小鼠造血干细胞因子基因克隆及在 C H O 细胞中的表达

目的： 克隆造血干细胞因子（ Ｓ Ｃ Ｆ）并在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达。方法： 采用 Ｐ Ｃ Ｒ 方法从ｐ Ｒ Ｃ／ Ｃ Ｍ Ｖ（含 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ）中钓取 Ｓ Ｃ Ｆ ｃ Ｄ Ｎ Ａ 膜外段活性区,克隆入真核表达载体ｐｃ Ｄ Ｎ Ａ３,转染入 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞;用 Ｒ Ｔ－ Ｐ Ｃ Ｒ 方法检测 ｍ Ｒ Ｎ Ａ 水平表达及通过协同刺激骨髓细胞集落形成来检测转染细胞上清的生物活性。结果：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 的 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞可表达 Ｓ Ｃ Ｆｍ Ｒ Ｎ Ａ,其细胞培养上清可协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ刺激骨髓细胞形成集落数比 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 单独作用高 ２ 倍,转染外源基因对细胞周期没有明显影响。结论：转染 Ｓ Ｃ Ｆｃ Ｄ Ｎ Ａ 在 Ｃ Ｈ Ｏ 细胞中表达,转染细胞上清协同 Ｇ Ｍ － Ｃ Ｓ Ｆ 刺激骨髓细胞集落的形成,而本身对集落的形成没有影响。     

CYTOGENETIC STUDY ON BGC-823 HUMAN GAS-TRIC CARCINOMA CELL LINE

ＣＹＴＯＧＥＮＥＴＩＣＳＴＵＤＹＯＮＢＧＣ８２３ＨＵＭＡＮＧＡＳＴＲＩＣＣＡＲＣＩＮＯＭＡＣＥＬＬＬＩＮＥＺｈａｎｇＱｉｎｘｉａｎ１），ＴｉａｎＪｉｎｇｓｈｅｎｇ２），ＬｉＳｈｅｎｄｅ３）１）ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＨｉｓｔｏｌｏｇｙａｎｄＥｍ...     

肿瘤坏死因子辅佐骨肉瘤化疗的体外研究

目的：探讨肿瘤坏死因子（ Ｔ Ｎ Ｆ）及其与阿霉素（ Ａ Ｄ Ｍ ）共同作用对骨肉瘤 Ｏ Ｓ ７３２及耐药模型 Ｒ Ｏ Ｓ ７３２细胞活性的影响。方法：应用阿霉素诱导建立 Ｒ Ｏ Ｓ ７３２,用 Ｍ Ｔ Ｔ 法测定 Ｔ Ｎ Ｆ 及其与 Ａ Ｄ Ｍ 共同作用下 Ｏ Ｓ ７３２及 Ｒ Ｏ Ｓ ７３２细胞的存活率（ Ｃ Ｓ Ｒ）。结果： Ｒ Ｏ Ｓ ７３２细胞表现出明显耐药,对 Ａ Ｄ Ｍ 耐药倍数达３０以上,且耐药表型 Ｐ １７０蛋白、 Ｇ Ｓ Ｔ、 Ｔ Ｏ Ｐ Ｏ Ⅱ呈强阳性表达。 Ｔ Ｈ Ｆ 单独作用,无论是 Ｏ Ｓ ７３２还是 Ｒ Ｏ Ｓ ７３２细胞,在１００ ｋ Ｕ／ｍ ｌ内 Ｃ Ｓ Ｒ 均在１００％ , Ｔ Ｎ Ｆ 与 Ａ Ｄ Ｍ 共同作用后的 Ｃ Ｓ Ｒ 明显低于 Ａ Ｄ Ｍ 单独作用组,在 Ｒ Ｏ Ｓ ７３２细胞更明显（ Ｐ＜ ０００５）。结论：单独应用 Ｔ Ｎ Ｆ在１００ ｋ Ｕ／ｍ ｌ内对骨肉瘤细胞活性无影响,而与 Ａ Ｄ Ｍ 联合应用则明显增加 Ａ Ｄ Ｍ 的抗肿瘤效应,在耐药细胞中表现更为明显。     

抗小鼠Ⅱ—2R单克隆抗体的制备及初步应用

目的：制备抗小鼠白细胞介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体。方法：利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株，并用细胞ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性克隆。结果：得到３株分泌抗小鼠Ⅱ－２ＲＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，其中８Ｃ８对ＣｏｎＡ刺激淋转有抑制作用，且ｓＩＬ－２Ｒ可抑制８Ｃ８与ＩＬ－２Ｒα一细胞的结合。结论：８Ｃ８是抗小鼠ＩＬ－２Ｒ抗体。     

1，25（OH）_2D_3及其类似物调节人原始巨核白血病细胞系增殖分化的机制

１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其两种新型类似物（ＭＣ９０３和ＥＢ１０８９）对人原始巨核白血病细胞系ＨＩＭｅｇ的增殖分化过程有重要调节作用。本研究利用分子杂交及逆转录－聚合酶链反应首次证明，ＨＩＭｅｇ细胞中有１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ的表达，强烈提示１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３对ＨＩＭｅｇ细胞的作用是由ＶＤＲ介导的。同时还发现，１，２５（ＯＨ）_２Ｄ_３及其类似物、维甲酸在调节ＨＩＭｅｇ细胞增殖分化过程中，Ｃ－ｍｙｃｍＲＮＡ表达水平迅速降低，６ｈ时已基本达到最低水平，提示这些作用因子对ＨＩＭｅｇ细胞的抑制增殖和诱导分化作用是和Ｃ－ｍｙｃ癌基因的表达改变密切相关的。     

分枝杆菌多糖治疗支气管哮喘的临床研究

对５２例支气管哮喘发作期患者进行了外周血Ｔ细胞亚群、ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ｓＩＬ－２Ｒ、ＡＣＴＨ及皮质醇的测定。结果显示哮喘发作期ＩｇＧ４、ＩｇＥ、ｓＩＬ－２Ｒ及ＡＣＴＨ均显著升高，提示哮喘患者存在细胞免疫及内分泌功能的异常。将分枝杆菌多糖（ＭＰＳ）用于３２例哮喘患者的治疗，结果与２０例常规治疗组比较，ＭＰＳ组ＣＤ４＋／ＣＤ８＋比值明显升高，ＩｇＧ４和ｓＩＬ－２Ｒ显著下降，而皮质醇和ＡＣＴＨ无明显变化。     

抗小鼠IL-2R单克隆抗体的制备及初步应用

目的：制备抗小鼠白细胞介素２受体（ＩＬ－２Ｒ）单克隆抗体（ＭｃＡｂ）。方法：利用杂交瘤技术获得杂交瘤细胞株，并用细胞ＥＬＩＳＡ方法筛选阳性克隆。结果：得到３株分泌抗小鼠ＩＬ－２ＲＭｃＡｂ的杂交瘤细胞株，其中８Ｃ８对ＣｏｎＡ刺激淋转有抑制作用，且ｓＩＬ－２Ｒ可抑制８Ｃ８与ＩＬ－２Ｒα阳性细胞的结合。结论：８Ｃ８是抗小鼠ＩＬ－２Ｒα抗体。     

RELATIONSHIP BETWEEN NEUROENDOCRINE POLYPEPTIDE 7B2 AND T LYMPHOCYTE

ＲＥＬＡＴＩＯＮＳＨＩＰＢＥＴＷＥＥＮＮＥＵＲＯＥＮＤＯＣＲＩＮＥＰＯＬＹＰＥＰＴＩＤＥ７Ｂ２ＡＮＤＴＬＹＭＰＨＯＣＹＴＥＸｕＹｉｐｉｎｇ（许以平）（ＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＧｅｒｉａｔｒｉｃｓ，ＲｅｎｊｉＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳＳＭＵ，Ｓｈａｎｇｈａｉ...     

1,25（OH）2D3及其类似物调节人原始巨核白血病细胞系增殖分…

１，２５（ＯＨ）２Ｄ３及其两种新型类似物对人原始巨核白血清细胞系ＨＩＭｅｇ的增殖分化过程有重要调节作用。本研究利用分子杂交及逆转灵－聚合酶链反应首次证明，ＨＩＭｅｇ细胞中有１，２５（ＯＨ）２Ｄ３受体（ＶＤＲ）ｍＲＮＡ的表达，强烈提示１，２５（ＯＨ）２Ｄ３对ＨＩＭｅｇ细胞的作用是由ＶＤＲ介导的。     

The cloning of Na+/Ca2+exchaanger Gene and its expression in brain ischemia

ＴＨＥＣＬＯＮＩＮＧＯＦＮａ￣＋／Ｃａ￣（２＋）ＥＸＣＨＡＮＧＥＲＧＥＮＥＡＮＤＩＴＳＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＩＮＢＲＡＩＮＩＳＣＨＥＭＩＡＴａｎｇＪｉａｎ汤健，ＷａｎｇＹｕ王瑜，ＺｋａｎｇＣｈｅｎｈｕｉ张晨晖，Ｅ．ＣｏｓｔａＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆＣａｒ...     

用转染m2胆碱受体基因的CHO细胞观察知母皂甙元的作用

目的 观察知母甾体皂甙元(sarsasapogenin,SAR)对M2受体亚型的调节作用。 方法采用转染了m2胆碱受体基因的CHO细胞为模型,以非选择性的3H-QNB作单点放射配基结合分析。 结果CHO m2细胞受体密度在培养48h达顶峰,以后呈进行性下降。SAR对下降的CHO m2细胞M2受体密度有明显的上调作用,这一作用有一定浓度依赖性。结论SAR对下降的M2受体密度具有上调作用。     

用抗肽抗体对豚鼠心肌行M2胆碱受体分布的研究

目的:对比观察豚鼠左右心房和心室M2胆碱受体的分布位置及其特性.方法:采用M2胆碱受体自身抗体与用人M2胆碱受体肽段经免疫制备的抗受体抗体在豚鼠心肌进行免疫组织化学研究.结果:M2胆碱受体的免疫反应阳性颗粒主要位于胞膜及周缘胞浆内;心房和心室肌细胞均存在明显的免疫阳性反应物,但其分布密度存在有明显差异,心房免疫阳性颗粒明显多于心室;用阿托品后,心房心室细胞的免疫阳性反应产物明显降低,M2胆碱受体抗体和受体结合的位点可部分被M2胆碱受体拮抗剂阻断.结论:豚鼠心脏M2胆碱受体主要分布于心房和心室肌细胞的表面,心房M2胆碱受体密度明显大于心室.M胆碱受体拮抗剂具有阻滞M2胆碱受体抗体和其受体结合的效应.     

兔心房和心室M_2胆碱受体分布特性的比较研究

目的 :对比观察了兔左右心房和心室M2 胆碱受体的分布位置及其特性。方法 :采用在扩张型心肌病患者新发现的心脏M2 胆碱受体自身抗体与用人M2 胆碱受体肽段经免疫制备的抗受体抗体在兔心肌进行免疫组织化学研究。结果 :①M2 胆碱受体的免疫反应阳性颗粒主要位于远离胞核的胞浆内 ;②心房和心室肌细胞均存在明显的免疫阳性反应物 ,但其分布密度存在有明显差异 ,心房免疫阳性颗粒明显多于心室 ;③用阿托品后 ,心房心室细胞的免疫阳性反应产物明显降低 ,M2 胆碱受体抗体和受体结合的位点可部分被M2 胆碱受体拮抗剂阻断。结论 :兔心脏M2 胆碱受体主要分布于心房和心室肌细胞的表面 ,心房M2 胆碱受体密度明显大于心室。M胆碱受体拮抗剂具有阻滞M2 胆碱受体抗体和其受体结合的效应     

M_2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流家兔心房钠尿肽分泌的影响

[目的]建立离体跳动灌流心房模型,并探讨激活M2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流心房钠尿肽(ANP)分泌的影响.[方法]利用急性剥离的家兔左心房和放射免疫分析方法观察M2型毒蕈碱受体对离体跳动灌流心房动力学及灌流液中ANP分泌的影响.[结果]记录到的离体跳动灌流心房模型心房内压及每搏搏出量与文献报道基本一致;卡巴胆碱明显抑制心房内压和搏出量,显著增加灌流心房ANP的分泌,此效应被M2型毒蕈碱受体抑制剂Methoctramine阻断.[结论]成功建立离体跳动灌流心房模型;M2型毒蕈碱受体的激活增加心房ANP的分泌.     

心肌M2胆碱受体抗体对大鼠心房及心室肌cAMP含量的影响

目的 :了解心肌M2 胆碱受体抗体 (M2 Ab)对大鼠心房和心室肌cAMP含量的影响 ,并与M2 胆碱受体激动剂卡巴可 (Carb)的作用进行了对比观察。方法 :采用离体生化放射免疫分析法测定M2 Ab及M2 胆碱受体激动剂Carb对心肌cAMP含量的影响。结果 :①M2 Ab及Carb两者均可剂量依赖性抑制异丙肾上腺素 (Isoproterenol,Iso)所刺激的大鼠心房及心室肌cAMP的增加。卡巴可浓度为 2 μmol/L ,10 μmol/L ,5 0 μmol/L时可分别抑制Iso所刺激的cAMP含量 (8.5± 1.2 ) % ,(16 .2± 1.4) % ,(2 9.5± 2 .1) % ,而M2 Ab浓度为 5 0nmol/L ,10 0nmol/L ,40 0nmol/L时 ,可分别抑制 (6 .1± 0 .6 ) % ,(17.3± 1.8) % ,(31.7± 3.1) % (P <0 .0 1)。②Carb(10 μmol/L)及M2 Ab(10 0nmol/L)两者可分别抑制基础cAMP(49.2± 4.3) %和 (6 4.3± 5 .1) %。③M受体阻断剂阿托品 (Atr) (1.5 μmol/L)不但可阻断Carb对Iso的抑制反应 ,亦能阻断M2 Ab的这种反应。而相应的抗原性肽段也能阻断M2 Ab的这种反应。结论 :M2 Ab抑制Iso引起的心室肌细胞cAMP生成量的增加反应 ,类似于M受体激动剂Carb ,两者效应均通过作用于M2 受体途径实现。     

膀胱黏膜毒蕈碱型胆碱能受体密度与前列腺术后膀胱痉挛的相关性研究

目的  探讨膀胱黏膜毒蕈碱型胆碱能受体（M受体）M2、M3亚型的密度与前列腺电切术后膀胱痉挛的相关性。方法  选取2012年5月-2015年5月医院收治的良性前列腺增生（BPH）患者作为研究对象,将其分为合并膀胱过度活动症（OAB）观察组和不合并OAB对照组,再将观察组分为发生膀胱痉挛组及不发生膀胱痉挛组,比较各组M2、M3受体的密度及其相关性。结果  观察组术后膀胱痉挛的发生率高于对照组;观察组M2、M3受体密度均低于对照组;观察组中发生膀胱痉挛患者的M3受体密度低于不发生膀胱痉挛患者的M3受体密度。结论  膀胱黏膜M3受体密度与前列腺术后发生膀胱痉挛存在相关性,提示M3受体可能参与膀胱痉挛的发病机制。

     

Stimulatory activity of anti-peptide antibodies against the second extracellular loop of human M2 muscarinic receptors

Objective To study the activity of anti-peptide antibodies against the second extracellular loop of human M(2) muscarinic receptors on cAMP production and inward calcium currents (I(Ca)) in guinea pig ventricular myocytes.A comparison was also made with those of a muscarinic receptor agonist.Methods cAMP content was determined by radioimmunoassay and the I(Ca) in guinea pig single ventricular cells were recorded by the whole-cell patch clamp technique.Results Both the muscarinic receptor agonist, carbachol (Carb 10 μmol/L), and anti-peptide antibodies (Abs 100 nmol/L) could decrease basal cAMP levels (by 46.9%±4.2% and 60.2%±4.6%, respectively) and basal I(Ca).Both Carb (10 μmol/L) and Abs (100 nmol/L) could also inhibit the isoprenaline-induced (Iso 0.8 μmol/L) increases in cAMP production (from 108.2±7.0 to 88.4±7.2 pmol/mg·protein/min for Carb and 88.6±5.1 pmol/mg·protein/min for Abs, respectively) and the increases in I(Ca).The muscarinic receptor antagonist atropine (Atr) was able to prevent these effects of Carb and Abs.Conclusions Anti-peptide antibodies against an epitope located in the second extracellular loop of human M(2) muscarinic receptors, similar to muscarinic receptor agonist, could decrease the basal I(Ca) and β-receptor agonist stimulated increase of I(Ca) by decreasing the basal and β-receptor agonist stimulated increase of cAMP production, and therefore could have an effect on their target receptor.These results further suggest that autoimmunity may participate in the pathogenesis of human cardiomyopathy and the second extracellular loop of human M(2)muscarinic receptor could be the main immunodominant region.     

mTLR2基因在CHO细胞中的表达

目的在CHO细胞中表达小鼠TLR2(mTLR2)。方法将目的基因克隆到真核表达载体pcDNA3.1中,并将其转染到CHO细胞,用G418筛选阳性克隆。采用PCR方法,检测外源基因的整合。采用Westernblot、免疫组织化学对转染细胞的mTLR2表达进行鉴定。结果成功构建了pcDNA-mTLR2重组质粒。将其转染到CHO细胞,经G418筛选获得阳性细胞克隆。阳性细胞克隆经PCR检测表明TLR2基因得到稳定整合。Westernblot分析显示在分子量约95000处可见清晰的阳性反应条带。免疫组织化学检测显示转染细胞表达mTLR2。结论获得了表达mTLR2的细胞株,为进一步进行相关研究奠定了基础。     

人MCHR2真核表达载体的构建及稳定转染CHO细胞系的建立

目的 构建人MCHR2真核表达载体,转染CHO细胞,建立稳定转染的CHO细胞系.方法 采用PCR方法,以人胎脑cDNA文库为模板扩增人MCHR2基因的全长cDNA编码区序列,利用DNA重组技术将其定向插入到真核表达载体pcDNA3.1( ),经酶切和测序鉴定后,用脂质体转染法转染CHO细胞,通过G418筛选,建立稳定转染的CHO细胞系,用RT-PCR、Western blot及免疫荧光法检测MCHR2的表达.结果 成功构建了pcDNA3.1( )/MCHR2真核表达载体,并建立了稳定转染的CHO细胞系,成功地表达目的基因.结论 真核表达载体成功构建和稳定转染CHO细胞系的建立为进一步研究MCHR2的功能奠定良好的实验基础.     

Gz-蛋白介导M_4胆碱受体对腺苷酸环化酶的抑制

目的探讨M4 受体是否通过Gz-蛋白的介导起抑制腺苷酸环化酶 (AC)的作用。　方法采用RT -PCR检测Gz和m4mRNA的表达和RIA测定cAMP含量。　结果PC12细胞既有Gz也有m4mRNA的表达。NECA能明显提高PC12的cAMP ;用PTX抑制Gi的介导作用后 ,NECA提高cAMP的作用增强 ,说明M4 受体未被激动时存在着Gi对AC抑制作用。但是 ,不论细胞中的Gi是否被PTX抑制 ,Muscarine都能部分对抗NECA提高cAMP的作用 ,即由对PTX不敏感的Gz蛋白所介导。　结论M4 受体既能通过Gi又能通过Gz的介导抑制AC