双mTORC1/2抑制剂AZD2014可抑制裸鼠体内的人肝细胞癌的生长

目的 体内研究双 mTORC1/2 抑制剂AZD2014 对肝细胞癌是否具有抗癌作用。方法 将肝癌细胞 HCCLM3 接种至祼鼠皮下,待形成明显瘤块,随机分成 2 组（对照组和 AZD2014组）,每组各 5 只。AZD2014 组腹腔内注射AZD2014,5 mg/kg体质量,1次/d;对照组腹腔内注射药物溶剂2.5 mL/kg体质量,1 次/d。定期测量肿瘤大小,绘制肿瘤体积增长曲线。给药后第24天,剥离皮下肿瘤,测量肿瘤的体积,并行HE 染色和免疫组织化学检测细胞增殖、凋亡和 EMT 相关蛋白。结果 AZD2014 组肿瘤的体积自给药后几乎未再增大,而对照组中的肿瘤体积随着时间的延长而不断增大（P<0.001）。HE 染色显示AZD2014 组中发生坏死的细胞显著多于对照组。免疫组化检测发现 AZD2014 组中细胞增殖核抗原 Ki-67 和血管内皮细胞标志蛋白 CD31的表达量显著低于对照组,而促凋亡蛋白 Cleaved caspase-3显著高于对照组;此外,AZD2014 组间质细胞表型蛋白 N-cadherin和 Vimentin的表达水平显著低于对照组,而上皮细胞表型蛋白 E-cadherin 的表达水平则显著高于对照组。结论 AZD2014可以抑制肝细胞癌的增殖、微血管形成和 EMT 进程,同时还可以促进肝癌细胞发生坏死和凋亡。     

肝移植术后急性排斥反应的诊治

报告１例原发性胆汁性肝硬化患者施行同种原位肝移植术、受体分别在术后第３天，第２０天发生两次急性排斥反应。经给予大剂量甲基强的松龙冲击及猪抗人胸腺淋巴细胞球蛋白（ＡＨＴＧ）治疗，急性排斥反应得到控制并逆转。     

大鼠原位肝移植急性排斥反应模型的建立

目的 建立大鼠原位肝移植急性排斥反应模型.方法 采用改进的Limmer和Kamada的二袖套法建立大鼠肝移植模型.将大鼠分为2组:①实验组:急性排斥反应组(Wistar→SD);②对照组:免疫耐受组(SD→SD).结果 免疫排斥组肝存活时间(7.4±1.7) d低于对照组(18.9±7.6)d,差异有统计学意义0.05 (P<0.05). 结论 Wistar→SD大鼠之间的原位肝移植模型可产生中、重度的免疫排斥反应,是一种较理想的可作为研究急性排斥反应的动物模型.     

近交系大鼠肝移植急性排斥模型的建立及排斥反应观察

目的 建立近交系大鼠肝移植急性排斥模型并观察其排斥反应的规律.方法 近交系大鼠随机分为G1(BN-BN)、G2(SD-Wistar)和G3(LEW-BN)3组,每组18对.采用改良"二袖套法"大鼠原位肝移植模型,观察一般情况,生存期,术后第3、7、14、21天血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)及移植肝病理学变化,根据Banff标准判断排斥反应强度.结果 G1、G2大鼠1月存活率为100%;G3大鼠急性排斥反应于术后第3天始发生,第7天后逐渐加重,第14天达到高峰,除并发症致死外,余大鼠均在20天内死于Ⅲ级排斥反应.G3术后各时相点ALT、TBIL均明显高于G1、G2(P<0.05).G3移植肝病理检查呈典型的排斥反应,而G1、G2没有.结论 LEW-BN大鼠组合为稳定的大鼠肝移植急性排斥模型;但近交系大鼠手术耐受性差,建模难度大,熟练的显微外科技术是模型成功的关键.     

大鼠原位肝移植术后排斥反应病理动态变化

目的观察高免疫排斥大鼠肝移植模型术后排斥反应的病理变化。方法运用改良“二袖套法”建立大鼠肝移植模型(Wistar→SD),于连续观测时间点取大鼠的肝脏组织,石蜡包埋切片,HE染色,观察病理变化并给予病理评级和评分。结果术后排斥反应随时间延长而逐渐增强,第5天达到高峰,5-15 d维持于较高水平,随后逐渐减弱,但仍维持于轻至中度水平。结论高免疫排斥大鼠肝移植模型术后5-15 d急性排斥反应最为强烈,是研究大鼠肝移植术后急性排斥反应较为理想的时间段。     

肝移植后急性排斥反应的诊断和防治

目的:探讨原位肝移植术后急性排斥反应的诊断和防治.方法:回顾分析2002年6月至2003年8月71例人原位肝移植术后急性排斥反应患者诊治的临床资料.结果:14例肝移植后8～200 d共出现16次急性排斥反应,平均46 d,6例有典型临床表现,所有病例均出现血清学改变并经肝穿刺活检确诊.经大剂量激素冲击治疗后,15次急性排斥反应被控制.结论:细针肝穿活检术是确诊急性排斥反应的惟一手段;预防急性排斥反应发生的关键在于合理应用免疫抑制剂;临床治疗应注重对病理学诊断、血清学检查和临床表现的综合分析和判断.     

大鼠原位肝移植术后排斥反应病理动态变化

目的 观察高免疫排斥大鼠肝移植模型术后排斥反应的病理变化.方法 运用改良"二袖套法"建立大鼠肝移植模型(Wistar→SD),于连续观测时间点取大鼠的肝脏组织,石蜡包埋切片,HE染色,观察病理变化并给予病理评级和评分.结果 术后排斥反应随时间延长而逐渐增强,第5天达到高峰,5～15d维持于较高水平,随后逐渐减弱,但仍维持于轻至中度水平.结论 高免疫排斥大鼠肝移植模型术后5～15d急性排斥反应最为强烈,是研究大鼠肝移植术后急性排斥反应较为理想的时间段.     

肝移植术后急性排斥反应的诊断和治疗

急性排斥反应 (ＡＲ)是肝移植术后最常见的并发症之一 ,也是造成移植肝功能丧失的主要原因之一。及时、准确地诊断 ,合理、规范地应用免疫抑制剂控制ＡＲ ,是保证移植肝顺利存活的关键。我院自 2 0 0 0年11月至今已成功地进行了 3例同种异体原位肝移植术 ,术后均出现ＡＲ ,但经过积极治疗均好转。现就ＡＲ的诊断和治疗问题探讨如下。1　资料与方法1.1　资料　 3例肝移植患者中 ,男 2例 ,女 1例 ;年龄分别为 5 3岁、4 6岁和 4 0岁。所患疾病分别为药物中毒所致的暴发性肝功能衰竭 ,乙型病毒性肝炎后肝硬化失代偿期 ,多囊肝。受者术前均行肝、…     

建立近交系大鼠肝移植急性排斥模型的体会

目的:探讨近交系大鼠原位肝移植模型的建立并判断排斥反应发生的强度.方法:采用Kamada二袖套法,利用封闭群大鼠SD和Wistar进行建模技能训练,在此基础上建立近交系大鼠DA→LEW肝移植模型,根据临床表现和Banff标准判断排斥反应发生的强度.结果:共施行DA→LEW大鼠肝移植模型15例,手术成功率86.7%,死亡原因为肝上下腔静脉漏血、肝下下腔静脉血栓、胆道梗阻.术后第3天开始出现Ⅰ级排斥反应,7 d以后逐渐达到高峰,除术后并发症致死外,剩余均在12 d内死于Ⅲ级排斥反应.结论:DA→LEW为稳定、强烈的大鼠肝移植急排模型,是研究肝移植排斥及免疫耐受的理想动物模型.但近交系大鼠在组织结构上有其自身特点,给建模带来一定难度.     

DA到Lewis大鼠肝脏移植急性排斥模型的建立

目的:建立大鼠原位肝脏移植的急性排斥模型并观察其排斥反应的特点. 方法:采用近交系雄性DA大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,改良"二袖套"法建立肝脏移植模型30例. 随机分为两组,对照组(n=15)术后不用免疫抑制剂,FK506处理组(n=15)术后1～7 d用FK506 0.2 mg/(kg·d) 灌胃. 术后4, 7和10 d分别随机处死3只,检测血清肝功能生化指标[天冬氨酸转氨酶(AST)、总胆红素(BILI)]以及肝脏病理组织学变化,每组各留6只观察生存期. 结果:术后7和10 d时对照组血清AST, BILI浓度均高于FK506处理组[AST:7 d, (17.7±3.6) μkat/L vs (7.9±1.6 ) μkat/L, P<0.05; 10 d, (21.9±4.3) μkat/L vs (4.7±0.7) μkat/L, P<0.05. BILI:7 d, (90.9±18.8) μmol/L vs (6.8 ± 0.7) μmol/L, P<0.05; 10 d, (111.5±23.3) μmol/L vs (15.5±3.2) μmol/L, P<0.05]. 术后7 d,对照组移植物出现明显的排斥反应的病理学变化,10 d时更为严重. FK506组术后7和10 d病理学检查为不明确或轻度的排斥表现. 对照组中位生存时间为12 d, 95%可信区间为(11.77～13.90) d (n=6, 12 d×4, 14 d×1, 15 d×1). FK506处理组中位生存时间为78 d,95%可信区间为(65.26～90.74) d (n=6, >65 d×1, >67 d×1, 76 d, 78 d, 89 d和90 d),生存时间明显较对照组延长(P<0.05). 结论:DA到Lewis大鼠品系组合可以建立稳定可靠的肝脏移植急性排斥模型;该模型的排斥反应的特点与临床相似,且可以为抗排斥药物FK506预防而达到长期存活.     

熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的抑制作用

目的探讨熊果酸对大鼠角膜移植排斥反应的治疗效果。方法以SD大鼠为供体,Wistar大鼠为受体,将48只Wistar大鼠
随机分为4组。A组为正常角膜对照组,B组为Wistar鼠自体原位角膜移植,C、D 组为SD-Wistar大鼠之间进行同种异体角膜移
植。术后当天腹腔给药,A、B、C三组分别给予生理盐水作为空白对照,D组给予熊果酸（UA）（20 mg·kg-1·d-1）,连续给药12 d。
根据Larkin等角膜排斥反应评分系统,判断术后植片排斥情况。比较角膜植片的存活时间和植片存活率。术后14 d检测各组
中IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、VEGF及ICAM-1的表达含量,并对角膜植片进行组织学检查与Western blot分析。结果D组角膜
植片的存括时间为29.12±9.58 d,与C组9.67±2.16 d 相比,两组间差异有显著性意义（P<0.01）。术后14 d D组角膜植片中的
IL-2、IFN-γ、NF-κBp65、ICAM-1及VEGF的相对含量明显下降,而IκB-α蛋白含量较高。未见明显淋巴细胞浸润和新生血管形
成。结论熊果酸作为NF-κB的核因子抑制剂,可以抑制角膜新生血管的形成与排斥反应,从而显著延长大鼠角膜植片的存活
时间。
     

近交系LEWIS→BN大鼠原位肝移植急性排斥模型的建立

目的 建立近交系LEWIS→BN大鼠原位肝移植急性排斥模型,分析手术成功率的影响因素及该模型的稳定性,并总结该模型区别于常规使用的SD、Wistar等封闭群大鼠间原位肝移植的特点.方法 实验组选择近交系雄性LEWIS及BN大鼠各30只分别作为供、受体,对照组选择雄性BN大鼠各9只作为供、受体.采用Kamada"二袖套"法实施原位肝移植术,不吻合肝动脉;于术后3,5,7,9,11,13,15 d处死受体获取肝脏组织,用中性甲醛固定后制作石蜡切片进行HE染色以判定急性排斥的程度.结果 原位肝移植术成功率约为74%,导致手术失败的原因依次为:肝上下腔静脉出血,门静脉出血,麻醉意外和其他;LEWIS→BN组出现不同程度的排斥现象, 而BN→BN组则无排斥现象.与封闭群大鼠肝移植比较,该模型具有自身特点,即在排斥出现的时间、程度和结果转归上表现并非完全一致,然而所有受体均出现了排斥现象.结论 大鼠肝移植是目前研究肝移植理想模型,本研究采用Kamada的"二袖套"法成功建立了大鼠肝移植急性排斥模型.     

阻断4-BB/4-1BB配体信号通路对抑制大鼠肝脏移植免疫排斥反应的实验研究

Background Blocking the 4-1BB/4-1BB ligand （4-1BBL） signal may modulate the secretion of Th1/Th2 cytokines and prolong the survival of the grafts, which play a key role in organ transplantation tolerance. The aim of this study was to investigate the role of blockade of the 4-1BB/4-1BBL co-stimulatory pathway with 4-1BBL monoclonal antibody （mAB） in acute rejection of rat orthotopic liver transplantation. Methods The orthotopic liver transplantation model was set up, while male Lewis rats were used as liver donors and Brown-Norway rats as recipients. The recipient rats were intravenously injected with anti 4-1BBL mAB or isotype control antibody. Groups were monitored for graft survival after transplantation. Plasma chemistry, including aspartate transaminase （AST）, alanine aminotransferase （ALT）, and bilirubin （BIL）, was assayed. The concentrations of interleukin （IL）-2, IL-10 and interferon （IFN）-γ in plasma were also measured by enzyme-linked immunosorbent assay. Allograft histology images were collected under light microscope and electron microscope. Results Isotype antibody treated recipients exhibited elevated plasma levels of liver injury markers including AST, ALT and BIL, progressive portal and venous inflammation and cellular infiltration of the liver ailografts, and a mean graft survival time （MST） of 10.9 days. Administration of anti 4-1BBL mAB resulted in a decrease in plasma levels of liver injury markers and the concentrations of IL-2, IL-10 and IFN-γ. The histological grade of rejection on day 7 decreased and MST （17.3 days） increased substantially. Conclusions These results demonstrate that attenuation of acute rejection follows the blockade of the 4-1BB/4-1BBL co-stimulatory pathway with 4-1BBL monoclonal antibody and strongly suggest it is a promising strategy to prevent progression of graft rejection by suppressing T cell-mediated immunity.     

肝移植术后趋化因子Mig、IP10、ITAC的变化对早期诊断急性排斥反应的意义

目的:观察趋化因子Mig、IP10、ITAC在肝移植术后的变化,探讨其对肝移植术后急性排斥早期诊断的意义.方法:2005年4～9月30例肝移植患者,根据临床表现及病理学检查分为急性排斥组(AR,n=9)(排除3例术后感染患者),非急性排斥组(NAR,n=18).检测患者术前1 d及术后1、3、5、7 d血清中趋化因子Mig、IP10、ITAC的表达,并与同期住院的肝硬化或肝癌患者(肝癌肝硬化组,n=16)以及健康体检者(正常对照组,n=16)进行比较.AR组患者分别于确诊当天以及经激素冲击治疗后3、7 d检测血清中3种趋化因子的表达,并分析确诊当天3种趋化因子表达与肝脏穿刺活检Banff排斥活动指数(RAI)的相关性.结果:肝移植术前1 d AR组、NAR组患者血清Mig、IP10、ITAC表达与肝癌肝硬化组无明显差异,但高于正常对照组(P<0.01).肝移植术后3 d,AR和NAR组Mig、IP10、ITAC的表达水平均有上升,高于术前1 d的表达(P<0.05).AR组9例患者分别在术后11、12和14 d确诊AR发生,术后各时间点患者血清Mig、IP10、ITAC表达明显高于NAR组(P<0.01);确诊AR当天Mig、IP10、ITAC的表达与RAI呈正相关(r=0.88、0.94、0.80).与确诊AR当天相比,经冲击治疗逆转后,3种趋化因子的表达也相应下降(P<0.01).结论:肝移植术后血清中趋化因子Mig、IP10、ITAC的表达可作为早期诊断急性排斥反应辅助特异、敏感的指标.     

The Role of sICAM-1 Detection in the Diagnosis of Acute Rejection Following Liver Transplantation

In order to evaluate the applied value of soluble intracellular adhesion molecule-1 （sICAM-l） in acute rejection （AR） following liver transplantation, the expression of sICAM-1 protein was sequentially detected by using ELISA in serum and bile of 43 patients receiving liver transplantation. In AR group, the expression levels of sICAM-1 protein were increased 3 days before and immediately on the establishment of AR diagnosis, and there was significant difference in the expression of bile between AR group and control group （P〈0.01）. After reversion of AR with hormone intensive therapy, there was significant difference in the sICAM-1 protein expression of serum and bile between AR group and control group. It was concluded that the sequential detection of sICAM-1 protein level in serum and bile was a reliable and noninvasive method for the early diagnosis of AR after liver transplantation and was valuable to observe the curative effects of anti-AR therapy.     

ＨＯ-１持续高表达对ＤＡ到Ｌｅｗｉｓ大鼠肝移植急性排斥反应的影响

目的:探讨血红素氧化酶-1(hemeoxygenage-1,HO-1)在DA到Lewis大鼠肝移植中对急性排斥反应的影响及其机制.方法:建立DA到Lewis大鼠肝移植急性排斥模型,实验分3组,各12对.A组供体术前24 h阴茎背静脉注射5ml/kg生理盐水作为对照;B组供体术前24 h阴茎背经脉注射HO-1诱导剂钴原卟啉(CoPP),C组供体给予HO-1抑制剂锌原卟啉(ZnPP),移植后持续予相同处理直至受体死亡.术后7天,各组处死6只,取外周血及肝脏标本,测定血清ALT,DBIL水平,组织病理观察排斥反应程度,RT-PCR及Western blot法测定移植物内HO-1 mRNA,Foxp3 mRNA及其蛋白表达情况,余观察生存期.结果:术后7天,B组血ALT,TBIL水平与A组,c组相比,差异有统计学意义(P＜0.01);病理示B组移植肝排斥反应程度轻于A,C组;B组HO-1和Foxp3 mRNA及其蛋白的表达均强于A,C组;B组受体存活时间(29.83±1.40)天较A组(13.00±0.52)天与C组(11.67±0.42)天显著延长(P＜0.01),而A,C组之间差异无统计学意义(P＞0.05).结论:诱导移植肝HO-1持续高表达,可通过促进移植物内Foxp3表达增强,发挥免疫抑制作用,减轻移植肝急性排斥反应.