新加肾元方调控RIPK1/RIPK3/MLKL通路对高糖诱导的糖尿病肾病肾小球足细胞损伤的影响

目的:探讨新加肾元方对高糖诱导的糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)大鼠肾小球足细胞损伤及RIPK1/RIPK3/MLKL通路的影响,并分析其可能的作用机制。方法:选取70只SD大鼠,随机取12只为正常对照组,另58只采用高糖高脂饲料喂养联合腹腔注射STZ法建立糖尿病肾病大鼠模型成功48只,随机分为模型组,阳性对照组,新加肾元方低、高剂量组,各12只。阳性对照组厄贝沙坦水溶液0.017g/kg灌胃,新加肾元方低、高剂量组0.72g/kg、1.44g/kg灌胃,正常对照组、模型组等体积生理盐水灌胃。检测肾功能：尿素氮、血清肌酐、蛋白尿;HE染色观察肾组织病理形态;透射电镜观察肾小球足细胞超微结构变化;TUNEL染色检测肾组织细胞凋亡情况;ELISA检测肾组织TNF-α、IL-6水平;WB检测肾组织RIPK1/RIPK3/MLKL通路相关蛋白表达;对新加肾元方中所含活性成分进行收集与筛选,并对“有效成分-靶点”拓扑分析所得度值较高的有效成分进行分子对接。结果:模型组大鼠蛋白尿、血清肌酐、尿素氮水平、凋亡指数、TNF-α、IL-6水平、RIPK1、RIPK3、MLK...     

苗药四大血对佐剂性关节炎大鼠抗炎作用研究

目的研究苗药"四大血"对佐剂性关节炎大鼠的抗炎作用,并探讨其作用机制。方法 60只大鼠随机分成空白组、模型对照组、"四大血"高、中、低剂量组和阳性对照组,每组10只。除空白组外,其余各组采用足趾部皮下注射弗氏完全佐剂,建立佐剂性关节炎大鼠(AA)动物模型。观察各组大鼠右足跖外观变化、肿胀程度、滑膜组织病理特征;Elisa法检测大鼠膝关节滑膜组织炎性细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平。结果给药后,"四大血"中、高剂量组及阳性对照组足跖肿胀程度明显小于模型对照组(P0.05);病理切片显示,"四大血"中、高剂量组较模型对照组大鼠滑膜组织充血减轻,炎性细胞浸润减少。酶联免疫吸附试验(Elisa)检测显示与模型对照组比较,"四大血"能下调IL-1β和TNF-α的表达量(P0.05,P0.01)。结论 "四大血"有抑制AA大鼠滑膜组织炎症的作用,减少滑膜组织炎性细胞浸润及滑膜上皮细胞增生,其作用机制可能与下调炎症介质IL-1β、TNF-α的表达有关。     

苗药验方四大血对人类风湿性关节炎成纤维样滑膜细胞凋亡和焦亡的影响

目的 探讨苗药验方四大血（SX）对人类风湿性关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLSs）凋亡和焦亡的影响。方法 数据库检索RA及凋亡、焦亡相关靶蛋白;韦恩软件分析获得与RA相关凋亡及焦亡蛋白;RA-凋亡-焦亡靶蛋白互作（PPI）网络构建以获取RA中凋亡和焦亡重要靶蛋白;Autodock vina软件进行分子对接验证SX主要活性成分与凋亡和焦亡相关蛋白的结合能力,并通过PyMoL软件进行可视化。人源第2代RA-FLSs MH7A细胞检测SX对MH7A细胞抑制率后分为空白对照组、雷公藤多甘片阳性对照组（TGT组,5 mg/L）及 5、10、20、40 mg/L SX 组,采用 Wound- healing 实验、Transwell 法、ELISA 法及Western blot法分别检测MH7A细胞的迁移和侵袭能力、凋亡和焦亡相关蛋白。结果 获得RA相关凋亡靶蛋白9个、焦亡靶蛋白15个、RA-凋亡-焦亡重叠靶蛋白4个,SX主要活性成分与TNF-α、Fas、Bax等靶蛋白均具有较高亲和力;与空白组相比,给药处理24、48、72 h,随着SX浓度增加,对MH7A细胞抑制率增加（P<0.05）,药物作用6、12、24 h,同一时间点内MH7A细胞划痕修复率随SX浓度增加而减少（P<0.05）;药物作用24 h,20、40 mg/L SX组MH7A细胞侵袭个数减少（P<0.05）;20、40 mg/L SX组和TGT组TNF-α、IL-1β、IL-18的表达水平均下降（P<0.05）;20、40 mg/L SX组Bax/Bcl-2比值均增加（P<0.05）;5、40 mg/L SX组Caspase-1表达量均减少（P<0.05）;20、40 mg/L SX组Fas和FasL表达量均增加（P<0.05）。结论 SX可诱导MH7A细胞凋亡、抑制其焦亡,减缓炎症反应,其作用机制可能与下调TNF-α、IL-1β、IL-18细胞因子水平,上调Bax、Fas、FasL,抑制Bcl-2和Caspase-1蛋白表达有关。     

川陈皮素调节RIP1/RIP3/MLKL信号通路对慢性心力衰竭大鼠心肌坏死性凋亡的影响

目的 探究川陈皮素(Nob)调节受体相互作用蛋白激酶1/受体相互作用蛋白激酶3/混合谱系激酶样结构域蛋白(RIP1/RIP3/MLKL)信号通路对慢性心力衰竭(CHF)大鼠心肌坏死性凋亡的影响及作用机制。方法 于2022年9月—2023年3月在南方医科大学中心实验室进行实验。建立大鼠CHF模型,将造模成功的75只大鼠按随机数字表法分为模型组(CHF组)、川陈皮素低剂量组(Nob-L组,7.5 mg·kg^-1·d^-1 Nob)、川陈皮素中剂量组(Nob-M组,15 mg·kg^-1·d^-1 Nob)、川陈皮素高剂量组(Nob-H组,30 mg·kg^-1·d^-1 Nob)和通路抑制剂Necrostatin-1组(Nec-1组,2.45 mg·kg^-1·d^-1 Nec-1),每组15只。另取15只大鼠作为假手术组(Sham组)只打开胸腔不进行结扎。干预28 d后,采用超声心动图检测左心室功能;酶联免疫吸附试验(ELISA...     

健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管新生的影响

目的观察健脾化湿通络方对佐剂关节炎大鼠滑膜血管PI3K/AKT/m TOR信号通路及缺氧诱导因子(HIF-1α)、血管内皮细胞生长因子A(VEGF-A)、滑膜微血管密度(MVD)、内皮抑素(ES)的影响。方法 50只大鼠随机均分成5组:正常对照组,模型对照组,甲氨蝶呤组,雷公藤多苷片组,健脾化湿通络方组。除正常对照组外,其余各组均采用弗氏完全佐剂建立佐剂关节炎大鼠模型。造模成功后,各治疗组给予相应药物灌胃,连续30 d。采用免疫组化法检测滑膜血管MVD表达,酶联免疫吸附法检测血清白细胞介素-6(IL-6)、IL-10、HIF-1α、VEGF-A表达,免疫印迹法检测滑膜血管PI3K、AKT、p-AKT、m TOR、ES蛋白表达。结果与正常对照组比较,模型对照组大鼠足跖肿胀度、关节炎指数升高,滑膜组织MVD计数升高,血清IL-6、VEGF、HIF-1α和滑膜血管PI3K、AKT、p-AKT、m TOR、ES表达显著升高,IL-10降低(P0.05或P0.01)。与模型对照组比较,健脾化湿通络方组MVD计数和血清VEGF-A、HIF-1α、IL-6表达降低,滑膜PI3K、p-AKT、m TOR、ES降低,血清IL-10升高。结论健脾化湿通络方通过调节PI3K/AKT/m TOR通路、HIF-1α及ES表达改善滑膜血管新生。     

木犀草素抑制HIF-1α/NLRP3信号通路对脑卒中大鼠认知障碍和神经细胞凋亡的影响

目的 探究木犀草素（Lut）对脑卒中大鼠认知障碍和神经细胞凋亡的影响及其机制。方法 将健康雄性SD大鼠随机分为Sham组、中动脉闭塞（MCAO）组、Lut组、低氧诱导因子-1α(HIF-1α)拮抗剂（YC-1）组、Lut+HIF-1α激动剂（AG1）组,每组20只。除Sham组外,其余各组大鼠均建立MCAO模型。Sham组大鼠正常喂养,给予等量生理盐水;MCAO组大鼠灌胃给予等量体积含5%二甲基亚砜（DMSO）的生理盐水;Lut组大鼠灌胃给予Lut(40 mg/kg);YC-1组大鼠腹膜内给予YC-1(5 mg/kg);Lut+AG1组大鼠灌胃给予Lut(40 mg/kg),腹膜内给予AG1(10 mg/kg)。再灌注24 h后记录上述各组大鼠神经功能缺损评分;核磁共振成像测试用于确定脑梗死体积;苏木精-伊红（HE）和原位缺口末端标记法（TUNEL）染色用于观察脑组织病理变化和神经细胞凋亡;莫里斯水迷宫测试用于评估大鼠的空间学习和记忆能力;相应的试剂盒测定超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平;Western bl...     

Kv1.5蛋白基于PI3K/Akt信号通路影响内毒素致大鼠血管内皮细胞损伤

目的 研究Kv1.5蛋白对内毒素致大鼠血管内皮细胞损伤的机制.方法 雄性SD大鼠60只,随机分为Control组、LPS组、DPO-1(Kv1.5特异性通道阻滞剂)低、中、高剂量组,每组12只.Control组尾静脉注射生理盐水,LPS组尾静脉注射LPS 5 mg/kg,DPO-1低、中、高剂量组静脉注射LPS 5 m...     

雷公藤甲素抑制类风湿关节炎患者的成纤维样滑膜细胞的炎症和迁移： 基于circRNA 0003353/JAK2/STAT3信号通路

目的 探讨雷公藤甲素（TPL）通过调控环状非编码RNA（circRNA）0003353对类风湿关节炎（RA）成纤维样滑膜细胞（FLS）炎症和细胞迁移的作用机制。方法 纳入我院风湿科住院RA患者50例和正常人30例,收集外周血单个核细胞（PBMCs）及血清,检测circRNA 0003353的表达、免疫炎症指标[类风湿因子（RF）、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、anti-CCP、IgA、IgG、IgM、C3、C4]和计算DAS28评分;采用最佳浓度10 ng/mL TPL处理RA-FLS,并转染circRNA 0003353过表达质粒。采用CCK-8法和Transwell实验检测RA-FLS细胞活力、迁移能力;ELISA法检测细胞因子IL-4、IL-6、IL-17;RT-qPCR法检测circRNA 0003353、Western blot检测p-JAK2、p-STAT3、JAK2、STAT3蛋白。结果 circRNA 0003353在RA患者PBMCs中表达升高,在协助诊断RA方面有良好效能（AUC=90.5%,P<0.001,95% CI：0.83-0.98）,circRNA 0003353与ESR、RF、DAS28呈正相关（P<0.05）;TPL呈时间依赖性降低circRNA 0003353表达,抑制RA-FLS的细胞活力和迁移能力,降低促炎细胞因子IL-6、IL-17,升高抑炎细胞因子IL-4（P<0.01）;TNF-α刺激后,RA-FLS中p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高,而TPL干预后降低（P<0.01）;在TPL干预基础上,转染circRNA 0003353过表达质粒,RA-FLS中circRNA 0003353表达升高,细胞活力和迁移能力升高,IL-4降低,IL-6、IL-17升高,p-JAK2/JAK2、p-STAT3/STAT3比值升高（P<0.01）。结论 circRNA 0003353在RA-PBMCs和RA-FLS中表达均升高,TPL可通过circRNA 0003353,调控JAK2/STAT3信号通路,抑制RA-FLS炎症和细胞迁移。     

苗药痛风汤方剂对痛风性关节炎大鼠炎症反应及NALP3炎性体信号的影响

目的 探讨苗药痛风汤方剂对痛风性关节炎（GA）大鼠炎症反应及NALP3炎性体信号的影响。方法 40只健康雄性SD大鼠随机分为5组,即空白组、模型组、双氯芬酸钠肠溶片组、苗药痛风汤方剂低、高剂量组,每组8只。采用踝关节腔内一次性注射尿酸钠构建急性GA大鼠模型,造模成功后,空白组、模型组给予生理盐水,双氯芬酸钠肠溶片组及苗药痛风汤方剂低、高剂量组分别按相应剂量给予双氧芬酸钠肠溶片及苗药痛风汤方剂连续灌胃5 d,处死大鼠,取膝关节滑膜组织。采用HE染色观察滑膜组织病理变化;ELISA检测血清TNF-α、IL-1β、IL-8、β-gal、NAG、SOD、MDA水平;qRT-PCR检测滑膜组织NALP3、Caspase-1、ASC mRNA表达;Western Blot检测滑膜组织NALP3、Caspase-1、pro-IL-1β蛋白表达。结果 与空白组相比,模型组滑膜组织衬里下层大量炎性细胞浸润,关节肿胀指数明显增加,TNF-α、IL-1β、IL-8、β-gal、NAG、MDA、NALP3、Caspase-1、ASC、pro-IL-1β水平明显升高,SOD水平明显降低（均P＜0.05）;与模型组比较,苗药痛风汤方剂高剂量组TNF-α、IL-1β、IL-8、β-gal、NAG、MDA、NALP3、Caspase-1、ASC、pro-IL-1β水平明显降低,SOD水平明显升高（均P＜0.05）。结论 苗药痛风汤方剂可减轻GA大鼠组织炎症程度,下调NALP3及炎性细胞因子的表达,可能有抑制急性痛风性关节炎发作的重要作用。     

中药更年春方通过ERβ及PI3K/Akt信号通路对Aβ25-35致大鼠胎鼠海马神经元损伤的保护作用

 目的 观察中药更年春方（Gengnianchun formula，GNC）通过雌激素受体β（estrogen receptor β，ERβ）及PI3K/Akt信号通路对β淀粉样蛋白25-35片段（Aβ_25-35）致大鼠胎鼠海马神经元细胞损伤的保护作用。方法 采用Aβ_25-35作用人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞系，通过CCK-8法检测细胞活力摸索Aβ_25-35及GNC含药血清（GNC serum，GS）处理神经细胞的合适浓度及时间。采用Aβ_25-35作用大鼠胎鼠海马神经元构建阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease，AD）的体外模型，分为无血清对照组、模型组、GS组、空白血清对照（normal saline serum，NS）组和PHTPP（选择性ERβ拮抗剂）组。利用正置显微镜观察细胞形态、CCK-8法检测细胞活力及LDH释放法检测细胞损伤。利用Hoest33258/PI双重荧光染色实验、qRT-PCR及Western blot实验检测细胞凋亡相关指标。结果 与无血清对照组相比，模型组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触出现明显的收缩崩解和细胞碎片、细胞活力下降、LDH释放升高。与模型组和NS组相比，GS组大鼠胎鼠海马神经元胞体及突触的收缩崩解和细胞碎片减少、细胞活力上升、LDH释放减少、PI阳性神经元细胞数目下降、神经元bax/bcl-2 mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase 3、cyt-c蛋白表达水平下降、p-Akt蛋白表达水平上升。与GS组相比，PHTPP组大鼠胎鼠海马神经元bax/bcl-2 mRNA、cyt-c mRNA水平及bax/bcl-2、cleaved-caspase 3、cyt-c蛋白表达水平上升、p-Akt蛋白表达水平下降。结论 GNC对Aβ_25-35致大鼠胎鼠海马神经元的损伤具有保护作用，此作用是通过ERβ及PI3K/Akt信号通路介导的。