人Gax基因转染对血管平滑肌细胞增殖、迁移和细胞周期的影响

目的: 探讨腺病毒介导人生长终止特异性同源异型盒基因(hGax基因)转染对血清刺激后兔血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖、迁移和细胞周期的影响,为静脉桥再狭窄基因治疗新策略提供帮助。方法: 构建含 hGax 的重组腺病毒载体并感染兔VSMCs;应用RT-PCR、免疫荧光染色检测hGax mRNA和蛋白的表达; MTT法观察hGax基因过表达对血清刺激后VSMCs增殖的影响;划痕法测定细胞迁移;流式分析细胞周期。结果: 成功构建Ad5-hGax重组腺病毒载体。转染48 h后 RT-PCR和免疫荧光染色法示转染 hGax 基因的VSMCs中存在目的基因特异性片段(174 bp)和目的蛋白表达;MTT法示hGax蛋白显著抑制血清刺激后VSMCs增殖;划痕法示hGax基因过表达明显抑制血清刺激后VSMCs迁移;流式结果示血清刺激72 h后,Ad5-hGax转染组G₀/G₁期细胞比例明显增加,G₂/M+S期细胞减少。结论: 含hGax的重组腺病毒载体构建成功,并在细胞中过表达。hGax基因过表达能有效抑制血清刺激后兔VSMCs的增殖和迁移,并使细胞停滞于G₀/G₁期。     

人突变p27基因对大肠癌细胞生物学行为的影响

目的： 观察人突变p27基因（p27mt）对人大肠癌细胞生长的影响，探讨p27mt基因在大肠癌基因治疗中的作用及可能机制。方法： 以携带突变p27基因复制缺陷型腺病毒（Ad-p27mt）为载体，转染大肠癌细胞SW480；Western blotting方法检测p27mt蛋白的表达；细胞计数法检测p27mt对SW480细胞生长的抑制作用；用流式细胞仪检测细胞周期；用DNA片段分析法检测细胞凋亡。结果： Ad-p27mt转染SW480细胞后，p27在细胞中出现了蛋白高表达;77.96%的细胞阻滞于G₀/G₁期，而Ad-LacZ组及空白对照组分别为27.57%和25.29%；生长曲线显示Ad-p27mt对细胞生长有明显的抑制作用；DNA片段分析示p27mt基因可诱导细胞的凋亡。结论： p27mt对细胞周期有明显的阻滞作用，主要阻滞于G₀/G₁期；p27mt基因对细胞的生长抑制机制与诱导细胞凋亡和细胞周期的阻滞有关。     

腺病毒介导胞嘧啶脱氨酶基因联合黄连素对直肠癌细胞的杀伤作用

目的:探讨黄连素联合腺病毒介导的胞嘧啶脱氨酶自杀基因(Ad-CD)对直肠癌细胞的体外杀伤作用.方法:用重组腺病毒介导外源CD基因转染到人直肠癌细胞株HR-8348,检测病毒的转导效率和CD基因表达.用四甲基偶氮唑盐(MTT法)检测黄连素联合Ad-CD基因对HR-8348细胞存活率及体外旁观者效应的影响.结果:在250μg/ml 5-氟胞嘧啶(5-FC)浓度下,0 1、 0 3、 3 0、 30 0μmol/L浓度的黄连素联合5-FC对直肠癌细胞生长抑制率分别为27 7%、 42 4%、 52 3%、 56 3%.3 0μmol/L浓度的黄连素可作为参考用药浓度.在转染和未转染CD基因的HR-8348混合体系中,黄连素联合CD/5-FC对直肠癌细胞具有更强的抑制作用.结论:黄连素可以增强自杀基因系统对直肠癌细胞的杀伤作用,可作为一种增效剂应用于直肠癌的治疗.     

细菌内同源重组高效制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-XL的重组腺病毒载体

目的:制备含绿色荧光蛋白和抗凋亡基因bcl-X_L的重组腺病毒载体。方法:采用PCR方法从质粒pEGFP-C3-bcl-X_L中扩增出bcl-X_L基因,再亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-bcl-X_L;然后与pAdEasy-1共转化BJ5183菌,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-gfp-bcl-X_L,筛选同源重组的阳性克隆;抽提的pAdEasy-1-gfp-bcl-X_L经PacI线性化后,再用LIPOFECTAMINE^TM2000介导转染至人胚肾293细胞内包装扩增出重组腺病毒颗粒;采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定;用氯化铯超高速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒rAd-gfp-bcl-X_L。结果:由pAdTrack-CMV-bcl-X_L和pAdEasy-1共转化BJ5183菌16-20h后,可获得35%的阳性重组体细菌克隆。由重组质粒DNA经293细胞包装后产生的重组腺病毒,经PCR检测表明含有目的基因bcl-X_L。氯化铯纯化所得重组腺病毒滴度约为65×10¹²PFU/L。结论:用细菌内同源重组法可以高效、简便、快捷地制备出重组腺病毒质粒载体,重组体病毒质粒经293细胞包装、扩增和氯化铯纯化后可制备出高滴度的重组腺病毒颗粒rAd-gfp-bcl-X_L,为人类相关疾病的基因治疗提供良好的基因转染载体。     

NS-398对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨选择性环氧合酶II(COX-2)抑制剂NS-398对人肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响。方法: 应用MTT法研究不同浓度NS-398对HepG2细胞增殖的影响,DNA梯状电泳(DNA ladder)检测凋亡的发生,流式细胞仪检测细胞周期的改变及凋亡百分率的变化,竞争性RT-PCR检测环氧合酶II COX-2 mRNA及抑凋亡基因bcl-2 mRNA表达的改变。结果: NS-398呈剂量依赖性抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明随着浓度增大S期细胞明显减少,有G₀/G₁期细胞累积现象,并伴有Bcl-2 mRNA表达的下调,而对COX-2 mRNA表达改变无明显影响,且COX-2表达改变与NS-398引起的HepG2细胞的增殖和凋亡均无相关性(相关系数分别为:r=0.056,P>0.05和r=0.119,P>0.05)。结论: NS-398能明显抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,与细胞G₀/G₁期阻滞以及bcl-2基因表达下调有关,而非依赖于抑制COX-2基因的表达。     

重组人诱导型一氧化氮合酶在V79细胞中的表达及四氢叶酸对其活性的影响

目的:探讨重组人诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)基因在V₇₉成纤维细胞中转染的可行性及四氢叶酸(H₄B)对转染后产生NO的影响。方法:将人iNOS基因通过真核表达载体转入V₇₉细胞中,经G₄₁₈筛选,RT-PCR、免疫荧光法进行鉴定。采用Griess法测定加入H₄B前后NO^-₂ 的生成量。结果:iNOS基因转染组V₇₉细胞中有iNOSmR NA的表达,细胞胞质中可见分泌的iNOS蛋白。未加H₄B时,iNOS转染组NO^-₂ 含量明显高于正常细胞组和空质粒转染组 (P <0.01,n=6),正常细胞组和空质粒转染组之间NO^-₂ 含量无明显差异 (P >0.05,n=6);加入H₄B后,iNOS转染组中NO^-₂ 含量较未加组明显增加,两者相比具有显著差异 (P <0.01,n=6),而正常细胞组和空质粒转染组与未加H₄B组相比无明显变化 (P >0.05,n=6)。结论:通过外界加入H₄B能显著增加成纤维细胞转染产生的iNOS的活性,成纤维细胞可以作为iNOS基因转染的靶细胞.     

人着色性干皮病D组基因对白细胞介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的: 探讨人着色性干皮病D组基因(XPD)对白细胞介素-6(IL-6)促进人血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖作用的影响。方法: 用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空质粒pEGFP-N2稳定转染VSMCs,然后给予1×10⁵ U/L IL-6孵育48 h。实验分为6组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)IL-6组;(5)IL-6 + pEGFP-N2组;(6)IL-6 + pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53(wt-P53)表达量的变化。结果: 在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力(P<0.05),并能抑制IL-6促进VSMCs增殖的作用(P<0.05);流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起了细胞G₀/G₁期增加(P<0.05)、S期减少(P<0.05)、凋亡率增加(P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs G₀/G₁期减少、S期增加、凋亡率降低的作用(P<0.01);RT-PCR和Western blotting检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P<0.05或P<0.01),同时Bcl-2表达降低,Bax和wt-P53表达增高(P<0.05或P<0.01),并能抑制IL-6促进VSMCs的Bcl-2表达增高、Bax和wt-P53表达降低的作用(P<0.05或P<0.01)。结论: XPD能抑制VSMCs增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMCs增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。     

siRNA沉默COX-2基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响

目的: 研究siRNA沉默环氧合酶-2(COX-2)基因对人胰腺癌Capan-2细胞增殖、细胞周期、凋亡和成瘤能力的影响。方法: 以Lipofectamine 2000(Lipo)为载体转染siRNA-COX-2至Capan-2细胞。应用RT-PCR、realtime PCR检测COX-2-mRNA表达,Western blotting 检测COX-2蛋白的表达。应用细胞直接计数法检测细胞的增殖,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡与周期。应用裸鼠模型评估COX-2-siRNA转染的Capan-2细胞成瘤能力的影响。结果: 在siRNA-COX-2浓度为50 nmol/L、Lipo为5 μL∶ 2 mL转染容积条件下,在Capan-2细胞的转染效率可达96.47%。siRNA-COX-2沉默Capan-2细胞中 COX-2 基因表达的最佳序列为siRNA006,转染24 h以后沉默效率达73%,COX-2蛋白表达水平在转染后48 h和72 h分别被下调了67% 和 61%。转染48 h后,Capan-2细胞生长明显减慢(P<0.05),48 h和72 h抑制细胞增殖率分别为35.48% 和56.32%。细胞凋亡率较对照组高(P<0.05),48 h和72 h细胞凋亡率为2.03%和3.27%。转染24 h、48 h和72 h G₀/G₁期的比例分别是58.03%、63.31%和65.66%,S期的比例分别是30.27%、24.87%和22.2%。siRNA-COX-2转染Capan-2细胞在裸鼠的皮下形成的肿瘤体积和重量明显减少(P<0.05)。结论: siRNA006-COX-2可有效沉默 COX-2 基因的表达,可明显抑制Capan-2细胞的生长并降低其成瘤能力。     

重组小鼠干细胞逆转录病毒载体高效基因转染CD41+、UT7、U937和MDA-MB-435细胞

目的:研究重组小鼠干细胞逆转录病毒载体介导基因转染,探索一条高效基因转染的途径,为重组小鼠干细胞逆转录病毒载体在基因转染中的应用提供理论依据和奠定实验基础。方法:①逆转录病毒载体的构建:EC1-4(repeats1-4ofcadherin-5extracellulardomains)基因克隆产物和mutant(Ser222A)MEK1基因克隆产物,Bg1Ⅱ和EcoRⅠ限制性内切核酸酶切割后,克隆进入逆转录病毒表达载体pMSCV。②CD41⁺细胞的获取和细胞培养:从脐带血分离的CD34⁺细胞通过TPO诱导表达CD41,FACS分离CD41⁺细胞。高糖DMEM培养液培养NIH3T3和MDA-MB-435细胞,U937细胞培养在RPMI-1640培养液,UT7细胞是细胞因子依赖性细胞株,Iscove'smodifiedDulbeco's培养液中加入GM-CSF。③测定病毒滴度:逆转录病毒载体转入包装细胞293,36h后收集病毒上清液,感染NIH3T3细胞,流式细胞仪测定病毒滴度。④Westernblot:基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,Westernblot检测基因产物的表达。结果:293细胞产生高滴度MEK1pMSCV病毒:3.1×10⁷,高滴度EC1-4pMSCV病毒:1.0×10⁸。用稀释8倍的病毒转染基因,重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染白血病细胞株UT7和U973,GFP阳性细胞(转染阳性细胞)分别是60.73％、72.56％。重组逆转录病毒MEK1pMSCV转染原代培养细胞CD41⁺,GFP阳性细胞为30.57％。重组逆转录病毒EC1-4pMSCV转染人乳腺癌细胞株MDA-MB-435,GFP阳性细胞为97.54％。TPO作用CD41⁺和UT7细胞以及血清对U973细胞的作用,显示出外源mutationMEK基因的dominantnegative的效应,实验组磷酸化的MEK1减少。EC1-4基因转染的MDA-MB-435细胞表达了EC1-4基因产物。结论:重组小鼠干细胞逆转录病毒载体能高效基因转染CD41⁺、UT7、U937和MDA-MB-435细胞,转染的基因能稳定地表达。     

骨髓间充质干细胞-胞嘧啶脱氨酶/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统的构建及效应

背景:体内研究已经证实骨髓间充质干细胞能够像神经干细胞一样在脑内迁移和整合,如果骨髓间充质干细胞用于系统途径移植成为可能,将会显著简化移植的步骤。目的:构建含胞嘧啶脱氨酶(CD)基因的重组表达质粒pEGFP-N3-CD,用脂质体Lipofectamine2000转染大鼠骨髓间充质干细胞,体外观察CD基因的表达及BMSCs-CD/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对C6胶质瘤细胞的杀伤作用。方法:构建pEGFP-N3-CD质粒,酶切、DNA测序鉴定。全骨髓贴壁法分离培养骨髓间充质干细胞,脂质体Lipofectamine2000介导重组表达质粒pEGFP-N3-CD转染大鼠骨髓间充质干细胞。G418筛选培养获取阳性克隆(BMSCs-CD细胞),免疫细胞化学染色检测BMSCs-CD细胞的CD基因蛋白表达。Transwell小室共培养BMSCs-CD细胞和C6胶质瘤细胞,24h后加入前体药物5-氟胞嘧啶,72h后TUNEL、MTT、流式细胞术检测C6胶质瘤细胞的凋亡情况。结果与结论:构建的重组表达质粒pEGFP-N3-CD含完整的CD基因序列,CD基因转染至骨髓间充质干细胞并在基因及蛋白水平有完整表达。BMSCs-CD和C6胶质瘤细胞体外共培养条件下,C6胶质瘤的凋亡率呈剂量依赖性,与对照组相比差异有显著性意义(P0.01)。结果提示体外共培养条件下,BMSCs-CD/5-氟胞嘧啶自杀基因治疗系统对C6胶质瘤细胞生长有显著的抑制作用。     

构建携带胞嘧啶脱氨酶基因骨髓间充质干细胞及其对胶质瘤细胞的体外抑制作用

背景：转染胞嘧啶脱氨酶基因的骨髓间充质干细胞能有效地将化疗前药5-氟尿嘧啶转化成具有细胞毒性的化疗药物5-氟尿嘧啶,并在体外对胶质瘤细胞有显著的生长抑制作用。 目的：探讨以骨髓间充质干细胞为基因治疗载体表达外源基因胞嘧啶脱氨酶基因对胶质瘤C6细胞增殖的影响。 方法：分离、培养小鼠间充质干细胞,构建胞嘧啶脱氨酶基因与GFP联合的慢病毒载体,通过慢病毒包装法将胞嘧啶脱氨酶基因及GFP转染至小鼠骨髓间充质干细胞,获得稳定表达胞嘧啶脱氨酶基因及GFP的骨髓间充质干细胞,使其与胶质瘤C6细胞共培养,在培养液中加入5-氟胞嘧啶后应用流式细胞仪检测胞嘧啶脱氨酶基因对胶质瘤细胞的增殖影响。 结果与结论：慢病毒介导的胞嘧啶脱氨酶基因及GFP基因成功转染小鼠骨髓间充质干细胞形成C57BL/6 mMSC-codA/eGFP细胞,C57BL/6 mMSC-codA/eGFP在5-氟胞嘧啶的作用下可引起胶质瘤C6细胞的明显凋亡,在5-氟胞嘧啶浓度为1×10⁶ μg/ L条件下C6胶质瘤细胞凋亡率为60%(P < 0.05)。提示,C57BL/6 mMSC-codA/eGFP可将5-氟胞嘧啶转化成5-氟尿嘧啶并对C6胶质瘤细胞生长有显著的限制作用甚至是致死效应。     

不同药物敏感基因对人胰腺癌细胞PC-2的杀伤作用

目的比较单纯疱疹病毒胸腺嘧啶核苷激酶（ＨＳＶＴＫ）／丙氧鸟苷（ＧＣＶ）和胞嘧啶脱氨基酶（ＣＤ）／５氟胞嘧啶（５ＦＣ）两系统对人胰腺癌ＰＣ２细胞的杀伤作用。方法构建表达ＨＳＶＴＫ和ＣＤ基因的重组逆转录病毒载体,将其直接导入胰腺癌细胞;噻唑蓝法检测转化细胞对前体药物的敏感度及５０％细胞受抑制时的药物浓度,即ＩＣ５０值,并对旁观者效应进行观察比较。结果ＨＳＶＴＫ基因转化细胞ＩＣ５０值为（１０６±０１２）μｍｏｌ／Ｌ,比未转化细胞下降５５８倍;ＣＤ基因转化细胞ＩＣ５０值为（３３００±０９５）μｍｏｌ／Ｌ,比未转化细胞下降２５８倍;混合细胞中含１０％的转化细胞时,ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统的生长抑制率为３９％,ＣＤ／５ＦＣ系统为５０３％。结论两系统对胰腺癌细胞ＰＣ２均有很好的杀伤和抑制细胞生长作用,ＨＳＶＴＫ／ＧＣＶ系统的治疗指数较高,但其旁观者效应弱于ＣＤ／５ＦＣ系统     

多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制的探讨

目的:观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响及其机制探讨。方法:用不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理人结肠癌SW480细胞后,采用MTT法观察多烯紫杉醇对人结肠癌SW480细胞增殖的影响,并使用流式细胞术及Hoechst33258染色检测多烯紫杉醇对SW480细胞的凋亡影响,采用RT-PCR检测SW480细胞Bcl-2mRNA表达。结果:经不同浓度(5、10、20nmol·L-1)多烯紫杉醇处理后,MTT结果显示SW480细胞生长抑制率显著上升,流式细胞术检测显示SW480细胞凋亡发生显著升高,并且Hoechst33258染色检测SW480细胞呈凋亡状态。此外,RT-PCR检测T-24细胞Bcl-2mRNA表达水平降低。结论:多烯紫杉醇通过诱导凋亡能抑制人结肠癌SW480细胞的生长,这可能与其下调Bcl-2mRNA表达有关。     

重组腺病毒介导的野生型p53对人胰腺癌细胞凋亡的诱导作用

目的研究恢复外源性野生型（ｗｔｐ）ｐ５３的表达对人胰腺癌细胞生长和凋亡的作用。方法构建了一个复制缺陷型５型腺病毒ｗｔｐ５３表达载体Ａｄ５ＣＭＶｗｔｐ５３，含有人ＣＭＶ启动子，人野生型ｐ５３和ＳＶ４０ｐｏｌｙＡ信号，经腺病毒包装细胞２９３细胞包装、扩增后，转染胰腺癌ＰＣ２细胞。ＰＣＲ和免疫沉淀技术证实转染的细胞有外源ｗｔｐ５３基因的存在和表达。结果转染的ＰＣ２细胞的生长率和３Ｈ掺入率降低。原位凋亡检测、流式细胞术和ＤＮＡ凝胶电泳显示转染细胞凋亡明显增多。而ＰＣ２细胞和用Ａｄ５ｐＸＪ转染的细胞没有这些改变。结论复制缺陷型腺病毒是一种安全高效的基因转移载体，恢复ｗｔｐ５３的表达可以有效地诱导凋亡和抑制胰腺癌细胞生长     

人突变p27基因转染大肠癌细胞凋亡的实验研究

目的：探讨人突变p27基因对大肠癌细胞凋亡的诱导作用。 方法： 构建重组腺病毒Ad-p27mt，转染大肠癌细胞SW480，用流式细胞仪、DNA片段分析法、TUNEL法观察Ad-p27mt对大肠癌细胞凋亡的诱导作用。 结果: 成功构建了Ad-p27mt，在感染复数≥50时，可达100%的转导效率。Ad-p27mt转染SW480 24 h后流式细胞仪检测在G1期前出现了亚二倍体凋亡峰，细胞DNA提取电泳后出现了凋亡特征性梯带，TUNEL法检测凋亡指数实验组和对照组分别为82.6±3.2和5.0±3.5，差异显著（P<0.01）。 结论： 人突变p27基因能有效诱导大肠癌细胞的凋亡。     

表达反义细胞周期蛋白cyclinD1载体对胰腺癌细胞生长和凋亡的影响

目的观察反义细胞周期蛋白ｃｙｃｌｉｎＤ１对胰腺癌细胞生长的影响。方法采用Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ和Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ方法检测了５株人胰腺癌细胞系中ｃｙｃｌｉｎＤ１的扩增及表达情况，发现ＰＣ７细胞中基因有扩增及过度表达。我们构建了反义（ＡＳ）ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达载体，采用ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ转染方法转染ＰＣ７细胞，获得转化细胞系ＰＣ７／ＡＳｃｙｃｌｉｎＤ１。经Ｎｏｒｔｈｅｒｎｂｌｏｔ、Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ检测转化细胞系，表明有外源反义ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，而内源性ｃｙｃｌｉｎＤ１ｍＲＮＡ表达及蛋白合成下调，并进行了细胞凋亡分析。结果转化细胞系细胞恶性生物学行为及表型部分逆转，细胞生长速度、ＤＮＡ合成及细胞增殖和代谢能力均明显下降，软琼脂集落形成能力减低。流式细胞术分析发现细胞被阻滞于Ｇ１期，ＤＮＡ凝胶电泳、原位凋亡检测发现凋亡细胞增多。结论通过反义ＲＮＡ技术，下调在细胞周期调控中起重要作用的ｃｙｃｌｉｎＤ１的表达，可使胰腺癌细胞恶性表型部分逆转。     

金雀黄素抑制人乳腺癌细胞系体外增殖作用机理的实验研究

目的 研究金雀黄素抑制人乳腺癌细胞株体外增殖作用的机理。方法 选用2种不同的人乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-23l体外培养，MTT法检测细胞增殖作用，Giemsa染色观察细胞形态学改变，流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率，同时进行了原位细胞凋亡的检测。结果 金雀黄素对MCF-7细胞和MDA-MB-231细胞体外生长具有明显的抑制作用。Giemsa染色显示，金雀黄素处理的MCF-7细胞呈明显的凋亡形态改变，细胞固缩、发泡，染色质凝集呈块状，并沿核周分布。流式细胞仪检测在G1峰前可见凋亡峰，且随用药时间的延长，凋亡比率递增。而金雀黄素处理的MDA-MB-231细胞未见明显的凋亡形态改变和凋亡峰的出现，细胞周期明显地阻滞于G2～M期。结论 金雀黄素通过诱导细胞凋亡或阻滞细胞于G2-M期，从而抑制乳腺癌细胞的体外增殖，为其减缓人乳腺癌细胞的体内生长提供理论依据。     

Apoptosis of T Cells in the First Trimester Human Decidua

PROBLEM: Apoptosis has been accepted as a mechanism for maintaining tolerance in the immune system. The induction of apoptotic cell death can also be a possible outcome of the lymphocyte activation. Expression of Fas ligand (FasL) by the human trophoblast has been proposed as a mechanism providing protection against the lytic action of decidual immune cells. The aim of this study was to determine whether decidual T cells undergo apoptosis during abortion. METHOD OF STUDY: We studied apoptosis of T cells isolated from the first-trimester decidua in 12 women after spontaneous or elective abortion. We used gel electrophoresis to detect DNA fragmentation. Cells undergoing DNA fragmentation also were identified by DNA analysis using flow cytometry. This method was based on the accumulation of ethanol-fixed apoptotic cells in the sub-GO/G1 peak of the DNA content as a result of the loss of DNA fragments from the cells and because of a reduced DNA ability to be stained by propidium iodide. In addition, the expression of Fas antigen on the surface of decidual T cells (CD3⁺) also was determined. RESULTS: We did not detect apoptosis by the “ladder” technique. However, the apoptotic index (the percentage of positive cells per total number of cells) ranged from 2% to 24% using flow cytometry. CONCLUSIONS: Trophoblast cells usually fail to stimulate alloantigen-specific T cells, but they may express nonclassical major histocompatibility complex alloantigens to which mothers can produce immunoglobulin G alloantibody, which requires T helper cell activation. The apoptosis of T cells in the human decidua, probably through Fas-FasL signaling, may be a defense mechanism against rejection of the fetal allograft by the maternal immune system.