血管生成素-1激活tyrosine kinase/PDK增加血管内皮细胞[Mg2+]i

目的:探讨血管生成素-1(Ang-1)对人脐静脉内皮细胞(HUVECs)内游离镁离子浓度([Mg2 ]i)的调节机制.方法:我们采用荧光指示剂mag-fura-2,运用PTi阳离子测定系统动态测HUVECs的[Mg2 ]i.结果:Ang-l诱导的[Mg2 ]i增加与细胞外Mg2 浓度无关.Ang-1诱导的[Mg2 ]i增加与细胞内Ca2 浓度无关.经酪氨酸激酶阻断剂(tyrphostin A23和genistein),磷脂酰3激酶阻断剂(wortmannin和LY294002)预处理,均显著阻断Ang-1诱导的[Mg2 ]i增加.但经活化丝裂原激活激酶阻断剂(SB202190和PD98059)预处理,不能阻断Ang-1诱导的[Mg2 ].增加.结论:Ang-1通过酪氨酸激酶/磷脂酰3激酶信号传递途径使细胞内的Mg2 库释放Mg2 ,从而增加HUVECs的[Mg2 ]i.     

血管生成素-1激活tyrosine kinase/PI3K增加血管内皮细胞［Mg2+］i

目的：探讨血管生成素-1（Ang-1）对人脐静脉内皮细胞（HUVECs）内游离镁离子浓度（［Mg²⁺］_i）的调节机制。方法:我们采用荧光指示剂mag-fura-2，运用PTi 阳离子测定系统动态测HUVECs的［Mg²⁺］_i。结果:Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞外Mg2+浓度无关。Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加与细胞内Ca2+浓度无关。经酪氨酸激酶阻断剂(tyrphostin A23 和 genistein), 磷脂酰3激酶阻断剂 (wortmannin和LY294002)预处理，均显著阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。但经活化丝裂原激活激酶阻断剂(SB202190和PD98059) 预处理，不能阻断Ang-1诱导的［Mg²⁺］_i增加。结论:Ang-1通过酪氨酸激酶/磷脂酰3激酶信号传递途径使细胞内的Mg2+库释放Mg2+，从而增加HUVECs的［Mg²⁺］_i。     

银杏叶提取物诱导大鼠主动脉平滑肌细胞HO-1的表达及细胞信号通路研究

目的： 旨在研究银杏叶提取物（Ginkgo Biloba Extract,EGB761）对大鼠主动脉平滑肌细胞(RVSMC)血红素氧合酶-1（HO-1）蛋白的影响,并探讨其中涉及的细胞信号通路。方法: 大鼠主动脉平滑肌细胞株复苏、传代培养到第6代，再复孔培养用于实验，分别给予空白对照、单纯EGB761、EGB761＋锌原卟啉Ⅸ(ZnPPⅨ)或不同的细胞内信号途径特异性阻断剂进行处理，采用Western blotting法定量检测HO-1蛋白表达。结果: EGB761能呈剂量依赖性诱导HO-1蛋白表达，加用ZnPPⅨ（血红素氧合酶特异性阻断剂）及酪氨酸蛋白激酶(TPK)阻断剂木黄酮均能显著抑制EGB761诱导的HO-1蛋白表达（均P<0.01），但calphostin-C（蛋白激酶C阻断剂）、LY294002（磷脂酰肌醇-3激酶阻断剂）及Bay11-7082（核因子-κB阻断剂）对EGB761诱导的HO-1蛋白表达无明显影响（均P>0.05）。结论: (1) EGB761能显著诱导RVSMC中HO-1蛋白的表达，并且这种诱导作用能被血红素氧合酶的特异性阻断剂ZnPPⅨ所阻断。（2）EGB761通过TPK途径介导大鼠主动脉平滑肌细胞HO-1蛋白的表达。     

抗血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型抗体对成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度的影响

目的：研究抗血管紧张素Ⅱ受体Ⅰ型（AT1受体）抗体对成年大鼠心室肌细胞内游离钙离子浓度（[Ca^2＋]．）的影响。方法：用AT1受体胞外第2肽段合成肽免疫Wistar大鼠，以硫酸铵沉淀法粗提血清抗体后再以亲和层析法纯化抗体，并以ELISA和Bradford的方法对抗体进行定量。以Fluo-3AM作为细胞内游离Ca^2＋示踪剂，通过激光共聚焦显微镜检测分离的成年大鼠心室肌细胞[Ca^2＋]．的变化，以判断抗体活性，分AngⅡ组，抗AT1受体抗体组，抗AT1受体抗体＋氯沙坦组和对照组。结果：AngⅡ刺激后引起[Ca^2＋]．快速上升至峰值，随后快速下降（157．4±52．5）％；而在抗AT1受体抗体刺激下，呈双相反应，[Ca^2＋]．快速上升至峰值，随后进入平台期（164．0±34.0）％，与AngⅡ组相比无统计学意义（P〉0．05）。其效应部分被氯沙坦阻断（79．7±13．2）％，与前两组相比差异有统计学意义（P〈0．05）。结论：抗AT1受体抗体可以引起大鼠心室肌细胞内[Ca^2＋]，浓度增加，呈快速的峰值和持续的平台期的双相反应，主要依赖于细胞内储存钙离子的释放。     

血管生成素-1通过调节PI3K/AKT信号途径抑制H2O2诱导小鼠心肌细胞凋亡

目的 观察血管生成素-1(Ang-1)对H2O2诱导小鼠心肌细胞凋亡的影响及其与磷脂酰肌醇3激酶(PI3K) / 丝氨酸苏氨酸蛋白激酶(Akt)信号通路活化的关系。方法 培养新生小鼠心肌细胞,分为对照组、H2O2诱导组、Ang-1干预组、共同干预组,用Hoechst-33342染色法观察细胞凋亡形态学特征,流式细胞仪检测细胞凋亡率;Westernblot检测蛋白p-AKT、AKT、active Caspase-3的表达。结果 H2O2可以诱导心肌细胞发生凋亡,凋亡的心肌细胞呈现细胞核聚集、皱缩、碎裂等典型的凋亡形态学特征;与H2O2诱导组相比对照组、Ang-1干预组的细胞凋亡率均降低（2.13%±0.61% vs 48.16%±1.37% p<0.01;31.20%±2.01% vs 48.16%±1.37% p<0.01）;共同干预组的细胞凋亡率高于Ang-1干预组（47.42±2.02% vs 31.20±2.01% p<0.01）,与H2O2诱导组没有统计学差异（47.42%±2.02% vs 48.16%±1.37%）;与H2O2诱导组相比Ang-1干预组磷酸化AKT（p-AKT）水平升高、active Caspase-3的表达水平降低,这种差别在共同干预组中不明显。结论 Ang-1通过调节PI3K/AKT信号途径对H2O2诱导的小鼠心肌细胞凋亡起到保护作用。     

血管紧张素-(1-7)对血管紧张素Ⅱ诱导的脐静脉内皮细胞MCP-1和ICAM-1表达的影响

目的： 研究血管紧张素-(1-7)［Ang-(1-7)］对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导的脐静脉内皮细胞（HUVEC）单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）和细胞间黏附分子-1（ICAM-1）的影响,阐明Ang-(1-7)对AngⅡ在炎症方面的拮抗作用。方法: 体外培养HUVEC,随机分为：对照组;AngⅡ组;Ang-(1-7)组;AngⅡ+Ang-(1-7)组;AngⅡ+ Ang-(1-7) + Ang-(1-7)受体阻断剂A-779组。以ELISA法和半定量RT-PCR法从蛋白和mRNA水平检测MCP-1和ICAM-1的表达情况。结果: 与对照组比,AngⅡ（100 nmol/L）使MCP-1和ICAM-1的蛋白和mRNA表达明显增加（P<0.05）;Ang-(1-7)（1 000 nmol/L）使MCP-1和ICAM-1的蛋白和mRNA表达降低（P<0.05）;混合刺激组中,与AngⅡ组比较,Ang-(1-7) （10 nmol/L、100 nmol/L、1 000 nmol/L、10 000 nmol/L）呈剂量依赖性地抑制AngⅡ诱导的HUVEC MCP-1、ICAM-1蛋白和mRNA的表达（P<0.05）,Ang-(1-7) 浓度为1 000 nmol/L时,虽然蛋白和mRNA表达仍高于对照组,但无显著差异（P>0.05）;加入 A-779 组与AngⅡ组比较无显著差异（P>0.05）。结论: Ang-(1-7) 通过其特异性受体MAS拮抗AngⅡ诱导的HUVEC MCP-1和ICAM-1的表达,并呈浓度依赖性。     

血管形成素-1与微血管通透性

血管形成素(Angiopoietin,Ang)为血管内皮细胞(endothelial cells,ECs)特异性受体酪氨酸激酶Tie-2的配体,是一类新发现的血管生成因子,它与血管内皮生长因子(vascularendothelial growth factor,VEGF)共同作用,协同调节血管的发生、形成过程[1]。Ang-1是Tie-2的主要生理配体,其功能涉及:募集与支持血管内皮周围细胞、诱导毛细血管发芽、ECs趋化反应和ECs网络形成[2]、与抗ECs凋亡有关[3,4]。Ang-1或Tie-2基因敲除的小鼠心脏、脑及卵黄囊血管系统的     

Ghrelin对血管紧张素Ⅱ诱导的人脐静脉内皮细胞损伤保护作用的研究

目的研究促生长激素释放肽Ghrelin对血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）体外诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）损伤的保护作用。方法体外培养的HuVEcs，随机分为6组：正常对照组；Ghrelin（10^-7mol／L）组；AngⅡ（10^-7mol／L）组；AngⅡ（10^-7mol／L）＋Ghrelin不同浓度组：（Ghrelin 10^-7mol／L、10^-7mol／L和10^-7mol／L三个浓度组）。每组设6个复孔。用AngⅡ和Ghrelin联合干预细胞18h后，采用放射免疫方法测定内皮素-1（ET-1）含量；硝酸还原酶法测定一氧化氮（NO）含量；流式细胞仪检测细胞内活性氧（ROS）水平。结果Ghrelin呈浓度依赖性地显著减少AngⅡ诱导人脐静脉内皮细胞的ROS生成及ET-1释放，且明显促进NO生成（P〈0．05）。结论Ghrelin对AngⅡ体外诱导的HUVECs损伤有保护作用。     

诱导HO-1基因表达的信号通路

血红素氧合酶（HO）的诱导型HO-1与其催化血红素降解生成的产物胆红素和CO一道，组成了机体重要的内源性保护系统，广泛参与抗炎与多种急慢性氧化应激损伤。多种理化因素通过不同的细胞内信号转导通路诱导HO-1的表达，这些信号通路涉及丝裂原活化蛋白激酶（MAPKs）、蛋白激酶C(PKC)、cAMP依赖的蛋白激酶A(PKA)、cGMP依赖蛋白激酶G（PKG）、酪氨酸蛋白激酶（TPK）、蛋白磷酸酶（PPs）、磷脂酰肌醇（-3）激酶（PI3K）/Akt     

脑热清对小鼠的腹腔巨噬细胞内游离钙及活性氧的作用

目的：实时监测脑热清口服液（NRQ）对小鼠腹腔巨噬细胞内活性氧（ROS）游离钙（[Ca^2＋]i）的作用。方法：取小鼠腹腔巨噬细胞，原代培养24小时，分别以荧光探针二氯荧光素二酯（H2 DCFDA）和Fluo-3-AM标记细胞内ROS及[Ca^2＋]i，并用EDTA和维拉帕米螫合细胞外钙，阻断细胞膜钙离子通道，通过激光共聚焦显微系统动态观察NRQ的作用。     

ERK/c-Fos通路在Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导大鼠肾系膜细胞株增殖中的作用

目的：研究ERK1/2/c-Fos通路在血管紧张素-（1-7）［Ang-(1-7)］抑制血管紧张素Ⅱ（Ang-Ⅱ）诱导的大鼠肾系膜细胞株（GMCS）增殖中的作用。方法：在培养的大鼠肾系膜细胞(GMC)中，加入不同浓度的Ang-(1-7)与Ang-Ⅱ共同培养，用结晶紫计数法检测GMC数目；Western blotting检测GMC中p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结果： Ang-(1-7)呈剂量依赖性地抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC数目的增加和GMC内p-ERK1/2和c-Fos蛋白的表达。结论：ERK/c-Fos通路参与Ang-(1-7)抑制Ang-Ⅱ诱导的GMC的增殖。     

LOX-1介导ox-LDL诱导的血管内皮细胞MCP-1的表达

目的：观察血凝素氧化低密度脂蛋白受体-1（LOX-1）对氧化LDL（ox-LDL）诱导的人脐静脉内皮细胞(human unbilical vein endothelial cells, HUVECs)表达单核细胞趋化蛋白（monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1）基因及蛋白的影响。 方法： 用RT-PCR和Western blot的方法观察ox-LDL对培养的HUVECs表达LOX-1和MCP-1基因及蛋白的影响，然后用LOX-1的受体阻滞剂爱兰苔胶（carrageenan） 和聚肌苷酸［polyinosinic acid，poly(I)］与HUVECs预先作用后，再观察内皮细胞表达LOX-1和MCP-1基因和蛋白的变化。 结果： 用不同浓度的ox-LDL（0 mg/L、10 mg/L、20 mg/L 、50 mg/L、100 mg/L）与HUVECs培养24 h后，LOX-1和MCP-1的mRNA和蛋白的表达明显增加，呈浓度依赖性；用Carrageenan 和polyinosinic acid与HUVECs预先作用2 h后，再加入50 mg/L的ox-LDL培养24 h，与未加Carrageenan和polyinosinic acid相比，HUVECsLOX-1和MCP-1的mRNA和蛋白的表达明显减少。 结论： ox-LDL可以调节培养的HUVECsLOX-1和MCP-1基因和蛋白的表达，LOX-1作为ox-LDL的特异性受体，可能介导了ox-LDL诱导血管内皮细胞分泌MCP-1，从而在动脉粥样硬化的发生发展中起着重要的作用。     

纳秒级陡脉冲电场诱导癌细胞凋亡的实验及作用机理研究

观察纳秒级陡脉冲电场诱导人浆液囊腺性卵巢癌SKOV3癌细胞凋亡效应,及其对细胞内钙离子浓度即[Ca2＋]i的影响并探讨其作用机理。采用场强为10kV/cm、脉宽为100ns、重复频率为1Hz的纳秒级陡脉冲电场作用于SKOV3癌细胞悬液5min。4h后采用Annexin V-FITC/PI双标记并结合流式细胞仪分析SKOV3癌细胞的凋亡率,采用扫描和透射电子显微镜观察癌细胞凋亡的超微结构变化;以Fluo-3/AM为细胞内钙离子的荧光指示剂,用激光扫描共聚焦显微镜检测纳秒级陡脉冲电场对SKOV3癌细胞[Ca2＋]i的影响,及[Ca2＋]i变化时的Ca2＋来源。结果显示,流式细胞术检测到癌细胞的早期凋亡率为（22.21&#177;2.71）%,明显高于对照组的（3.04&#177;0.44）%（P〈0.01）,扫描和透射电子显微镜均观察到典型的凋亡细胞形态,证实纳秒级陡脉冲电场能够有效诱导SKOV3癌细胞发生凋亡;同时纳秒级陡脉冲电场可明显升高细胞[Ca2＋]i（P〈0.01）,而与细胞外钙离子浓度无关（P〉0.05）。由于纳秒级陡脉冲电场的等值频率很高,容易穿透细胞膜,其诱导凋亡的机制之一可能是通过激活细胞内钙库（内质网、线粒体）,引起细胞内钙离子升高,从而介导凋亡信号通路。     

肺炎衣原体感染通过PI3K激活Rac1而诱导血管平滑肌细胞迁移

 目的:研究Rac1活化在肺炎衣原体（C.pn）感染诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）迁移中的作用及磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）对其活化的影响。方法:谷胱甘肽巯基转移酶（GST）-p21活化激酶1 p21结合结构域（PBD）即GST-PBD重组质粒转化感受态细菌,诱导融合蛋白表达并纯化;GST-pull down实验检测C.pn感染VSMCs后Rac1活性的变化;PI3K特异性抑制剂LY294002 （25 μmol/L）预处理VSMCs,GST-pull down实验检测Rac1活性的变化;Rac1特异性抑制剂NSC23766（50 μmol/L）预处理VSMCs,wound-healing 实验和Transwell 实验观察VSMCs迁移能力的变化。结果:重组质粒转化感受态细菌后,经诱导表达和纯化,得到足量有效的GST-PBD融合蛋白;GST-pull down实验结果显示,C.pn感染VSMCs后Rac1活性增强且显著高于正常对照组（P<0.05）;LY294002预处理VSMC后,C.pn感染诱导的Rac1活性明显下降（P<0.05）;细胞迁移实验结果显示,NSC23766预处理的 C.pn感染组细胞迁移能力明显低于单纯感染组（P<0.05）。结论: C.pn感染可能通过PI3K激活Rac1,从而诱导VSMCs迁移。     

促红细胞生成素通过PI3-K/Akt信号通路抑制血管紧张素II诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的： 探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素Ⅱ(Ang Ⅱ)诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B（PI3-K/Akt）信号途径和一氧化氮合酶（NOS）的作用。方法: 应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、Ang Ⅱ、PI3-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L-NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的一氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、p-Akt、内皮型一氧化氮合酶（eNOS）和诱生型一氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果: Ang Ⅱ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的CFs增殖。在给药后第4 d,和单纯的Ang Ⅱ相比,浓度为5×103 U/L、1×104 U/L和2×104 U/L EPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24.4％、41.5%和50.5%。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用PI3-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L-NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制Ang Ⅱ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了eNOS蛋白表达,而L-NAME对eNOS没有影响。结论: EPO可剂量依赖性的抑制Ang Ⅱ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活PI3-K/Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。     

3种钙激动剂促培养的大鼠血管平滑肌细胞增殖

目的：探讨不同来源的细胞内钙离子（[Ca²⁺]i）对血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells, VSMCs）丝裂素活化蛋白激酶（MAPK）介导的增殖反应的作用。方法：以培养的大鼠VSMCs为靶细胞,用血管紧张素II（Ang Ⅱ）剌激VSMCs跨膜Ca²⁺内流、三磷酸肌醇（IP₃）和雷尼丁（RY）剌激胞内Ca²⁺释放,[γ-³² P]-ATP掺入法和免疫印迹（Western blot）测MAPK活性及蛋白含量,氚-亮氨酸（[³H]-Leu）、氚-胸腺嘧啶（[³H]-TdR）掺入量作为VSMCs增殖的指标。结果：Ang Ⅱ、IP₃和RY均能显著增加VSMCs的[Ca²⁺]i浓度、MAPK活性及蛋白含量,并提高[³H]-Leu、[³H]-TdR掺入量,与对照组VSMCs相比差异显著（P<0.01）。结论：钙激动剂诱导的MAPK活性及含量的增加参与了VSMCs的增殖,VSMCs的肥大增殖与[Ca²⁺]i浓度增加有关,而与[Ca²⁺]i的来源无关。     

人肾小管上皮细胞necroptosis模型的构建

 目的：以体外培养的人肾小管上皮细胞（HK-2细胞）为靶细胞,构建肾小管上皮细胞凋亡样坏死（necroptosis）的模型。方法：采用肿瘤坏死因子 α (tumor nercosis factor α, TNF-α)诱导细胞凋亡,同时采用抗霉素A (antimycin A)耗竭ATP,构建肾小管上皮细胞凋亡的模型,并以caspase-8抑制剂苄氧羰酰-缬氨酰-丙氨酰-天冬氨酰-氟甲基酮(benzyloxycarbonyl-Val-Ala-Asp-fluoromethylketone, zVAD-fmk) 阻断凋亡,用necroptosis的特异性抑制剂necrostatin-1（Nec-1）阻断necroptosis,观察细胞在不同的处理下形态学的变化,同时检测细胞存活率及标志物微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ（microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ,LC3-Ⅱ）的表达。结果：（1）在TNF-α+zVAD- fmk+antimycin A处理1 h时细胞及细胞器膨胀,电镜下细胞膜碎裂,线粒体变圆、肿胀,嵴逐渐模糊,胞浆中出现大量自噬小体,而Nec-1预处理后细胞的坏死程度较对照组明显改善。（2）在TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A 1 h实验组,Nec-1预处理后细胞的存活率显著增加（P<0.05）。（3）TNF-α+zVAD-fmk+antimycin A干预1 h实验组在Nec-1预处理后LC3-Ⅱ的表达量明显下降（P<0.05）。结论：凋亡环境中阻断凋亡可以诱导肾小管上皮细胞necroptosis,抑制剂Nec-1能特异性阻断肾小管上皮细胞发生坏死。     

PI3K在白细胞趋化中的作用

磷酸肌醇3-激酶（Phosphoinositide 3-kinase，PI3K）也称磷脂酰肌醇3-激酶（Phosphatidyl inositol 3-kinase，PI3K），是指能够磷酸化磷脂酰肌醇（Phosphatidyl inositol，PtdIns）及其衍生物肌醇环3位羟基的磷酸激酶。其产物的主要功能是作为膜引导信号介导质膜募聚相应的选择性蛋白。在真核细胞中，PI3K及其调节蛋白转位的功能是相当保守的。基因阻断或增强PI3K活性均对细胞和机体的功能产生较大影响心。大部分关于PI3K的早期研究主要集中在鉴定能够活化该酶的受体，以及观察激酶活化后继发的细胞应答。后来，学者们对PI3K的下游效应分子进行了鉴定。     

人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对吗啡依赖海马神经元胞内游离钙离子浓度（intracellular free Ca^2＋ concentration,[Ca^2＋]i）的影响。方法采用荧光钙离子指示剂Fluo-3／AM,利用激光扫描共聚焦显微镜观察低剂量（1μmol／L）、中剂量（10μmol／L）、高剂量（100μmol／L）人参皂苷R暑。处理吗啡依赖原代培养大鼠海马神经元后[Ca^2＋]i的改变。结果低、中、高剂量人参皂苷Rg1单独处理海马神经元前后并没有引起胞内[Ca^2＋]i的显著改变（P〉0．05）,而吗啡依赖海马神经元胞内[Ca^2＋]i较正常海马神经元细胞明显增高（P〈0．01）。此外,低、中、高剂量人参皂苷R翱处理吗啡依赖海马神经元细胞后,均能显著抑制胞内[Ca^2＋]i的升高（P〈0．01）,并呈剂量依赖性,照。剂量越大,抑制作用越明显（P〈0．01）。结论人参皂苷Rg1可以抑制吗啡依赖海马神经元细胞内[Ca^2＋]i的增高,对吗啡的成瘾性具有明显的拮抗作用,为合理安全有效地应用人参戒毒提供了实验依据。     

促红细胞生成素通过P13-K／Akt信号通路抑制血管紧张素Ⅱ诱导的新生大鼠心脏成纤维细胞增殖

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对血管紧张素11（AngⅡ）诱导的心脏成纤维细胞（CFs）增殖的影响,以及磷脂酰肌醇-3-激酶／蛋白激酶B（P13-K／Akt）信号途径和-氧化氮合酶（NOS）的作用。方法：应用胰酶和胶原酶双酶和差速贴壁法分离培养新生大鼠CFs细胞,应用EPO、AngⅡ、P13-K抑制剂LY294002、NOS抑制剂L—NAME不同因素干预。细胞计数和MTT法作出CFs的生长曲线,检测CFs的增殖。化学酶法检测CFs培养液中的-氧化氮（NO）浓度以及总NOS和其亚型的活性。Western blotting检测Akt、P—Akt、内皮型-氧化氮合酶（eNOS）和诱生型-氧化氮合酶（iNOS）蛋白的表达。结果：AngⅡ促CFs增殖的作用显著。EPO剂量依赖性的增加CFs培养液中的NO浓度,同时剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的CFs增殖。在给药后第4d,和单纯的AngⅡ相比,浓度为5&#215;10。U／L、1&#215;10^4U／L和2&#215;10^4U／LEPO对CFs增殖的抑制率分别达到了24．4％、41．5％和50．5％。EPO显著提高Akt的磷酸化水平,促进eNOS蛋白的表达。应用P13-K抑制剂LY294002和NOS抑制剂L—NAME均能使培养液中的NO浓度也随之下降,EPO抑制AngⅡ诱导CFs增殖的作用均被阻断。但LY294002同时阻断了cNOS蛋白表达,而L—NAME对cNOS没有影响。结论：EPO可剂量依赖性的抑制AngⅡ诱导的新生大鼠CFs的增殖。其作用机制是通过激活P13-K／Akt信号途径促使CFs中eNOS表达来促进NO的生成,从而抑制CFs的增殖。