类风湿关节炎中CCL19/IL-1β正反馈环路的体外实验

目的 探讨趋化因子（C-C基序）配体19（CCL19）在类风湿关节炎发病中的功能及机制。 方法 收集5例类风湿关节炎患者的滑膜细胞,另采用密度梯度离心法分离出5例健康人外周血单个核细胞（PBMCs）,对两种细胞分别给予白细胞介素（IL）-1β、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、IL-17等细胞因子刺激,实时定量PCR检测细胞中\CCL19和其受体\CCR7基因的表达。同时,采用不同浓度的CCL19处理滑膜细胞和PBMCs,实时定量PCR检测细胞中\IL-1β、TNF-α及\CCR7的表达改变。利用Western blot技术检测不同浓度CCL19处理后的PBMCs中磷酸化的脑外信号调节激酶（p-ERK）、磷酸化p38(p-p38）的表达情况。 结果 IL-1β和TNF-α能促进滑膜细胞和PBMCs中\CCL19/\CCR7的表达,并具有协同效应;CCL19能促进滑膜细胞和PBMCs中\IL-1β、TNF-α和CCR7的表达;CCL19可以活化PBMCs中的p-ERK和p-p38。 结论 CCL19可能通过活化p-ERK和p-p38上调IL-1β表达,而高表达的IL-1β通过正反馈进一步促进CCL19的表达参与类风湿关节炎疾病的发生发展。     

丙酮酸乙酯对滑膜细胞HMGB1的影响及机制

目的 探讨丙酮酸乙酯对类风湿关节炎（RA）滑膜细胞高迁移率族蛋白-1（HMGB1）表达的影响及分子机制.方法 将培养的RA滑膜细胞分为正常对照组、TNF-α组和丙酮酸乙酯＋TNF-α组;采用RT-PCR法检测细胞HMGB1 mRNA表达;ELISA法检测细胞培养上清液中HMGB1、IL-6和IL-8含量;采用Western blot法分别检测滑膜细胞胞质和核内NF-κB变化;采用免疫荧光法观察NF-κB在细胞中的分布.结果 丙酮酸乙酯可抑制TNF-α诱导滑膜细胞IL-6、IL-8、HMGB1的分泌和HMGB1 mRNA的表达,以及NF-κ B（p65）在滑膜细胞核内的表达和移位.结论 丙酮酸乙酯能下调滑膜细胞HMGB1表达和抑制NF-κB信号通路活化,可能对RA发挥抗炎作用.     

CCR5基因沉默对RA大鼠滑膜细胞炎症反应的影响

【摘要】 目的 探讨CCR5基因沉默对类风湿关节炎（RA）大鼠滑膜细胞炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3 的影响。方法 将SPF级Wistar雄鼠饲养一周后随机分为Control(WC)组与RA模型组,采用胶原诱导法构建RA大鼠模型,然后分离和培养RA大鼠滑膜细胞,再将细胞分为4组：RA组（RA大鼠滑膜细胞）、RA+NC组（加入脂质体包裹的NC siRNA）、RA+mock组（加入脂质体）、RA+siRNA组（加入脂质体包裹的CCR5 siRNA）。利用RNA干扰技术干扰大鼠滑膜细胞CCR5的表达,干扰后用qRT-PCR检测各组滑膜细胞CCR5及炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3 mRNA相对表达水平,用Western Blot检测其CCR5蛋白表达情况,并用ELISA方法检测各组滑膜细胞上清液中TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3的水平。结果 干扰大鼠滑膜细胞CCR5的表达后,与RA组比较,RA+siRNA组CCR5 mRNA及TNF-α、IL-6、MMP-1、MMP-3 mRNA及蛋白水平均显著降低（P＜0.05）,而RA+NC组、RA+mock比较组差异无统计学意义（P＞0.05）。 结论 沉默CCR5可抑制CCR5 mRNA及其蛋白的表达,并有助于降低RA大鼠滑膜细胞的炎症因子TNF-α、IL-6、MMP-1及MMP-3的表达,减轻大鼠滑膜细胞的炎症反应,并为以后利用RNA干扰技术沉默CCR5用于RA的治疗提供新的方向。     

雷公藤甲素抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的炎症和迁移： 基于circRNA 0003353/JAK2/STAT3信号通路

目的 探讨雷公藤甲素（TPL）通过调控环状非编码RNA（circRNA）0003353对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）炎症和细胞迁移的作用机制。方法 纳入我院风湿科住院RA患者50例和正常人30例,收集外周血单个核细胞（PBMCs）及血清,检测circRNA 0003353的表达、免疫炎症指标[类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、anti-CCP、IgA、IgG、IgM、C3、C4]和计算DAS28评分;采用最佳浓度10 ng/mL TPL处理RA-FLS,并转染circRNA 0003353过表达质粒。采用CCK-8法和Transwell实验检测RA-FLS细胞活力、迁移能力;ELISA法检测细胞因子IL-4、IL-6、IL-17;RT-qPCR法检测circRNA 0003353、Western blot检测p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3蛋白。结果 circRNA 0003353在RA患者PBMCs中表达升高,在协助诊断RA方面有良好效能（AUC=90.5%,P<0.001,95% CI：0.83-0.98）,circRNA 0003353与ESR、RF、DAS28呈正相关（P<0.05）;TPL呈时间依赖性降低circRNA 0003353表达,抑制RA-FLS的细胞活力和迁移能力,降低促炎细胞因子IL-6、IL-17,升高抑炎细胞因子IL-4（P<0.01）;TNF-α刺激后,RA-FLS中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高,而TPL干预后降低（P<0.01）;在TPL干预基础上,转染circRNA 0003353过表达质粒,RA-FLS中circRNA 0003353表达升高,细胞活力和迁移能力升高,IL-4降低,IL-6、IL-17升高,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高（P<0.01）。结论 circRNA 0003353在RA-PBMCs和RA-FLS中表达均升高,TPL可通过circRNA 0003353,调控JAK2/STAT3信号通路,抑制RA-FLS炎症和细胞迁移。     

lncRNA CASC2通过调控miR-218-5p表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞炎症反应及迁移与侵袭的影响

目的 探讨长链非编码RNA肿瘤易感候选基因2(CASC2)对类风湿关节炎(RA)滑膜成纤维细胞炎症反应、迁移及侵袭的影响及其机制。方法 收集45例RA患者滑膜组织和18例健康对照者滑膜组织，采用qRT-PCR检测滑膜组织中CASC2和miR-218-5p的表达水平。ENCORI在线软件预测和双荧光素酶报告实验分析CASC2和miR-218-5p的靶向相互作用。将CASC2过表达质粒及miR-218-5p mimic转染至人RA滑膜成纤维细胞系MH7A中，qRT-PCR检测细胞中CASC2和miR-218-5p表达水平；CCK-8检测细胞的增殖水平；ELISA检测细胞上清液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)水平；Transwell检测细胞迁移和侵袭能力；Western blot检测基质金属酶(MMP)-2和MMP-9蛋白表达水平。结果 RA患者滑膜组织中CASC2表达水平较健康对照者滑膜组织减少(P<0.05),而miR-218-5p表达水平则增加(P<0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示，CASC2与miR-218...     

抑制LINC00667表达对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖、迁移、侵袭的影响

目的 探究长链非编码RNA（LncRNA）LINC00667对类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（RA-FLS）增殖、迁移、侵袭的影响及其机制。方法 复制类风湿关节炎（RA）模型大鼠,SPF级Wistar大鼠分离踝关节滑膜组织,用实时荧光定量聚合酶链反应（qRT-PCR）检测RA-FLS中LINC00667和miR-19a-3p的表达。在RA-FLS中分别转染si-NC（si-NC组）、si-LINC00667（si-LINC00667组）、miR-NC（miR-NC组）、miR-19a-3p模拟物（miR-19a-3p组）、si-LINC00667与anti-miR-NC（si-LINC00667+ anti-miR-NC组）、si-LINC00667与anti-miR-19a-3p（si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组）。CCK-8法检测各组转染后RA-FLS的增殖抑制率。Transwell法检测RA-FLS迁移、侵袭。Western blotting检测E钙黏蛋白（E-cadherin）、N钙黏蛋白（N-cadherin）表达。双萤光素酶报告验证LINC00667和miR-19a-3p的靶向关系。结果 RA模型组滑膜组织中LINC00667表达量约为正常组的270%,miR-19a-3p表达量约为正常组的36%（P <0.05）。转染成功后,si-LINC00667组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于si-NC组（P <0.05）,si-LINC00667组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于si-NC组（P <0.05）。LINC00667靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量高于miR-NC组（P <0.05）,miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量低于miR-NC组（P <0.05）。si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组RA-FLS的增殖抑制率、E-cadherin蛋白相对表达量低于si-LINC00667+ anti-miR-NC组（P <0.05）,si-LINC00667+ anti-miR-19a-3p组迁移、侵袭细胞数、N-cadherin蛋白相对表达量高于si-LINC00667+ anti-miR-NC组（P <0.05）。结论 抑制miR-19a-3p通过靶向LINC00667,抑制RA-FLS的增殖、迁移、侵袭,LINC00667或可用作诊断和治疗RA的靶点     

羊踯躅含药血清对TNF-α诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞增殖及炎症因子分泌的影响

目的 探究羊踯躅含药血清对肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α, TNF-α)诱导的类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞（rheumatoid arthritis fibroblast-like synoviocytes, RA-FLS）增殖和炎症因子分泌的影响和作用机制,为临床治疗RA提供理论及实验依据。方法 将细胞分为空白组、模型组、雷公藤多苷组、5%和10%空白血清组及5%和10%羊踯躅含药血清组。RA-FLS经TNF-α(10 ng/mL)处理24 h以构建RA细胞模型。CCK-8检测细胞增殖情况。采用ELISA检测炎症因子白细胞介素-1β(interleukin-1 beta, IL-1β)、白细胞介素-17A(interleukin-17A, IL-17A)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、白细胞介素-2(interleukin-2, IL-2)和γ干扰素（interferon-γ, IFN-γ）的含量。Western blot检测蛋白激酶B(protein kinase B, AKT1)、磷酸化AKT1(phosphoryla...     

Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞的表达与功能研究

目的探讨Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞的表达特征及其功能。方法采用RT-PCR和免疫荧光技术,从基因和蛋白水平检测Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞(RA FLS)的表达;采用ELISA方法,检测IgA对RA FLS分泌IL-6的影响。结果采用RT-PCR和免疫荧光染色方法,均检测到Fcα受体在RA FLS的表达。sIgA与RAFLS孵育12h后,细胞分泌IL-6的水平明显增高,差异具有显著性(P<0.01)。mIgA与RA FLS孵育12h后,细胞分泌IL-6的量无明显改变(P>0.05)。sIgA+TNF-α同时与RA FLS孵育12h后,细胞分泌IL-6含量明显高于sIgA或TNF-α单一组(P<0.01)。结论 Fcα受体在类风湿性关节炎人成纤维样滑膜细胞存在表达,sIgA增高RA FLS分泌IL-6的水平,并与TNF-α产生协同作用。     

miR-21对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖与凋亡的影响

探讨miR-21对类风湿关节炎（RA）滑膜成纤维细胞（FLS）增殖与凋亡的影响。方法 Realtime PCR方法检测正常和RA-FLS中miR-21表达差异。RA-FLS分成Control组、miR-NC组（转染mimics control）、miR-21组（转染miR-21 mimics）、miR-21+IGF-1组（转染miR-21 mimics,PI3K/Akt信号通路特异性激活剂IGF-1处理）,CCK-8实验分析细胞增殖活性变化,流式细胞术分析细胞凋亡水平变化,Western blot方法分析细胞中C-Caspase-3、Bax、Bcl-2、PI3K、p-PI3K、Akt、p-Akt蛋白表达变化。结果 与正常-FLS比较,RA-FLS中miR-21表达水平降低（P＜0.05）。与Control组、miR-NC组比较,miR-21组RA-FLS细胞中miR-21表达水平升高,细胞增殖活性降低,细胞凋亡率增加,细胞中C-Caspase-3、Bax蛋白表达增多,Bcl-2蛋白表达减少,p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白水平降低（P＜0.05）。与miR-21组比较,miR-21+IGF-1组RA-FLS增殖活性升高,细胞凋亡率降低,细胞中p-PI3K/PI3K、p-Akt/Akt蛋白表达增多,C-Caspase-3、Bax蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多（P＜0.05）。结论 上调miR-21可抑制RA-FLS增殖,诱导细胞凋亡,机制可能与降低PI3K/Akt信号激活水平有关。     

过表达miR-124a对J774.1细胞中TNF-α和IL-6表达水平及细胞周期的影响

目的：探讨miR-124a对类风湿关节炎（RA）细胞模型小鼠巨噬细胞J774.1细胞中肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素6（IL-6）表达水平及细胞周期的影响,阐明miR-124a在RA中的作用机制。方法：取对数生长期J774.1细胞,以1×10⁶mL^-1均匀接种于培养皿,每组设3个复孔,当细胞融合度达到60%时进行感染,实验分为miR-124a过表达组（感染miR-124a腺病毒载体）、空载腺病毒组（感染阴性病毒液）和空白对照组（不做任何处理）。ELISA法检测感染48 h后3组细胞上清液中TNF-α和IL-6的表达水平,RT-PCR法检测感染48 h后J774.1细胞中TNF-α和IL-6 mRNA相对表达水平,流式细胞术检测感染48 h后3组细胞细胞周期变化。结果：感染48 h后,与空白对照组和空载腺病毒组比较,miR-124a过表达组细胞上清中TNF-α和IL-6表达水平明显降低（P=0.038,P=0.042;P=0.043,P=0.044）,miR-124a过表达组细胞中TNF-α和IL-6 mRNA表达水平明显降低（P=0.001,P=0.002;P=0.001,P=0.003）,G₁期细胞百分率明显升高（P=0.01）,S期和G₂期细胞百分率明显降低（P<0.01）。结论：miR-124a感染小鼠巨噬细胞J774.1后可使细胞的炎性因子表达水平下降,抑制细胞增殖,miR-124a有望成为RA治疗的新靶点。     

长链非编码RNA Linc00638对类风湿关节炎患者炎症和氧化应激的影响

目的 探究类风湿关节炎（RA）患者长链非编码RNA（lncRNA）Linc00638的表达,及其对RA滑膜成纤维细胞（FLS）炎症、氧化应激的影响。方法 收集20例正常人（健康对照组）、35例RA患者（RA组）外周血单个核细胞（PBMCs）,RT-qPCR法检测Linc00638表达,并研究其与临床指标的相关性;构建Linc00638过表达质粒和小干扰RNA,转染至RA-FLS中;CCK8检测细胞活力;RT-qPCR法检测Linc00638的过表达和干扰效率。ELISA法检测细胞上清液中白介素-4（IL-4）、白介素-6（IL-6）、活性氧（ROS）、超氧化物歧化 酶（SOD）的表达。结果 与健康对照组相比,RA患者血沉（ESR）、C反应蛋白、类风湿因子（RF）、抗环瓜氨酸肽抗体（Anti-CCP）、IgA、 C4显著升高（P<0.05）,Linc00638表达显著降低（P<0.01）;ROC曲线下面积AUC为91.86%,Linc00638的最佳截断值为0.74。Spearman相关性分析表明Linc00638与年龄、病程、DAS28、ESR、C反应蛋白、RF、anti-CCP呈负相关,与IL-4,SOD呈正相关（P<0.05）。关联规则分析表明Linc00638的下降与年龄（>60岁）、病程（>10年）、ESR、RF、anti-CCP的升高,与IL-4、SOD的降低具有强关联。过表达Linc00638能够抑制细胞活力,干扰Linc00638能够提升细胞活力。过表达Linc00638组能够显著升高Linc00638、IL-4、SOD水平（P<0.05）,降低IL-6、ROS表达（P<0.05）;si-Linc00638组能显著降低Linc00638、IL-4、SOD表达（P<0.05）,升高IL-6、ROS表达（P<0.05）。结论 Linc00638在RA患者中低表达,可能通过调控炎症和氧化应激参与疾病进展。     

新风胶囊通过miR-23a-3p/PTEN/PI3K/AKT/mTOR抑制骨关节炎CD4+T与软骨细胞共培养的免疫炎症

目的 观察新风胶囊（XFC）含药血清通过调控miR-23a-3p /PTEN/PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制骨关节炎（OA）CD4+T与软骨细胞共培养中免疫炎症反应的作用机制。方法 选取30例OA患者（OA组）及30例正常人（NC组）检测miR-23a-3p、10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（PTEN）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B（AKT）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）的表达,观察临床指标：红细胞沉降率（ESR）、超敏C反应蛋白（hs-CRP）、IgA、IgG、IgM、补体 C3、补体C4的表达,并观察通路与临床指标的相关性。观察 30 例 OA 患者经 XFC 治疗后通路及临床指标的变化。分离及提取 OA-CD4 +T 细胞,transwell小室培养OA-CD4+T细胞与OA-CH,SD大鼠给药灌胃制备XFC含药血清;采用CCK8法检测OA-软骨细胞的细胞增殖;双荧光素酶报告实验分析miR-23a-3p和PTEN的靶向关系;RT-PCR技术检测共培养细胞中miR-23a-3p、PTENmRNA、PI3KmRNA、AKTmRNA、mTORmRNA 的表达;采用 ELISA 法检测 IL-1β、IL-6、IL-10、TNF-α的水平;Western blotting 检测PTEN、PI3K、AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达。结果 与NC组相比,OA组miR-23a-3p、PTEN、PI3K、AKT、IL-1β、IL-6、TNF-α表达显著上调,而PTEN、IL-10表达显著下调（P<0.01）;相关性分析表明：miR-23a-3p与IL-6呈正相关（P<0.01）,PI3K与IL-10呈正相关,mTOR与IL-6、IL-10、补体C3、补体C4呈正相关（P<0.01或P<0.05）;加入XFC含药血清,miR-23a-3p及PI3K/AKT/mTOR通路被抑制,L-1β、IL-6、TNF-α表达水平下降、IL-10表达水平升高（P<0.01）;Model组miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平升高,PTEN、IL-10表达水平降低（P<0.01）;miR-23a-3p经过表达后,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR、IL-1β、IL-6和TNF-α表达水平显著升高,PTEN、IL-10表达水平显著降低（P<0.01或P<0.05）;XFC组IL-1β、IL-6、TNF-α表达降低,IL-10表达升高,miR-23a-3p、PI3K、AKT、mTOR表达下调,PTEN表达上调（P<0.01或P<0.05）。结论 XFC可通过下调miR-23a-3p的表达,抑制PTEN/PI3K/AKT/mTOR通路的活化,改善IL-1β、IL-6,IL-10和TNF-α的表达,降低OA患者炎症反应。     

免疫性血小板减少症患者外周血中microRNA-181a、microRNA-146a、microRNA-326及microRNA-142-3p的表达

目的 通过检测4种免疫相关的microRNAs （miR-181a、miR-146a、miR-326和miR-142-3p）在免疫性血小板减少症（ITP）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达,探讨miRNA在ITP中的作用及意义。方法 采用实时定量PCR（RT-PCR）法,检测34例ITP患者（ITP组）及31例健康人（正常对照组）外周血PBMCs中4种miRNAs的表达水平;改良MAIPA法检测ITP组中22例患者抗血小板自身抗体GPIIb/IIIa、GPIb/IX,分析miRNA与抗血小板自身抗体的关系,以及与血小板计数等临床指标的相关性。结果 ITP组PBMCs中miR-146a、miR-326和miR-142-3p表达水平与正常对照组相比明显降低（P<0.05）,miR-146a与miR-326 (r=0.437, P=0.011）,miR-146a与miR-181a (r=0.652, P<0.001),miR-326与miR-181a(r=0.745, P<0.001）的表达水平均呈显著正相关,且miR-146a与ITP患者血小板计数呈正相关（r=0.468,P=0.016）。ITP组不同性别间4种miRNAs表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。ITP组中26例患者接受糖皮质激素治疗后,有效组与无效组4种miRNAs表达水平差异无统计学意义（P>0.05）。GPIb/IX、GPIIb/IIIa单阳性组、双阳性组和双阴性组间miRNAs的表达水平均无显著性差异（P>0.05）。结论 miR-146a、miR-326及miR-142-3p表达异常在ITP的发生和发展中可能发挥了一定的作用。     

miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症中的表达

目的：探讨外周血单个核细胞（PBMCs）中miR-144-5p、miR-668-3p、miR-134-5p在儿童原发性免疫性血小板减少症（ITP）中的表达变化。方法：采用RT-qPCR检测25例ITP患儿和15例正常对照PBMCs中3种miRNAs相对表达量,Sysmex XE-5000全自动血细胞分析仪检测血小板计数及未成熟血小板分数（IPF%）;分析miRNAs与血小板计数的相关性,ROC曲线分析检验效能。结果：ITP患儿组PBMCs中的miR-144-5p和miR-668-3p较对照组表达均上调,miR-134-5p表达下调（均P＜0.05）。miR-144-5p和miR-668-3p在急性ITP患儿组中表达量要高于慢性ITP患儿组（均P＜0.05）,且miR-144-5P（r=-0.802,P＜0.001）和miR-668-3p（r=-0.753,P＜0.001）的相对表达量与外周血小板计数呈负相关。相较于单个指标,miR-144-5p联合IPF%诊断急性ITP的AUC为0.960,灵敏度和特异度分别为93.3%和100%;而miR-134-5p联合IPF%诊断慢性ITP的AUC为0.967,灵敏度和特异度分别为90.0%和93.3%。结论：miR-144-5p和miR-668-3p在ITP患儿PBMCs中表达显著上调,miR-134-5p表达下调,这些改变可能在疾病的发生与发展中发挥了重要作用。     

抗CCP抗体与基质金属蛋白酶3在类风湿关节炎早期诊断中的应用

目的观察类风湿性关节炎（RA）早期患者治疗前后血液中抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体和基质金属蛋白酶3（MMP-3）的含量变化,评价两者在RA患者早期诊断中的临床价值。方法用酶联免疫吸附试验法对84例早期RA患者、96例非nA患者和26名健康体检者中抗CCP抗体及MMP-3进行检测;结合影像学诊断以及临床跟踪随访情况评价两者与病情活动度、骨侵蚀度的相关性。结果RA早期患者治疗前血液中抗CCP抗体和MMP-3的含量与非RA患者和健康体检者相比均明显升高（P〈0．01）,治疗后含量均明显降低,与非RA患者和健康体检者相比无显著性差异（P〉0．05）。非RA患者抗CCP抗体含量变化不明显,与健康对照组相比MMP-3含量无显著性差异（P〉0．05）。结合影像学诊断及跟踪随访发现抗CCP抗体阳性者比抗CCP抗体阴性者病情严重,骨侵蚀明显（χ^2=5．059,P〈0．05）,致残率高;MMP-3含量变化与病情活动度有关（r=0．76,P〈0．05）,活动时含量显著升高,恢复期降低,前后相比有显著性差异（P〈0．05）。结论抗CCP抗体与MMP-3含量可作为RA患者早期诊断指标;动态检测两者的血液含量有利于RA的早期干预;联合检测抗CCP抗体和MMP-3在早期发现RA患者、为RA患者的彻底治愈提供理论基础。     

苗药验方四大血对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡和焦亡的影响

目的 探讨苗药验方四大血（SX）对人类风湿性关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）凋亡和焦亡的影响。方法 数据库检索RA及凋亡、焦亡相关靶蛋白;韦恩软件分析获得与RA相关凋亡及焦亡蛋白;RA-凋亡-焦亡靶蛋白互作（PPI）网络构建以获取RA中凋亡和焦亡重要靶蛋白;Autodock vina软件进行分子对接验证SX主要活性成分与凋亡和焦亡相关蛋白的结合能力,并通过PyMoL软件进行可视化。人源第2代RA-FLSs MH7A细胞检测SX对MH7A细胞抑制率后分为空白对照组、雷公藤多甘片阳性对照组（TGT组,5 mg/L）及 5、10、20、40 mg/L SX 组,采用 Wound- healing 实验、Transwell 法、ELISA 法及Western blot法分别检测MH7A细胞的迁移和侵袭能力、凋亡和焦亡相关蛋白。结果 获得RA相关凋亡靶蛋白9个、焦亡靶蛋白15个、RA-凋亡-焦亡重叠靶蛋白4个,SX主要活性成分与TNF-α、Fas、Bax等靶蛋白均具有较高亲和力;与空白组相比,给药处理24、48、72 h,随着SX浓度增加,对MH7A细胞抑制率增加（P<0.05）,药物作用6、12、24 h,同一时间点内MH7A细胞划痕修复率随SX浓度增加而减少（P<0.05）;药物作用24 h,20、40 mg/L SX组MH7A细胞侵袭个数减少（P<0.05）;20、40 mg/L SX组和TGT组TNF-α、IL-1β、IL-18的表达水平均下降（P<0.05）;20、40 mg/L SX组Bax/Bcl-2比值均增加（P<0.05）;5、40 mg/L SX组Caspase-1表达量均减少（P<0.05）;20、40 mg/L SX组Fas和FasL表达量均增加（P<0.05）。结论 SX可诱导MH7A细胞凋亡、抑制其焦亡,减缓炎症反应,其作用机制可能与下调TNF-α、IL-1β、IL-18细胞因子水平,上调Bax、Fas、FasL,抑制Bcl-2和Caspase-1蛋白表达有关。     

miRNA-142-3p对肺泡巨噬细胞炎症过程的负向调控及其机制

目的 探索miRNA-142-3p (miR-142-3p)对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺泡巨噬细胞炎症反应的负向调控作用及其可能机制.方法 用100 ng/mL LPS诱导肺泡巨噬细胞NR8383,实时定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法分别检测诱导后0、6、24、48 h时细胞中miRq42-3p和高迁移率族蛋白(HMGB1)的表达.细胞体外转染miR-142-3p拟似物(miR-142-3p mimic),qFCR检测转染后细胞中miR-142-3p及炎症因子[肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白介素(IL)-6、l-1β和巨噬细胞炎症蛋白2β(MIp2β)]的表达,蛋白质印迹法检测细胞中HMGB1的表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测细胞培养液中HMGB1的含量.结果 LPS诱导NR8383细胞后,细胞中miR-142-3p在48 h时表达最高,HMGB1在24h时最高,与0h时相比差异均有统计学意义(P＜0.05).过表达miR-142-3p后,NR8383细胞中miR-142-3p的表达升高(P＜0.05),HMGB1 mRNA和蛋白及TNF-α、IL-6、IL-1β和MIP-2β mRNA的表达均降低(P＜0.05).结论 miR-142-3p能介导LPS诱导的NR8383细胞的炎症反应过程,该效应可能是通过负向调控HMGB1的表达来实现的.