促进乳腺癌增殖转移和肿瘤干细胞特征的研究

目的 研究Gankyrin在乳腺肿瘤中的表达及其促进肿瘤进展的分子机制。方法 利用数据库研究Gankyrin在乳腺癌中的表达情况,并分析其表达与患者生存的关系。在BT549和MDA-MB-231乳腺癌细胞系过表达和敲减Gankyrin基因后,利用CCK-8、Transwell和流式细胞实验分析细胞增殖、转移和肿瘤干细胞的比例。结果 通过数据库分析显示Gankyrin在乳腺癌组织表达较高(P＜0.01),其高表达与患者的不良预后有关(P＜0.01)。与正常乳腺组织相比,乳腺癌组织中Gankyrin启动子甲基化水平较低(P＜0.01)。通过在乳腺癌细胞中过表达和敲减Gankyrin基因后,表明Gankyrin具有促进乳腺肿瘤细胞增殖和转移的能力,可以维持乳腺癌细胞的肿瘤干细胞特征(P＜0.01)。结论 Gankyrin在乳腺癌高表达与患者的不良预后相关,其可能作为乳腺癌肿瘤标记物。     

长链非编码RNA HCP5通过调控凋亡通路促进三阴性乳腺癌的研究

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)HCP5在三阴性乳腺癌中的作用及其机制。方法 通过qPCR分析HCP5在乳腺癌细胞系和正常乳腺细胞系中的mRNA含量,RNA Scope方法分析HCP5在乳腺组织和癌组织中的表达;通过CCK-8实验和细胞存活/死亡实验分析敲低HCP5对三阴性乳腺癌细胞增殖能力的影响;裸鼠体内实验分析敲低HCP5对三阴性乳腺癌细胞成瘤能力的影响;抗体芯片技术分析敲低HCP5影响凋亡通路中BIRC3和Caspase-3蛋白的表达。结果 与正常乳腺细胞和其他类型乳腺癌细胞相比,HCP5在三阴性乳腺癌细胞系中表达上调(P＜0.05),与正常乳腺组织和其他亚型乳腺癌组织相比,HCP5在三阴性乳腺癌组织中表达上调(P＜0.05);与对照组相比,HCP5敲低组三阴性乳腺癌细胞增殖减少、凋亡增加,且原位移植瘤的生长受到抑制(P＜0.01);敲低HCP5引起凋亡通路中凋亡抑制因子BIRC3表达量降低、Caspase-3表达增加,差异具有统计学意义(P＜0.05),对MAPK信号通路蛋白的影响组间差异无统计学意义。结论 lncRNA HCP5通过调控细胞凋亡途径促进三阴性乳腺癌的恶性进展。     

乳腺癌中miR-221、miR-222表达水平对GATA3和FOXA1蛋白的影响及其作用机制

目的： 探讨乳腺癌中miR-221和miR-222（miR-221/222）表达水平对GATA结合蛋白3（GATA3）和叉头框蛋白A1（FOXA1）表达的影响及其作用机制。方法： 收集汕头大学医学院附属肿瘤医院2020年1月—2021年5月经手术切除的86例乳腺浸润性导管癌及其癌旁组织标本,分别采用茎环引物实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫组织化学方法检测癌组织和相应癌旁组织中miR-221/222的表达水平及GATA3、FOXA1蛋白的表达水平,分析其与临床病理指标的关系。进一步在5种乳腺癌细胞系（MCF-7、T47D、SKBR3、MDA-MB-231和BT-549）中转染miR-221/222 mimics后,采用qPCR检测各细胞中miR-221/222的表达水平;采用Western blot检测转染后MCF-7细胞中GATA3、FOXA1、雌激素受体-α（ER-α）和钙黏蛋白E（E-cadherin）的表达;用细胞划痕和迁移侵袭实验检测转染后MCF-7细胞修复和迁移侵袭能力。结果： 在乳腺癌组织中,miR-221/222的表达水平明显高于癌旁正常乳腺组织（P=0.00）。miR-221/222表达水平在FOXA1、GATA3、ER-α及孕激素受体（PR）阴性表达组均显著高于阳性表达组（P<0.01）;在Her-2阳性和高表达Ki-67的乳腺癌中较Her-2阴性和低表达Ki-67组显著升高（P<0.05）;在三阴性和Her-2阳性亚型乳腺癌中显著高于Luminal A和Luminal B1型乳腺癌（P=0.00）;而miR-221/222水平与患者年龄、月经状况、肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移及TNM分期无显著相关关系（P>0.05）。在5种乳腺癌细胞系中,miR-221/222在MCF-7细胞中均低表达。与对照组相比,在MCF-7细胞中瞬时转染miR-221/222 mimics后miR-221/222表达显著升高（P<0.05）,且内源性的GATA3和FOXA1蛋白表达被抑制（P<0.01）,上皮细胞相关分子ER-α和E-cadherin表达显著下降（P<0.01）;划痕修复能力和迁移侵袭能力均显著增强（P<0.01）。结论： miR-221/222可能通过下调GATA3和FOXA1的表达促进乳腺癌的迁移和侵袭。     

纳豆脂肽诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的机制研究

目的:初步探讨纳豆脂肽诱导人乳腺癌细胞MCF-7凋亡的可能作用机制。方法:取对数生长期的MCF-7细胞,实验设4组,分别加入不同浓度(0、1、2、4μg/mL)的纳豆脂肽,于37℃培养箱中继续培养12 h后,收集细胞,采用流式细胞术检测纳豆脂肽对MCF-7细胞凋亡的影响;单细胞凝胶电泳检测纳豆脂肽对MCF-7细胞DNA损伤的影响;Western blot法检测纳豆脂肽对雌激素受体ERα和ERβ蛋白表达的影响。结果:与对照组比较,各浓度纳豆脂肽处理组均可诱导MCF-7细胞凋亡(P均<0.05);Olive尾矩和尾部DNA含量均明显增加(P<0.05或P<0.01),且4μg/mL纳豆脂肽组尾长亦明显增加(P<0.01)。纳豆脂肽浓度为4μg/mL时,ERα表达水平明显下降,ERβ表达水平明显上升,差异均具有统计学意义(P均<0.05)。结论:纳豆脂肽可能是通过影响MCF-7细胞内雌激素受体表达水平和引起DNA损伤来诱导MCF-7细胞发生凋亡。     

小窝蛋白-1和E-钙黏蛋白在食管癌TE1细胞系中的表达及其意义

目的:检测小窝蛋白-1(Cav-1)和E-钙黏蛋白(E-cad)在食管癌TE1细胞系中的表达水平,探讨Cav-1在食管癌转移中可能的作用及机制。方法:化学合成针对Cav-1基因3个不同靶点的siRNA(Cav-1 siRNA1,Cav-1 siRNA2和对照siRNA),分别转染食管癌TE1细胞系,以未转染细胞为空白对照,转染对照siRNA细胞为阴性对照。采用Western blot法检测RNA干扰后TE1细胞中Cav-1和E-cad的表达情况;Transwell方法检测各组细胞的迁移和侵袭能力。结果:Western blot检测结果提示,与空白对照组比较,Cav-1 siRNA使食管癌TE1细胞系中Cav-1表达水平降低(P<0.01),E-cad表达水平升高(P<0.01);Transwell迁移及侵袭试验结果提示转染Cav-1 siRNA后细胞的迁移、侵袭能力较空白对照组显著减弱(P<0.05)。结论:Cav-1可能通过调节E-cad的表达影响食管癌的转移。     

人乳腺癌细胞系RUNX3基因启动子甲基化状态研究

目的:探讨人乳腺癌细胞系中抑癌基因RUNX3启动子甲基化状态,并分析其与RUNX3基因表达的相关性。方法:运用甲基化特异性PCR(MSP)检测5种乳腺癌细胞系和一种人类正常乳腺细胞系中RUNX3启动子甲基化状态,运用RT-PCR和Western印迹检测这些细胞系中RUNX3基因mRNA和蛋白的表达。结果:在6种细胞系中,有两种(T47D、MCF7)呈高甲基化状态,并且这两种细胞系的RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。SKBR3中没有检测出RUNX3启动子区的甲基化,但RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。结论:乳腺癌细胞系中RUNX3基因由于启动子区甲基化而失活,但尚有其它失活机制存在,需进一步研究探讨。     

细胞分裂周期7蛋白在肝癌组织的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭的影响

目的 检测细胞分裂周期7(CDC7)蛋白在人肝癌组织的表达,探讨CDC7过表达对肝癌细胞增殖和侵袭的影响。方法 实时定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测CDC7 mRNA在肝癌组织和癌旁组织的表达,检测CDC7 mRNA在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达。Western blot检测CDC7蛋白在肝癌组织和癌旁组织中的表达,检测CDC7蛋白在肝癌细胞系和正常肝脏细胞中的表达水平。利用慢病毒载体构建稳定过表达CDC7的肝癌HCCLM3和SMMC 7721细胞株。细胞克隆实验和CCK-8法检测CDC7过表达对肝癌细胞增殖的影响。Transwell实验和划痕实验检测CDC7过表达对肝癌细胞侵袭迁移的影响。结果 与癌旁组织相比,CDC7 mRNA和蛋白在肝癌组织中表达水平显著升高(P＜0.001);与正常肝细胞相比,肝癌细胞系的CDC7 mRNA和蛋白表达水平显著增高(P＜0.001);CCK-8法、细胞克隆实验说明CDC7过表达会明显增强肝癌细胞的增殖能力;划痕实验、Transwell实验说明CDC7过表达会明显提高肝癌细胞的侵袭能力。结论 CDC7蛋白在人肝癌组织高表达,其过表达促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力。     

WNT4在脑胶质瘤中甲基化下调及抑制恶性胶质瘤细胞增殖的研究

目的 探讨WNT4在脑胶质瘤细胞系和组织中细胞系的表达与甲基化对脑胶质瘤细胞系U87增殖的作用和机制。方法 qRT-PCR和免疫蛋白印迹实验分析WNT4在脑胶质瘤组织中的表达和甲基化及WNT4在脑胶质瘤细胞系中的表达;以胶质瘤U87细胞为本实验研究对象,分别转染慢病毒载体pLVX-Gfp-WNT4(实验组)和pLVX-Gfp-NC(对照组);细胞增殖和克隆形成实验分析WNT4基因对细胞增殖的影响;免疫蛋白印迹法验证WNT4对Wnt/β-catenin信号通路的影响。结果 与正常人星形胶质细胞相比,WNT4 mRNA在脑胶质瘤细胞系中的表达下调(P＜0.001),与正常脑组织相比,WNT4 mRNA和蛋白在脑胶质瘤组织中表达下调(P＜0.001);脑胶质瘤分级越高WNT4 mRNA表达越低(P＜0.001),高表达WNT4 mRNA患者的预后好(P＜0.001);WNT4在脑胶质瘤中甲基化程度明显高于正常脑组织。过表达WNT4后细胞活性和增殖能力受到抑制(P＜0.001);恢复WNT4表达后Wnt/β-catenin信号通路及其下游细胞因子明显受到抑制。结论 WNT4在人脑胶质瘤组织中表达甲基化下调,通过抑制Wnt/β-catenin信号通路参与脑胶质瘤的进展。     

甲基化修饰抑癌基因MSX1抑制黑色素瘤细胞迁移和侵袭的研究

目的 探讨MSX1在黑色素瘤细胞系和组织中表达和甲基化及对黑色素瘤细胞A375迁移/侵袭的影响和机制。方法 qRT-PCR和免疫组织化学法分别检测MSX1在黑色素瘤细胞系和组织中的表达;甲基化PCR分析MSX1在黑色素瘤组织中甲基化;分别转染pcDNA3.1(+)-Flag-MSX1质粒(实验组)和pcDNA3.1(+)-Flag-Vector质粒(对照组)至A375细胞;Transwell迁移和侵袭实验检测MSX1对细胞迁移和侵袭的影响;RT-PCR验证MSX1对上皮间质转化及下游相关标志物的影响,免疫蛋白印迹实验验证MSX1对WNT/β-catenin信号通路的影响。结果 与色素痣组织和细胞相比,MSX1 mRNA和蛋白在黑色素瘤细胞和组织中表达下调(P＜0.001);MSX1甲基化水平表达上调,其甲基化程度明显高于癌旁组织和正常色素痣组织。过表达MSX1后抑制细胞迁移和侵袭(P＜0.001),而上皮间质转化及下游相关标志物表达受到抑制。过表达MSX1能抑制WNT/β-catenin信号通路及其下游细胞因子的表达。结论 MSX1在黑色素瘤组织中表达下调,能抑制Wnt/β-catenin信号通路参与黑色素瘤的进展。     

人乳腺癌细胞系RUNX3基因启动子甲基化状态研究

目的：探讨人乳腺癌细胞系中抑癌基因RUNX3启动子甲基化状态,并分析其与RUNX3基因表达的相关性。方法：运用甲基化特异性PCR（MSP）检测5种乳腺癌细胞系和一种人类正常乳腺细胞系中RUNX3启动子甲基化状态,运用RT-PCR和Western印迹检测这些细胞系中RUNX3基因mRNA和蛋白的表达。结果：在6种细胞系中,有两种（T47D、MCF7）呈高甲基化状态,并且这两种细胞系的RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。SKBR3中没有检测出RUNX3启动子区的甲基化,但RUNX3 mRNA和蛋白表达阴性。结论：乳腺癌细胞系中RUNX3基因由于启动子区甲基化而失活,但尚有其它失活机制存在,需进一步研究探讨。     

蛋白酪氨酸磷酸酶受体J在乳腺癌组织中的表达及其与临床预后的相关性

目的：探讨蛋白酪氨酸磷酸酶受体J（PTPRJ）在乳腺癌中的表达,并分析其与临床病理指标和预后的关系。方法：应用免疫组化SP法检测198例乳腺癌组织及其配对癌旁正常组织中PTPRJ的表达情况,并分析PTPRJ表达与乳腺癌临床病理指标及预后的关系。结果：免疫组化染色结果显示PTPRJ在癌旁正常组织中的表达显著高于乳腺癌组织（P=0.003）,PTPRJ表达水平与淋巴结转移（P=0.014）、TNM分期（P=0.003）,ER状态相关（P=0.048）。Kaplan-Meier生存分析显示PTPRJ低表达组患者的总生存率明显低于PTPRJ高表达组（P=0.002）。多因素COX比例风险模型分析显示TNM分期和PTPRJ表达是影响患者总生存的独立预后因素。结论：PTPRJ在乳腺癌中低表达,与肿瘤进展密切相关,可作为评价乳腺癌患者预后的有效指标之一。     

雌激素受体α介导氧化磷酸化通路在肺癌发生中的作用

目的：通过生物信息学方法探讨雌激素受体α（ESRRA）在肺癌发生发展中的作用。方法：利用UALCAN在线平台对人肺癌组织（包括肺腺癌与肺鳞癌）和癌旁正常肺组织中ESRRA基因的表达变化进行分析,并利用Kaplan-Meier Plotter数据库对肺癌中ESRRA及其相关基因的表达进行生存分析。利用GEPIA2在线平台获得与ESRRA表达模式相似的前50个基因,在GeneMANIA在线平台上构建这50个基因编码的蛋白质-蛋白质的相互作用网络,并通过DAVID数据库对该50个基因群进行GO分析和KEGG通路富集。通过TIMER 2.0在线平台分析肺癌组织中ESRRA与富集在氧化磷酸化通路中核心基因表达水平的相关性。利用Western blot法验证ESRRA蛋白在肺癌细胞系中的表达水平。结果：与癌旁正常肺组织相比,ESRRA在肺癌组织中高表达（P<0.01）,ESRRA表达水平高的肺癌患者显示出较差的预后（P<0.01）。与ESRRA表达模式相似的前50个基因主要富集在氧化磷酸化通路,包括ATP5B、ATP5G3、COX5A、COX8A、SDHD、UQCRC1和UQCRC2。其中ATP5B、COX8A和UQCRC1在肺癌组织中的表达水平与ESRRA的表达呈正相关（P<0.05）。ATP5B、ATP5G3、COX5A、COX8A、SDHD、UQCRC1和UQCRC2在肺癌组织中均高表达,ATP5B、ATP5G3、COX5A、COX8A表达水平高和SDHD表达水平低的肺癌患者均显示出较差的预后（P<0.01）。Western blot验证结果显示,与正常人支气管上皮16HBE细胞相比,ESRRA蛋白的相对表达水平在肺腺癌NCI-H1975细胞和肺鳞癌SW900细胞中均高表达（P<0.01）。结论：ESRRA介导氧化磷酸化通路中ATP5B和COX8A的表达改变引起能量代谢紊乱可能是其促进肺癌发生和导致肺癌不良预后的原因之一。     

转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒的构建及鉴定

目的： 利用分子克隆的方法构建转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒并鉴定其效应。方法： 以乳腺癌MCF7细胞基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增STAT5A基因的启动子序列,并将其克隆至荧光素酶报告基因质粒pGL3-Enhancer中,经过菌液扩增、酶切、测序等方法获得目的质粒,并通过双荧光报告基因实验进一步验证其功能。结果： 构建的STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒pGL3-STAT5A-pro-luc-E序列正确,且具有转录活性。在双荧光报告基因实验中发现重组载体pGL3-STAT5A-pro-luc-E荧光素酶的相对活性约为阴性对照pGL3-Enhancer的8倍（P<0.01）,而pGL3-STAT5A-pro-N-luc-E荧光素酶的相对活性约是阴性对照pGL3-Enhancer的6倍（P<0.01）。结论： 本项目成功构建了转录因子STAT5A启动子荧光素酶报告基因质粒,为进一步研究STAT信号转导及转录激活蛋白信号通路提供了重要的研究工具。     

HLA-E基因表达沉默对人乳腺癌细胞生物学行为的影响

目的：探讨HLA-E基因表达对人乳腺癌细胞增殖、凋亡、侵袭、迁移等生物学行为的影响,分析靶向HLA-E基因的小分子RNA干扰(siRNA)技术应用于乳腺癌治疗的可行性。方法：设计并合成靶向HLA-E基因的特异性siRNA序列,转染至人乳腺癌细胞MDA-MB-231,同时设立空白对照组、阴性对照组及脂质体组。实时荧光定量PCR(qPCR)和Western blot法分别检测各组乳腺癌细胞HLA-E mRNA及蛋白的表达;CCK-8法和流式细胞术检测各组乳腺癌细胞增殖率和凋亡率;Transwell实验检测各组乳腺癌细胞侵袭和迁移能力。结果：乳腺癌细胞转染HLA-E siRNA后,HLA-E mRNA及蛋白表达水平明显降低。与阴性对照组相比,HLA-E siRNA转染组乳腺癌细胞增殖率降低(P<0.01);凋亡率增加(P<0.01);侵袭迁移能力降低(P<0.01)。结论：靶向人乳腺癌细胞HLA-E基因的siRNA能有效抑制其基因表达,进而抑制细胞增殖,诱导细胞凋亡,降低乳腺癌细胞侵袭和迁移能力。     

黑色素瘤相关抗原A基因在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的: 探讨黑色素瘤相关抗原A家族(MAGE-As)在乳腺癌患者外周血及组织中的表达,并分析其与乳腺癌患者临床病理学指标及预后的关系。方法: 采用多重巢式PCR法检测106例乳腺癌患者和30例健康志愿者外周血中MAGE-As m RNA的表达水平,并利用限制性内切酶酶切法,鉴定该家族成员MAGE-A1、A2、A3、A4和A6的表达情况。采用免疫组织化学法检测了106例乳腺癌组织蜡块中MAGE-As蛋白的表达情况,同时分析外周血中MAGE-As mRNA表达与其相应肿瘤组织中MAGE-As蛋白的表达的相关性。结果: MAGE-As mRNA在乳腺癌患者外周血中阳性表达率为40.5%(43/106)。MAGE-A1、A2、A3、A4和A6的表达率分别为10.3%(11/106)、19.8%(21/106)、15.1%(16/106)、13.2%(14/106)和5.7%(6/106),MAGE-As表达率的顺序为A2>A3>A4>A1>A6。MAGE-As mRNA阳性表达与患者年龄、肿瘤大小、临床分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。乳腺癌患者外周血中MAGE-As mRNA表达水平与其相应肿瘤组织中蛋白水平的表达呈正相关(r=0.368,P<0.01)。MAGE-As各亚型(MAGE-A1、A2、A3、A4和A6)阳性表达率与乳腺癌患者5年生存率相关(P<0.01);MAGE-As表达及淋巴结转移可作为乳腺癌患者5年生存率的独立预后影响因素(均P<0.01)。结论: MAGE-As可能作为检测乳腺癌患者外周血中循环肿瘤细胞的特异性生物标志物,其表达与乳腺癌患者预后相关。乳腺癌患者外周血中MAGE-As检测可作为监测乳腺癌预后的重要指标。     

TRIM59在结直肠癌中的表达及其与临床病理指标的关系

目的： 探讨三结构域蛋白59（TRIM59）在结直肠癌组织中的表达及其临床意义。方法： 收集86例结直肠癌患者的癌组织及癌旁组织,分别采用实时荧光定量PCR（qPCR）和免疫组化检测TRIM59 mRNA和蛋白在结直肠癌及癌旁组织中的表达情况;分析其与患者临床病理指标和生存率的关系。结果： 结直肠癌组织中TRIM59 mRNA表达水平较配对的癌旁组织升高（t=12.86,P<0.01）。结直肠癌组织中TRIM59蛋白阳性表达率为62.79%（54/86）,高于癌旁组织的32%（37/86）,差异具有统计学意义（χ²=6.74,P=0.009）。TRIM59蛋白高表达与患者TNM分期（χ²=8.515,P=0.003）、肿瘤浸润深度（χ²=7.167,P=0.007）以及淋巴结转移情况（χ²=5.511,P=0.018）相关。Kaplan-Meier生存分析结果显示TRIM59高表达患者总生存率（OS）和无病生存期（DFS）均明显短于TRIM59低表达患者（均为P<0.05）。结论： 结直肠癌组织中TRIM59呈高表达,且与肿瘤TNM分期、肿瘤浸润深度、淋巴结转移情况及患者预后相关。     

溶质载体超家族50蛋白在乳腺癌中的表达及其临床意义

目的：探讨溶质载体家族50蛋白成员1(SLC50A1)在乳腺癌中的表达及其临床意义。方法：选取符合入组标准的乳腺癌患者 39例，使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)对入组患者的血浆进行 SLC50A1蛋白浓度检测。分别使用 Kendall's tau-b以及Mann-Whitney U检验对SLC50A1蛋白浓度与患者治疗期间的临床指标进行相关性及差异性分析，并根据log-rank检验结果进行多因素 Cox回归分析。应用生物信息学技术分析 TCGA数据库中乳腺癌组织及癌旁正常组织 SLC50A1基因表达水平的差异。结果：乳腺癌患者血浆SLC50A1水平在早期与晚期患者组、雌激素受体阳性和阴性组、Ki67高表达与低表达组中的差异均有统计学意义(P<0.05)，SLC50A1表达与 CA153水平存在正相关关系(Kendall's tau-b=0.257，P=0.004)。Cox回归分析结果显示 SLC50A1表达水平是乳腺癌患者的独立预后因素(HR=0.385，P=0.03)。TCGA数据库分析结果表明，乳腺癌组织中的SLC50A1基因表达水平较癌旁正常组织升高(P<0.01)。结论：晚期乳腺癌患者血浆 SLC50A1水平升高，SLC50A1表达水平是乳腺癌的独立预后因素，SLC50A1有望作为乳腺癌预后预测与治疗的靶点。     

青藤碱对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭的影响

目的： 探讨青藤碱对HPV阳性宫颈癌SiHa细胞增殖和侵袭的影响。方法： 体外培养SiHa细胞,在细胞培养液中分别加入0.2、0.4和0.8 mmol/L的青藤碱,阴性对照组细胞未加青藤碱,24和48 h后采用CCK-8法检测细胞活力。细胞培养液加入0.2 mmol/L的青藤碱,24 h后采用免疫荧光法检测Ki67阳性细胞数;Transwell实验检测侵袭细胞数;Western blot检测侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9的蛋白表达水平。结果： 与阴性对照组相比,0.2、0.4和0.8 mmol/L青藤碱作用SiHa细胞24和48 h后,SiHa细胞的增殖率均明显降低（P<0.01）;青藤碱处理组SiHa细胞中Ki67阳性细胞数减少（P<0.01）,发生侵袭的SiHa细胞数减少（P<0.05）,侵袭相关蛋白MMP-2和MMP-9蛋白的表达均降低（P<0.01）。结论： 在体外,青藤碱可以抑制体外培养的HPV阳性宫颈癌SiHa细胞的增殖和侵袭。     

miR-101基因簇与食管癌发病风险的病例对照研究

目的：探讨miR-101基因簇与食管癌发病风险的关系。方法：收集3例食管癌进展期患者的新鲜组织标本进行组织芯片高通量microRNA检测,采用肿瘤基因组图谱(TCGA)数据库食管癌RNA测序数据验证的方式对miR-101基因簇表达水平进行分析;另收集33例食管癌患者癌组织和癌旁组织标本,分别提取样本总RNA,采用实时荧光定量PCR法(qPCR)检测miR-101基因簇相关基因的表达,logistic回归分析miRNA异常表达对食管癌发病风险的影响,受试者特征曲线(ROC)评价miR-101基因簇对食管癌的诊断效力,Fisher检验分析基因簇各miRNA的表达和食管癌患者临床病理指标之间的相关性。结果：miRNA芯片高通量检测及TCGA数据库生物信息学分析结果显示,与食管正常组织相比,miR-101-3p、miR-125a-5p和miR-145-5p在食管癌组织中表达下调(P<0.05)。qPCR结果显示miR-101基因簇在33例食管癌组织中均呈低表达,多因素logistic回归分析显示,miR-101基因簇miR-101-3p、miR-127-5p与miR-145-5p表达水平与食管癌的发病风险呈负相关[OR (95% CI)值分别为：0.717(0.563,0.912)、0.717(0.534,0.962)和0.597(0.426,0.838),均为P<0.05];ROC分析显示miR-101基因簇曲线下面积(AUC)分别为0.753、0.792、0.763和0.800(P<0.05)。此外,miR-101-3p、miR-145-5p的表达水平与食管癌患者肿瘤大小相关(P<0.05),miR-125a-5p的表达水平与患者淋巴结转移相关(P<0.05)。结论：miR-101基因簇在食管癌患者癌组织中呈低表达,可作为食管癌诊断的潜在生物标志物,其在食管癌进程中的功能和调控机制有待进一步研究。