胶质母细胞瘤恶性进展中不同细胞亚群的动态轨迹和细胞通讯网络

目的：探索胶质母细胞瘤(glioblastoma, GBM)恶性进展过程中细胞亚群的动态轨迹以及免疫细胞亚群之间的通讯网络,结合GBM患者的转录组数据和临床信息,挖掘GBM恶性进展过程中的关键风险标志物,以期为该疾病的治疗和预后提供科学依据。方法：基于单细胞测序数据分析方法,构建GBM恶性进展中的细胞亚群图谱,利用Monocle2技术构建GBM恶性进展中肿瘤细胞亚群的动态进展轨迹,基于基因富集分析,挖掘肿瘤细胞亚群随GBM恶性进展中显著变化的基因所富集的生物学过程,利用CellChat软件识别不同免疫细胞亚群间的复杂通讯网络,通过生存分析识别GBM恶性进展中影响患者预后的关键风险分子标记物。结果：单细胞测序数据分析识别出6种不同的细胞类型,包括淋巴细胞、周细胞、少突神经胶质细胞、巨噬细胞、胶质瘤细胞、小胶质细胞,单细胞数据集中了27 151个细胞,其中包含3 881个来源于低级别胶质瘤患者的细胞,10 166个来源于新诊断GBM患者的细胞,13 104个来源于复发性胶质瘤患者的细胞。胶质瘤细胞亚群逆时序分析提示,胶质瘤细胞亚群在恶性进展中存在着明显的细胞异质性;免疫细胞亚群的细胞相互作...     

高分级胶质瘤的化疗进展

胶质瘤起源于神经胶质细胞，临床上将恶性星形细胞瘤和胶质母细胞瘤统称为恶性胶质瘤，而将Ⅲ级胶质瘤（如间变性星形细胞瘤，间变性少枝胶质细胞瘤）、胶质母细胞瘤、胶质肉瘤等统称为高分级胶质瘤。当前手术切除病灶后放疗是治疗高分级胶质瘤的常规方案。由于肿瘤呈弥漫性生长，并影响和侵袭正常脑组织，手术常难彻底切除，术后放疗效果欠佳，辅助性化疗为患者提供了更多选择。本文就高分级胶质瘤化疗的现状和进展做一简要综述。     

高分级胶质瘤化疗的现状和进展

胶质瘤起源于神经胶质细胞的肿瘤。临床上将恶性星形细胞瘤和胶质母细胞瘤统称为恶性胶质瘤，而将Ⅲ级胶质瘤（如间变性星形细胞瘤，间变性少枝胶质细胞瘤）、胶质母细胞瘤、胶质肉瘤等统称为高分级胶质瘤。当前手术切除病灶后放疗已是治疗高分级胶质瘤的常规方案，由于肿瘤呈弥漫性生长，并影响和侵袭正常的脑组织，手术常难彻底切除、术后放疗效果欠佳，辅助性化疗为患者提供了更多的选择。本文就高分级胶质瘤化疗的现状和进展做一简要综述。     

血管内皮生长因子在人脑胶质瘤及其瘤周水肿组织中的表达及意义

目的:探讨VEGF在人脑正常组织、胶质瘤及瘤周水肿组织中的表达及意义。方法:应用免疫组化SP法检测VEGF在66例人脑胶质瘤组织中的表达。测算EI,进行统计分析。结果:VEGF典型阳性表现为血管内皮细胞的细胞浆及星形胶质细胞、反应性星形胶质细胞和肿瘤细胞的细胞浆和/或突起呈黄色或棕黄色,较少表达于神经元细胞,神经胶质中表达不明确。VEGF在不同病理级别胶质瘤间的表达不同,其表达程度与病理级别相关;而在胶质瘤瘤周水肿组织中的表达与来源肿瘤的病理级别、性别、年龄均不相关。EI与肿瘤病理级别、高低级别、患者年龄有一定的正相关,与VEGF表达、性别、肿瘤发生侧别不相关。幕上胶质瘤的EI与肿瘤病理级别、高低级别有很强的正相关,而与VEGF表达、性别、年龄、肿瘤发生侧别不相关。结论:VEGF在人正常脑组织中异质表达;在人脑胶质瘤肿瘤及瘤周水肿组织中表达增强,并与胶质瘤病理级别相关。瘤周水肿程度与肿瘤恶性度密切相关。     

免疫微环境在胶质母细胞瘤中的研究进展

摘要: 胶质母细胞瘤是中枢神经系统恶性程度最高的胶质瘤,其标准治疗手段是最大程度的肿瘤切除、放疗和替 莫唑胺辅助化疗,中位生存期仅为14个月。免疫疗法开启多种癌症治疗的新篇章,在胶质母细胞瘤中却未能带来生存 获益。胶质母细胞瘤具有高度异质性和复杂的免疫抑制性微环境,肿瘤细胞与非肿瘤细胞相互作用,促进肿瘤的生长、 侵袭、耐药。因此,剖析胶质母细胞瘤免疫微环境各组成成分,了解免疫细胞与肿瘤细胞之间的信号通路,有利于理解免 疫治疗失败的原因,也为后续研究提供依据。     

胶质瘤干细胞及其靶向治疗研究

胶质母细胞瘤是中枢神经系统的原发肿瘤,其恶性程度高、预后差、治疗棘手。研究发现胶质瘤干细胞是胶质母细胞瘤放化疗抵抗、侵袭转移的根源。其中CD133阳性的胶质瘤干细胞会产生持续的高强度的放、化疗抵抗性;很多信号通路如Notch、Shh、血管内皮生长因子（VEGF）、STAT3、BMP等对于调控胶质瘤干细胞的自我更新和多向分化是必需的,亦和胶质母细胞瘤治疗抵抗有关;胶质母细胞瘤微环境主要由微脉管系统和肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）构成,VEGF水平和微脉管系统与肿瘤生长息息相关。以胶质瘤干细胞为靶点的治疗策略主要包括两方面,一是消除维持其多能性的细胞表面标记和特定信号转导通路,二是改变胶质瘤干细胞与其周围微环境的相互作用,主要指血管生成和免疫豁免方面。这些以胶质瘤干细胞为靶点的治疗策略正在为人们所认识,并逐渐受到重视,为胶质瘤的治疗带来了希望。     

原位杂交方法检测人脑胶质瘤VEGF mRNA的表达

目的 :检测血管内皮细胞生长因子 ( VEGF)在胶质瘤及瘤周组织的基因表达 ,探讨其促进肿瘤血管生成及瘤周组织水肿的作用机制。方法 :采用原位杂交方法检测 2 3例人脑胶质瘤及瘤周组织和 7例正常脑组织中 VEGF的基因表达。结果 :VEGF在胶质瘤组织主要表达于毛细血管、血管内皮细胞及肿瘤细胞 ,瘤周组织表达于变异的星形胶质细胞 ,而正常脑组织几乎无表达。胶质瘤及瘤周组织的阳性细胞表达率显著高于正常脑组织 ( P<0 .0 0 1 ) ;胶质瘤组织中血管内皮细胞VEGF的阳性表达率高于瘤周组织 ( P<0 .0 1 ) ,而瘤周组织星形胶质细胞的阳性表达率高于肿瘤组织 ( P<0 .0 1 )。结论 :VEGF在脑胶质瘤及瘤周组织中的高表达与肿瘤血管生成及瘤周组织水肿的发生密切相关。     

尿激酶及其受体在人脑胶质瘤中的表达

目的研究尿激酶（ｕＰＡ）、尿激酶受体（ｕＰＡＲ）在人脑胶质瘤中的表达特征，评估其在胶质瘤恶性生长方式中的作用。方法选取５７例不同恶性程度的星形细胞瘤、１３例良性脑膜瘤和１０例正常脑组织，分别以抗ｕＰＡ单克隆抗体和抗ｕＰＡＲ多克隆抗体用ＡＢＣ法进行免疫组织化学染色和半定量分析。结果ｕＰＡ、ｕＰＡＲ的表达程度与胶质瘤的恶性程度有关，胶质瘤恶性程度越高，表达程度越高；良性脑膜瘤的表达程度较低；正常脑组织则未见ｕＰＡ、ｕＰＡＲ的表达。ｕＰＡ染色除见于肿瘤细胞、血管内皮细胞外，还见于少数胶质增生带的正常胶质细胞和神经元。在肿瘤细胞增殖密集区域，ｕＰＡ阳性的肿瘤细胞比例较低，而在肿瘤细胞生长较稀疏、肿瘤血管增殖旺盛的区域阳性细胞比例较高。ｕＰＡＲ的染色定位于肿瘤细胞和血管内皮细胞。结论ｕＰＡ和ｕＰＡＲ的共同表达是浸润性生长的胶质瘤的特征之一。其表达程度可作为判断星形细胞瘤浸润性的重要参考指标。在人体内，表达ｕＰＡ的细胞种类是较多的。ｕＰＡ、ｕＰＡＲ的表达对胶质瘤的浸润和血管发生可能起着重要作用。     

不同起源胶质瘤中microRNA-210表达差异及其和星形胶质细胞肿瘤级别相关性的研究

【摘要】 目的 探讨microRNA-210（miR-210）在星形胶质细胞肿瘤和少突胶质细胞肿瘤中的表达差异及意义。方法 将组织标本分为正常脑组织、少突胶质细胞肿瘤、星形胶质细胞肿瘤三组,星形胶质细胞肿瘤再分为A[毛细胞型星形细胞瘤（WHO Ⅰ级）],B[弥漫性星形细胞瘤（WHO Ⅱ级）],C[间变性星形细胞瘤（WHO Ⅲ级）],D[胶质母细胞瘤（GBM,WHO Ⅳ级）]。采用实时定量PCR方法检测各组中miR-210的表达水平。 统计学分析miR-210的表达和星形胶质细胞肿瘤的相关性。结果 miR-210在各级别星形胶质细胞肿瘤中表达水平依次为D,C,(B,A)(P<0．001),除A、B组间外,其他组间都具有统计学意义(P<0．001),说明星形胶质细胞肿瘤级别越高,miR-210表达水平越高;然而在少突胶质细胞肿瘤中呈低表达(P<0．05),且间变性少突胶质细胞瘤中表达量低于少突胶质细胞瘤中的表达量。结论 miR-210在不同起源、不同级别胶质瘤中的表达水平不同,可以作为不同起源胶质瘤病理检查的辅助鉴别手段,也可作为星形胶质细胞肿瘤恶性进展的生物学标志物。     

轴突外微环境对中枢神经再生的影响

中枢神经轴突外微环境包括胶质细胞及化学因子,中枢神经系统损伤后修复的成功依赖于损伤的神经通路中至少有一部分存活的神经元和适当的微环境。本文综述成年哺乳动物轴突外微环境的研究进展。 1 胶质细胞 CNS中的胶质细胞是大胶质细胞(星形胶质细胞、少突胶质细胞)和小胶质细胞,其中星形胶质细胞造成的胶质瘢痕最早引起注意和研究。为了避免形成或减缓形成胶质瘢痕,先后采用过多种方法:①     

M2巨噬细胞来源的外泌体转运miR-1260b促进胶质母细胞瘤迁移的机制研究

肿瘤相关巨噬细胞浸润肿瘤组织并促进胶质母细胞瘤进展,但作用机制还有待进一步研究。本文以探究M2巨噬细胞通过分泌外泌体影响胶质母细胞瘤迁移能力的机制为目的。采用超高速离心法提取外泌体;采用RNA测序筛选差异表达的miRNA;采用数据库靶点预测miRNA可能的靶蛋白;采用双萤光素酶报告基因实验验证miRNA与靶基因的相互作用;采用裸鼠皮下移植瘤模型检测肿瘤细胞增殖能力。实验结果表明,肿瘤相关巨噬细胞主要是M2巨噬细胞,M2巨噬细胞分泌的外泌体能够促进脑胶质瘤细胞的迁移,其机制与转运miR-1260b且靶向调控AJAP1影响脑胶质瘤细胞的迁移有关,提示巨噬细胞分泌的外泌体通过转运miR-1260b,从而影响胶质母细胞瘤的迁移能力。     

大鼠小胶质细胞及巨噬细胞对胶质瘤C6细胞株迁移能力的影响

目的 探讨大鼠小胶质细胞及外周血巨噬细胞对胶质瘤C6细胞株迁移能力的影响.方法 将大鼠小胶质细胞及外周血单核细胞诱导分化形成的巨噬细胞分别与胶质瘤C6细胞共培养,以大鼠成纤维细胞共培养为阳性对照,单纯胶质瘤C6细胞为空白对照,共培养0、24、48 h分别行划痕实验,于划痕后6 h观察划痕实验结果;共培养24、48 h时以CD11b标记、流式分选分离小胶质/巨噬细胞及C6细胞,行Western blot检测0、24、48 h小胶质/巨噬细胞IL-10、IL-18和MMP-9及C6细胞株TGF-β、FAS配体表达水平的改变.结果 早期小胶质细胞及巨噬细胞均抑制胶质瘤的迁移,巨噬细胞的抑制效果更强(P<0.05);与胶质瘤细胞共培养后两种细胞对肿瘤的抑制作用消失且差异无统计学意义,均表现为促进肿瘤迁移.小胶质细胞、巨噬细胞在初始阶段IL-10、IL-18、金属基质蛋白酶MMP-9表达略有不同,但共培养后两种细胞的上述蛋白表达均升高且一致;共培养后的胶质瘤细胞的TGF-β、FAS配体较共培养前表达均升高且一致.结论 小胶质细胞及巨噬细胞与C6胶质瘤细胞共培养后被驯化成同样的GAMs,对C6细胞迁移影响的生物学表现一致.     

CXCL12-CXCR4轴促进胶质母细胞瘤前神经间质转化

［摘要］目的: 探讨CXC趋化因子配体12-CXC趋化因子受体4(CXC chemokine ligand 12 CXC chemokine receptor 4,CXCL12-CXCR4)轴对脑胶质母细胞瘤前神经间质转化的作用。方法: 分析TCGA GBM基因数据库中CXCR4 mRNA在不同胶质瘤分子分型肿瘤组织中的水平差异及其对肿瘤患者生存率的影响;人胶质瘤LN428、U87MG细胞经不同浓度CXCL12 (0、20、40、60、80、100 ng/mL)及20 μmol/L普乐沙福(选择性CXCR4拮抗剂)预处理48 h,免疫印迹实验检测细胞内OLIG2、E-钙黏蛋白、YKL-40、N钙-黏蛋白和波形蛋白表达水平;Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,CCK8法和克隆形成实验检测肿瘤细胞增殖能力。结果： TCGA GBM数据库分析结果显示,与健康者相比,胶质瘤患者CXCR4 mRNA表达显著增高,且与患者生存率呈负相关;间质型胶质母细胞瘤组织标本中CXCR4 mRNA水平显著高于前神经型胶质母细胞瘤(P均＜0.05)。与对照组相比,CXCL12组细胞间质型相关蛋白YKL-40、N-钙黏蛋白、波形蛋白表达水平显著升高,而前神经型相关蛋白OLIG2、E-钙黏蛋白表达水平显著降低,人胶质瘤LN428、U87MG细胞迁移和侵袭能力、增殖能力显著增强(P均＜0.05);给予普乐沙福处理后,与CXCL12组相比,人胶质瘤LN428、U87MG细胞迁移和侵袭能力、增殖能力显著降低,且间质型相关指标蛋白表达显著降低,前神经型相关指标蛋白表达显著升高(P均＜0.05)。结论： CXCL12-CXCR4轴具有促进胶质母细胞瘤前神经间质转化,及迁移和侵袭、增殖的作用。     

人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体调控恶性胶质瘤相关巨噬细胞的极化

  目的  探究人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体对肿瘤相关巨噬细胞极化的影响，并初步探讨其对胶质瘤发生发展的影响。  方法  利用试剂盒提取人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体，通过扫描电镜及Western blot 鉴定外泌体。将胶质瘤细胞分为SHG449:SHG449细胞不做特殊处理；SHG449+M0组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养；SHG449+M0+exosome组:SHG449细胞与M0型巨噬细胞共培养后，加入标记有PKH-67的外泌体使其进入M0型巨噬细胞。  结果  （1）人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体成功提取，且进入M0型巨噬细胞；（2）外泌体进入胶质瘤细胞SHG449诱导极化的巨噬细胞后细胞形态转化，且M2型巨噬细胞活化标志物Arginase、CD206以及CCL22，TGF-β表达下降（Arginase:P < 0.01，CD206:P < 0.05， CCL22:P < 0.05，TGF-β:P < 0.01），M1型活化标志物iNOS，CD68以及IL-1β，TNF-α表达上升（iNOS:P < 0.01，CD68:P < 0.01，L-1β:P < 0.000 1，TNF-α:P < 0.001）；（3）被外泌体诱导极化的巨噬细胞导致胶质瘤细胞增殖能力下降（P < 0.05），凋亡能力上升（P < 0.000 1）。  结论  人骨髓间质细胞分泌的外泌体可抑制肿瘤相关巨噬细胞向M2表型转化，并诱导其向M1表型转化，调节肿瘤免疫微环境，从而达到抑癌的作用。     

人肺癌细胞原位移植瘤小鼠模型免疫细胞的多色流式细胞术检测方法的建立

目的 对肺癌原位接种的小鼠模型,设计并建立了11色的免疫细胞分类方法,对肿瘤微环境中的T细胞、巨噬细胞、自然杀伤(natural killer, NK)细胞进行更加细致的分型,从而获得有关影响肿瘤细胞进展的研究手段。方法 建立11色的上皮细胞、T细胞、巨噬细胞和NK细胞的标志物荧光基团的搭配方案,对有免疫功能的小鼠血液样本进行鉴定。进一步原位接种PC-9细胞于裸鼠体内,通过该搭配方案分析鉴定M1型、M2型巨噬细胞,以及不同成熟程度的NK细胞。结果 11色免疫细胞的搭配方案能够使各种标志物发挥到最大的荧光效应,减少荧光串色。对小鼠血液标本,通过流式细胞学分析可以得到准确的淋巴细胞、巨噬细胞和NK细胞的分类和分型。对原位移植瘤样本,能够更精准的区分肿瘤细胞和各种免疫细胞及细胞亚型。采用溶瘤病毒干预措施,发现干预后的免疫细胞各个分型之间差异有统计学意义。结论 在原位移植瘤的模型中,该11色免疫细胞的流式荧光抗体搭配方案可以对肿瘤微环境中的多种免疫细胞进行精确分类,为研究不同免疫细胞和肿瘤细胞之间的相互作用提供了有效的手段,并可以应用于大量的肿瘤微环境研究中。     

子宫内膜癌肿瘤微环境的免疫调控机制进展

 研究发现子宫内膜癌局部浸润有大量的免疫细胞如肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)、辅助性T细胞(helper T cells,Th)、调节性T细胞(regulatory T cells,Tregs)等,以及炎性介质如转化生长因子β(transforming growth factor β,TGF-β)、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor, VEGF)、IL-1等,参与组成子宫内膜肿瘤细胞周围的炎性微环境。而这些因素失衡与子宫内膜样腺癌的发生、进展及临床预后密切相关。因此,明确肿瘤微环境中免疫细胞及其相关炎症介质的相互作用对子宫内膜癌的影响就变得极为重要。本文就子宫内膜癌肿瘤微环境的最新研究进展作一综述。     

2-羟基戊二酸对胶质母细胞瘤细胞增殖和迁移的影响

目的 探讨2-羟基戊二酸(2-HG)对异柠檬酸脱氢酶(IDH)野生型胶质母细胞瘤增殖、迁移的作用.方法 通过细胞培养,细胞增殖实验(CCK-8)检测不同浓度(5、10、15、20、30、40 mmol/L)2-HG对胶质瘤细胞的增殖抑制作用,细胞迁移实验检测细胞迁移能力,聚合酶链式反应(PCR)检测相关基因mRNA的表达.结果 外源性加入2-HG使胶质母细胞瘤细胞形态发生间质样改变,随浓度的升高作用愈明显,呈浓度依赖性,促进胶质母细胞瘤细胞的增殖和迁移,下调上皮细胞标志物E-钙黏蛋白(E-Cadherin)的表达,上调间质细胞标志物波形蛋白(Vimentin)和β-链蛋白(β-catenin)的表达.结论 2-HG能够促进IDH野生型胶质母细胞瘤的增殖、迁移.     

肿瘤相关巨噬细胞的脂质代谢重编程

肿瘤相关巨噬细胞（tumor associated macrophages,TAMs）是实质肿瘤中最常见的间质细胞类型之一,且与肿瘤微环境的免疫抑制状态有着紧密联系,并促进肿瘤的恶性进展。TAMs内的代谢发生了重编程,并且参与调控其自身的极化以及相应的功能表型。本文详细论述了TAMs中包括三酰甘油、脂肪酸及其衍生物、胆固醇和磷脂在内的脂质代谢重编程以及它们对肿瘤进展的调控。然而,肿瘤细胞与肿瘤微环境间质细胞的代谢极具异质性。肿瘤细胞与间质细胞之间脂代谢重编程的异同点以及重编程如何调控细胞活性的机制值得深入探索。同时,综合考虑肿瘤不同的组织类型、不同的发展阶段,精准靶向干预TAMs脂质代谢重编程,促进TAMs向M1样巨噬细胞极化,将成为代谢调节肿瘤免疫治疗的新策略。     

Nutritional and signal interactions in a tumor-host social relationship

To the Editor: We read with great enthusiasm an interesting and exciting viewpoint by Lin,1 who believed that the core relationship between a tumor and its host microenvironment is the nutritional and signal interactions between cancer stem cells and endothelial cells.Our group is long-termly engaged in the study of glioma and glioma stem cell, and we also put much concern upon the research of tumor invasion. One of the most marked bionomics of malignant gliomas is invasion, which leads to the spreading of tumor masses along nerve fibers and blood vessels, and even distant dissemination.However, a benign tumor grows only by expansive growth.Therefore, it is of a quite benefit to illuminate or even partly illuminate the "tumor-host social (THS) relationship".