AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响

目的:研究表皮生长因子受体(EGFR)抑制剂AG1478对大鼠脊髓损伤后反应性星形胶质细胞增生的影响。方法:SD大鼠60只,随机分为对照组,AG1478组和假手术组,各组20只。观察AG1478对大鼠脊髓损伤后磷酸化表皮生长因子受体(pEGFR)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达、髓鞘脱失、神经功能恢复及体重的影响。结果:AG1478组大鼠pEGFR和GFAP的表达较对照组明显减弱(P0.01),损伤区脱髓鞘范围明显较对照组减小(P0.01),BBB评分明显高于对照组(P0.01),体重较对照组增加更明显(P0.05)。结论:AG1478可能通过阻断星形胶质细胞上的EGFR通路抑制胶质增生,促进脊髓损伤大鼠神经功能的恢复。     

Tip30调节EGFR核内化及其与核内EGFR靶分子或基因的关联性研究

目的 探讨肿瘤转移抑制基因(Tip30)调节表皮生长因子受体(EGFR)核内化及与核内化EGFR靶分子或基因的关联性,为针对EGFR分子靶向治疗提供依据.方法 采用野生型Balb/c小鼠(Tip30+/+小鼠,对照组)和Tip30基因敲除、Balb/c纯背景的小鼠(Tip30-/-小鼠)作为动物模型(每组6只),饲养18个月后处死,取肺组织,福尔马林固定,酒精脱水,石蜡包埋,组织切片后,进行组织学检查、免疫组化检测、组织免疫荧光检测、体外培养细胞免疫荧光/激光共聚焦检测、免疫印迹检测、细胞计数试剂盒-8方法体外细胞抑制实验、荧光定量PCR检测和基因芯片数据库分析.结果 Tip30基因敲除促进肺上皮细胞增殖、上调细胞周期蛋白cyclin DI表达;基因转染后Tip30-SH1、Tip30-SH2细胞抑制Tip30表达;Tip基因抑制致EGFR在早期内涵体滞留;表皮生长因子(EGF)处理可诱导Tip30细胞核内化;Tip30基因抑制可促进EGF诱导EGFR细胞核内化,Tip30蛋白可在早期内涵体内聚集.结论 Tip30基因抑制干扰EGFR分选,抑制EGF诱导EGFR降解,延迟EGFR下游信号分子激活时间,同时促进EGF诱导的EGFR细胞核内化,促进肺癌细胞生长,而与细胞膜或细胞浆内EGFR信号通路激活的关联性较小.     

AG1478对GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的:探讨表皮生长因子受体阻滞剂TyrophostinAG1478对肾癌GRC-1细胞的诱导凋亡作用及其机制,为肾癌的生物学特征研究和药物治疗提供理论依据。方法:将不同浓度的AG1478作用于体外培养的肾癌GRC-1细胞,以研究表皮生长因子受体信号转导阻滞剂对细胞增殖和细胞周期分布的影响。结果:AG1478抑制肾癌GRC-1细胞的增殖,诱导细胞周期停留在G1期,诱导肾癌GRC-1细胞凋亡。结论:表皮生长因子受体特异性阻滞剂可抑制肾肿瘤细胞的增殖,有望成为抗肾脏恶性肿瘤药物。     

姜黄素诱导黑素瘤细胞凋亡的研究

目的:研究姜黄素诱导黑素瘤细胞A375、M14凋亡的机制。方法:将对数生长的黑素瘤细胞A375、M14分别用姜黄素干预;显微镜下观察黑素瘤细胞株A375和M14的凋亡状态;应用Western Blot方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Ba x、Caspase-3、γ-H2A X、NF-κB的变化;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果:实验发现姜黄素干预黑素瘤细胞后可见细胞发生凋亡;在姜黄素诱导黑素瘤细胞凋亡过程中,凋亡相关蛋白Bax和γ-H2AX表达水平较对照组升高,而Bcl-2、NF-κB表达水平较较对照组下降,有活性的Caspase-3生成;随着姜黄素的浓度增加,黑色素瘤细胞早期凋亡的比例增加。结论:姜黄素诱导黑素瘤细胞生长凋亡的机制可能与其对凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Caspase-3、γ-H2AX、NF-κB的表达调控有关。     

西比灵对脑缺血再灌细胞凋及其相关基因表达的影响

目的 研究西比灵对脑缺血再灌细胞凋亡及其相关基因表达影响。方法 采用沙鼠脑缺血再灌损伤模型,原位末端标记法（TUNEL）和免疫组化方法分别检测脑缺血再灌后不同时间脑组织细胞凋亡及其相关基因Bcl-2、Bax蛋白表达。结果 西比灵能增加脑缺血后脑组织Bcl-2蛋白表达（P＜0.05),降低其Bax蛋白表达（P＜0.05),使缺血神经细胞凋亡减轻（P＜0.001)。结论 西比灵能增加Bcl-2表达,降低Bax表达,减轻细胞凋亡。     

去松果体对β—淀粉样蛋白诱导海马细胞凋亡及相关基因表达的探讨

目的：探讨松果体除对β－淀粉样蛋白（Aβ）神经毒性影响。方法：SD大鼠随机分为松果体除组和假手术组，术后40d给Aβ1-40右侧海马注射，7d后标本用改进甲醇刚果红染色以及HE、TUNEL法检测海马凋亡细胞、SABC法检测凋亡相关基因Bax、Bcl-2表达。结果：实验组海马细胞凋亡数比对照组增多（P＜0．01），Aβ周围Bax表达比对照组增强（P＜0．01）；而Bcl-2在两组中表达无明显差别（P＞0．05）。结论：大鼠松果体除可以使Aβ1-40诱导海马细胞凋亡增多，与Bax表达增强有关。     

家蝇胚胎细胞抗菌肽对黑色素瘤细胞A375抑制作用的实验研究

目的 研究家蝇胚胎细胞MDEC-07114抗菌肽对黑色素瘤细胞A375的抑制作用.方法 利用脂多糖诱导家蝇胚胎细胞MDEC-07114提取抗菌肽.将家蝇胚胎细胞抗菌肽分为40,80,160,320和640 μg/ml五个实验组,同时以PBS和培养基作为正常对照组.采用MTT比色法测定不同浓度抗菌肽作用下细胞生长曲线,流式细胞术观察抗菌肽对黑色素瘤细胞A375周期及凋亡的影响.结果 ①在不同浓度家蝇胚胎细胞抗菌肽作用下,黑色素瘤细胞A375的生长受到明显的抑制,药物浓度越高、作用时间越长,对细胞的抑制作用越强.②各浓度组抗菌肽引起A375细胞的G2/M期升高,高浓度组(＞160 μg/ml)可引起G0/G1期降低,PI明显升高,与正常对照组相比差异具有统计学显著性意义(F=214.89,P＜0.05).与正常对照组相比,各实验组引起的A375细胞凋亡率差异无统计学显著性意义(F=14.17,P＞0.05).结论 家蝇胚胎细胞抗菌肽对肿瘤细胞的抑制作用随着药物剂量的增加和作用时间的延长而增强.家蝇胚胎细胞抗菌肽对A375细胞的抑制机理可能主要是阻滞细胞周期的正常发育.     

表皮生长因子受体活化与胰腺癌细胞解离关系的实验研究

目的 明确表皮生长因子受体(EGFR)活化参与胰腺癌细胞解离调节的分子机制.方法 通过免疫荧光法检测仓鼠高转移株(PC-1.0)和低转移株(PC-1)胰腺癌细胞中EGFR、活化(磷酸化)EGFR (p-EGFR)、活化(磷酸化)丝裂原活化蛋白激酶激酶2 (p-MEK1/2)及活化(磷酸化)细胞外信号调节激酶1/2 (p-ERK1/2)的表达变化及其与胰腺癌细胞解离状态变化的关系.结果 胰腺癌细胞解离因子(DF)明显诱导低转移株胰腺癌细胞(PC-1)中EGFR、p-EGFR、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达,同时诱导其细胞克隆解离.相反,AG1478(EGFR活化抑制剂)明显抑制高转移株胰腺癌细胞(PC-1.0)中EGFR、p-EGFR、p-MEK1/2和p-ERK1/2的表达,同时诱导PC-1.0细胞聚集成细胞克隆.结论 表皮生长因子受体活化后激活MEK/ERK信号通路,从而参与胰腺癌细胞解离的调节.     

青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:研究青蒿琥酯诱导人胃癌SGC-7901细胞凋亡作用及其可能机制.方法:应用流式细胞术(FCM)、透射电镜(TEM)等方法检测不同浓度下青蒿琥酯对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响,并应用Western Blot法检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平.结果:经青蒿琥酯处理后,人胃癌SGC-7901细胞凋亡率升高,并具有时间浓度依赖性(P＜0.05),癌细胞被阻滞于G0/G1期;电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;Western Blot法检测到凋亡相关基因Bcl-2表达减弱,Bax表达增强(P＜0.05).结论:青蒿琥酯能有效抑制人胃癌SGC-7901细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与下调凋亡相关基因Bcl-2、上调Bax表达有关.     

羊水过少孕妇血清中表皮生长因子与胎盘Bcl-2、Bax基因表达关系的初步研究

目的探讨羊水过少病例中母血及脐血中表皮生长因子(EGF)与胎盘组织中凋亡相关基因Bcl-2、Bax表达的联系。方法放射免疫分析法测定羊水过少组12例母血、脐血EGF浓度,以同期正常足月妊娠12例为对照组。荧光定量PCR及免疫印迹法检测羊水过少组与正常对照组中胎盘中Bax、Bcl-2基因差异。结果①羊水过少组母血、脐血EGF浓度与对照组比较明显减少(P<0.01)。②羊水过少组胎盘中Bax的表达与正常组相比都明显上升,Bcl-2表达与正常组相比都明显下降,差异有统计学意义(P<0.01);羊水过少组胎盘中的Bax与Bcl-2的比值(Bax/Bcl-2)与正常组相比明显上升,差异有统计学意义(P<0.01)。③羊水过少组母血、脐血EGF与胎盘组织中Bcl-2呈正相关,与Bax表达无相关性。结论母血、脐血EGF减少可能是引起羊水过少的原因之一。羊水过少组胎盘组织中Bcl-2表达下降,Bax表达增高,EGF可以通过上调Bcl-2的表达,抑制胎盘细胞凋亡所引起的羊水减少。     

三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞促凋亡作用的体外实验

目的 探讨三氧化二砷对人冠状动脉平滑肌细胞(HCSMC)的促凋亡作用机制及其对损伤动脉再狭窄防治的意义.方法 将人冠状动脉平滑肌细胞传代培养,将细胞分为正常对照组、三氧化二砷(浓度分别为1.0,2.0,3.0,4.0,5.0 μmol/L)组,通过原位细胞凋亡检测试剂盒(TUNEL),流式细胞仪检测细胞周期观察三氧化二砷促细胞凋亡作用,WESTERN印迹检测凋亡相关基因Bcl-2和Bax的表达变化,RT-PCR检测三氧化二砷对E2F-1的作用.结果 随三氧化二砷浓度的增加它能够抑制HCSMC的增殖并且该作用与时间及三氧化二砷浓度呈正相关(观察第7天、浓度为5.0 μmol/L时活细胞数为(4.41±0.10)×105/mL与正常对照组(30.11±0.93)×105/mL相比较差异具有统计学意义(P＜0.05),TUNEL可见凋亡细胞由16.0%±3.1%增至38.7%±2.7%(P＜0.05),流式细胞仪可见4.0 μmol/L三氧化二砷作用HCSMC 48 h后代表细胞凋亡的亚二倍体峰在48 h为最多,WESTERN印迹可见三氧化二砷上调凋亡促进基因Bax的表达而下调凋亡抑制基因Bcl-2表达.RT-PCR可见E2F-1 mRNA表达于48 h最少(P＜0.05).正常对照组均不见典型上述变化.结论 三氧化二砷可促进HCSMC的凋亡,降低HCASMC转录因子E2F-1 mRNA表达,从而抑制HCASMC的过度增殖、迁移和黏附.     

MTX对映体耐药A549细胞株中EGFR基因mRNA的表达分析

【摘要】目的探讨表皮生长因子受体（epidermalgrowthfactorreceptor，EGFR）在氨甲喋呤（methotrexate，MTX）对映体L-（＋）-MTX和D-（-）-MTX耐药A549细胞株中的表达。方法采用RT-PCR方法测定肺癌A549敏感细胞株和15p,moUL、35p,mol／L、55p,mol／L的L-（＋）-MTX和D-（-）-MTXA549耐药细胞株中EGFRmRNA表达情况。结果15μmol／L、35μmol／L、55μmol／LL-（＋）-MTXA549耐药细胞株中EGFR基因表达的mRNA相对含量分别为肺癌A549敏感细胞株的（1．55±0．26）倍、（1．86±0．13）倍、（1．20~0．05）倍。RT—PCR结果显示，A549敏感细胞株和L-（＋）-MTX各浓度A549耐药株均扩增出315bp条带，有EGFR基因表达，而3种浓度的D-（-）-MTX耐药细胞株中EGFR基因不表达。结论MTX诱导耐药后A549细胞株中EGFRmRNA发生变化，且在3种浓度两种对映体细胞株间具有明显的手性差异，MTX可能通过改变EGFR基因启动子的甲基化状态，影响EGFR的表达。     

氯法拉滨对NB4细胞的增殖抑制作用及对Bcl-2表达的影响

本研究观察氯法拉滨对人急性髓系白血病NB4细胞的增殖抑制作用并探讨其可能的作用机制。用MTT法观察氯法拉滨0.01-0.1μmol/L作用于NB4细胞48 h的增殖抑制作用;氯法拉滨0.01-0.1μmol/L作用于NB4细胞24 h后,用流式细胞术分析其细胞的凋亡水平,Western blot检测细胞内Bcl-2的蛋白表达。结果表明,氯法拉滨对NB4细胞具有浓度依赖性增殖抑制作用。氯法拉滨作用24 h后,NB4细胞凋亡率明显增加,Bcl-2蛋白表达下调。结论:氯法拉滨能抑制NB4细胞增殖,其作用机制可能与下调Bcl-2的蛋白表达,诱导NB4细胞凋亡有关。     

过氧化物酶体增殖因子激活受体γ介导5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡的研究

目的 探讨5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)诱导人卵巢癌CoC1细胞凋亡作用的分子机制.方法 采用MTT法测定ADFMChR对卵巢癌CoC1细胞系细胞增殖抑制作用;DNA琼脂糖凝胶电泳证实ADFMChR诱导CoC1细胞凋亡作用;Western印迹检测ADFMChR对CoC1细胞过氧化物酶体增殖物激活受体(PPARγ)、Bcl-2及Bax蛋白表达的影响.结果 MTT法显示ADFMChR呈剂量依赖性抑制CoC1细胞增殖作用,IC50值为7.76 μmol/L;ADFMChR(30.0 μmol/L)处理CoC1细胞48 h的DNA琼脂糖凝胶电泳呈现典型"梯形"条带,加用PPARγ阻断剂(GW9662)后条带消失;Western印迹分析ADFMChR作用CoC1细胞后PPARγ和Bax蛋白表达上调,而Bcl-2蛋白表达下调(P<0.05或P<0.01);GW9662具有阻断ADFMChR对Bcl-2的下调和Bax上调作用.结论 ADFMChR通过活化PPARγ,进而减少Bcl-2/Bax比例,诱导CoC1细胞凋亡.     

脊髓背角神经元凋亡在炎性痛大鼠吗啡耐受中作用研究

目的:探讨NMDAR及谷氨酸转运体(GT)在阿片耐受机制中的作用,以及脊髓神经元凋亡在慢性阿片耐受形成机制中的意义.方法:将60只健康雄性SD大鼠行鞘内置管后随机分为6组(n=10),空白对照组(A)于左后足踝关节腔注射生理盐水50μl,其他5组注射CFA 50μl.3d后分别经鞘内给予生理盐水10μl(A和B)、吗啡10μg(C组)、吗啡20μg(D组)、吗啡10μg+NMDA受体抑制剂MK-801 10nM(E组)、吗啡10μg+GT抑制剂PDC10μg(F组),1日2次,连续给药7 d.检测大鼠左后肢机械缩爪阈值评价其痛行为学,于给药后第7天取出左侧腰膨大处脊髓进行TUNEL染色和Western blotting检测.结果:C、D两组关节炎大鼠在鞘内给予吗啡第7天形成较稳定的吗啡耐受,MK-801和PDC分别对吗啡耐受的机械痛敏具有抑制和促进作用.B组大鼠脊髓背角凋亡细胞数及凋亡相关蛋白表达与A组比较,差异无统计学意义.与B组比较,C、D组大鼠脊髓背角的凋亡细胞数显著增加(P＜0.01),Bax和caspase-3蛋白表达上调(P＜0.01),Bcl-2表达下调(P＜0.01).与C组比较,E组大鼠脊髓背角凋亡细胞显著减少(P＜0.05),Bax和caspase-3蛋白表达下调(P＜0.01),Bcl-2表达上调(P＜0.05);F组凋亡细胞增多(P＜0.01),Bax和caspase-3蛋白表达上调(P＜0.01),Bcl-2表达下调(P＜0.01).结论:脊髓神经元凋亡可能是慢性阿片耐受的神经基础,NMDAR及GT在阿片耐受的神经细胞凋亡过程中发挥作用.     

EGF对食管鳞癌细胞HIF-1α基因表达及功能的影响

目的 研究表皮生长因子（EGF）对人食管鳞癌细胞株HIF-1α基因表达及功能的影响及其对血管生成拟态相关基因表达的影响.方法 将人食管鳞癌细胞株Eca-109、TE13分为试验组（加入含EGF 100 μg/L的无血清DMEM培养液）和对照组（加入无血清DMEM培养液）,分别于常氧及缺氧下培养.应用蛋白质印迹法（Western blot）检测细胞HIF-1α蛋白与血管内皮钙黏附素（sVE-cadherin）、层黏连蛋白（Laminin5γ2）、酪氨酸蛋白激酶受体（EphA2）和基质金属蛋白酶-2（MMP-2）基因蛋白的表达,应用逆转录聚合酶链反应法（RT-PCR）检测HIF-1α与sVE-cadherin、EphA2和MMP-2 RNA的表达,基质胶（Matrigel）三维培养显微镜下观察并计数两组细胞的管状结构.结果 常氧和缺氧情况下,与对照组比较,试验组Eca-109、TE13细胞HIF-1α蛋白与sVE-cadherin、Laminin5γ2、EphA2基因蛋白的表达及sVE-cadherin、EphA2 RNA水平的表达均显著增加,差异均有统计学意义（P＜0.05）;而对MMP-2基因蛋白的表达及RNA水平的表达无明显影响,差异无统计学意义（P＞0.05）.Eca-109、TE13细胞均可形成典型的管网状结构,试验组在EGF作用下数目增加,与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 在常氧和缺氧情况下EGF均可促进Eca-109、TE13细胞HIF-1α蛋白与sVE-cadherin、EphA2等基因蛋白及RNA的表达,均可形成典型的管网状结构,且EGF能有效促进肿瘤细胞体外血管生成拟态形成.     

体外血管内皮生长因子单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响

目的:在体外观察血管内皮生长因子(VEGF)单克隆抗体对C6胶质瘤细胞增殖、侵袭和迁移力的影响。方法:采用氯化钴(Co Cl2)模拟缺氧环境,予以0、0.1、1、10μg/m L的VEGF抗体,对常氧或缺氧条件下对C6胶质瘤细胞进行处理。通过MTT实验检测细胞增殖,Transwell实验检测细胞的侵袭和迁移能力,Western blotting检测HIF-1α蛋白、FAK/Pyk2总蛋白及磷酸化FAK-Tyr397/Pyk2-Tyr402表达水平变化。结果:200μmol/L Co Cl2明显抑制C6细胞增殖(P<0.05),10μg/m L VEGF抗体可明显抑制C6细胞增殖(P<0.05)。与常氧相比,缺氧可使C6细胞的迁移、侵袭能力增强(P<0.05)。常氧和缺氧下,VEGF抗体的干预均增强C6细胞的迁移、侵袭能力(P<0.05),且相对于常氧,缺氧可进一步增强VEGF抗体促C6细胞迁移、侵袭的作用(P<0.05)。Co Cl2干预可增加C6细胞中HIF-1α的含量;在常氧和缺氧情况下,只有1μg/m L VEGF抗体可降低FAK的总蛋白量(P<0.05);在缺氧情况下,VEGF抗体可明显增高Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平。结论:在缺氧情况下,VEGF抗体的干预可使Pyk2-Tyr402位点的磷酸化水平增高,引起C6细胞的侵袭迁移能力进一步增强。     

淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡与奥氮平的保护作用

背景:在阿尔茨海默病中起着重要作用的淀粉样β蛋白能够诱导细胞凋亡。目的:探讨奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡的机制及其保护作用。单位:解放军总医院南楼神经科。设计:随机设计。材料:实验于2002-05/2003-03在加拿大萨斯卡彻温大学医学院神经精神研究所完成。方法:P12细胞在RPMI1640培养液中培养。在96孔板每孔中接种100μL细胞悬液,在胶原被覆的25cm2培养瓶中接种5mL细胞悬液,培养24h后,分别加50μmol/L、100μmol/L奥氮平培养24h,再加不同浓度的淀粉样β蛋白25～35(0.01μmol/L、2μmol/L、20μmol/L)培养24h。将收获好的96孔板以淀粉样β蛋白25～35诱导PC12细胞凋亡,采用MTT比色分析测定细胞存活率。收获25cm2培养瓶中的PC12细胞,应用Westernblot检测奥氮平对PC12细胞Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响。主要观察指标:细胞存活率的测定,PC12细胞中Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的表达水平。结果:①细胞存活率比较:淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞的细胞活性从75%降低到35%;50μmol/L、100μmol/L奥氮平预处理组PC12细胞的活性明显提高。②奥氮平对淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞凋亡中Bax表达的影响:0.01μmol/L,2μmol/L,20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞Bax的表达增加,50μmol/L奥氮平预处理使淀粉样β蛋白25～35诱导的PC12细胞Bax的表达减低。③奥氮平对Aβ25～35诱导的PC12细胞凋亡中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达的影响:0.001μmol/L、0.01μmol/L淀粉样β蛋白处理的PC12无变化,50μmol/L奥氮平预处理对PC12细胞表达亦无影响;2μmol/L、20μmol/L淀粉样β蛋白25～35处理的PC12细胞表达增高,50μmol/L奥氮平预处理能抑制其表达升高。结论:①淀粉样β蛋白25～35能够诱发与细胞凋亡密切相关的Bax、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在培养的PC12细胞中高表达。②奥氮平具有降低其表达,提高PC12细胞存活的保护作用。     

表皮生长因子调控核因子κB诱导卵巢上皮性癌紫杉醇耐药的作用及机制

目的探讨表皮生长因子(EGF)中上调的核因子κB(NF-κB)诱导卵巢上皮性癌(EOC)紫杉醇耐药的作用及机制。方法选取江苏省徐州市陆军第七十一集团军医院妇产科2015年1月至2019年1月收治的EOC亲本细胞系(A2780细胞)和紫杉醇耐药细胞系(A2780/Taxol细胞)及所对应的裸鼠实验分成A组(A2780组)、B组(A2780+CRM197组)、C组(A2780/Taxol组)、D(A2780/Taxol+CRM197组)四组,A组和C组加入100μg/ml DMSO培养基培养24 h,B组和D组加入100μg/ml CRM197培养基培养24 h。同时按NF-κB在紫杉醇的IC50及P-gp蛋白表达中的表达情况将上述分组细分成A1组(空载体)、B1组(NF-κB+siRNA组)、C1组(空载体+CRM197组)、D1组(NF-κB siRNA+CRM197组)。所有纳入者的肝素结合表皮生长因子(HB-EGF)和表皮生长因子受体(EGFR)表达均采用双重免疫荧光染色法检测,NF-κB表达采用蛋白印迹法检测,而裸鼠移植瘤组织(A2780/Taxol组与A2780/Taxol+CRM197组)中EGFR和P-糖蛋白(P-gp)表达则采用免疫组化SP法检测。结果C、D组HB-EGF、EGFR、NF-κB表达均低于A、B组,裸鼠移植瘤组织中NF-κB表达均低于A、B组(P<0.05),同时C组以上三项指标的表达及裸鼠移植瘤组织中NF-κB表达均高于A组(P<0.05),单NF-κB表达来看,EOC患者(A、B、C、D组)的NF-κB表达均低于裸鼠移植瘤组织中NF-κB表达(P<0.05)。B1、C1、D1组A2780/Taxol细胞对紫杉醇的IC50及P-gp蛋白表达均明显显著低于A1组,而B1、C1、D1组细胞内Rh123荧光强度则明显高于A1组(P<0.05);D1组A2780/Taxol细胞对紫杉醇IC50及P-gp蛋白表达均低于B1、C1组,Rh123荧光强度高于B1、C1组(P<0.05),其中B1与C1组的IC50、P-gp表达和Rh123荧光强度均无显著差异(P>0.05)。A2780/Taxol+CRM197组EGFR、P-gp表达强度均低于A2780/Taxol组(P<0.05)。结论在EOC的治疗中,EGF可通过调控EGFR、NF-κB、P-gp等信号通路而诱导其对紫杉醇产生耐药,NF-κB表达与EOC的紫杉醇耐药有相关性。