肠杆菌目细菌碳青霉烯酶检测方法及临床应用与治疗的研究进展

肠杆菌目细菌碳青霉烯酶通常划分为A类、B类和D类,不同类型的碳青霉烯酶的治疗方案有所不同,故对碳青霉烯酶快速准确的检测以及抗菌药物的选择对临床治疗及患者预后十分重要。本文对肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的检测方法以及抗菌药物进行总结整理,对其优缺点进行比较,旨在为临床监测及检测方法的制定提供思路。     

耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的临床感染特征及其耐药基因分析

目的 分析耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)的临床特点及耐药基因携带情况.方法 收集作者医院2018-01/2019-12月临床研究标本中所产生分离出的CRE 72株,采用VITEK2 Compact全自动微生物鉴定/药敏检测系统,进行不同菌株鉴定和药敏结果分析.碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测碳青霉烯酶表型.用特异性引物检测blaKPC、blaIMP、blaOXA-48、blaVIM和blaNDM基因聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增,将PCR阳性扩增反应产物进行分析测序和BLAST比对,检测菌株耐药基因的携带情况.结果 CRE感染患者主要分布在重症监护室(intensive care unit,ICU) (34/72,47.22％),其次为老干部保健病房(14/72,19.44％)和呼吸内科病区(11/72,15.28％).CRE菌株的标本主要分离自呼吸道分泌物(46/72,63.89％),其次为尿液(18/72,25.00％),分泌物(5/72,6.94％),血液(3/72,4.17％).药敏试验结果表明,CRE对亚胺培南、美罗培南和厄他培南的耐药率分别为85.2％、86.4％和100％,对头孢菌素、单环内酰胺和内酰胺抑制剂/复合物的耐药率分别为100％,但对氨基糖苷类(阿米卡星)和四环素类(米诺环素)药物的耐药率相对较低,分别为62.1％和47％.72株CRE进行碳青霉烯酶抑制剂增强试验表型检测,70株阳性.PCR扩增出72株CRE,产碳青霉烯酶的菌株70株,其中有56株blaK-PC基因和11株blaNDM基因,3株同时携带blaKPC基因和blaNDM基因,但未检出blaOXA-48、bla VIM基因和bla IMP基因.两种方法的符合率为100％.产碳青霉烯类肠杆菌最多的是肺炎克雷伯菌(56株),其次是大肠埃希菌(11株).肺炎克雷伯菌主要产生KPC型碳青霉烯,而大肠杆菌仅产生NDM型碳青霉烯.结论 CRE的主要临床分布在ICU等重症科室,耐药现象比较严重,CRE的基因型以blaKPC型为主,临床应加强对医院感染的预防和控制,避免耐药菌在医院中的播散.     

247株耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的临床分布及耐药特性分析

目的:了解我院耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的临床分布及其耐药特性.方法:收集江西中医药大学附属医院2015年―2019年非重复临床分离肠杆菌目细菌,分析其中CRE的菌种分布和耐药特性;采用MicroScan WalkAway-96全自动微生物分析仪进行细菌鉴定和药物敏感性试验,参照美国临床实验室标准化协会(CLSI 2019)标准判断结果,并将结果用Whonet 5.6软件进行统计学分析,以此得到CRE菌株的耐药情况.结果:共收集7806株肠杆菌目细菌,其中CRE菌株247株,分离率为3.2％(247/7806).分离获得的CRE,主要是肺炎克雷伯菌102株(41.3％)、产气肠杆菌51株(20.7％)、大肠埃希菌38株(15.4％)、阴沟肠杆菌23株(9.4％)、产酸克雷伯菌7株(2.8％);标本来源主要为尿液、痰液、分泌物、血液等;科室分布主要为外科、急诊科、心血管科、针灸科等;患者年龄分布情况为:61～70岁、71～80岁、81～90岁.此三个年龄段的人数明显多于其他年龄人数,同时20岁以下和90岁以上患者人数相对较少;药敏情况为:CRE对氨苄西林、哌拉西林、哌拉西林/舒巴坦、头孢唑啉、头孢呋辛、头孢曲松、头孢噻肟、头孢吡肟呈现很高耐药率,皆达90％以上,对厄他培南、亚胺培南、美罗培南和氨曲南的耐药率分别为95％、84.9％、91.3％和89％,对阿米卡星的耐药率相对较低,为50.1％,均未发现对替加环素耐药的菌株.结论:我院CRE患者临床分布广泛,以老年患者居多,CRE患者对临床常用抗菌药物有较高耐药性,较大程度增加了治疗难度,应加强该菌的耐药性监测,合理使用抗生素,探索中药治疗途径,中西医并用,有效阻止耐药菌株的扩散和传播.     

某三级医院耐碳青霉烯肠杆菌目细菌的分布和耐药性

目的 了解某三级医院分离的耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌(CRE)的分布和耐药表型,为合理用药提供依据。方法 通过布鲁克质谱仪和Vitek Compact对2019年1月-2021年11月期间分离的所有肠杆菌目细菌进行鉴定和药敏试验。临床资料分析采用回顾性方法。结果 从2019年1月到2021年11月,共分离出169株CRE,检出率为1.64%(169/10274)。在这些CRE菌株中,大肠埃希菌(CR-ECO)、肺炎克雷伯菌(CR-KPN)和阴沟肠杆菌分别占62.72%(106/169)、20.71%(35/169)和10.65%(18/169),主要分离自尿液(68株)、痰液(35株)和血液(24株)。CRE分离的主要科室是ICU(32株)、泌尿外科(24株)和肾内科(19株)。药敏结果显示,除了对替加环素都敏感外,这169株CRE对头孢类、碳青酶烯类、喹诺酮类和氨基糖苷类抗菌药物呈现不同程度的耐药。结论 该医院CRE检出率低于全国平均水平,但呈现多重耐药。有必要加强对耐碳青霉烯类肠杆菌目细菌的监测,预防CRE菌株的流行传播和暴发。     

某院临床样本中耐碳青霉烯肠杆菌目菌株的流行病学分析

目的 分析某院临床样本中耐碳青霉烯肠杆菌目（carbapenem-resistant Enterobacteriaceae, CRE）菌株的检出率、对抗菌药物的体外敏感性和碳青霉烯酶型别,为CRE相关感染的防控和治疗提供依据。方法 按照细菌学检验操作规程进行临床样本检测,对分离菌株进行菌种鉴定和体外药敏试验。对CRE菌株采用3-氨基苯硼酸联合乙二胺四乙酸碳青霉烯酶抑制剂增强试验检测的碳青霉烯酶型别。结果 2021年该院从157 196份临床样本中分离到CRE菌株2 215株,检出率为1.4%(2 215/157 196)。1 134株CRE非重复株分离于903例患者,主要样本来源为呼吸道样本（494/1 134,43.6%）、分泌物（191/1 134,16.8%）和血液（173/1 134,15.3%）,从同一患者的二个、三个和四个部位的样本中分离出相同CRE菌株的病例分别占12.5%、4.9%和1.1%。CRE最常见菌种是肺炎克雷伯菌（883/1 134,77.9%）,其次是阴沟肠杆菌复合群（107/1 134,9.4%）和大肠埃希菌（96/1 134,8.5%）。不同菌种对多黏菌...     

基于NG-Test? CARBA 5的快速检测方法在碳青霉烯耐药肠杆菌目细菌血流感染中的应用

目的 比较快速检测方法(简称快速法)与传统检测方法(简称传统法)对血培养阳性瓶的病原体鉴定、药敏试验和碳青霉烯酶型检测的一致性与准确性。方法 收集2022年3月–2022年5月血流感染标本中涂片报告结果为“革兰阴性杆菌”的血培养阳性标本51份。采用快速法对阳性血培养标本进行快速药敏试验(rapid antibiotic susceptibility test,RAST)和鉴定,根据RAST判读标准,利用NG-Test^?CARBA 5试剂盒对亚胺培南耐药菌株进行酶型快速检测,结果采用PCR确认。同时采用传统法对血培养阳性标本纯培养后的菌落进行鉴定、VITEK 2 Compact药敏分析和酶型检测。结果 细菌鉴定中,两种方法鉴定大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌、铜绿假单胞菌和鲍曼不动杆菌的一致率均为100%。药敏试验中,两种方法的符合率较高,亚胺培南符合率为100%。碳青霉烯酶型鉴定中,传统法检测出18株产丝氨酸酶与3株产金属β-内酰胺酶的肠杆菌目细菌。快速法采用试剂盒检测出18株产KPC酶、2株产NDM酶以及1株产IMP酶的血培养标本,与PCR相比,快速法检测酶型的敏感度和...     

纸片协同试验用于肠杆菌科细菌碳青霉烯酶检测的价值

目的 评估纸片协同试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌(CPE)的应用价值.方法 收集2015年1月至2018年12月瑞安市人民医院75株可疑产碳青霉烯酶非重复肠杆菌科细菌和10株非CPE.通过使用美罗培南(MEM)联合多种抑制剂[包括苯基硼酸(PBA)、氯唑西林、乙二胺四乙酸钠(EDTA)和替莫西林]的纸片扩散法等试验检...     

胶体金免疫层析法快速检测血培养肠杆菌目细菌碳青霉烯酶的对比研究

目的 评估胶体金免疫层析法快速检测血培养肠杆菌目细菌碳青霉烯酶。方法 收集西安交通大学第二附属医院血培养79株肠杆菌目细菌,其中碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌57株和碳青霉烯类敏感肠杆菌目细菌22株,按照NG-Test CARBA 5试剂盒说明书检测待测菌株五种主要碳青霉烯酶[klebsiella pneumoniae carbapenemase(KPC)、new delhi metallo-β-lactamase(NDM)、verona integron-encoded metallo-β-lactamase(VIM)、imipenemase metallo-β-lactamase(IMP)、oxacillinase48(OXA)-48]。碳青霉烯酶基因经PCR测序确认。结果 57株血培养碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌,NG-Test Carba 5在15 min内检测到KPC、NDM、IMP、KPC+NDM和NDM+IMP,其敏感度和特异度分别为100%和100%。金山川碳青霉烯酶耐药检测试剂检测到KPC、NDM、IMP、KPC+NDM和NDM+IMP的敏感度和特异度分别为94.74%和1...     

MALDI-TOF MS检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的应用价值

目的 评价基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)方法快速检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的价值.方法 以34株产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌及50株碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌为研究对象,美罗培南与细菌37℃孵育2h后,上清液进行MALDI-TOF MS检测.结果 碳青霉烯类敏感肠杆菌科细菌的质谱峰有3个,质荷比(m/z)依次为384、406、428;而产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌由于可以水解美罗培南,其质谱峰有6个,m/z依次为358、380、402、424、446、468,通过质谱峰的变化可以鉴定产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌,MALDI-TOF MS法与测序法结果高度一致(P=1.000).结论 MALDI-TOF MS可以快速、准确检测产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌,指导临床合理使用抗生素.     

mCIM、eCIM对碳青霉烯酶检测能力评估及CRE耐药特点分析

目的:评估碳青霉烯酶失活试验(modified carbapenem inactivation method,mCIM)、EDTA碳青霉烯酶失活试验(EDTAcarbapenem inactivation method,eCIM)及改良Hodge试验对肠杆菌科细菌不同基因型碳青霉烯酶的检测能力,分析碳青霉烯类耐药的肠杆菌科细菌(carbapenem-resistant Enterobacteriaceae,CRE)对临床常用药物最低抑菌浓度(minimum inhibitory concentration,MIC),便于临床合理选择用药。方法:收集华北理工大学附属医院2018年6月至12月临床标本中分离的CRE菌株40株,经VITEK 2 Compact全自动细菌鉴定/药敏系统进行鉴定及药敏试验,E-test法检测亚胺培南、美罗培南、替加环素、阿米卡星、左氧氟沙星、复方新诺明对CRE的MIC,微量肉汤稀释法检测多粘菌素的MIC。用mCIM、eCIM和改良Hodge试验检测CRE菌株产碳青霉烯酶的情况,用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测碳青...     

A类碳青霉烯酶的研究进展

碳青霉烯类（如亚胺培南和美罗培南）最常用于产ESBL和,或去阻遏AmpC肠杆菌所致严重感染的治疗,但具有碳青霉烯类水解活性的A类酶的出现,使抗感染治疗步入困境。依据系统发生关系,A类碳青霉烯酶分为包括GES、KPC、SME、IMI／NMC—A、SHV-38和SFC-16个不同的群。除KPC、GES和IMI-2的编码基因位于可移动元件外,其他均位于染色体。这类酶水解青霉素类、早期的头孢菌素类、单酰胺类、以及亚胺培南和美罗培南。依据Bush—J-M分类系统,这些酶分为4个不同的表型亚群,即2br,2be,2e和2fo与其他A类β-内酰胺酶一样,A类碳青霉烯酶可被克拉维酸和他唑巴坦抑制。     

苏州大学附属儿童医院碳青霉烯类耐药肠杆菌目细菌流行特征及耐药基因分析

目的 了解苏州大学附属儿童医院碳青霉烯类耐药的肠杆菌目细菌(CRE)的临床分布及耐药性特点,为院内感染控制及临床合理使用抗生素提供理论依据。方法 统计分析2018～2020年苏州大学附属儿童医院感染性标本中分离得到的CRE临床分布特点及耐药性。聚合酶链式反应法分析碳青霉烯酶基因(blaNDM、blaKPC、blaIMP、blaVIM及blaOXA-48)。结果 近3年CRE检出率为9.59%,以大肠埃希菌(CR-ECO)[100株(54.94%)]及肺炎克雷伯菌(CR-KPN)[71株(39.01%)]为主,主要分离于尿液及痰液。CRE对氨基糖苷类以外的多种抗生素耐药率均高于80%。患者主要为≤1岁的儿童。58.27%的CRE检出碳青霉烯酶基因,以NDM[42株(59.15%)]型为主,VIM型[28株(39.43%)]次之。NDM以NDM-5型[25株(59.52%)]为主,NDM-2型[15株(35.71%)]次之。CR-ECO以blaNDM[20株(80.00%)]为主,blaKPC[6株(24.00%)]次之,而CR-KPN以blaVIM [26株(55.32%)]为主,blaNDM[21株(44.68%)]次之。并在多株CRE中同时检测到多个碳青霉烯酶。结论 苏州大学附属儿童医院CRE分离率较高,尤其是大肠埃希菌,需要加强医院感染防控措施,合理使用各种抗菌药物。     

活体长爪沙鼠幽门螺杆菌检测方法的建立

目的应用巢式PCR方法通过胃液活体检测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染,从而建立可以持续监测长爪沙鼠幽门螺杆菌感染的检测技术。方法体外培养幽门螺杆菌并接种至长爪沙鼠体内,在感染后第10周使用普通PCR方法检测长爪沙鼠胃液,使用巢式PCR方法对长爪沙鼠胃液、胃组织、十二指肠内容物、结肠粪便进行检测;同时还利用快速尿素酶试验和血清ELISA方法等对比分析巢式PCR方法的准确性,上述PCR产物均经过测序验证。结果普通PCR方法检测胃液、巢式PCR方法检测胃液、胃组织、十二指肠内容物,结肠粪便以及快速尿素酶试验、血清ELISA检测方法检验结果阳性率分别为30%、100%、100%、90%、10%、100%和0%。比较不同检测方法的检测结果发现,胃液巢式PCR、胃组织巢式PCR和快速尿素酶试验均有100%的检测率,普通PCR检测胃液的方法、结肠粪便巢式PCR方法及血清学ELISA检测方法检测率均比较低。结论胃液巢式PCR检测方法由于其特异性、准确性及灵敏性较高等特点可以用于长爪沙鼠幽门螺杆菌的长期检测,特别是对于预防和治疗幽门螺杆菌感染的实验具有重要价值。     

恒温扩增法检测肺炎支原体RNA临床应用研究

目的 研究恒温扩增法检测肺炎支原体(MP)RNA对临床诊断儿科患者MP感染的应用价值。 方法 收集2016年10月-2017年7月安徽医科大学第二附属医院临床住院急性呼吸系统感染178例患儿咽拭子/痰标本及血清标本,其中咽拭子/痰液标本同时检测MP-DNA及MP-RNA,血清标本检测MP-Ab。根据患儿病程分为A组(病程 ≤ 10 d)和B组(病程>10 d),分别以MP-Ab、MP-DNA检测为参考比较恒温扩增法检测MP-RNA在各组间的阳性率差异,并评估其灵敏度、特异度、阳性预测值及阴性预测值。应用SPSS 21.0统计软件对数据进行统计分析。 结果 MP-DNA、MP-Ab与MP-RNA总体阳性率差异无统计学意义。A组中,MP-RNA阳性率(37.8%)高于MP-Ab阳性率(22.9%),B组中MP-RNA阳性率(10.6%)低于MP-Ab阳性率(23.1%),差异有统计学意义(P=0.003,P=0.001)。与MP-DNA结果相比,MP-RNA阳性率差异无统计学意义。分别以MP-Ab、MP-DNA为参考方法评估MP-RNA的总体灵敏度为0.63/0.79、特异度为0.91/0.96、阳性预测值为0.67/0.85、阴性预测值为0.89/0.94。其中A组的灵敏度、特异度分别为0.94/0.88、0.79/0.90。 结论 恒温扩增法检测MP-RNA具有较好的临床诊断效能,可应用于MP感染的早期临床诊断。      

实验树鼩空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR方法的建立

目的为实验树鼩微生物检测提供一种快速、简便、灵敏,并且特异性强的空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺菌多重荧光定量PCR检测方法。方法根据空肠弯曲菌的Hip O区域、沙门菌的in V区域和志贺菌的ipa H区域设计特异性引物和探针,并进行单病原定量PCR检测验证;后分析多重PCR的灵敏度和特异性,并使用该多重PCR方法检测实验树鼩样品。结果本研究的PCR要素可用于空肠弯曲菌、沙门氏菌及志贺菌等单种菌的实时荧光定量PCR扩增。多重定量PCR扩增出了空肠弯曲菌、沙门氏菌和志贺氏菌标准扩增曲线;该方法的灵敏度为1×103ng/μL;特异性检测未从其他参考菌株中检出阳性。结论该多重定量PCR方法在实验树鼩微生物检测中具有很好的应用和推广前景。     

高效液相色谱法测定白狼毒中月腺大戟素A的含量

目的 建立白狼毒药材中月腺大戟素A的含量测定方法.方法 采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent Zorbax SB-C18 (4.6 mm× 150 mm,5 μm),流动相为乙腈∶0.1％甲酸水溶液=55∶45,等度洗脱,流速1.0mL·min-1,检测波长为290 nm,柱温25℃,进样量20 μ上L,运行时间为20 min.结果 月腺大戟素A与周围干扰峰达到基线分离,线性范围为4.545～227.3 μg·mL-1,相关系数r=0.999 9;日内、日间精密度均小于2％;平均回收率为(99.1±3.4)％(n=6),狼毒大戟2个批次药材及月腺大戟对照药材中月腺大戟素A含量分别为(56.73±1.09)、(18.98±2.11)及(235.2±2.4) μg/g(n=6).结论 该法简便快捷、测定结果准确,重复性好,可用于白狼毒药材中月腺大戟素A的含量测定.     

分子生物学方法在结核分枝杆菌及其耐药性检测中的价值

目的探讨分子生物学方法在结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）及其耐药性检测中的价值。方法以MTB标准菌株H37Rν作为对照,以单耐药及耐多药的MTB行梯度浓度稀释后作为检测样本,分析Xpert MTB/RIF法、基因芯片法、改良罗氏培养法、比例法检测MTB的准确性、最低检出限及检测周期等。结果改良罗氏培养法和Xpert MTB/RIF法检测MTB下限均为3×102 cfu/mL,基因芯片法检出下限为3×104 cfu/mL;Xpert MTB/RIF法在3×102 cfu/mL时检测利福平耐药性存在假阳性现象,无法检测异烟肼的耐药性;Xpert MTB/RIF法检测周期≤2 h,而基因芯片法≤8 h,比例法和改良罗氏培养法检测周期在5~8周。结论在MTB及其耐药性检测中分子生物学方法的检测周期优势明显,在最低检出限和准确性方面各有优势,因此,临床诊断中综合考虑病人的经济水平和病情危重程度,选择合适的检测方法。     

维药刺山柑果实的炮制方法研究

目的 研究刺山柑果实炮制方法并对其工艺进行优化。方法 分别建立UV和GC测定刺山柑果实中有效部位（总酚酸和总硫苷）及刺激性成分量的方法,并以其为指标筛选蒸、煮、烘及炒4种刺山柑果实的炮制方法,通过单因素试验和正交试验,选用渴求函数处理数据,对该炮制工艺进行优化。结果 刺山柑果实的最优炮制方法为炒法,最佳工艺为选用过40～50目筛的刺山柑果实粉末,炒制过程中药材温度为80 ℃,炒制时间为15 min。结论 炮制后的刺山柑果实在保证有效成分量的同时降低了其刺激性。