热应激通过激活NLRP3/IL-1β/IL-6途径介导肝脏炎症损伤效应

目的 探究热应激致肝炎症损伤的分子机制.方法 雌性SD大鼠随机分为对照组和热应激组,38℃暴露建立热应激动物模型,每天暴露2 h,连续3 d,分离肝组织;体外培养的L-02细胞分为对照组、热应激组、热应激+二甲基亚砜(DMSO)组及热应激+白藜芦醇组(100μmol/L),采用5％CO2,41℃暴露建立热应激细胞模型,...     

库存红细胞输注增强LPS诱导的外周血单个核细胞炎症反应的初步研究

目的探讨库存红细胞（RBCs）输注对受者炎症反应的作用。方法将RBCs在保存1、21、35d（以下用D1、D21、D35表示）后分别分离其上清,-20℃冻存备用。将冻存上清分别与健康受者外周血单个核细胞（PBMC）体外培养24h后,加入脂多糖（LPS）再培养24、48h后收集培养细胞的上清冻存待检。用ELISA分别检测细胞培养上清中细胞因子IL-1β、IL-6、IL-17、TNF-α、TGF-β及GM-CSF浓度的变化。结果在LPS诱导下,随保存时间的延长,库存红细胞可增强PBMC分泌TNF-α和IL-6;而TGF-β逐步减少。结论随悬浮红细胞保存时间的延长,可增强受者PBMC分泌TNF-α和IL-6含量,推测输注保存时间较长的红细胞可能增强受者的炎症反应,这为进一步阐明临床严重创伤患者大量输血后的相关免疫应答提供了理论依据。     

阿托伐他汀通过激活PPARa信号通路抑制老年大鼠心肌IL-1β表达

目的：观察阻断老年大鼠心肌细胞过氧化物酶体增殖物激活型受体a（PPARα）信号通路对白细胞介素-1β（IL-1β）表达水平的影响。方法：将培养的老年大鼠心肌细胞分为空白对照组、溶剂对照组、阿托伐他汀组、PPAR拮抗剂GW6471＋阿托伐他汀组。分别加入细胞培养液、二甲基亚砜（DMSO）、阿托伐他汀、阿托伐他汀＋PPARa拮抗剂GW6471。用RT-PCR和western blot方法检测各组细胞IL-1βmRNA和IL-1β蛋白含量。结果：①与空白对照组相比,溶剂对照组大鼠心肌细胞IL-1βmRNA表达水平和蛋白含量均无显著差异（P〉0．05）;②与空白对照组相比,阿托伐他汀组IL-1βmRNA表达水平和蛋白含量均显著降低（P〈0．01）;③GW647l＋阿托伐他汀组IL-18mRNA表达水平及蛋白含量均显著高于阿托伐他汀组（P〈0．05）,但仍低于空白对照组（P〈0．05）。结论：阿托伐他汀抑制老年大鼠心肌细胞IL-1p表达的作用可能与其激活PPARα信号通路有关。     

高尔基蛋白73参与炎症反应的分子机制研究

目的：通过研究高尔基蛋白73（GP73）对炎症反应的影响,揭示其参与肿瘤发生发展可能的机制。方法基于TCGA数据库中肝癌患者的GP73与炎症因子NF－κB、IL－1β、IL－6、TNF－α等基因表达相关性的分析,推测GP73可能参与炎症反应。依据数据分析结果设计细胞实验,构建过表达GP73的质粒和敲低GP73的小干扰RNA （ siRNA）,通过检测野生型、过表达和敲低表达GP73细胞系中NF－κB的转录活性以及炎症因子IL－1β、IL－6、TNF－α等基因的表达,来验证GP73在炎症反应中发挥的作用。结果 TCGA数据库分析结果提示,临床肝癌患者的GP73基因表达与NF－κB、IL－1β、IL－16及TNF－α的表达均呈正相关;细胞实验结果显示,过表达GP73细胞系与野生型相比,细胞内NF－κB转录活性升高,而敲低GP73细胞系内NF－κB转录活性降低;过表达GP73细胞系与野生型相比细胞内IL－1β、IL－6及TNF－α的表达均升高;二硫代氨基甲酸吡咯烷（ PDTC）能抑制GP73激活炎症反应,NF－κB为GP73激活炎症反应的关键分子。结论 GP73可能参与炎症反应,并因此促进肿瘤的发生发展。     

Caspase-1激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎肺损伤中的作用

目的　探讨Caspase 1激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎 (SAP)肺损伤中的作用机制。方法　采用 5 %牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发大鼠SAP模型。SD大鼠 32只 ,随机分为 4组 :正常对照组 (HC组 )和SAP 6h组、SAP 12h组、SAP 18h组。采用ELISA法测定血清IL 1β水平 ;半定量RT PCR检测肺内Caspase 1、IL 1β及IL 18mRNA的表达。结果　SAP造模后各组血清IL 1β水平与HC组相比均显著升高 (P <0 0 1) ;HC组肺内可见Caspase 1、IL 1β及IL 18mRNA表达 ;SAP各组肺内Caspase 1、IL 1β及IL 18mR NA的表达显著上调 (P<0 0 1) ,而且与急性肺损伤 (ALI)的严重程度有关。结论　Caspase 1的激活、IL 1β及IL 18的过度表达在SAP并发ALI和ARDS过程中具有重要的作用。     

LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系和肝源永生化细胞系增殖的调控作用

目的 研究反转座子LINE-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p对肝脏肿瘤细胞系以及肝源永生化细胞系增殖能力的影响.方法 构建针对LINE-1 ORF-1编码序列的siRNA表达载体(LINE-1 ORF-1p psilence2.1-U6-siRNA),转染肝脏肿瘤细胞系Bel-7402、SMMC-7721、HepG2和肝源水生化细胞系LO2.采用Western blotting检测LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体对LINE-1 ORF-1编码蛋白LINE-1 ORF-1p表达的影响,采用MTT法检测LINE-1 ORF-1p表达受抑对细胞增殖的影响.结果 在肝脏肿瘤细胞HepG2、Bel-7402、SMMC-7721和肝源永生化细胞LO2中,转染LINE-1 ORF-1p siRNA表达载体均能降低LINE-1 ORF-1p的表达水平,并从第3天起显著抑制前述细胞的增殖(P＜0.05),其抑制率分别为63％、51％、40％、43％.结论 抑制LINE-1 ORF-1p蛋白表达后可使肝脏肿瘤细胞系和永生化细胞系的增殖受抑.     

白细胞介素－11基因治疗促进放射损伤小鼠造血恢复的实验研究

白细胞介素－１１（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ－１１，ＩＬ－１１）是一种新的造血生长因子，体内、外实验结果显示ＩＬ－１１具有显著的造血促进作用，它能作用于早期的造血干细胞及祖细胞，促进其增殖和分化。为了探讨ＩＬ－１１基因治疗放射损伤后造血恢复的促进作用，我们构建了含人ＩＬ－１１ｃＤＮＡ的逆转录病毒载体，并转染小鼠成纤维细胞系ＮＩＨ－３Ｔ３，经筛选获得３株高表达ＩＬ－１１的转染细胞亚克隆，用高表达ＩＬ－１１的转染细胞作为载体细胞，进行了ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤小鼠造血系统影响的实验研究。结果表明ＩＬ－１１基因治疗能明显缩短亚致死量放射损伤小鼠白细胞降低的时间，促进外周血白细胞、血小板和红细胞压积的恢复。提示ＩＬ－１１基因治疗对放射损伤造成的造血功能低下具有潜在的应用价值。     

RNA干扰阻滞胸腺素β4表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化的抑制作用

目的 探讨RNA干扰阻滞胸腺素β1表达对TGF-β1诱导人肾小管上皮-肌成纤维细胞转分化(EMT)的抑制作用.方法 构建能表达针对胸腺素β1的小干扰RNA(siRNA)的重组腺病毒载体,以及表达不针对任何已知mRNA的siRNA的阴性对照载体,分别感染人肾小管上皮细胞株(HKC),得到胸腺素β1表达受抑制的HKC-siTβ4和胸腺素β4表达未受影响的HKC-siC.根据用TGF-β1处理HKC、HKC-siTβ4和HKC-siC的情况,将培养的细胞分为4组:正常HKC组(C组),TGF-β1处理HKC组(T C组),TGF-β1处理HKC-siTβ1组(T siTβ1组)和TGF-β1处理HKC-sic组(T siC组).48h后,分别采用RT-PCR和Western blotting检测各组胸腺素β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和E-钙黏素表达,并分析胸腺素β1和α-SMA表达量的相关性.结果 C组胸腺素β4表达弱阳性,α-SMA表达阴性,E-钙黏素表达强阳性;T C组胸腺素β1和α-SMA表达强阳性,E_钙黏素表达较C组减弱(P＜0.01);T siTβ1组胸腺素β1和α-SMA表达弱阳性,表达量显著低于T C组(P＜0.01),E-钙黏素显著高于T C组(P＜0.01);T siC组胸腺素β1、α-SMA和E-钙黏素表达与T C组相比均无显著差异(P＞0.05).胸腺素β4和α-SMA表达呈显著正相关.结论 RNAi阻滞胸腺素β4表达能有效地抑制TGF-β1诱导EMT,提示胸腺素β4是介导TGF-β1诱导EMT的重要分子.     

rhIL-11对8.0Gy 60Co γ射线照射小鼠肠道损伤的防治作用研究

目的研究重组人白介素11(rhIL-11)对小鼠小肠上皮辐射损伤的防治作用。方法采用^60Coγ射线照射小鼠模型,观察rhIL-11照射前后给药对小鼠小肠上皮形态、隐窝细胞坏死和细胞增生的影响,用流式细胞仪检测小鼠小肠上皮细胞周期的变化。结果照射前给药对小肠隐窝辐射损伤有显著防护作用,照后给药具有促进恢复作用。照射后小肠上皮细胞发生明显的G2期阻滞,rhIL-11作用后使阻滞更明显并能提高S期细胞比例。结论rhIL-11对小鼠小肠辐射损伤具有明显的防护作用,可能与其对细胞周期的调控相关。     

ARRDC4通过NF-κB和MAPK信号通路促进EV71诱导的IL-6产生

目的 研究含阻遏蛋白结构域蛋白4(arrestin domain-containing protein 4,ARRDC4)对肠道病毒71(EV71)诱导IL-6产生的调节作用和相关机制.方法 利用特异性靶向ARRDC4的小干扰RNA(siRNA)在THP-1诱导分化的巨噬细胞(t-M?)中干扰ARRDC4的表达,无关siRNA序列干扰作为阴性对照组,采用实时定量PCR、ELISA和Western印迹等技术观察ARRDC4对IL-6产生、EV71复制以及相关天然免疫信号通路接头分子活化的影响.结果 EV71感染时,ARRDC4表达显著上调.以siRNA靶向干扰ARRDC4的表达,能抑制EV71感染诱导的IL-6 mRNA的表达和IL-6的分泌产生,促进EV71的复制.靶向干扰ARRDC4能明显抑制EV71诱导的p-65、IκBα、ERK、JNK和p38的活化.结论 ARRDC4通过增强NF-κB和MAPK信号通路的活化,促进EV71诱导的IL-6产生,从而抑制EV71的复制,正向调控EV71触发的天然免疫反应.     

Evaluation of a rapid,multiphase MRE sequence in a heart‐simulating phantom

The aims of this study were to validate stiffness estimates of a phantom undergoing cyclic deformation obtained using a multiphase magnetic resonance elastography (MRE) imaging sequence by comparison with those obtained using a single‐phase MRE sequence and to quantify the stability of the multiphase‐derived stiffness estimates as a function of deformation frequency and imaging parameters. A spherical rubber shell of 10 cm diameter and 1 cm thickness was connected to a computerized flow pump to produce cyclic pressure variations within the phantom. The phantom was imaged at cyclic pressures between 18–72 bpm using single‐phase and multiphase MRE acquisitions. The shear stiffness of the phantom was resolved using a spherical shell wave inversion algorithm. Shear stiffness was averaged over the slice of interest and plotted against pressure within the phantom. A linear correlation was observed between stiffness and pressure. Good correlation (R² = 0.98) was observed between the stiffness estimates obtained using the standard single‐phase and the multiphase pulse sequences. Stiffness estimates obtained using multiphase MRE were stable when the fraction of the deformation period required for acquisition of a single image was not greater than 42%. The results demonstrate the potential of multiphase MRE technique for imaging dynamic organs, such as the heart. Magn Reson Med, 2009. © 2009 Wiley‐Liss, Inc.     

rhIL-11对中子照射小鼠肠损伤的治疗作用

目的研究重组人白介素11(rhIL-11)对中子照射小鼠小肠上皮损伤及细胞周期的影响。方法采用裂变中子照射小鼠模型，观察rhIL-11对照射后小鼠小肠上皮形态、隐窝细胞坏死和细胞增生的影响，用流式细胞仪检测小鼠小肠上皮细胞周期的变化。结果rhIL-11治疗和预防给药可通过促进小肠隐窝细胞增殖使肠损伤得到迅速修复。照射后小鼠小肠上皮细胞发生明显的G2期阻滞，rhIL-11治疗可明显提高S期细胞比例。结论rhIL-11对中子照射小鼠小肠损伤具有防护作用，并能够影响细胞周期的变化。     

富氢盐水抑制大鼠压疮深部骨骼肌NLRP3炎性小体活化

 目的 观察富氢盐水对大鼠压疮深部骨骼肌氧化应激及炎性反应的干预效果,探讨NLRP3炎性小体在其中的生物效应。方法 30只SD大鼠随机分为对照组(C)、压疮+生理盐水组(PU+S)和压疮+富氢盐水组(PU +HS)。PU+S和PU +HS组大鼠双下肢制备压疮模型。模型建立成功后,PU +HS组大鼠每日腹腔注射富氢盐水(10 ml/kg体重)1次,连续5 d。末次注射后24 h处死大鼠,检测骨骼肌MDA 、IL-1β含量、Caspase-1活性、NLRP3和ASC蛋白表达。结果 PU+HS组与PU+S组比较,MDA 、IL-1β含量和Caspase-1活性均显著降低(分别为14.92±3.11 vs 27.40 ±4.42,1.13±0.25 vs 1.42±0.35和0.69±0.18 vs 1.05±0.19,P<0.05),NLRP3和ASC蛋白表达均显著降低(分别为122.29±19.96 vs 178.49±18.62,105.33±16.67 vs 129.49±18.77,P<0.01)。结论 富氢盐水可能通过抑制氧化应激下调NLRP3炎性反应小体活化水平,进而抑制压疮诱导深部骨骼肌的炎性反应。     

Ku70对同源重组修复蛋白Rad51的调节作用

目的 研究非同源末端连接(NHEJ)蛋白Ku70对同源重组(HR)修复蛋白Rad51的调节作用,初步探讨HR与NHEJ间协同作用的机制。 方法 采用Western blot法观察特异性增高和降低Ku70蛋白水平后Rad51蛋白表达水平的变化情况。 结果 靶向Ku70基因小干扰RNA(siRNA)单纯转染组Rad51蛋白的表达水平较空白对照组明显下降;Ku70高表达载体PGCsi3.0-hKu70转染肿瘤细胞后,随着Ku70表达水平的升高,Rad51水平也随之升高。 结论 Ku70可能对Rad51有正调控作用,NHEJ可能通过Ku70对Rad51的调节来实现其与HR的协同作用。     

新基因XTP11表达蛋白在酵母细胞中的转录激活功能研究

目的 构建乙型肝炎病毒X蛋白反式激活基因XTP11的酵母表达载体,探索应用酵母双杂交系统克隆与XTP11蛋白结合的肝细胞蛋白的可行性。方法 用聚合酶链反应（PCR）扩增XTP11编码基因,并在其5＇端引入Nco I／BamHI酶切位点,连接入酵母表达载体pGBKT7中,构建编码XTP11全序列与酵母蛋白GAL4 DNA结合域融合蛋白的酵母表达质粒,转化酵母细胞AHl09并应用Westem blot方法检测XTP11蛋白表达。然后铺于含有X-α半乳糖的SD／-Trp和SD／-Trp-His-Ade营养缺陷型培养基上进行自激活验证（蓝／白筛选）。结果 成功地构建了XTP11的酵母表达载体并在酵母细胞中表达相应的融合蛋白,转化了pErBKT7-XTP11的AH109酵母细胞在两种营养缺陷型培养基上均可正常生长,并且可以产生α-半乳糖苷酶,从而在铺有x_n半乳糖的培养基上呈现蓝色,表明XTP11蛋白代替了酵母GALA蛋白的DNA激活域发挥作用,从而激活下游报告基因（ADE2,HIS：3,MEL1和LacZ）的表达。结论 全序列XTP11蛋白与GALA DNA结合域的融合蛋白在酵母细胞中呈现转录激活功能,限制了应用酵母双杂交系统研究XTP11的肝细胞结合蛋白。     

HBXIP蛋白表达对宫颈癌细胞的增殖能力及放射敏感性的影响

目的探讨用siRNA敲降乙肝病毒X蛋白结合蛋白（HBXIP）的表达对宫颈癌ME-180细胞的增殖能力及放射敏感性的影响。方法根据不同的处理方法,分别按两种分组方式进行分组。（1）把宫颈癌ME-180细胞分为4组:空白对照组、4 Gy γ射线照射组、HBXIP-siRNA转染组以及HBXIP-siRNA+γ射线照射联合组。采用MTT和克隆形成实验法来检测细胞增殖;采用qRTPCR检测凋亡相关蛋白Bcl-2及Bid的表达;Western blot检测蛋白激酶AKT的磷酸化水平。（2）把宫颈癌ME-180细胞分为3组:空白对照组、HBXIP-siRNA单独处理组、HBXIP-siRNA和AKT共转染组。对3组细胞进行不同剂量的γ射线照射,并采用克隆形成实验方法检测细胞生长。采用Student t-test对数据进行统计学分析,P < 0.05表示差异有统计学意义。结果 MTT实验和克隆形成实验结果显示,与γ射线照射组相比,HBXIP-siRNA转染+γ射线照射联合组的宫颈癌ME-180细胞增殖率明显降低（t=11.63、12.17,均P < 0.01）,并伴随抑凋亡蛋白Bcl-2表达的降低（t=10.88,P < 0.01）和促凋亡蛋白Bid表达的增高（t=9.31,P < 0.01）。γ射线照射明显上调了HBXIP蛋白的表达水平和AKT蛋白的磷酸化水平,而转染HBXIP-siRNA则抑制了γ射线照射导致的AKT磷酸化水平的升高。另外,与HBXIP-siRNA单独处理组相比,HBXIP-siRNA和AKT共转染组中HBXIP-siRNA对宫颈癌ME-180细胞增殖的影响显著降低（t=8.96,P < 0.01）。结论降低HBXIP蛋白表达可以抑制辐照诱导的AKT磷酸化水平,进而降低宫颈癌ME-180细胞的增殖能力,同时增强其放射敏感性。     

脑胶质瘤的11C-甲硫氨酸和11C-胆碱PET和PET-CT

18F-氟脱氧葡萄糖(18F-FDG)在脑肿瘤检查中较常用的诊断用显像剂,但由于其正常的生理分布和自身的缺点影响了其在胶质瘤术前尤其是治疗后的诊断和评估.研究表明,11C标记的甲硫氨酸(11C-MET)和胆碱(11C-胆碱)在脑胶质瘤PET和PET-CT检查中的术前诊断价值、疗效监测以及治疗后肿瘤复发或残存与放射性坏死或治疗后反应的鉴别和评估方面克服了18F-FDG的局限性,是18F-FDG PET和PET-CT的一个重要替代或补充.     

小干扰RNA抑制核因子-κB增强131I治疗甲状腺癌疗效的研究

目的 探讨小干扰RNA (siRNA)抑制核因子-κB (NF-κB)对131I致DTC细胞凋亡能否产生协同作用.方法 2×104 MBq/L 131I作用人甲状腺乳头状癌细胞株KTC-1 24 h后做DNA结合实验,48 h后做细胞存活分析.Western blot鉴定131I作用6h后细胞NF-κB p65的变化,24 h后凋亡抑制因子[X-染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)、细胞凋亡抑制因子1(clAP1)、B细胞淋巴瘤因子大亚基(Bcl-xL)]、凋亡关键因子[半胱氨酸蛋白酶(caspase 3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)]的变化.p65和凋亡抑制因子的Western blot检测分4组:未转染(A)组、未转染+131I(B)组、转染对照siRNA+ 131I(C)组和转染p65 siRNA+131I(D)组;其余实验分为6组:未转染(1)组、转染对照siRNA(2)组、转染p65 siRNA(3)组、未转染+131I(4)组、转染对照siRNA+131I(5)组和转染p65 siRNA+131I(6)组.多组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 1至6组DNA结合率分别为(100.00±11.65)％、(96.00±17.98)％、(9.28±5.01)％、(322.72±50.81)％、(311.36±44.81)％和(36.96±15.66)％,差异有统计学意义(F=137.74,P＜0.01);131I作用后KTC-1细胞NF-κB活性均增强(q4∶1组=10.90,q5∶2组=11.38,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制NF-κB功能(q1∶3组=18.25,q4∶6组=13.71,均P＜0.01).6组细胞存活率分别为(100.00±11.65)％、(96.32±9.44)％、(70.88±7.41)％、(64.16±9.50)％、(62.24±9.37)％和(28.64±6.74)％ (F=52.76,P＜0.01);3、4和6组比,q=10.76和7.79,均P＜0.01.Western blot结果显示A、B、C和D组p65相对表达水平分别为(56.60 ±7.37)％、(111.07±13.31)％、(113.16±15.04)％和(12.46±2.74)％,差异有统计学意义(F=60.17,P＜0.01);131I作用后p65浓度增高(qB∶A组=6.20,qc∶A组=5.85,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制其浓度增高(qB∶D组=12.57,qc∶D组=11.41,均P＜0.01).4组XIAP、cIAP1和Bcl-xL分别为(17.59±1.96)％、(16.45±1.85)％和(19.92±2.22)％,(98.37±17.92)％、(109.81±19.16)％和(95.59±22.20)％,(98.43±18.71)％、(98.86±15.88)％和(100.99±21.70)％,(7.00±0.95)％、(5.86±0.35)％和(9.52±0.90)％,差异均有统计学意义(F =44.22、56.51和29.11,均P＜0.01);131I作用后三者表达增加(qB∶A组 =7.76、8.40和5.88,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制三者表达(qB∶D组=8.82、9.40和6.71,均P＜0.01).6组caspase 3亚基p19和p17、PARP活性蛋白p116和失活产物p89差异均有统计学意义(F=39.03、48.45、32.56和52.20,均P＜0.01);3、4和6组比q =3.18 ～9.98,均P＜0.05.结论 131I通过活化NF-κB导致甲状腺癌细胞内凋亡抑制因子表达升高,p65 siRNA可抑制这种变化;联合使用p65 siRNA对131I致DTC细胞凋亡产生协同效应.     

1504-siRNA对EphA3表达肿瘤细胞HCT116的抑制作用研究

目的研究原癌基因EphA3的小干扰RNA(small interfering RNA)1504-siRNA对高表达结肠癌细胞HCT116的增殖抑制作用。方法将1504-siRNA质粒用Vigofect转染试剂瞬时转染HCT116细胞,36～48 h后,收集蛋白,用Western印迹检测EphA3及AKT信号通路中的蛋白分子表达,收集细胞,进行噻唑蓝(MTT)实验、平板克隆形成实验和软琼脂克隆形成实验。结果 1504-siRNA能抑制HCT116细胞的EphA3蛋白水平,抑制其增殖、平板克隆和软琼脂克隆的形成,抑制pmTOR、p-c-Raf、pAKT、p-4ebp1等信号分子的表达。结论 1504-siRNA抑制HCT116细胞的增殖、存活能力和恶性程度,这可能是通过抑制AKT信号通路来实现,它有望作为肿瘤治疗的候选药物。