抗SARS病毒融合蛋白单克隆抗体的制备与初步鉴定

用基因工程技术表达的SARS-CoV S蛋白片段和N蛋白片段的融合蛋白作抗原免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价,用免疫印迹法进行特异性鉴定。最终获得2株(1F11和3D2)能稳定分泌抗SARS-CoV融合蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞。其培养上清的ELISA效价分别为1∶1024和1∶512;腹水效价分别为:1×10-6,2×10-5。1F11株识别融合蛋白上的N抗原表位,3D2识别其上的S抗原表位。该单抗可望成为快速诊断SARS-CoV感染的特异性抗体。     

抗呼吸道合胞病毒单克隆抗体

呼吸道合胞病毒是造成婴幼儿下呼吸道感染的常见原因，目前尚无有效的自动免疫制剂，本文介绍了两种被动免疫制剂，并就它们的应用范围和各自的优缺点作了说明。     

抗哇巴因单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的制备抗哇巴因单克隆抗体。方法以半抗原哇巴因与蛋白质载体卵清蛋白(OVA)的耦联物为抗原,免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与SP2/0细胞融合,获得两株分泌抗哇巴因的单克隆抗体的细胞株(OUA1,OUA2)。结果两株细胞染色体数目均为100条左右,证实为杂交瘤细胞;所分泌抗体为小鼠IgG1亚类;小鼠腹水效价测定分别为5×106,8×106;和地高辛交叉反应率分别为1.342%和2.323%;ELISA相加试验表明,两株单克隆抗体可能针对同一抗原决定簇。结论成功制备出小分子物质哇巴因的单克隆抗体。     

抗HPV11病毒样颗粒单克隆抗体的性质鉴定及初步应用

目的分析和鉴定抗HPV11病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)鼠源单克隆抗体的性质,筛选性质和生物学活性较优的抗体,并初步应用于抗原或疫苗的质量分析。方法分别利用间接ELISA法和Western blot对HPV11的22株单克隆抗体的亚类、与HPV11 VLP的结合能力和构象敏感性进行检测;采用血凝抑制实验对单克隆抗体的血凝抑制活性进行分析;运用基于假病毒的抗体中和实验对单克隆抗体的中和活性进行鉴定,选出中和活性高的单抗进行两两配对,采用双抗夹心ELISA法捕获单抗并筛选合适的配对双抗。结果对22株单抗的性质进行了详细和完整的鉴定,并根据构象敏感性进行排序,筛选出6株型别特异、结合活性强且中和活性高的单抗(2A2、4A1-3、16G7、14A6、9C12和19C7);成功建立了基于单抗的双抗夹心(14A6∶Ag∶9C12-HRP)ELISA定量分析方法。结论获得了较全面的HPV11 VLP单抗性质信息,建立了重组HPV11抗原质量分析的双抗夹心ELISA法,为HPV11抗原的生命周期管理或尖锐湿疣疫苗的研发、工艺优化、产品放行和稳定性研究等提供了技术支持。     

抗重组人巨细胞病毒单克隆抗体的制备与鉴定

为了获得抗人巨细胞病毒(HCMV)单克隆抗体(McAb).采用重组HCMV(rhCMV)gp52蛋白片段免疫Balb/c小鼠,将免疫鼠脾细胞与Sp2/0细胞融合,经ELISA法筛选阳性克隆及测定效价,用免疫印迹法进行特异性鉴定.最终获得4株(3E9,5A6,4G12,2H2)能稳定分泌高效价抗rhCMV McAb的杂交瘤细胞.其培养上清的ELISA效价分别为12048,11024,11024,1512;腹水效价分别为1×10-7,1×10-7,1×10-6,2×10-6.它们分别识别gp52蛋白上的2个不同的抗原表位,2H2识别gp52蛋白上的一个表位,3e9,5A6和4G12识别另一个表位.该单抗可作为快速诊断CMV感染的特异性抗体.     

抗前列腺干细胞抗原单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的　制备抗前列腺干细胞抗原 (PSCA)单克隆抗体 (McAb) ,并对其特性进行鉴定。方法　应用PC 3细胞免疫BALB/c小鼠 ,按常规方法融合并经间接ELISA方法筛选 ,制备稳定的抗PSCAMcAb ,并对McAb的亚型、组织特异性进行鉴定。结果　制备出抗PSCA单克隆抗体 ,免疫扩散鉴定为IgG1亚类 ,ELISA法测定其腹水效价为 5× 1 0 -5。组织学检查与前列腺癌组织呈阳性反应 ,与其他肿瘤组织均呈阴性反应 ,和人体正常组织细胞无一出现阳性反应。结论　初步制备出一株抗PSCA的单克隆抗体细胞株 ,能特异性识别前列腺癌组织 ,对前列腺癌的诊断和治疗提供有用的工具。     

HFRS传代细胞纯化疫苗病毒株的筛选及其免疫原性研究

选用在Vero细胞上初步适用的LR1,R22株病毒,经乳鼠脑或腹腔接种,收剖感染鼠脑并在Vero细胞交叉传代适应,此收获病毒与接种乳鼠前Vero细胞毒比较,抗原含量,毒力滴度明显提高,用此LR1,R22毒株的Vero细胞培养制备单价粗制疫苗和双价精制纯化疫苗,免疫家兔,用空斑减少中和试验检测中和抗体,结果表明：经乳鼠和Vero细胞传代适应后的LR1,R22株病毒具有良好的抗原性和免疫原性。     

抗人EGFRvⅢex单克隆抗体的制备及初步鉴定

目的研制抗人表皮生长因子受体突变体Ⅲ胞外区(EGFRvⅢex)单克隆抗体(mAb),并鉴定其特性。方法采用原核表达的EGFRvⅢex蛋白免疫BALB/c小鼠,以间接ELISA法筛选分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,采用蛋白印迹、间接免疫荧光和免疫组化染色鉴定mAb的特异性。结果获得1株可稳定分泌mAb的杂交瘤细胞株。mAb的Ig亚类为IgM,效价为10-6。mAb可识别U87细胞膜上稳定转染的人EGFRvⅢex和SPC-A1细胞膜上高表达的EGFR。结论成功制备1株抗EGFRvⅢex的mAb,经蛋白印迹、免疫荧光和免疫组化染色检测,mAb的特异性良好,能够检测细胞上的EGFR和EGFRvⅢex,为肿瘤的治疗提供了良好的手段。     

关于抗狂犬病病毒单克隆抗体临床疗效评价的考虑

狂犬病是我国传染病主要致死病因之一,病死率几乎100%。被动免疫是狂犬病暴露后预防的重要措施之一,目的是在第一针狂犬病疫苗注射后至机体产生足量抗体前的窗口期提供即时的免疫保护。抗狂犬病病毒单克隆抗体(简称狂犬病单抗)定位于狂犬病暴露后被动免疫,相对于现有被动免疫制剂具有成本降低、安全性提高的潜在优势。由于疾病和药物作用特点,狂犬病单抗临床试验设计和疗效评价存在诸多挑战。国家药品监督管理局2022年1月发布了《抗狂犬病病毒单克隆抗体新药临床试验技术指导原则》,为此类产品临床研发提供了具备科学性和可操作性的策略。本文通过分析狂犬病发病特点、被动免疫机制、已有被动免疫制剂的上市临床经验等,总结狂犬病单抗疗效评价中的关键问题,并对指导原则中推荐疗效指标的审评考虑进行说明。     

抗钙调素单克隆抗体的制备及开发利用

目的：抗钙调素单克隆抗体的制备及开发利用。方法：以碳化二亚胺法将钙调素-卵清蛋白偶联物作为免疫原，采用常规免疫方法免疫BALB/c小鼠，杂交瘤技术制备抗牛脑钙调素单克隆抗体。酶联免疫吸附法(ELISA)检验，应用硫酸铵盐析法进行了抗体的纯化。结果：采用免疫印迹、免疫酶斑点法及液相竞争法鉴定了抗钙调素单克隆抗体的性质，表明该抗体对钙调素有较强的特异性。结论：此研究制备出的高特异性、高亲和力及高效价的抗牛脑钙调素单克隆抗体可用于胞外钙调素促进皮肤创伤修复的基础研究，也可用于免疫学定量分析、免疫学定位分析及共沉淀分析，具有较好的经济价值。     

女性肾综合征出血热与雌、孕激素变化的关系

目的 :探讨女性肾综合征出血热与其雌、孕激素水平变化的关系。方法 :通过对本地区226例肾综合征出血热中60例女性患者的调查分析 ,女性肾综合征出血热在各年龄组中的病例数构成比 ;绝经期后、月经期后、排卵期后临床类型、预后例数 ,并作统计学H检验。结果 :226例肾综合征出血热中女性肾综合征出血热病例数60例 (26 54 % ) ,其发病率、患病率中以40岁以上人群较多 ,未发现妊娠合并肾综合征出血热 ;绝经期后、月经期后、排卵期后的肾综合征出血热 ,各期预后差异无显著性 ;各临床类型中 ,重型病例数为 :绝经期后>月经期后>排卵期后 ,差异有显著性。结论 :雌、孕激素的变化明显影响女性肾综合征出血热的发病率、患病率、临床重型病例数     

肾病综合征出血热回顾性分析

肾病综合征出血热是由汉坦病毒引起的以鼠类为主要传染源的一种自然疫源性疾病。表现为愈后自理能力减退,不能从事劳动。本文对确诊的肾病综合征出血热病例46例患者临床资料进行分析。     

The pathogenesis of nephropathia epidemica: New knowledge and unanswered questions

Puumala virus (PUUV) causes an acute hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS), a zoonosis also called nephropathia epidemica (NE). The reservoir host of PUUV is the bank vole (Myodes glareolus). Herein we review the main clinical manifestations of NE, acute kidney injury, increased vascular permeability, coagulation abnormalities as well as pulmonary, cardiac, central nervous system and ocular manifestations of the disease. Several biomarkers of disease severity have recently been discovered: interleukin-6, pentraxin-3, C-reactive protein, indoleamine 2,3-dioxygenase, cell-free DNA, soluble urokinase-type plasminogen activator, GATA-3 and Mac-2 binding protein. The role of cytokines, vascular endothelial growth hormone, complement, bradykinin, cellular immune response and other mechanisms in the pathogenesis of NE as well as host genetic factors will be discussed. Finally therapeutic aspects and directions for further research will be handled.     

肾综合征出血热并发胃肠功能衰竭64例临床分析

目的探讨肾综合征出血热(HFRS)并发胃肠功能衰竭的原因及治疗措施。方法选择我院近2年所收治HFRS并发胃肠功能衰竭者进行回顾性分析。结果156例HFRS患者中64例出现胃肠功能衰竭 ,占41.1% ,临床表现为腹胀45例 ,胃肠粘膜出血44例 ,肠鸣音消失、肠麻痹53例 ,胃肠功能衰竭于第3病日即可出现 ,少尿期发生率最高 ,其次为低血压休克期 ,且胃肠功能衰竭发生时间越早 ,预后越差。结论HFRS并发胃肠功能衰竭的原因是多方面的 ,临床应采取以防治消化道出血、促进胃肠蠕动功能恢复、纠正电解质紊乱及输血或成分输血为主的综合治疗措施     

双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)在儿童和老年人中的免疫原性观察

目的    评价双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞)在6～15岁儿童和>60岁老年人中的免疫原性。方法   对知情同意的500名6～15岁(儿童组)、16～60岁(成年人组)和>60岁(老年人组)的健康人群按2:1:2的人数比例非随机接种双价肾综合征出血热纯化疫苗(Vero细胞),其中以成年人组作为对照。用ELlSA和空斑减少中和试验测定儿童和老年人接种疫苗后的抗体阳转率和几何平均滴度(GMT)。结果 经ELISA测定,试验组(儿童和老年人)免疫后的抗体阳转率与成年人对照组的差异无统计学意义;老年人组与成年人组的抗体GMT差异无统计学意义,儿童组的GMT水平低于成年人组,差异有统计学意义,但GMT达到有效保护水平。经空斑减少中和试验测定,试验组的抗体阳转率和GMT与对照组的差异均无统计学意义。结论   疫苗对≥6岁的所有健康人群接种(禁忌证除外)均具有良好的免疫效果。     

蚌埠市15年流行性出血热疫情分析及防治对策

目的 探讨我市流行性出血热流行特征,以制定切合实际的控制疫情措施.方法 采用流行病学研究方法.结果 1987～2001年共发病1 840例,年均发病率3.99/10万;发病最高年份为1991年,发病率17.30/10万,2001年出现疫情上升趋势;县区病例占全部病例的93.91%;性别特征明显,以男性农村青壮年发病为主;秋冬季季节高峰明显,10月、11月、12月次年1月份为高发月份.结论 洪涝灾害对外环境的影响能够导致流行性出血热疫情突然上升,为保护易感人群,应在10月份以前适时开展流行性出血热疫苗的接种工作,尤其是高发区高危人群的预防接种工作;防治重点地区为市辖三县郊区农村地区,沿水系分布的乡镇作为防治工作的重点乡镇.重点人群为青壮年农民,但不可忽视城镇居民的预防.     

肾综合征出血热患者T细胞亚群数量与白细胞介素2,4水平变化的关系

采用ABC免疫组化染色法及单克隆抗体夹心法ELISA，同步检测了34例肾综合征出血热（HFRS）患者外周血T细胞亚群数量和血清白细胞介素2和4（IL－2、IL－4）水平。发现HFRS病程中各T细胞亚群数量均有不同程度的升高，其中CDS阳性T细胞在各病期均有升高。IL－4水平升高仅见于发热期．而IL－2的升高主要在低血压期和少尿期。病程中有CD4／CD8比值的下降甚至倒置。这种比值的变化与IL－2和IL－4的动态变化有一定的相关性。结果揭示，在HFRS发病机理中存在Thl型和Th2型免疫反应等多种免疫病理机制。     

抗HBsAg单链抗体特异性单克隆抗体的制备及应用

目的获得抗HBsAg单链抗体(HBScFv)的单克隆抗体,并初步研究其在抗HBsAg类小分子抗体及其融合蛋白质的纯化、活性鉴定方面的应用。方法利用杂交瘤技术,以大肠杆菌表达的重组抗HBScFv为抗原,免疫Balb/c小鼠,再将小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合。通过ELISA法、Western-blot鉴定特异性单克隆抗体,通过免疫双扩散法鉴定单抗亚型,并将筛选到的高效价单抗用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及ELISA鉴定。结果建立了9株能够稳定分泌抗HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株,其细胞上清效价为1∶160~1∶12 800,腹水效价为1∶50 000~1∶400 000;单克隆抗体的亚类分析结果显示有6株为IgG1,其余3株为IgG2a。初步应用结果表明制备的单克隆抗体14F7可用于抗HBsAg Fab抗体等重组蛋白质的亲和色谱及活性鉴定。结论成功建立了能够稳定分泌HBScFv特异性单克隆抗体的细胞株。     

一株家鼠型肾综合征出血热病毒的分离鉴定及核苷酸序列分析

目的 探讨保定地区肾综合征出血热（ＨＦＲＳ）流行高峰的原因。方法 ＲＴ－ＲＣＲ法分型、病毒分离、鉴定及核苷酸序列测定。结果 ３１例急性期病人血清经ＲＴ－ＰＣＲ分型,２例为姬鼠型（ＨＴＮ型）,２４例为家鼠型（ＳＥＯ型）。对其中１例ＳＥＯ型病毒进行分离、鉴定及其部分Ｍ基因的核苷酸序列测定,并与ＳＥＯＵＬ、Ｒ２２两株病毒Ｍ基因核苷酸及氨基酸同源性比较分别为：９５．１５％、９３．９４％、９７．２７％及９７     

Synthesis of 1-beta-D-ribofuranosyl-3-ethynyl-[1,2,4]triazole and its in vitro and in vivo efficacy against Hantavirus

There are no FDA approved drugs for the treatment of hemorrhagic fever with renal syndrome (HFRS), a serious human illnesses caused by hantaviruses. Clinical studies using ribavirin (RBV) to treat HFRS patients suggest that it provides an improved prognosis when given early in the course of disease. Given the unique antiviral activity of RBV and the lack of other lead scaffolds, we prepared a diverse series of 3-substituted 1,2,4-triazole-beta-ribosides and identified one with antiviral activity, 1-beta-d-ribofuranosyl-3-ethynyl-[1,2,4]triazole (ETAR). ETAR showed an EC(50) value of 10 and 4.4 microM for Hantaan virus (HTNV) and Andes virus, respectively. ETAR had weak activity against Crimean Congo hemorrhagic fever virus, but had no activity against Rift Valley fever virus. Intraperitoneally delivered ETAR offered protection to suckling mice challenged with HTNV with a approximately 25% survival at 12.5 and 25mg/kg ETAR, and a MTD of 17.1+/-0.7 days. ETAR was phosphorylated in Vero E6 cells to its 5'-triphosphate and reduced cellular GTP levels. In contrast to RBV, ETAR did not increase mutation frequency of the HTNV genome, which suggests it has a different mechanism of action than RBV. ETAR is an exciting and promising lead compound that will be elaborated in further synthetic investigations as a framework for the rational design of new antivirals for treatment of HFRS.