抗柯萨奇病毒A组2型单克隆抗体制备及ELISA抗原检测方法的建立

目的  制备抗柯萨奇病毒A组2型( coxsackievirus A2,CV-A2)单克隆抗体（单抗）,建立CV-A2抗原检测方法。方法  用纯化后的CV-A2全病毒颗粒免疫小鼠,筛选获得抗CV-A2单抗。建立CV-A2抗原检测方法,确定线性范围,对其准确度、精密度、稳定性、专属性进行验证。用 ELISA检测病毒颗粒纯化过程中样品的抗原含量。结果  制备了高效价的抗CV-A2单抗并建立 ELISA抗原检测方法,检测范围为5.00~320.00 ng/ml。高、中、低3个浓度样品准确度验证回收率在89.58%~104.78%之间。重复性验证变异系数分别为2.10%、2.47%、6.18%。中间精密度验证变异系数分别为2.89%、2.69%、1.94%。耐用性验证回收率在84.26%~114.21%之间。包被微孔板于37℃放置3d,样品回收率在90.31%~103.11%之间。专属性验证结果显示该方法只识别CV-A2抗原,与其他抗原均无交叉反应。结论  建立并验证了CV-A2 ELISA抗原检测方法,可应用于病毒纯化过程中样品的抗原检测,还可应用于含CV-A2的手足口病多价疫苗的CV-A2抗原含量检测。     

双抗体夹心ELISA法定量检测左旋多巴

目的建立左旋多巴的酶联免疫定量分析方法。方法以左旋多巴与载体蛋白钥孔戚血蓝素偶联,制备免疫抗原Levodopa-KLH。采用杂交瘤技术制备的特异性抗左旋多巴单克隆抗体作为包被抗体,待测左旋多巴为夹心抗原,免疫抗原Levodopa-KLH免疫新西兰兔得到的多克隆抗体为检测抗体,建立了一种定量测定左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法。结果左旋多巴浓度在40～2 000 ng/mL范围内呈良好线性关系,Y=0.8367 X+0.3423,相关系数r2=0.993 3,检测限为20 ng/mL。经方法学考核,批内、批间变异系数分别为9.53%和12.77%,平均回收率为87.86%,与卡比多巴、多巴胺、异丙肾上腺素、去甲肾上腺素、肾上腺素、维生素C、5-羟色胺、金刚烷胺基本无交叉反应,健全性分析表明,人血清稀释倍数对该方法无影响,8 d连续检测标准曲线表明稳定性良好。结论这种定量检测左旋多巴的双抗体夹心ELISA方法,灵敏度高,重复性好,为左旋多巴研究提供了定量检测的方法,并为药代动力学、临床血药浓度监测提供备选方法。     

柯萨奇病毒A组16型感染生物学的研究进展

近年来柯萨奇病毒A组16型（coxsackievirus A16,CVA16）和肠道病毒71型（enterovirus 71,EV71）在我国引起了手足口病（HFMD）的暴发和流行.CVA16感染的生物学基础研究有助于提高HFMD的防治水平,为HFMD疫苗的研发提供重要依据,此文就CVA16的生物学特性及其与宿主细胞相互作用的研究进展作一综述.     

检测黑猩猩腺病毒68型抗原的双抗体夹心ELISA的建立

目的  建立定量黑猩猩腺病毒68型（chimpanzee adenovirus type 68，AdC68）含量的双抗体夹心ELISA，并验证其可行性。方法  用表达绿色荧光蛋白（green fluorescence protein，GFP）的非复制型AdC68（AdC68GFP）感染HEK293细胞，收获病变细胞并进行超速离心纯化AdC68GFP。用纯化AdC68GFP免疫家兔制备抗AdC68GFP抗体。以抗AdC68GFP抗体为包被抗体，辣根过氧化物酶标记的抗腺病毒HEXON IgG为酶标抗体，建立双抗体夹心ELISA，确定该法的线性范围，并验证该法的准确度、精密度、专属性和适用性。结果  纯化AdC68GFP的蛋白浓度为38.8 µg/ml，其中HEK293细胞的蛋白浓度低于0.3 µg/ml。双抗体夹心ELISA的最适包被抗体和酶标抗体浓度分别为1∶50和1∶500。该法的线性范围为0.06~3.88 µg/ml，线性相关系数为0.999 6。高、低浓度AdC68GFP样品的回收率分别为93.17%和94.33%，变异系数分别为6.72%和3.44%。该法可特异性检测AdC68GFP抗原，未发现与HEK293细胞蛋白发生交叉反应。应用该法检测AdC68GFP纯化过程中的样品可反映病毒的纯化效果。结论  建立的双抗体夹心ELISA具有良好的准确度、精密度和特异性，可用于AdC68纯化工艺过程中对病毒蛋白含量的快速检测。     

柯萨奇病毒A组6型所致手足口病研究进展

柯萨奇病毒A组6型（coxsackievirus A6, CA6）是引起疱疹性咽峡炎及手足口病(hand, foot, and mouth disease, HFMD)的主要病毒之一,临床症状包括广泛性皮疹、迟发性脱皮、脱甲症等。近年来,CA6感染已成为成人HFMD的主要原因。目前尚无有效治疗CA6感染的药物,但随着关注度的不断提高,相关流行病学和疫苗等方面的研究取得了一定的进展,这些成果将在HFMD的预防和控制中发挥重要作用。此文就CA6的病原学、分子流行病学、临床特征及疫苗相关的研究进行综述。     

柯萨奇病毒A组16型研究进展

柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CA16)是手足口病的主要病原体之一.近年来手足口病的不断暴发和流行使CA16日益引起人们的重视.此文就CA16的流行病学、蛋白结构和功能、实验室检测方法和疫苗开发4个方面进行阐述,希望对手足口病的认识和防控起到促进作用.     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的应用探讨

目的探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的应用。方法分析包括血液筛查阴性标本420份,质控标本430份。结果对240份HCV抗体阳性标本进行检测,双抗原夹心法检测有3份标本未检出。3份样本经ChironRIBA确认试剂检测,结果为阳性。敏感性较高99.85%。结论双抗原夹心丙型肝炎病毒抗体酶联免疫诊断试剂对所检测的质控标本的检测总符合率达99.85%,且敏感性和特异性均较好,有望用于临床血液标本的筛查。     

丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床研究

目的 探讨丙型肝炎病毒抗体双抗原夹心法的临床应用.方法 我院采集的400份血液筛查阴性标本,以及400份质控标本,对其进行相关分析.结果 对200份丙型肝炎病毒(HCV)抗体阳性标本进行检测,采用双抗原夹心法进行检测,其中有2份标本,没有检出.通过ChironRIBA确认试剂检测2份样本,结果显示都为阳性.敏感性较高,敏感度达到99.0%.结论 使用双抗原夹心丙型肝炎病毒(HCV)抗体酶联免疫诊断试剂对所检测样本的敏感性和特异性均较高,可能以后会用于临床血液样本的筛查检测.     

在院患儿柯萨奇病毒B组抗原血症的时相性分析

目的 了解柯萨奇B组病毒(CVB)感染时抗原血症的时相性特征。方法 CVB抗原阳性的住院患儿138例，分析初次检测及复查CVB抗原抗体的变化。结果 ①初次检测抗原滴度呈“ ”较多。②1周后复查抗原消失明显低于抗原未消失者．③初次检测CVB抗原和抗体均阳性者占CVB抗原阳性总例数的52．9，6，1周后复查病例中两者仍并存者有48．1，6。结论 在小儿体内CVB感染后病毒血症持续存在，并且CVB抗原和CVB-Ig-I抗体可同时存在。     

双抗原夹心酶联免疫法检测抗白细胞介素-3的抗体

目的 :建立一种多用途、快速简便和易行的检测抗白细胞介素 3(IL 3)抗体的酶联免疫检测方法。方法 :以高纯度的基因工程人白细胞介素 3(rhIL 3)包被酶标板 ,以辣根过氧化物酶标记rhIL 3,建立了检测抗rhIL 3抗体的一步法双抗原夹心法。结果 :特异性 :与相似的蛋白分子 (其它细胞因子抗体 )无交叉反应 ,实验动物和人的正常血清反应呈阴性。灵敏度 :最低检出限为抗IL 3的单抗 5ng/ml。精密性 :组间和组内变异系数均 <1 2 %。应用于rhIL 3长期毒性实验取得良好的检测效果。结论 :此法特异性强、灵敏度高、方法稳定、操作简便 ,与其它细胞因子的单抗无交叉反应 ,能在同一条件下检测不同种属动物血清中的IL 3抗体 ,用于IL 3长期毒性实验等明显优于间接酶联免疫法。     

检测百日咳毒素的双抗体夹心ELISA法的建立

目的  建立白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产中百日咳毒素（pertussis toxin, PT）含量的测定方法。方法  免疫家兔制备高效价抗PT血清,纯化抗PT多克隆抗体并进行酶标记,建立双抗体夹心ELISA法并对其进行验证。结果  建立的方法在0~20 ng/ml PT测量区间呈现最佳线性,相关系数＞0.99,且重复性好。检测百日咳丝状血凝素和黏着素,结果均为阴性,说明该法特异性良好。试验内10次、不同试验间3次测定16.0、8.0、4.0、3.0 ng/ml PT,变异系数为2.8%~9.7%,回收率为95.7%~106.0%,精密度和准确度验证均符合常规质量控制要求,定量限度为3.0 ng/ml。结论  该方法能有效检测百日咳杆菌大罐发酵过程中分泌的PT,为PT质量控制奠定了重要基础。     

检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒的建立及应用研究

目的  建立特异、敏感的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒。方法  采用大肠杆菌菌体蛋白免疫家兔,制备得到高效价抗菌体蛋白抗血清。将经饱和硫酸铵盐析、阴离子交换柱层析和亲和层析纯化的兔抗大肠杆菌菌体蛋白特异性多克隆抗体作为包被抗体和检测抗体,用生物素标记检测抗体,并加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的亲和素。结果　建立的大肠杆菌菌体蛋白夹心ELISA检测方法的敏感性为0.32 μg/L,检测范围为1~100 μg/L,与国际同类商品化试剂盒相当。此法具有良好的稳定性,其批内变异系数小于7.7%,批间变异系数小于6.2%。结论  建立了特异、敏感、稳定的检测大肠杆菌菌体蛋白的夹心ELISA试剂盒,为生物制品中残留大肠杆菌菌体蛋白的质量控制提供了一种重要的检测方法。     

发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒抗原定量检测方法的建立

目的 建立定量检测发热伴血小板减少综合征布尼亚病毒(severe fever with thrombocytopenia syndrome bunyavirus,SFTSV)抗原的方法,以用于疫苗生产过程中SFTSV抗原含量的检测.方法 用SFTSV抗原免疫BALB/c小鼠,制备抗SFTSV单克隆抗体.抗体纯化后以辣根过氧化物酶进行标记,建立双抗体夹心ELISA法.确定该法的线性范围和灵敏度,并对该法的准确性、精密性、专属性进行验证.结果 建立的ELISA法的线性范围为0.117～2.000 mg/L,定量限为0.117 mg/L,线性的决定系数为0.990 3.该法具有良好的准确性和精密度,样品回收率为98％,变异系数均＜8％.该法的专属性良好,对6株不同SFTSV的检测结果均为阳性,而与其他布尼亚病毒、Vero细胞培养上清及其他生产辅料均无交叉反应.结论 成功建立了SFTSV抗原的定量检测方法,为疫苗生产的质量控制奠定了基础.     

检测百日咳黏着素的酶联免疫吸附法的建立及初步应用

 目的  建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中黏着素（pertactin, Prn）的方法。 方法   纯化的Prn免疫家兔以制备高效价血清抗Prn抗体。辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗Prn多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,建立双抗体夹心ELISA法。 结果   建立的方法与丝状血凝素和百日咳毒素无交叉反应,特异性较好。该ELISA法在1.25~80 .00 μg/L Prn测量区间有最佳线性,相关系数＞0.99。实验内和实验间检测64、32、16 μg/L Prn,变异系数为2.6%~7.7%,回收率为84.9%~95.5%,精密度和准确度均符合常规质控要求,因此该法的定量限度为16 μg/L。 结论   建立的ELISA法可有效检测百日咳疫苗纯化过程中的Prn含量,为组分百日咳疫苗质量控制奠定了重要基础。     

检测破伤风类毒素的酶联免疫吸附法的建立及应用

目的  建立定量检测白喉-破伤风-无细胞百日咳疫苗生产过程中破伤风类毒素（tetanus toxoid,TT）的方法。方法  TT免疫家兔以制备高效价血清抗TT抗体。辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗TT多克隆抗体并进行辣根过氧化物酶标记,建立双抗体夹心ELISA法。结果  建立的ELISA法与丝状血凝素、百日咳毒素及白喉类毒素无交叉反应,特异性较好。该ELISA法在0.5~16.00 Lf/L TT测量区间有最佳线性,决定系数＞0.99。实验内和实验间检测14.0、12.0、6.0、3.0和1.5 Lf/L TT,变异系数为4.7%~9.8%,回收率为92.7%~109.0%,精密度和准确度均符合常规质控要求。该法的定量下限为1.5 Lf/L TT。结论  建立的ELISA法可有效检测破伤风疫苗纯化过程中的TT含量,为破伤风疫苗质量控制奠定了基础。