应用多重连接依赖性探针扩增技术进行脊髓性肌萎缩症的基因诊断及产前诊断

目的 探讨多重连接依赖性探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术在脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)基因诊断及产前诊断中的应用.方法 选择来自8个SMA家系的患者4例,父母16例,胎儿4例,应用MLPA技术进行分析,对患者同时应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)方法进行分析.结果 对患者的检测,MLPA分析结果与PCR-RFLP检测结果相符,4例患者的运动神经元存活基因(survival motor neuron gene,SMN)1的第7和第8外显子均为纯合缺失.除家系1、4母亲的SMN1基因MLPA检测结果与其他家系不同外,其余各家系14名父母均明确诊断为SMN1基因杂合缺失突变携带者.结论 MLPA技术是一种准确可靠的基因定量分析方法 ,适合于SMA患者、携带者的基因诊断及产前诊断.     

一种脊髓性肌萎缩快速简便的基因诊断方法

一种脊髓性肌萎缩快速简便的基因诊断方法王蜴麻宏伟宓真武盈玉赵淑霞吉士俊ＰＣＲ－ＳＳＣＰ分析技术是目前广泛应用的基因变异筛查技术。对脊髓性肌萎缩（ｓｐｉｎａｌｍｕｓｃｕｌａｒａｔｒｏｐｈｙ，ＳＭＡ）的ＳＭＮ（ｓｕｒｖｉｖａｌｍｏｔｏｒｎｅｕｒｏｎ，ＳＭ...     

应用多重连接探针扩增技术行脊髓性肌萎缩症产前诊断的结果分析与遗传咨询指导

目的:对脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy, SMA)家系进行产前诊断,为SMA产前分子诊断提供遗传咨询指导意见。方法:纳入2016年至2019年在本院产前诊断中心就诊的21个家系开展研究,应用多重连接探针扩增(multiplex ligation-dependent probe ampli...     

连云港地区1266例孕妇脊髓性肌萎缩症携带者筛查及产前诊断

目的 对连云港地区1266例孕妇进行脊髓性肌萎缩症（SMA）携带者筛查,统计SMA携带者在本地区人群中的携带率。针对生育SMA患儿的高风险夫妇进行产前诊断,预防SMA出生缺陷。方法 收集2020年1月至2022年6月来我院进行SMA携带者筛查的孕妇共1266例样本,应用荧光定量PCR法检测SMN1基因第7、8号外显子（E7、E8）的拷贝数,筛选SMA携带者。对于双方均为SMA携带者的高风险夫妇,采用多重连接依赖探针扩增技术（MLPA）进行家系验证和产前诊断。结果 1266例孕妇中有25例携带者（E7、E8杂合缺失18例,E7杂合缺失7例）,携带率为1.97%。检出双方均为携带者的夫妇1对,对高风险胎儿进行产前诊断,结果为E7、E8杂合缺失。结论 初步阐明连云港地区SMN1基因突变携带率,可以为遗传咨询及预防出生缺陷工作提供指导,对减少该疾病的发生具有重要的意义。     

婴儿脊髓性进行性肌萎缩症二家系调查

婴儿脊髓性肌萎缩症及少年型家族性进行性脊肌萎缩症均属运动神经元疾病之一，是一种常染色体隐性遗传病，其临床特点是广泛的肌萎缩和弛缓性瘫痪，我们近年来发现两个家系现报道如下。病例与家系家系一：熊氏家系是江西新建县望城岗人，三代共１２人，先证者为第Ⅲ代中两...     

PCR-RFLP法在脊髓性肌萎缩症基因检测中的局限性

目的 探讨聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism,PCR-RFLP)技术在脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)基因诊断中的应用.方法 用PCR-RFLP分析935例临床疑似SMA患儿的运动神经元存活基因1(survival motor neuron,SMN1)第7和第8外显子的缺失,同时用多重连接探针扩增技术(multiplex ligationdependent probe amplification,MLPA)分析其中339例疑似病例的SMN1基因拷贝数改变.用Pearson卡方检验分析两种方法检测SMN1纯合和杂合性缺失的一致性.结果 共发现SMN1基因第7外显子纯合缺失590例,疑似患者的SMA基因诊断率为63.1％(590/935).用PCR-RFLP和MLPA技术联合分析疑似病例339例,PCR-RFLP共发现SMN1纯合缺失194例,MLPA发现196例,二者的一致性为98.9％,差异无统计学意义(x2=0.2,P=0.88).PCR-RFLP仅发现SMN1疑似杂合性缺失4例,而MLPA证实有17例,二者的一致性为23.5％,差异有统计学意义(x2=8.29,P＜0.01).结论 PCR-RFLP尽管简便、特异、实用,但对于5％～10％ SMN1杂合缺失合并点突变的病例则存在明显的局限性.     

云南地区3049名育龄人群脊髓性肌萎缩症携带者筛查结果分析

目的对云南地区3049名育龄人群进行脊髓性肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)的携带者筛查,探讨本地区人群运动神经元存活基因(survival motor neuron,SMN)的拷贝数情况及携带频率。方法应用多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)对SMN1及SMN2基因第7外显子的拷贝数进行检测,筛查出SMN1基因第7外显子拷贝数为1的SMA携带者。对双方均为携带者的夫妇提供产前诊断。结果在3049名育龄人群中,共检测出SMA携带者62例,携带率为1/49(2.03%)。男性携带率为1.91%(40/2094),女性携带率为2.30%(22/955),二者的差异无统计学意义(P>0.05)。SMN1杂合缺失占1.30%(41/3049),由SMN1转换为SMN2者占0.69%(21/3049)。SMN1等位基因的平均拷贝数为1.99。检出双方均为SMA携带者的夫妇2对,通过产前诊断避免了1例患病胎儿的出生。结论云南地区SMA男女携带者的频率无显著差异,符合常染色体隐性遗传模式。阐明SMA携带者的频率和SMN基因的拷贝数情况,可为遗传咨询和产前预防提供依据。     

脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究进展

本文就脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究方面的进展进行了综述。SMN2基因拷贝数、SMN基因mRNA、SMN蛋白、细胞核内gems数、NAIP基因等，均与SMA的临床表型有密切的相关性。目前对于SMA还没有有效的治疗方法。调控SMN2基因表达，促进全长SMN蛋白产生和核内gems数的恢复达到治疗的目的，此为SMA基因治疗的新途径。因此，研究不同表型SMA的分子遗传学机制不仅有助于基因治疗策略的制定，而且有助于在分子水平观察疗效。     

假肥大型肌营养不良症15例家系的基因检测及产前诊断

目的 对15例假肥大型肌营养不良家系进行基因型分析.并为其家庭提供产前分子诊断评估再生育风险.方法 联合多重连接依赖性探针扩增(MLPA)检测和单体型连锁分析分别对15例家系行假肥大型肌营养不良(DMD)的DMD基因诊断.所有产前诊断标本均通过STR位点检测排除母血污染.结果 MLPA检测结果显示,15例先证者中DMD...     

脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究进展

本文就脊髓性肌萎缩临床分型的分子遗传学研究方面的进展进行了综述。SMN2基因拷贝数、SMN基因mRNA、SMN蛋白、细胞核内gems数、NAIP基因等,均与SMA的临床表型有密切的相关性。目前对于SMA还没有有效的治疗方法。调控SMN2基因表达,促进全长SMN蛋白产生和核内gems数的恢复达到治疗的目的,此为SMA基因治疗的新途径。因此,研究不同表型SMA的分子遗传学机制不仅有助于基因治疗策略的制定,而且有助于在分子水平观察疗效。     

假肥大型肌营养不良症家系的基因检测与产前诊断

目的 分析假肥大型肌营养不良症(Duchenne and Becker muscular dystrophy,DMD/BMD)家系的致病突变,对胎儿进行产前诊断,并确定家系中的女性成员是否为突变携带者.方法 收集43个DMD/BMD家系,用多重PCR方法分析DMD基因缺失热点区的18个外显子;用多重连接依赖性探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)方法对43例患者及32个家系中的36位女性进行DMD基因全部79个外显子的定量检测,为其中27个家系提供产前诊断.结果 用多重PCR共检测到26例缺失突变.采用MLPA方法,除多重PCR检测到的突变外,还检测到3例缺失和6例重复突变,突变范围明确.用MLPA检测的36例女性中,32例为患儿母亲,共发现16例突变携带者,另有2名女性亲属也被确诊为携带者.10名女性排除了携带者的可能性,8例不能确定.经产前诊断,18例男性胎儿中3例为患者,9例女性胎儿中1例为携带者.结论 MLPA方法可全面检测DMD基因缺失及重复突变,同时明确女性携带者,从而为产前诊断提供准确信息.     

一例脊肌萎缩症患者及其家系的SMN基因突变分析

目的 对1例脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)患者及其家系成员的SMN基因行突变分析.方法 采用多重连接依赖性探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术、逆转录聚合酶链反应及T克隆-测序技术对患者SMN基因进行拷贝数分析和点突变的鉴定,应用MLPA和针对点突变区域的SMN基因第5外显子PCR-直接测序法对患者父母SMN基因进行拷贝数分析和点突变的证实,同时用200名正常人外周血进行相关位点对照研究.结果 患者具有1个拷贝的SMNl基因和1个拷贝的SMN2基因,在这个SMNl基因第230位密码子上存在1个未见报道的错义突变S230L(TCA→TTA);父亲具有两个SMN1和两个SMN2拷贝,其中1个SMNl基因存在S230L突变;母亲具有1个SMN1拷贝,而SMN2基因是纯合缺失的.200名对照中未发现该位点突变.结论 在1个SMA家系中发现了1个新的SMNI基因点突变,即S230L,并准确分析了此家系各成员的SMN基因型.     

脊髓性肌萎缩症基因诊断研究进展

脊髓性肌萎缩症是一组常染色体隐性遗传病,临床表现为进行性肌无力、肌萎缩,是导致婴儿死亡最常见的疾病之一。脊髓性肌萎缩症的致病基因被定位于染色体5q13．2,此外还发现其他多种基因与其临床表型相关。对该病进行基因诊断可以明确病因,预防患儿出生。此文对该病的最新基因学及基因诊断学进展作一综述。     

MLPA联合遗传连锁分析在假肥大型肌营养不良症产前诊断中的价值

目的 探讨多重连接依赖探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)联合短串联重复序列(short tandem repeat,STR)基因连锁分析用于Duchenne型假肥大型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy,DMD)产前诊断的价值.方法 通过检测Y染色体性别决定基因(Y chromosome sex-determining gene,SR Y)判断胎儿性别;MLPA检测45个DMD家系中先证者、孕妇以及胎儿Dystrophin基因突变情况,并对家系成员和胎儿进行第45、49、50内含子以及5′和3 ′端STR的连锁分析.结果 45个进行产前诊断的家系中,SRY阳性31例,其中6例为DMD患病胎儿;阴性14例,其中4例为携带者,余未见异常.结论 MLPA能检测胎儿Dystrophin基因外显子突变情况,STR连锁能分析胎儿是否继承母源性风险X染色体,因此,STR连锁分析能发现MLPA技术检测不到的外显子突变胎儿.将两种方法结合起来用于DMD的产前诊断准确性更高.     

Mutation analysis and prenatal diagnosis for 50 pedigrees affected with Duchenne/Becker muscular dystrophyCSCD

Objective To establish individualized prenatal diagnosis program for families affected with Duchenne/Becker muscular dystrophy (DMD/BMD) and different clinical background using a variety of methods. Methods Multiplex ligation-dependent probe amplification (MLPA) was performed on 50 patients suspected for DMD/BMD. For single exon deletions of the DMD gene, PCR was used for validating the results. For those without any deletion or duplication, Sanger sequencing was used to screen for DMD gene mutations in the children and their mothers. Prenatal genetic testing was provided to female carriers using chorionic villus, amniocentesis or cord blood samples. To ensure the accuracy of diagnosis, all prenatal specimens were also subjected to linkage analysis. Results Among the 50 patients with DMD/ BMD, 23 harbored large deletions, 11 only had single exon deletions, 10 harbored duplications, and 5 had small scare mutations. No mutation was detected in one family. For 37 women undergoing prenatal diagnosis, 10 fetuses were identified as affected males, 6 were female carriers, while 21 were not found to carry any mutation. Testing of creatine kinase was consistent with the results of prenatal diagnosis. For a patient harboring exon 51 deletion, the same mutation was found in a fetus but not in their mother. The proband and fetus had inherited the same haplotype, which suggested that the mother probably has germline mosaicism for the mutation. Conclusion Application of individualized methods for analyzing pregnant women with different clinical background can minimize the risk for giving birth to further children affected with DMD/BMD. © 2018 West China University of Medical Sciences. All rights reserved.     

单细胞遗传学诊断脊肌萎缩症的实验室研究

目的 试图建立一种准确、可靠的单细胞诊断脊肌萎缩症（spinal muscular atrophy，SMA）的方法，以用于SMA的临床胚胎植入前遗传学诊断（preimplantation genetic diagnosis，PGD）。方法 以不同基因型的单个淋巴细胞为研究对象，采用了二重巢式PCR同时扩增SMN基因外显子7（包括内含子7）、外显子8其产物经多重引物延伸-DHPLC法检测的诊断SMA方法。结果在对200个各种基因型单细胞的检测实验中，新PGD诊断方法的PCR总扩增率达97％，SMN1基因外显子7、8同时扩增率为92％，各位点的扩增率为90％-98％；设立的加个空白对照没有一个扩增阳性，所有SMN1基因纯合缺失的标本没有一例SMN1基因外显子7或8扩增阳性；各位点的准确诊断率（即为准确分型率）为90％一97％；二个位点的同时准确诊断率在正常组、携带组、患病组分别为92％、88％、94％，平均为92％；所有操作步骤约需8h完成。结论 新建立的单细胞诊断SMA方法是一种准确、可靠、快速、敏感的方法，可直接应用于临床对有生育sMA患儿风险的夫妇行PGD，以获得健康婴儿。