半乳糖结合位点封闭免疫毒素的研制及其杀伤活性

作者报道B链半乳糖结合位点封闭的蓖麻毒素-胃癌单克隆抗体MGb_2结合物的制备及其细胞毒特征。首先将引入碘乙酰基团的毒素与引入巯基的抗体反应,得到的结合物通过琼脂糖亲和层析柱除去仍保留半乳糖结合能力的部分。细胞毒性试验结果表明,结合物对肿瘤靶细胞具有较强的选择性杀伤作用,在1.0×10~(-11)mol/L水平,对人胃癌细胞KATOⅢ的杀伤率为46％,优于MGb_2-蓖麻毒素A链结台物(12％),而对非靶细胞作用很弱,在1.0×10~(-9)mol/L水平对正常人胚肺细胞SL_7杀伤率仅为42％,无需半乳糖拮抗。     

胃癌单克隆抗体-蓖麻毒素A链结合物的制备及其对肿瘤靶细胞的杀伤作用

作者报道胃癌McAb MGb_2(本室制备)与蓖麻毒素A链(RTA)交联物的制备。交联物对胃癌细胞具有强大的选择性杀伤怍用,胃癌McAbMGb_2对RAT具有导向能力。     

免疫毒素EGF-TCSredlk的表达及其活性测定

目的 表达新型免疫毒素EGF-TCSredlk,并进行抗人胃癌细胞活性的初步测定.方法 利用大肠杆菌系统表达抗胃癌重组免疫毒素EGF-TCSredlk,表达产物经Ni-NTA Agrose亲和层析柱纯化并进行特异性杀伤活性检测.结果 该新型免疫毒素以可溶性形式表达于大肠杆菌培养上清中,并获得有效纯化,应用四甲基偶氮唑盐...     

含天花粉蛋白的抗人大肠癌免疫毒素制备及其细胞毒性研究

用异型双功能连接剂ＳＰＤＰ，将核糖体抑制蛋白一天花粉蛋白（ＴＣＳ）共价连接在单克隆抗体ＮＤ－１上，制成免疫毒素，此单抗与人大肠癌细胞表面抗原一大分子表面抗原（ＬＥＡ）有高度亲合能力。连接物ＮＤ－１－ＴＣＳ用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－１５０分子筛层析纯化。间接免疫荧光试验结果表明，ＮＤ－１－ＴＣＳ保留了较高的抗体活性。体外细胞毒性试验表明，ＮＤ－１－ＴＣＳ对人大肠癌细胞ＣＸ－１的ＩＣ＿（５０）。为０．３６μｇ／ｍｌ．细胞毒性ＮＤ－１和ＴＣＳ混合物高１０倍。ＮＤ－１－ＴＣＳ对人大肠癌细胞的细胞毒性比非抗原携带细胞ＳＰ＿（２／０）高６０倍。此免疫毒素在人大肠癌的治疗方面有应用前景。     

RTA—RA3是B220特异性的有潜力的抗自身免疫的免疫毒素

将抗B220单克隆抗体分泌克隆RA3注射至SCID小鼠腹腔以获取腹水，抗体经proteinA亲和层析柱提纯，再经SPDP双功能交联剂修饰后，与还原的去糖基蓖麻毒蛋白A链反应生成免疫毒素RTA-RA3．SephadexG150柱层析分离纯化此免疫毒素，在还原状态下可见到免疫球蛋白重链、轻链及另一条带RTA．免疫毒素体内注射，研究MRL/＋和MRL/lpr小鼠脾细胞的淋巴细胞标志．实验表明：RTA－RA3对脾B220＋细胞有显著抑制作用．提示这一免疫毒素可用于治疗自身免疫性疾病。     

抗胃癌细胞单克隆抗体的制备

作者用新鲜胃癌组织匀浆免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗胃癌细胞单克隆抗体，一次融合率为９２．８％，获得分泌特异性ＭｃＡｂ杂交瘤细胞１５株，阳性率１３．２％，三次克隆纯化后阳性率１００％，在体外培养１５０余天，分泌能力稳定，选择ＱＹ－１，ＱＹ－２，ＱＹ－３，ＱＹ－４４株ＭｃＡｂ进行鉴定，４株ＭｃＡｂ对正常纤维组织、红细胞等呈阴性反应，而对胚胎的消化道上皮均呈阳性反应，ＱＹ－１￣４ＭｃＡｂ的胃癌反应阳性率     

柔红霉素-抗胃癌单克隆抗体结合物的制备及其对肿瘤细胞的杀伤作用

作者将胃癌McAb MG11与柔红霉素交联,提高其对肿瘤细胞的选择性,从而改变柔红霉素体内的自然分布状态。经体外初步观察,制成的交联物对胃癌细胞具有较强的选择性杀伤作用。 首先用等量的乌头酸酐处理柔红霉素得到柔红霉素衍生物,通过酸沉淀法将柔红霉素衍生物     

抗胃癌细胞单克隆抗体的制备

作者用新鲜胃癌组织匀浆免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，制备抗胃癌细胞单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。一次融合率为９２．８％，获得分泌特异性ＭｃＡｂ杂交瘤细胞１５株，阳性率１３．２％，三次克隆纯化后阳性率１００％，在体外培养１５０余天，分泌能力稳定。选择ＱＹ－１，ＱＹ－２，ＱＹ－３，ＱＹ－４４株ＭｃＡｂ进行鉴定。４株ＭｃＡｂ对正常纤维组织、红细胞等呈阴性反应，而对胚胎的消化道上皮均呈强阳性反应，ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ的胃癌反应阳性率为９４．６～１００％，肝癌３３．３～６０．０％，大肠癌为５．０～３５．０％，萎缩性胃炎不伴肠化型为０％，伴肠化型为０～１５．０％。本文结果表明ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ相应抗原为非ＣＥＡ、ＡＦＰ成份的消化道肿瘤抗原，ＱＹ－１～４ＭｃＡｂ具有较高的肿瘤特异性。     

免疫毒素BDI—1—PEA的构建及其活性测定

目的 构建新型免疫毒素BDI-1-PEA,并进行抗入膀胱肿瘤活性的初步研究测定。方法 应用异型双功能连接剂N-琥珀酰胺酯3-（2-吡啶基二硫）丙酸（SPDP）将抗人膀胱肿瘤单克隆抗体（BDI-1）与铜绿假单胞菌外毒素（PEA）交联,制备出新型免疫毒素BDI-1-PEA。应用四甲基偶氮唑盐（MTT）法初步检测其对人膀胱肿瘤细胞系E-J的选择性杀伤活性。结果 BDI-1-PEA结合物具有高效靶向杀伤膀胱肿瘤细胞的能力,优于游离PEA或BDI-1的混合物。结论 新型免疫毒素BDI-1-PEA有较高的选择性抗人膀胱肿瘤细胞的活性,有较高的研究的应用价值。     

人类肿瘤相关蛋白hyrdC的原核表达、抗体制备及其在胃癌中的初步检测

目的:制备原核表达的hyrdC纯化蛋白及相应单克隆抗体,并以该抗体初步检测胃癌中hyrdC蛋白的表达.方法:用RT-PCR方法获取人hyrdC基因序列,插入原核表达载体pET32a构建重组质粒,纯化得到TRX-hyrdC融合蛋白,将其作为抗原免疫BALB/c小鼠,按常规方法制备抗hyrdC单克隆抗体,以ELISA、Western印迹法筛选及鉴定;采用免疫组织化学法(SP法)比较胃癌组织及瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平的差异.结果:测序结果显示克隆的hyrdC ORF与GenBank中登录的序列一致.所获TRX-hyrdC融合蛋白相对分子质量与理论计算值相符,获得2株分泌抗hyrdC单克隆抗体的细胞株;Western印迹法显示该抗体能特异性地结合人hyrdC蛋白;SP法测定显示,hyrdC蛋白在胃癌组织中表达明显高于正常胃组织(P＜0.001).结论:成功制备了抗hyrdC单克隆抗体;SP法测定胃癌组织与瘤旁正常组织中hyrdC抗体水平有显著差异.     

食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体的制备及其特性的初步鉴定

目的 制备抗原食管癌细胞核仁抗原单克隆抗体，用于寻找肿瘤的标志物和癌的病理诊断。方法 以食管癌组织核基质为抗原，采用足垫法免疫Ｂａｌｂ／ｃ小鼠，运用杂交瘤技术建立分泌特异性单抗的杂交瘤细胞株，制备食管癌细胞抗原片和食管癌冰冻切片，采用免疫组化检测并采用蛋白印迹法分析，鉴定是否为特异性单克隆抗体。结果 获得一细胞株能稳定分泌抗体的杂交瘤细胞株，１－７／Ｅ能与食管癌细胞和其他１０种癌细胞的核仁反应，不     

抗肠型胃癌单克隆抗体的制备及意义

制备2S株McAb(MGc1及MGd1),免疫组化染色能分别与82.4％和81.0％的胃癌发生阳性反应。其中MGd1在肠型胃癌的阳性率为92.9％,强阳性率84.6％,在胃型胃癌分别为57.1％和25.0％。MGd1在肠型胃癌的强阳性率较胃型胃癌高(P<0.05)。用MGd1和/或MGc1对胃癌作免疫组化分型,有可能弥补病型形态学分型的某些不足。     

影响免疫毒素杀瘤作用因素初探

免疫毒素对恶性肿瘤细胞的杀伤力受很多因素的影响。本文报道温度、药物作用时间及化疗药物对半乳糖结合点封闭式免疫毒素体外杀伤力的影响。结果表明:37℃、39℃或41℃水浴1小时,再培养47小时,温度对结合物杀伤力的影响很小(P>0.05),结合物的杀伤力与药物作用时间有关,37℃,10~(-9)mol/L 浓度时,24小时、48小时及72小时的杀伤率分别为17.2%、50.3%及53.5%,10~(-10)mol/L 浓度时分别为10.6%、16.9%及18.4%;化疗药物阿霉素及丝裂霉素 C 均能使该结合物的杀伤力提高10倍。本文还对温度、药物作用时间及化疗药物影响免疫毒素杀伤力的机制进行了讨论。