和肿瘤细胞杀伤率均显著增高（P<0.01）,LAG-3 mRNA和蛋白表达均明显降低（P<0.05,P<0.01）;加味当归贝母苦参丸高剂量组肿瘤组织中PD-1 mRNA表达较模型组、顺铂组显著降低（P<0.01）。结论 加味当归贝母苦参丸可能通过下调LAG-3表达,促进H22肝癌荷瘤小鼠CD4⁺、CD8⁺ T细胞的增殖并向肿瘤微环境浸润,从而改善T细胞免疫活性、抑制肿瘤生长,为加味当归贝母苦参丸与免疫检查点抗体联用治疗肝癌提供实验依据。     

酸枣仁汤通过抑制神经炎症和改善神经营养水平促进APP/PS1痴呆小鼠海马神经发生＊

目的 观察酸枣仁汤对APP/PS1痴呆小鼠海马促炎性因子和神经营养因子的影响，并探讨其改善神经发生的可能机制。方法 32只APP/PS1小鼠随机分为模型组（Model，20 mL·kg^-1）、多奈哌齐组（Donepezil，0.92 mg·kg^-1）、酸枣仁汤低剂量组（L-SZRD，12.96 g·kg^-1）和酸枣仁汤高剂量组（H-SZRD， 25.92 g·kg^-1），8只相同月龄和相同品系的C57BL/6JNju小鼠设为空白组（Control，20 mL·kg^-1）。灌胃30天后，采用HE染色观察小鼠海马病理形态变化，采用免疫荧光（IF）对小鼠海马中5-溴脱氧尿苷（BrdU）、肾上腺皮质激素（DCX）、神经元核抗原（NeuN）进行标记，采用免疫印迹（Western blot）检测各组小鼠海马中肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白细胞介素1β（Interleukin-1β，IL-1β）、白细胞介素6（Interleukin-6，IL-6）、c-fos、表皮细胞生长因子（Epidermal growth factor，EGF）、血管内皮生长因子（Vascular endothelial growth factor，VEGF）、脑源性神经营养因子（Brain derived neurotrophic factor，BDNF）的蛋白表达水平。结果 Control组小鼠海马CA3区和DG区细胞排列整齐，细胞染色均匀，细胞数量较多且细胞连接紧密。Model组小鼠海马CA3区和DG区细胞排列欠整齐，细胞核固缩明显，细胞数量明显减少。Donepezil组、L-SZRD组和H-SZRD组小鼠海马CA3区和DG区细胞排列稍整齐，细胞核固缩减少，细胞数量有所增加。与Control组比较，Model组小鼠海马DG区BrdU、DCX、NeuN标记的阳性细胞数明显减少（P < 0.01），与Model组比较，Donepezil组、L-SZRD组和H-SZRD组小鼠海马DG区BrdU、DCX、NeuN标记的阳性细胞数增加（P < 0.01，P < 0.05）。与Control组比较，Model组小鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、c-fos的蛋白表达水平明显升高（P < 0.01），而EGF、VEGF、BDNF的蛋白表达水平明显下降（P < 0.01），与Model组比较，Donepezil组、L-SZRD组和H-SZRD组小鼠海马中TNF-α、IL-1β、IL-6、c-fos的蛋白表达水平降低（P < 0.01，P < 0.05），而EGF、VEGF、BDNF的蛋白表达水平升高（P < 0.01，P < 0.05）。结论 酸枣仁汤可通过抑制神经炎症和改善神经营养促进APP/PS1痴呆小鼠海马神经发生。     

解毒通络调肝方干预TGR5/cAMP信号通路靶向NLRP3炎症小体保护胰岛β细胞的作用机制

目的 探讨解毒通络调肝方通过胆汁酸G蛋白偶联受体5（TGR5）/环状磷酸腺苷（cAMP）信号通路靶向NOD样受体蛋白3（NLRP3）炎症小体保护胰岛β细胞的干预作用。方法 选用32只SPF级雄性db/db小鼠随机分为模型组、解毒通络调肝方低、高剂量组（3.6、7.2 g·kg^-1）、二甲双胍组（0.2 g·kg^-1）,8只db/m小鼠作为空白组,药物干预8周,每2周检测各组小鼠空腹血糖（FBG）,并在末次给药后,进行口服糖耐量实验（OGTT）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测空腹胰岛素（FINS）并计算β细胞功能稳态指数（HOMA-β）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-1β水平。苏木素-伊红（HE）染色观察小鼠胰腺组织病理学改变,免疫荧光测定小鼠胰腺组织胰岛素（Insulin）的表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测TGR5/cAMP信号通路和NLRP3炎症小体关键靶点的蛋白、mRNA的表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠FBG、OGTT、FINS、IL-6、TNF-α和IL-1β显著升高（P<0.01）;与模型组比较,药物治疗6周后,解毒通络调肝方组和二甲双胍组的FBG水平显著下降（P<0.01）;OGTT实验结果表明,与模型组比较,各给药小组小鼠各时间点的血糖均有降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组FINS、TNF-α和IL-6水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组IL-1β水平显著降低（P<0.01）。胰腺病理显示模型组小鼠的胰岛形状不规则,分布不均匀,有萎缩的征象,解毒通络调肝方干预后,其细胞计数增加,边界更清晰;免疫荧光结果表示,空白组小鼠的胰岛细胞排列有序,形态饱满,伴有适当的胰岛素分泌,而模型组胰岛细胞形态扭曲,结构萎缩,胰岛素分泌变少,解毒通络调肝方各剂量组和二甲双胍组小鼠的胰岛素含量显著增加。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白（ASC）、胱天蛋白酶-1（Caspase-1） mRNA表达显著升高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组促进了TGR5和cAMP mRNA的上调,并下调了NLRP3、ASC和Caspase-1的mRNA表达（P<0.05,P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠TGR5蛋白表达显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组TGR5蛋白显著升高（P<0.01）。与空白组比较,模型组NLRP3、Caspase-1、ASC蛋白表达显著增高（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方各剂量组、二甲双胍组Caspase-1、ASC蛋白表达显著降低（P<0.01）,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组NLRP3蛋白表达显著降低（P<0.01）。与空白组比较,模型组小鼠胰腺组织中cAMP含量显著降低（P<0.01）;与模型组比较,解毒通络调肝方高剂量组和二甲双胍组小鼠cAMP含量明显升高（P<0.05,P<0.01）。结论 解毒通络调肝方保护db/db小鼠的胰岛β细胞,其作用机制可能与调节TGR5/cAMP信号通路抑制NLRP3炎症小体有关。     

二妙散对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎中Th17/Treg细胞分化的影响

目的 观察古代经典名方二妙散（EMS）对DBA/1小鼠胶原诱导型关节炎（CIA）中辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）分化的影响。方法 按体质量将20只DBA/1小鼠随机分为正常组、CIA组,EMS（5.4 g·kg^-1）组及甲氨蝶呤（MTX,0.5 mg·kg^-1）组。CIA组、EMS组及MTX组在第1天以等体积牛Ⅱ型胶原和完全弗氏佐剂免疫DBA/1小鼠,于第21天以等体积牛Ⅱ型胶原和不完全弗氏佐剂于尾根部有别于第1次免疫部位免疫DBA/1小鼠建立CIA模型（此为第2次免疫）,并于第2次免疫当天开始灌胃给药,除MTX为每周3次外,其余每天1次,共给药28 d。第22天开始观察CIA小鼠的关节红肿等症状并进行关节炎评分,第49天取材后,采用苏木素-伊红（HE）染色观察CIA小鼠关节滑膜炎症的情况;免疫荧光（IF）双标法检测CIA小鼠关节中CD4⁺T细胞中Th17细胞标志物白细胞介素-17（IL-17）和Treg细胞标志物叉头框转录因子P3（FoxP3）在关节滑膜中的表达情况;流式细胞术检测小鼠脾脏及淋巴结中Th17和Treg的细胞比例情况。结果 与正常组比较,CIA组小鼠关节滑膜炎症情况明显,小鼠关节结构严重紊乱,关节软骨及骨破坏明显,骨侵蚀严重（P<0.01）;小鼠关节组织中Th17/Treg值显著升高（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结中Th17的细胞表达比例显著增高（P<0.01）,Treg细胞表达比例显著减少（P<0.01）;与CIA组比较,EMS组和MTX组两组小鼠关节结构均相对正常,骨侵蚀、骨破坏较轻,关节面相对完整光滑;EMS组和MTX组两组中Th17/Treg值显著降低（P<0.01）;小鼠脾脏及淋巴结组织中,EMS组、MTX组Th17细胞表达比例显著降低（P<0.01）,Treg细胞的表达比例显著增加（P<0.01）。结论 EMS通过调节Th17/Treg平衡,抑制CIA小鼠中Th17细胞的表达,促进Treg细胞的表达,进而治疗RA。     

加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠耐药相关基因及IL-7介导的Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的 通过建立气阴两虚型Lewis肺癌小鼠模型,观察加味龟鹿二仙胶汤联合顺铂对Lewis肺癌小鼠免疫功能、耐药相关基因及白细胞介素-7（IL-7）介导的Wnt/β-连环蛋白（β-catenin）信号通路的影响,阐明加味龟鹿二仙胶汤的抗癌机制,为其临床应用提供依据。方法 建立气阴两虚型Lewis肺癌小鼠模型,分为正常组（不造模）,模型组（等体积生理盐水）,顺铂组（顺铂,2 mg·kg^-1）,中药组（加味龟鹿二仙胶汤,19.63 g·kg^-1·d^-1）,联合组（加味龟鹿二仙胶汤,19.63 g·kg^-1·d^-1+顺铂,2 mg·kg^-1）,每组10只,分别给药,干预21 d。观察小鼠一般情况、脏器指数,计算抑瘤率,流式细胞仪检测CD4⁺CD25⁺调节性T细胞（CD4⁺ CD25⁺Treg）,酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测血清中细胞因子水平IL-7,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测肿瘤组织中耐药相关基因P-糖蛋白（P-gp）,多药耐药相关蛋白1（MRP1）mRNA的表达水平,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测肿瘤组织中Wnt/β-catenin信号通路蛋白表达。结果 与模型组比较,中药组及联合组摄食量增加,精神状态较好,反应灵敏,体质量增加。与顺铂组比较,联合组胸腺指数、脾脏指数显著升高（P<0.01）,联合组抑瘤率明显升高（P<0.01）。与顺铂组比较,中药组、联合组CD4⁺ CD25⁺Treg /CD4⁺明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药组、联合组IL-7水平显著升高（P<0.01）。与顺铂组比较,中药组、联合组P-gp,MRP1 mRNA表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,中药组、联合组Wnt1,β-catenin蛋白表达显著降低（P<0.01）。结论 加味龟鹿二仙胶汤与顺铂联用可明显抑制Lewis肺癌小鼠体内肿瘤的生长,其作用机制可能与其能够解除机体免疫抑制状态,促进机体产生IL-7,调节IL-7介导的Wnt/β-catenin信号通路,减少肺癌组织中耐药相关基因的表达有关。     

补肾化痰方对去势骨质疏松模型大鼠Th17/Treg平衡机制的影响

目的 研究补肾化痰方在防治绝经后骨质疏松症中对免疫T细胞亚群辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）平衡的影响。方法 6月龄SD雌性大鼠60只,按随机数字表分为假手术组,模型组,戊酸雌二醇组（0.184 mg·kg^-1）,补肾化痰方低、中、高剂量组（4.7,9.4,18.8 g·kg^-1）,除假手术组外,其他组均采用手术切除卵巢,制作绝经后骨质疏松症模型。术后1周灌胃给药,模型组和假手术组以等体积的生理盐水灌胃,1次/d,灌胃12周后取材。运用微计算机断层扫描技术（Micro CT）检测大鼠骨量及骨微结构;采用酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清中叉头框蛋白p3（Foxp3）,维甲酸相关核孤受体γt（RORγt）含量;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测骨组织中Foxp3,RORγt mRNA表达,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测骨组织中Foxp3,RORγt蛋白表达量;运用流式细胞抗原检测,分析并比较各组Th17,Treg细胞的数量。结果 与假手术组比较,模型组大鼠骨量降低、骨小梁显著减少（P<0.01）;骨微结构破坏,血清中Foxp3浓度显著降低,RORγt浓度显著升高（P<0.01）,骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达降低,RORγt mRNA及蛋白表达显著升高（P<0.01）,骨组织中Treg细胞数量减少（P<0.01）,Th17细胞数量增加,且Th17/Treg值显著升高（P<0.01）;与模型组比较,各给药组骨量明显增加（P<0.05,P<0.01）,血清中Foxp3浓度升高,RORγt浓度显著降低（P<0.01）,骨组织中Foxp3 mRNA及蛋白表达明显升高（P<0.05,P<0.01）,但低剂量组mRNA差异无统计学意义,RORγt mRNA及蛋白表达明显降低（P<0.05,P<0.01）,骨组织中Treg细胞数明显升高,Th17细胞数量明显降低（P<0.05,P<0.01）,且Th17/Treg显著降低（P<0.01）。结论 补肾化痰方可以提高去卵巢大鼠骨量,改善骨微结构,并使骨组织中Treg细胞数量增加而Th17细胞数量减少。进而推论补肾化痰方可能通过调节Th17/Treg平衡,而发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。     

温经通络汤对膝骨关节炎模型小鼠VEGF/VEGFR2/ERK1/2信号通路的影响

目的 探讨温经通络汤改善膝骨关节炎关节（KOA）软骨缺损,延缓关节退变的可能作用机制。方法 采用前交叉韧带切除术（ACLT法）建立KOA模型,实验分为假手术组、模型组、温经通络汤组（高、低剂量）和阳性药组。造模4周后中药组分别予以高、低剂量（80,20 g·kg^-1）的温经通络汤灌胃;阳性药组予以硫酸氨基葡萄糖胶囊（0.29 g·kg^-1）;假手术组与模型组均予等体积生理盐水灌胃。连续干预4周后苏木素-伊红（HE）染色观察软骨组织形态学变化并进行Mankin''s评分;蛋白免疫印迹法（Western blot）和实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测血管内皮生长因子A（VEGFA）,血管内皮生长因子受体2（VEGFR2）,细胞外调节蛋白激酶1/2（ERK1/2）和血小板反应蛋白解整合素金属肽酶4（ADAMTS4）蛋白和mRNA的表达。结果 HE染色结果显示与假手术组比较,模型组小鼠Mankin''s评分显著升高（P<0.01）;与模型组比较,药物组均能明显改善造模引起的关节软骨面缺损,Mankin''s评分均有显著降低（P<0.01）,但各给药组间差异无有统计学意义。与假手术组比较,模型组VEGFA,VEGFR2,ERK1/2和ADAMTS4蛋白和mRNA的表达显著升高（P<0.01）。与模型组比较,各给药组可以显著抑制VEGFA和ERK1/2的蛋白表达（P<0.01）,硫酸氨基葡萄糖胶囊组效果要优于温经通络汤低剂量组（P<0.05）,但弱于温经通络汤高剂量组（P<0.01）;硫酸氨基葡萄糖胶囊组可以抑制VEGFR2和ADAMTS4的蛋白表达,作用与温经通络汤低剂量组相当,作用均弱于温经通络汤高剂量组（P<0.05）。结论 温经通络汤可以改善KOA小鼠关节软骨损伤,其作用机制可能与VEGF/VEGFR2/ERK1/2信号通路有关。     

基于Notch1-Jagged1通路探讨鹿鹅鼻炎方对变应性鼻炎小鼠Th17/Treg的影响

目的 探讨鹿鹅鼻炎方对变应性鼻炎（AR）小鼠Notch1-Jagged1通路及辅助性T细胞17（Th17）/调节性T细胞（Treg）免疫失衡的影响。方法 将30只BALB/c小鼠随机分为空白组、模型组、鹿鹅鼻炎方低、中、高剂量组,每组6只。以卵清蛋白（OVA）为致敏原诱导建立AR模型小鼠,鹿鹅鼻炎方低、中、高剂量组每天分别给与鹿鹅鼻炎方0.5、1、2 g/kg 灌胃。通过行为学观察评估各组小鼠鼻部症状（打喷嚏、流鼻涕）改变;进行鼻灌洗液（NLF）细胞计数;观察各组小鼠鼻黏膜组织形态学变化并计算嗜酸性粒细胞、杯状细胞和肥大细胞数;采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测各组小鼠血清中OVA特异性IgE（OVA-sIgE）、OVA特异性IgG（OVA-sIgG）水平以及NLF中白细胞介素（IL）-10、IL-17水平;Western Blot检测各组小鼠鼻黏膜中Notch1、Jagged1、视黄酸相关孤儿受体γt（RORγt）及叉头状螺旋转录因子3（Foxp3）蛋白表达。结果 与空白组比较,模型组小鼠可观察到鼻黏膜上皮细胞显著增生和化生,纤毛脱落不完整,黏膜下层血管扩张明显,出现以嗜酸性细胞为主的炎性细胞浸润;经鹿鹅鼻炎方干预后,黏膜上皮损伤好转。与空白组比较,模型组小鼠末次滴鼻激发后10 min内喷嚏和抓鼻次数、鼻黏膜上皮厚度、嗜酸性粒细胞数、杯状细胞数、肥大细胞数、血清OVA-sIgE及OVA-sIgG水平、NLF IL-17水平、鼻黏膜RORγt、Notch1、Jagged1蛋白表达增加（P<0.05）,NLF IL-10水平、鼻黏膜Foxp3蛋白表达降低（P<0.05）。与模型组比较,鹿鹅鼻炎方低、中、高剂量组小鼠末次滴鼻激发后10 min内喷嚏和抓鼻次数、鼻黏膜上皮厚度、嗜酸性粒细胞数、血清OVA-sIgE及OVA-sIgG水平、NLF、IL-17水平、鼻黏膜RORγt、Notch1、Jagged1表达降低,鼻黏膜Foxp3表达水平升高（P<0.05）;鹿鹅鼻炎方中、高剂量组鼻黏膜杯状细胞数、鼻黏膜RORγt蛋白表达降低,NLF IL-10水平升高（P<0.05）;鹿鹅鼻炎方高剂量组鼻黏膜肥大细胞数降低（P<0.05）。结论 鹿鹅鼻炎方干预AR小鼠的机制可能是通过抑制Notch1-Jagged1表达,恢复Th17/Treg免疫平衡实现的。     

房氏天灸1号对四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤的保护作用＊

目的 探讨房氏天灸1号及其联合复方联苯双酯对大鼠急性肝损伤的保护作用及作用机制，为房氏天灸1号的临床应用提供实验依据。方法 50只SD大鼠随机分成正常对照组、肝损伤模型组、复方联苯双酯组、天灸组及天灸联合复方联苯双酯组，通过腹腔注射四氯化碳建立大鼠急性肝损伤模型，天灸及给药48 h后，采血、取肝，计算肝体比，制备肝组织匀浆和肝组织切片，ELISA法检测肝匀浆液中MDA、GSH含量和SOD活力及血清ALT、AST、ALP、IL-6和TNF-α含量，显微镜下观察肝组织病理变化。结果 与正常对照组比较，肝损伤模型大鼠肝体比增大，肝细胞水肿和坏死严重，炎症细胞浸润明显，肝组织匀浆中MDA含量增加、GSH含量和SOD活力降低，血清ALT、AST、ALP及TNF-α和IL-6水平升高（P < 0.05或P < 0.01）；与肝损伤模型组比较，给药组的大鼠肝组织MDA含量降低，GSH含量和SOD活力升高，血清ALT、AST、ALP及TNF-α、IL-6水平降低，尤以天灸联合复方联苯双酯组最为明显。结论 房氏天灸1号对于四氯化碳诱导的大鼠急性肝损伤具有保护作用，与复方联苯双酯联合应用疗效更佳，其作用机制可能与增强机体抗氧化能力、减少TNF-α和IL-6等炎症因子有关。     

从NSCs关键调控基因Neurogenin1初探益肾化浊方改善阿尔茨海默病模型大鼠海马区学习记忆能力的作用机制研究

[目的]观察益肾化浊方对阿尔茨海默病(AD)模型大鼠海马区Neurogenin1(ngn1)基因、GFAP和Tubulin蛋白表达的影响,初探益肾化浊方改善AD模型大鼠学习记忆能力的作用机制。[方法]雄性SD大鼠随机分为5组,即假手术组、模型组、益肾化浊方低、中、高剂量组。治疗组给予益肾化浊方低、中、高剂量分别为2.8、5.6、11.2 g/kg,1次/日,共灌胃4周。采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测海马区ngn1基因表达,蛋白质印迹法检测GFAP和Tubulin蛋白表达的变化。[结果]与假手术组比较,模型组大鼠海马区ngn1基因表达下降,GFAP蛋白表达增加,Tubulin蛋白表达显著下降,差异均具有统计学意义(P0.05);与模型组相比,益肾化浊方低、中、高剂量组大鼠海马区ngn1基因表达升高,GFAP蛋白表达减少,Tubulin蛋白表达显著升高。[结论]益肾化浊方可能通过增加AD模型大鼠海马区ngn1基因表达,促进神经元再生,进而改善其学习记忆功能。     

镇肝熄风汤对帕金森病大鼠易激惹程度和结膜充血及NQO-1,TH的影响

目的:观察镇肝熄风汤对帕金森病肝大鼠易激惹程度和结膜充血的影响及可能机制。方法:将105只Wistar大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,司来吉兰组(0.9 mg·kg~(-1)·d~(-1)),镇肝熄风汤低、中、高剂量组(8,16,32 g·kg~(-1)·d~(-1)),每组15只。采用附子汤ig联合6-羟基多巴胺单侧损毁黑质法复制帕金森病肝阳上亢型病证结合大鼠模型,灌胃4周。蛋白质免疫印迹(Western blot)及实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测酪氨酸羟化酶(TH)和醌氧化还原酶-1(NQO-1)蛋白和mRNA表达。结果:与假手术组比较,帕金森病肝阳上亢证模型大鼠易激惹程度和结膜充血显著升高,中脑组织NQO-1蛋白和mRNA表达增加,而TH蛋白表达明显降低(P0.05)。与帕金森病肝阳上亢证模型组比较,镇肝熄风汤组大鼠易激惹程度和结膜充血显著降低,TH蛋白表达显著增加,NQO-1蛋白和mRNA表达均明显增加(P0.05),而司来吉兰组大鼠易激惹程度、结膜充血和中脑组织NQO-1蛋白表达无显著性差异。结论:镇肝熄风汤能显著改善帕金森病肝阳上亢证模型大鼠易激惹程度和结膜充血,其机制可能与上调大鼠中脑组织TH和NQO-1分子表达有关。     

Panaxatriol saponins extracted from Panax notoginseng induces thioredoxin-1 and prevents 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced neurotoxicity

Aim of the study

Thioredoxin-1 has various biologic activities, including the control of redox balance and the inhibition of apoptosis. The current study was designed to examine the effects of panaxatriol saponins (PTS) extracted from Panax notoginseng on thioredoxin-1 expression and 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced injury.

Materials and methods

Using PC12 cells and Kunming mice, we test thioredoxin-1 expression after PTS treatment by Western blot. The protective effect of PTS against 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced injury was assessed by MTT assay and LDH release assay.

Results

PTS induced thioredoxin-1 expression in vitro and in vivo, and attenuated 1-methyl-4-phenylpyridinium ion-induced cell death of PC12 cells.

Conclusions

PTS is a new inducer of thioredoxin-1 and has a possible potential as a therapeutic agent for neurodegenerative diseases including Parkinson's disease.     

有机阴离子转运多肽1B1的研究进展

 目的介绍有机阴离子转运多肽1B1(OATP1B1)的研究进展。方法查阅国外有关文献,并对其进行分析、归纳和总结。结果OATP1B1存在遗传多态性,且不同等位基因所表达的OATP1B1的转运能力具有显著性差异,进而会对多种药物的药动学及药效学产生影响;OATP1B1还与药物不良反应及药物相互作用有关。结论基于OATP1B1对药物体内过程的重要作用,关注OATP1B1遗传多态性对药动学、药效学的影响,及其与不良反应及药物相互作用的关系具有一定临床意义。     

Ferulic acid reinstates mitochondrial dynamics through PGC1α expression modulation in 6‐hydroxydopamine lesioned rats

Disruption of the tightly regulated mitochondrial dynamics and energy homeostasis leads to oxidative stress and apoptotic cell death, as observed in neurodegenerative disorders such as Parkinson's disease (PD). Polyphenolic plant derivatives have been shown to alleviate such pathological features and have been used in models of neurodegenerative disorders in previous reports. In the current study, we utilized a 6‐hydroxydopamine (6‐OHDA) lesioned rat model of PD to explore the protective efficacy of polyphenolic phytochemical ferulic acid (FA) against mitochondrial dysfunction and explored its effect on gene and protein expression of mitochondrial dynamics regulators dynamin‐related protein 1 (Drp1)/mitofusin 2 (Mfn2) in lesioned animals. We also evaluated its effect on expression of mitochondrial biogenesis regulator PGC1α and apoptotic regulators BAX, cyt c, p53, and cleaved PARP. We found that oral FA supplementation alleviated 6‐OHDA induced oxidative stress, DNA fragmentation, morphological changes, and blocked apoptotic cascade. FA also reduced mitochondrial Drp1 expression and increased gene and protein expression of PGC1α, thereby regulating expression of its downstream target Mfn2 and restoring mitochondrial dynamics in lesioned animals. Our data suggest that targeting mitochondrial dynamics through modulation of PGC1α can prove to be a potent preventive strategy against PD pathology.     

Polyprenols mitigate cognitive dysfunction and neuropathology in the APP/PS1 mouse

Alzheimer's disease (AD) is a very common neurodegenerative disorder in the elderly and brings considerable financial and social problems worldwide. In this study, polyprenols were firstly evaluated the effects on the cognitive deficits and neuropathology in APP/PS1 mice model of AD. At 3 months old, the APP/PS1 mice were divided into model group; polyprenols low, middle, and high dosage group; and positive drug group. Age‐matched wild‐type mice were chosen in control group. The administration by oral gavage lasted 6 months. Polyprenols treatment significantly improved cognitive impairment of double transgenic mice compared with vehicle control treatment in behavioral tests. In addition, immunohistochemistry and enzyme‐linked immunosorbent assay showed that there were significantly reductions in neuritic plaques and the level of hyperphosphorylated tau in brain of polyprenols‐treated mice. Furthermore, we found that polyprenols treatment reduced the apoptotic cells in brain sections of 9‐month‐old APP/PS1 mice. These results reveal that polyprenols exert neuroprotective effects in APP/PS1 mice and could represent an effective treatment for AD.     

八棱丝瓜蛋白1的体外抗HIV-1活性

目的：研究八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。方法：通过实验株HIV-1ⅢB诱导合胞体形成抑制实验、HIV-1ⅢB和临床分离株HIV-1KM018急性感染细胞以及HIV-1ⅢB慢性感染细胞的p24抗原表达抑制实验检测八棱丝瓜蛋白1的抗HIV-1活性。结果：八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB诱导C8166细胞形成合胞体的EC50为0．025μmol·L^-1，治疗指数为76。八棱丝瓜蛋白1抑制HIV-1ⅢB感染C8166和HIV-1KM018感染PBMC的p24抗原表达的EC50分别为0．033和0．207μmol·L^-1。八棱丝瓜蛋白1不抑制HIV-1ⅢB在慢性感染H9细胞中的复制。结论：首次发现八棱丝瓜蛋白1是一种具有抗HIV-1活性的核糖体失活蛋白。     

新型甲型H1N1流感的分期辨证模式研究

目的观察新型甲型H1N1流感患者的证候学特点,阐述其病因病机,总结出符合临床实际的分期辨证模式。方法以卫生部甲型H1N1流感的诊断标准,采用横断面调查方法回顾性分析甲型H1N1流感确诊病例308例,分别按照表证期、里证期和恢复期三个阶段的各自临床症状、体征,以及各期相关证素等进行统计学分析。结果 (1)表证期相对高频的症状、体征有:发热90.25%,疲乏69.16%,咳嗽49.35%,恶寒43.83%,咽痒咽痛43.83%,头晕头痛33.12%,白痰32.14%,流涕29.87%等,咽充血72.08%,扁桃体肿大83.77%。(2)里证期的相对高频的症状、体征有:发热、咳嗽、小便黄、口渴等为100%,心烦、咽痛等为85.71%,纳差、脘痞、疲乏、扁桃体肿大等为71.43%。(3)恢复期相对高频的症状、体征有:疲乏30.52%,纳差、脘痞17.82%,小便黄17.53%,咳嗽10.39%,咽充血15.26%。(4)主要证素特点是,表证期以风热(100%)、气虚(69.16%)和痰湿(46.75%)为主,里证期以郁火(100%)、气虚(71.43%)和痰湿(71.43%)为主,恢复期以正气受损(气虚、阴虚、阳虚)、余邪未净为病机特点。结论新型甲型H1N1流感患者表证期以风热袭表、阳气郁滞为特点,里证期类似于"风温病"的"热郁胸膈证"和"邪热壅肺证"的组合,恢复期以正气受损(气虚、阴虚、阳虚)、余邪未净为病机特点。