组蛋白去甲基化酶KDM5C在疾病中的功能研究

赖氨酸去甲基化酶5C(lysine demethylase 5C, KDM5C)可以催化组蛋白H3上第4位赖氨酸残基二甲基和三甲基(histone H3 lysine 4 di-/trimethylation, H3K4me2/3)去甲基化为H3K4me1。KDM5C主要在人的大脑和骨骼肌中表达,其编码的蛋白质参与各种生物学效应。KDM5C与X连锁智力迟钝有关,在神经系统疾病中发挥重要作用;KDM5C在肿瘤中是一把双刃剑,具有促癌和抑癌的特性。KDM5C在前列腺癌、卵巢癌、结肠癌、膀胱癌、肝细胞癌、食管癌、鼻咽癌、胃癌、肺癌和弥漫性大B细胞淋巴瘤中过表达并促进肿瘤生长,在肝内胆管癌、子宫颈癌、套细胞淋巴瘤和甲状腺乳头状癌中低表达,在肾透明细胞癌和前体B细胞急性淋巴细胞白血病中易失活突变,并与不良预后相关,在乳腺癌中发挥双重作用。本文就KDM5C在疾病中的功能研究做一简述。     

FTO调控PYCR1-RNA-m^(6)A促进膀胱癌发生发展的研究进展

膀胱癌(BLCA)是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一。肥胖相关蛋白(FTO)通过m^(6)A依赖性的去甲基化酶活性广泛参与脂肪形成和肿瘤的发生过程,影响了包括吡咯啉-5-羧酸还原酶(PYCR1)等多个mRNA的转录后修饰,进而导致BLCA的发生发展。本文对FTO调控PYCR1-RNA-m^(6)A促进BLCA发生发展的机制进行详细的总结综述,为后续深入阐明BLCA发生发展的分子机制和临床诊疗提供重要参考。     

术前尿液 BLCA－4及 IL－8水平与膀胱癌临床病理特征的关系及意义

目的：探讨术前尿液BLCA－4及IL－8水平与膀胱癌病理特征的关系并确定其在临床诊断上的意义。方法：采用酶联免疫反应原理分别检测膀胱癌组患者、正常对照组和高危性膀胱癌人群中术前尿液中BLCA－4和IL－8水平,分析研究他们与膀胱癌临床病理特征的关系。结果：实验测得BLCA－4水平的Cutoff值为14．0 A／μg．protein,正常对照组尿中BLCA－4含量为2．7±5．8 A ／μg．Pro－tein;高危性膀胱癌组BLCA－4含量为9．1±18．7 A ／μg．protein,均低于实验的Cut－off值,但高危性膀胱癌组明显高于正常对照组（P＜0．01）;而膀胱癌组患者尿中BLCA－4含量为45．3±69．2 A ／μg．protein;显著高于正常对照组和高危性膀胱癌组（P＜0．001）。与正常对照组相比,术前尿液中IL－8水平在高危性膀胱癌组和膀胱癌组均显著性上升,统计学差异分别为P＜0．01, P＜0．001。膀胱癌组患者术前尿液中BLCA－4和IL－8水平均与年龄、性别、肿瘤单发还是多发,初发还是复发没有显著统计学差异（ P均＞0．05）,而与肿瘤的病理分期和分级有显著统计学差异（ P＜0．05）。结论：术前尿液BLCA－4及IL－8水平可能成为膀胱癌肿瘤诊断标志物,为临床早期诊断和病理特征判断提供依据。     

赖氨酸特异性去甲基化酶6A及其在白血病中的研究进展

白血病是发生于血液系统造血干/祖细胞的恶性增殖性疾病,临床以化学药物治疗为主,但其复发及耐药仍是难题和瓶颈。最新研究显示组蛋白甲基化是通过调控基因转录参与了细胞增殖、分化、凋亡等过程的表观遗传调节机制之一。另有研究显示赖氨酸特异性去甲基化酶6A(KDM6A),又称X染色体上普遍转录的四肽重复序列(UTX),与多种肿瘤尤其白血病的发生密切相关。 KDM6A通过将H3K27me3去甲基化为H3K27me2或H3K27me1激活基因的表达;还可通过非去甲基化酶功能调控靶基因转录的激活,参与形成与Set1结构域相关的蛋白质复合体的亚基继而调节H3K4me1表达;与酵母交配型转换/蔗糖不发酵复合物的结合,从而促使染色质构象开放;促进H3K27ac生成。本文全面阐述KDM6A(UTX)结构和生物活性的最新进展,重点讨论其在白血病中的作用,为白血病的靶向治疗提供新的研究方向。     

膀胱癌代谢风险模型的构建及其应用

目的：建立一个高效能的膀胱癌（BLCA）代谢风险模型，并应用多组学技术揭示不同风险人群的异质性特征。方法：利用TCGA-BLCA转录组数据，根据86条代谢通路中共1 660个代谢相关的基因，应用单因素COX分析、Lasso回归分析和多因素COX分析，构建BLCA代谢风险模型；应用转录组学、代谢组学和单细胞蛋白质组学技术揭示高风险和低风险人群的分子表达谱、代谢物表达谱及免疫微环境特征。结果：构建了一个由CYP2J2、GDPD3、IL4I1、ATP6V1B1、AKR1B1、ENGASE、CHPF、MBOAT7、CAD、FASN、AHCY、FLAD1和ALG3 13个基因组成的BLCA代谢风险模型；训练队列对应的受试者工作特征（ROC）曲线预测BLCA患者1年、3年和5年总生存期（OS）的曲线下面积（AUC）分别为0.796、0.702和0.717，广西队列对应的ROC曲线预测BLCA患者1年、2年和3年OS的AUC分别为0.866、0.810和0.816;Kaplan-Meier曲线分析显示，低风险组预后显著优于高风险组（P<0.001）；高风险组和低风险组患者的代谢物存在显著改变，...     

乙肝病毒核心启动子区和前C区突变与肝细胞自噬的关系

目的：探讨乙型肝炎病毒（hepatitis B virus, HBV）核心启动子区和前C区突变与肝细胞自噬的关系。方法构建前C区和C启动子区突变的1.3mer HBV质粒G1613A、A 1762T/G1764A、,G1896A;HepG2细胞分别转染GFP-LC3质粒和突变的HBV质粒。免疫荧光染色法检测HBV感染的细胞LC3荧光颗粒表达水平,免疫印迹法分析内源性LC3表达水平,实时定量PCR检测转染后细胞内自噬相关基因Atg5、Atg7和Beclin-1 mRNA的转录水平。结果免疫荧光显示,转染HBV G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A质粒的细胞LC3荧光颗粒表达水平分别为（12.5±0.2）%、（11.7±0.2）%、（8.5±0.2）%,低于转染野生型HBV质粒的细胞[（14.5±0.2）%],差异有统计学意义（P﹤0.05）。实时定量PCR显示,自噬相关基因Atg5 mRNA在转染HBV G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A质粒的细胞中的转录水平均明显低于野生型HBV （P﹤0.01）,Atg7和Beclin-1在转染G1896A HBV质粒细胞中的基因转录水平低于野生型HBV转染的细胞,且Beclin-1的降低具有统计学意义（P<0.05）。结论 HBV前C区和C启动子区G1613A、A 1762T/G1764A、G1896A突变能够降低HBV感染的肝细胞自噬。     

乳腺癌中SLC5A8基因的甲基化及转录水平

目的 研究SLC5A8基因在乳腺癌中的甲基化及转录水平。方法 将2017年5月至2019年12月河北大学附属医院基本外科的32例乳腺癌患者经手术治疗的肿瘤标本及癌旁正常组织标本分为2组,分别为实验组和对照组。采用甲基化特异性PCR法检测32例乳腺癌及乳腺癌周围正常组织SLC5A8基因甲基化,运用RT-PCR法检测32例乳腺癌组织SLC5A8基因的转录表达水平情况。结果 实验组32例乳腺癌组织SLC5A8基因甲基化阳性20例(62.50%),对照组32例癌旁组织SLC5A8基因甲基化阳性7例(21.87%)。实验组的甲基化阳性率显著高于对照组(P<0.05)。实验组甲基化阳性的20例乳腺癌组织中检测到基因mRNA转录表达的有6例(30.00%)。实验组甲基化阴性的12例癌组织中检测到基因mRNA转录表达的有7例(58.33%)。实验组中甲基化阳性的癌组织基因转录表达率较甲基化阴性的癌组织基因转录表达率显著降低(P<0.05)。结论 SLC5A8基因甲基化是乳腺癌中普遍存在的一种现象,可能参与乳腺癌的演变过程,并且乳腺癌组织SLC5A8基因甲基化与基因的转录表达不是完全一致的,二者具有一定的反向一致性。     

DR4?DR5基因甲基化对膀胱癌TRAIL耐受的影响研究

目的:探讨膀胱癌细胞中DR4、DR5甲基化状态以及与肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TRAIL)耐受间的关系.方法:采用RT-PCR技术检测膀胱癌T2A细胞、BIU87细胞表面DR4、DR5 mRNA表达,对低表达或无表达DR4、DR5膀胱癌细胞采用甲基化特异性PCR(MSP)检测DR4、DR5启动子甲基化状态.同时应用流式细胞仪检测TRAIL组以及TRAIL+5-氮杂胞苷组细胞凋亡状态.结果:RT-PCR示膀胱癌T24细胞无DR4、DR5表达,MSP法研究显示:DR4、DR5基因呈甲基化状态,对TRAIL诱导的凋亡表现为耐受状态(100 ng/ml TRAIL,凋亡率7.6%),经去甲基化试剂5-氮杂胞苷处理,T24细胞DR4、DR5表达随时间而增加,100 ng/ml TRAIL,凋亡率达29.2%;BIU-87细胞表达DR4、DR5并对TRAIL敏感(100 ng/ml TRAIL凋亡率30.4%),应用5-氮杂胞苷处理BIU87细胞,DR4、DR5表达无差异,100 ng/ml TRAIL,细胞凋亡率31.7%,MSP法检测DR4、DR5基因呈非甲基化状态.结论:膀胱癌T24细胞DR4、DR5启动子区域甲基化与TRAIL耐受有关,去甲基化可逆转上述耐受状态,可为TRAIL的下一步临床应用提供基础研究资料.     

P3H家族基因在膀胱尿路上皮细胞癌组织中的表达及其预后意义

目的探讨脯氨酰3-羟化酶（P3H）家族基因在膀胱尿路上皮细胞癌（BLCA）组织中的表达及其预后意义。方法从癌症基因组图谱数据库和GTEx数据库获取435例BLCA患者的临床数据，使用R3.6.3统计软件分析BLCA与癌旁正常组织中P3H家族基因表达水平的差异、不同TNM分期的BLCA患者P3H家族基因表达水平的差异、P3H家族基因表达水平与BLCA患者预后的关系以及预测效能。结果与癌旁正常组织比较，P3H1、P3H4在BLCA组织中的表达水平均明显升高（均P＜0.05），P3H2、P3H3、CRTAP在BLCA组织中的表达水平均明显降低（均P＜0.05）。不同TNM分期的BLCA患者P3H1、P3H3、P3H4、CRTAP表达水平比较，差异均有统计学意义（均P＜0.05），其中Ⅰ期和Ⅱ期患者的P3H3、P3H4表达水平较Ⅲ、Ⅳ期患者明显降低（均P＜0.05），Ⅱ期患者的P3H1、CRTAP表达水平较Ⅲ、Ⅳ期患者明显降低（均P＜0.05）；不同TNM分期的BLCA患者P3H2表达水平比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。Kaplan-Meier生存分析显示，P3H1、P3H3、P3H4、CRTAP基因表达水平与BLCA患者的预后有关，高表达组总体生存率更低（均P＜0.05）；而P3H2基因表达水平与BLCA患者的预后无关（P＞0.05）。ROC曲线分析显示，P3H1、P3H2、P3H3、P3H4、CRTAP预测BLCA患者的预后均有一定的准确度，其中P3H1、P3H4预测趋势方向一致（AUC=0.774、0.837），且P3H4的预测效能更高；P3H2、P3H3、CRTAP预测趋势方向一致（AUC=0.724、0.643、0.825），且CRTAP的预测效能更高。结论在BLCA的发生、发展过程中，P3H2、P3H3、CRTAP可能作为抑癌基因而P3H1、P3H4可能作为促癌基因发挥作用，其中P3H4对BLCA患者预后的预测价值较高。     

2型糖尿病患者PBMC组蛋白甲基化研究

目的 该研究探讨了2型糖尿病(T2DM)患者外周血单个核细胞(PBMC)组蛋白修饰情况.方法 收集12例T2DM患者及12例健康对照者的PBMC,采用H3K4/H3K9甲基化检测试剂盒提取组蛋白和检测H3K4/H3K9甲基化水平.实时荧光定量PCK法检测T2DM患者的PBMC组蛋白甲基转移酶和组蛋白去甲基化酶基因的mRNA表达水平.结果 与健康对照组比较,T2DM患者的PBMC组蛋白H3K4甲基化水平升高.实时定量PCR结果 显示T2DM患者组PBMC的SET1、SUV39H1、SUV39H2、KDM3A、KDM5B和LSD1基因表达分别是健康对照组的3.06、0.46、0.48、0.43、3.07和0.35倍.结论 2型糖尿痛患者外周血PBMC组蛋白甲基化呈现异常.     

结直肠癌组织中B7-H1和B7-H4表达与Foxp3+调节性T细胞浸润的关联性

目的：探讨B7-H1和B7-H4在结直肠癌（CRC）组织中的表达及其与肿瘤中Foxp3⁺调节性T细胞（Treg）浸润的关系,为判定CRC的生物学行为及预后提供依据。方法：免疫组织化学法检测56例CRC患者肿瘤标本及癌旁正常组织样本中B7-H1、B7-H4蛋白的表达和Treg的浸润情况,并与CRC患者的临床病理特征进行关联性分析。结果：CRC患者CRC组织中B7-H1阳性表达率高于癌旁正常组织（χ²=72.34,P<0.01）。不同浸润深度的CRC组织中B7-H1表达频数比较差异有统计学意义（P<0.01）;淋巴结转移阳性者CRC组织中B7-H1高表达频数高于淋巴结转移阴性者（P<0.01）;Duke's分期C+D者CRC组织中B7-H1高表达频数高于Duke's分期A+B者（P<0.01）。CRC组织中B7-H4阳性表达率高于癌旁正常组织（χ²=78.92,P<0.01）。不同浸润深度的CRC组织中B7-H4高表达频数比较差异有统计学意义（P<0.05）,淋巴结转移阳性者CRC组织中B7-H4高表达频数高于淋巴结转移阴性者（P<0.05）;肿瘤组织中Treg阳性细胞数明显高于癌旁正常组织（P<0.01）;分化程度不同CRC组织中Treg阳性细胞数比较差异有统计学意义（P<0.01）;淋巴结转移阳性者CRC组织中Treg阳性细胞数高于淋巴结转移阴性者（P<0.01）。Treg浸润与B7-H1的表达有相关性（P<0.01,Cramer's=0.463）,Treg浸润与B7-H4的表达有相关性（P<0.05,Cramer's=0.320）。结论：B7-H1和B7-H4在CRC组织中呈异常高表达,并与肿瘤中Treg浸润增加有关,可作为评估CRC预后的指标。     

大蒜素通过miR-486-5p/KDM5B轴增加非小细胞肺癌A549细胞放疗敏感性

目的：探讨大蒜素对非小细胞肺癌（NSCLC）A549细胞放射敏感性影响及其作用机制。方法：大蒜素联合X射线处理A549 细胞,采用MTT法检测A549 细胞增殖活力;Transwell实验检测A549 细胞侵袭能力;克隆形成实验检测A549细胞对放射的敏感性;彗星实验评估A549细胞DNA损伤情况;Western blot检测γ-H2AX、Snail、Vimentin蛋白和组蛋白去甲基化转移酶（KDM5B）的表达量。qRT-PCR检测miR-486-5p的表达量。双荧光素酶报告基因验证miR-486-5p与KDM5B的靶向关系。结果：不同浓度（20、40、60 μg/mL）大蒜素干预可显著抑制A549细胞增殖活力（P ＜0.05）和侵袭能力（P ＜0.05）,并上调miR-486-5p在A549细胞中的表达量（P ＜0.05）。40 μg/mL大蒜素可明显上调X射线对A549细胞增殖和侵袭能力的抑制作用（均P ＜0.05）,且加速了A549细胞DNA损伤。机制上,大蒜素通过上调miR-486-5p增强A549细胞对X射线的敏感性,但敲低miR-486-5p可显著下调大蒜素对A549细胞放射增敏作用。此外,miR-486-5p靶向负调控KDM5B的表达。结论：大蒜素可通过抑制A549细胞增殖、侵袭并诱导细胞DNA损伤,进而增强A549细胞对X射线的敏感性,其作用机制是通过上调miR-486-5p靶向抑制KDM5B来实现的。     

荧光定量PCR检测膀胱癌患者尿沉淀细胞TWIST1基因启动子甲基化状态的临床价值

目的:评估尿沉淀细胞TWIST1基因启动子甲基化状态在膀胱癌诊断中的价值?方法:用实时荧光定量PCR的方法,对50例临床确诊的膀胱癌患者?13例非肿瘤性尿路疾病患者?7例健康志愿者检测了尿沉淀细胞TWIST1基因启动子的甲基化状态;同时行尿脱落细胞学检查?结果:50例膀胱癌患者中尿脱落细胞TWIST1基因启动子甲基化阳性率为64.0%(32/50),对照组均未发现甲基化改变,两者比较差异有统计学意义(P < 0.01)?TWIST1基因启动子甲基化率有随组织分期升高的趋势,但在不同分级?分期膀胱癌中的差异无显著性?实时荧光定量PCR法检测尿液中TWIST1基因启动子甲基化的敏感性和特异性分别为64.0%?100.0%?而尿脱落细胞学检查阳性率为48.0%(24/50),其敏感性和特异性分别为48.0%和100.0%?结论:尿脱落细胞TWIST1基因启动子的甲基化检测诊断膀胱癌敏感性和特异性均较高,且无创?无痛苦,可作为早期诊断膀胱癌的敏感指标?     

吉西他滨对体外乳腺肿瘤细胞抑制及其MTA1 mRNA表达的影响

目的：探讨吉西他滨对体外培养的乳腺肿瘤MCF－7细胞株抑制作用及其作用机制。方法 将浓度为25 mg／mL、50 mg／mL、100 mg／mL、200 mg／mL和400 mg／mL吉西他滨培养液分为5组：A组、B组、C组、D组和E组。 A组、B组、C组、D组和E组均作用于体外传代培养对数生长期乳腺肿瘤细胞株MCF－7细胞24 h;使用四甲基偶氮唑盐（ MTT）法检测5组各对乳腺肿瘤细胞株MCF－7的生长抑制率;用实时定量聚合酶链反应（ PCR）检测5组各对乳腺肿瘤MCF－7细胞株肿瘤转移相关基因1（MTA1）mRNA的相对表达量。结果 A组、B组、C组、D组和E组对乳腺肿瘤MCF－7细胞株抑制率A组＜B组＜C组＜D组＜E组,差异均有统计学意义（P＜0．05）;C组、D组和E组MTA1 mRNA的相对表达量均人低于空白对照组,且这3组的MTA1 mR－NA的相对表达量依次降低,差异均有统计学意义（P＜0．01）。结论 吉西他滨能抑制乳腺肿瘤MCF－7细胞株增殖,且有剂量依赖性,其主要作用机制是通过下调MTA1 mRNA的表达,从而发挥抑制乳腺肿瘤MCF－7细胞株转移与抗乳腺肿瘤作用。     

PITX2启动子甲基化及其与膀胱癌临床病理的关系

目的:由于近些年表观遗传学的发展,基因启动子甲基化检测在预测癌症诊断预后方面拥有巨大的潜力。PITX2启动子的高CpG岛增加其甲基化程度,其能够成为新的膀胱癌预测因子。方法: QRT-PCR检测永生化膀胱上皮细胞系（SV-HUC）和3种膀胱癌细胞系（EJ、5637、T24）以及癌组织和癌旁组织的差异性表达。通过DNA甲基化测定实验对33例全膀胱切除术切除癌组织进行甲基化程度测定,分为大于50%甲基化,小于50%甲基化建立甲基化程度与肿瘤分期分级的联系。结果:使用实时定量RT-PCR（Q-PCR）证明PITX2在膀胱癌细胞中高表达。癌组织中甲基化程度明显高于癌旁组织。PITX2启动子甲基化与肿瘤大小（P =0.026 7）、高级别（P =0.027 7）和TNM分期（0.016 0）显着相关。在预测肿瘤侵袭（T2-T4肿瘤）中,PITX2启动子甲基化的ROC曲线下面积（AUC）为0.867。 Kaplan-Meier生存分析表明,与低PITX2甲基化表达的肿瘤相比,高PITX2启动子甲基化表达的肿瘤与较短的总体存活相关。结论:PITX2在膀胱癌组织中异常高表达,并且PITX2启动子区域在癌组织中存在高甲基化是患者不良预后的独立危险因素,因此,PITX2启动子甲基化可能成为膀胱癌肿瘤发生进展有效的预测因子。     

Relationship between aberrant methylation of FAS promoter and biological behavior of bladder urothelial carcinoma

This study examined the promoter methylation of APO-1/CD95 (Fas) gene in bladder urothelial carcinoma and analyzed the relationship between the Fas promoter methylation and the biological behavior of b...     

表观遗传学药物影响乳腺癌细胞系抑癌基因BRCA1及CHD5表达的研究

目的 明确表观遗传学药物对乳腺癌细胞系抑癌基因BRCA1及CHD5表达的作用,探讨此类药物在乳腺癌临床治疗中的合理应用。方法 采用去甲基化制剂5 AZA和组蛋白去乙酰化酶抑制剂TSA分别作用于乳腺癌细胞系T47D、MCF-7及乳腺正常上皮细胞HBL-100,5 AZA终浓度分别为0、0.5、1.0、2.5、5.0和10.0μmol/L,TSA终浓度分别为0、0.25、0.5、0.75、1.0和1.5μmol/L。荧光定量RT PCR检测各浓度5 AZA作用12、24、48及72h,各浓度TSA作用6、12、24、48及72h BRCA1和CHD5的表达水平,并行甲基化特异PCR（MSP）检测两基因的甲基化状态。结果 2.5μmol/L AZA和0.5μmol/L TSA作用可提高乳腺癌细胞系BRCA1及CHD5的表达,而10μmol/L AZA和1.0、1.5μmol/L TSA作用反致表达降低,且对乳腺正常上皮细胞呈毒性作用。MSP未能发现AZA和TSA对MCF 7细胞两抑癌基因及T47D细胞BRCA1甲基化状态的影响,而两种药物均可逆转T47D细胞CHD5的甲基化状态。结论 表观遗传学药物对乳腺癌细胞抑癌基因表达的影响具有给药剂量及时间限制性,本研究可为此类药物在乳腺癌治疗中的科学应用提供实验依据。     

膀胱移行细胞癌中P16基因的甲基化失活

目的研究膀胱移行细胞癌中p16基因甲基化失活及其在肿瘤发生中的作用.方法应用DNA甲基化分析技术检测52例膀胱移行细胞癌中P16基因5'CPG岛的甲基化状态,应用RT-PCR检p16基因mRNA的表达.结果52例膀胱移行细胞癌中19例出现p16基因5'CPG岛的甲基化,甲基化率为36.54％,而发生甲基化的肿瘤均未检测p16mRNA表达.P16基因5'CPG岛甲基化多见于高期、高级肿瘤(P＜0.05).结论P16基因5'CPG岛的甲基化引起的基因失活是膀胱肿瘤发展过程中的晚期所见.