超声微泡介导沉默T 淋巴细胞Itch 基因对胃癌MFC 细胞免疫杀伤作用的实验研究

目的 利用超声介导微泡破裂技术（UTMD）沉默T 淋巴细胞Itch 基因表达,观察转染T 细胞 对胃癌MFC 细胞的免疫杀伤效率。方法 免疫磁珠分离T 淋巴细胞,构建靶向Itch 基因的shRNA 表达质 粒,超声微泡介导转染48 h 后,流式细胞仪分析T 细胞转染成功率,Western blot 测定T 细胞Itch 蛋白表达。转 染24 h 后,流式细胞仪检测T 淋巴细胞活化早期标志CD69 表达。转染72 h 后,观察对比单纯T 淋巴细胞、 阴性对照T 淋巴细胞及转染T 淋巴细胞与小鼠胃癌MFC 细胞共培养时肿瘤杀伤率。结果 利用UTMD 技 术介导shRNA 转染效率达到51.9%,Itch 蛋白表达能被有效抑制。转染24 h 后,转染组T 淋巴细胞早期活化 标志CD69 表达较其他组更高。转染72 h 后,与阴性对照组和空白组相比,在不同的效靶比水平（10 ∶ 1、 20 ∶ 1、40 ∶ 1）,转染T 淋巴细胞杀瘤活性均增强。结论 利用UTMD 技术介导shRNA 转染能有效沉默 Itch 基因表达,促进T 淋巴细胞免疫活性,增强T 淋巴细胞对胃癌MFC 细胞的免疫杀伤效率。     

慢病毒介导NIS和TPO基因转染肺癌细胞125I摄入及流出的研究

目的：研究NIS和TPO基因对肺癌细胞放射性碘摄取及流出时间的影响。方法：通过基因亚克隆建立携带NIS和TPO基因的慢病毒载体重组质粒,利用293T细胞包装获得慢病毒液,感染肺癌A549和H1299细胞,用125I观察肺癌细胞摄碘和碘流出时间变化。结果：转染NIS的A549和H1299细胞摄碘时间较原始细胞增加：A549和H1299细胞在含有125I的培养液中随着培养时间的增加,细胞摄碘的量增加,分别在培养30min、60min时细胞摄碘达高峰,A、B组与C组比较差异具有统计学意义（P<0.05）;共转染NIS/TPO的A549和H1299细胞碘流出时间延长：A组125I外流速度较B组减慢,两组间比较差异具有统计学意义（P<0.05）。结论：体外肺癌细胞转染NIS基因能明显增加细胞摄取碘能力,转染TPO基因有助于细胞内碘有机化,延长细胞内碘流出时间。     

分化型甲状腺癌细胞株FTC-133失分化现象与^131I辐射的关系

目的研究体外培养的分化型甲状腺癌细胞株FTC-133失分化现象与放射性碘（^131I）辐射的关系。方法体外培养的甲状腺癌细胞株FTC-133分为实验组（以经筛选不造成细胞增殖抑制剂量的Na^131I辐射细胞48h,长期传代培养）、对照组（不加入Na^131I,长期传代培养）和空白组（细胞冻存,实验时复苏）。测定各组细胞摄碘率;分别采用RT—PCR、Western blotting和放射免疫分析法（RIA）检测各组细胞甲状腺球蛋白（Tg）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、钠碘转运体（NIS）、促甲状腺激素受体（TSHR）mRNA和蛋白表达。结果细胞摄碘率为空白组〉对照组〉实验组,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．01）。与空白组比较,实验组和对照组细胞Tg、TPO、NIS、TSHR蛋白表达均明显下降,且以实验组下降尤为显著,组间比较差异均有统计学意义（P〈0．05）;三组Tg、TPO、NIS和TSHRmRNA与蛋白表达变化一致。结论分化型甲状腺癌细胞FTC-133长期体外培养自动经历失分化过程,^131I辐射促进这一过程的发展,可能与甲状腺特异蛋白表达下降有关。     

嵌合抗原受体修饰T细胞免疫治疗食管癌的实验研究

目的 观察嵌合抗原受体修饰T细胞(CAR-T)对人食管癌细胞EC109的体内外抗肿瘤作用。方法 以表皮生长因子受体Ⅲ型突变体(EGFRvⅢ)为分子靶点、EC109-EGFRvⅢ为靶细胞，将二代CAR表达框克隆入慢病毒表达载体中，制备慢病毒并转染人外周血T细胞，采用乳酸脱氢酶(LDH)活性及干扰素γ(IFN-γ)等方法检测体外抗肿瘤作用，通过NSG小鼠移植瘤模型观察体内抗肿瘤作用。结果 表达质粒pEGFRvⅢ/CAR经限制性内切酶片段分析、基因检测及NCBI/Blast同源性分析确认各功能单位核苷酸序列准确无误、基因片段连接正确，流式细胞术检测慢病毒转染后T细胞EGFRvⅢ/CAR表达率为82%。效应细胞(EGFRvⅢ/CAR-T)和靶细胞(EC109-EGFRvⅢ)混合培养，LDH细胞毒性检测结果显示靶细胞裂解死亡与效/靶比呈正相关(E∶T为5∶1、10∶1、20∶1、40∶1),IFN-γ在E∶T为5∶1时与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01)。NSG小鼠皮下移植模型提示EGFRvⅢ/CAR-T对移植瘤有肿瘤抑制作用。结论 体外和体内实验显示CAR-T细胞对EC109-E...     

中药夏枯草对甲状腺癌细胞NIS基因表达及摄碘率的影响

目的:探讨中药夏枯草对甲状腺癌细胞株K1钠/碘同向转运体(NIS)基因表达及摄碘率的影响,为夏枯草辅助放射性碘治疗甲状腺癌提供依据.方法:分别以不同浓度(0,20,50,100,150,200 g/L)的夏枯草处理体外培养的甲状腺癌细胞株(K1),48 h后利用半定量RT-PCR检测细胞NIS mRNA表达,γ-计数仪检测细胞摄碘能力.结果:夏枯草浓度在0～100 g/L范围内,细胞NIS基因表达及摄碘能力随夏枯草浓度的增加而增加(P<005).当夏枯草浓度达150～200 g/L时,增加后浓度与100 g/L浓度相比差别无统计学意义(P>0.05).结论:夏枯草可上调甲状腺癌K1细胞NIS基因表达,增强其摄碘率,而且这种作用在一定浓度范围内具有剂量依赖性.     

Egr-1启动子调控hNIS基因的重组质粒构建及转染细胞株的建立

目的构建早期生长反应基因-1（Egr-1）启动子调控人钠碘转运体（hNIS）基因的重组质粒并稳定转染人宫颈癌细胞株Hela,评价Egr-1启动子对hNIS蛋白功能的辐射诱导作用。方法以Egr-1／pMRl8T为模板PCR扩增Egr-1启动子序列,亚克隆至真核表达载体FL％-hNIS／pcDNA3,构成重组质粒Egr-1-hNIS／pcDNA3,酶切电泳鉴定,通过FuGENEHD转染入Hela细胞,G418筛选抗性克隆,获取单克隆Hela—Egr-1-hNIS。分别采用流式细胞仪、RT．PCR检测Hela-Egr-1-hNIS细胞系中NIS基因和NIS蛋白的表达。动态摄取碘一125实验观察Hela—Egr-1-hNIS细胞和前期研究所得细胞株Hela—NIS（＋）给予不同剂量的x线辐照前后的摄碘功能。未转染的Hela细胞作为阴性对照组。结果成功构建重组质粒Egr-1．hNIS／pcDNA3,转染Hela细胞后获得了稳定表达细胞系Hela—Egr--一hNIS,流式细胞仪测得NIS表达效率为11．2％;RT—PCR检测到Hela—Egr-1-hNIS有NISmRNA的转录,而对照组无NIS蛋白表达。动态摄碘实验提示Hela—Egr-1-hNIS细胞摄碘能力比阴性对照Hela细胞提高了13倍;辐照后摄碘能力增强,在0～6Gy范围内与辐射剂量成正相关（r=0．960,P〈0．05）;而Hela—NIS（＋）组辐照后摄碘功能下降,与辐射剂量无相关性（r=-0．770,P〉0．05）。结论成功构建Egr-1启动子调控的稳定表达hNIS蛋白的Hela-Egr-1-hNIS细胞系,该细胞系具有较强的摄碘功能及辐射诱导作用,有望在体内治疗中获得更好的治疗效果。     

人钠/碘转运体基因转染结肠癌SW480细胞介导放射性碘治疗的实验研究

目的：检测碘131（131I）对转染了人钠/碘转运体（hNIS）基因的人结肠癌细胞（SW480细胞）的杀伤作用。方法：将SW480细胞分为转染组、空白质粒转染组（空白质粒组）和空白对照组,行体外摄131I试验、高氯酸盐抑制实验,及AnnexinV-FITC/PI双染行流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果：转染组与空白对照组及空白质粒组比较,摄131I能力均增高8倍;高氯酸盐可以有效地抑制转染组的摄131I能力;AnnexinV-FITC/PI双染后流式细胞仪检测结果显示,转染组凋亡指数高于空白对照组和空白质粒组。结论：131I对转染hNIS-SW480细胞具有显著杀伤效果。     

H2S对Graves甲亢小鼠甲状腺功能与甲状腺滤泡上皮细胞损伤的保护作用及机制

目的 探讨气体信号分子硫化氢（H2S）对 Graves甲亢（GD）小鼠甲状腺功能的改善情况,及其对甲状腺滤泡上皮细胞损伤的保护作用。方法 45只BALB/c小鼠随机分为正常对照组、空载体病毒组和重组腺病毒组,每组15只。通过注射Ad-TSHR289重组腺病毒建立GD小鼠模型,GD造模成功的15只小鼠随机分为模型组、H2S组及甲疏咪唑组,每组5只。H2S组小鼠予以硫氢化钠（NaHS）溶液（56μmol/kg/d）腹腔注射,甲疏咪唑组小鼠予以甲疏咪唑溶液（3.9 mg/kg/d）腹腔注射,正常对照组和空载体病毒组小鼠予以等体积 0.9%Nacl 溶液腹腔注射,共干预 4 周。4周后,测定小鼠血清中促甲状腺激素受体抗体（TRAb）、甲状腺素（T4）和促甲状腺激素（TSH）水平,HE染色观察各组小鼠甲状腺组织的病理变化,免疫组织化学染色检测甲状腺组织增殖细胞核抗原（PCNA）与细胞周期蛋白D1（CyclinD1）表达,Western blot检测钠/碘转运体（NIS）、甲状腺过氧化物酶（TPO）、甲状腺球蛋白（Tg）表达水平。分离培养小鼠甲状腺滤泡上皮细胞,将细胞随机分为正常对照组、H2O 组、NaHS+H2O 组,正常对照组细胞不进行任何处理,H2O 组使用H2O 溶液处理甲状腺滤泡上皮细胞24 h,NaHS+H2O 组先用 NaHS 预处理甲状腺滤泡上皮细胞 30 min再用H2O 2溶液处理细胞。通过CCK-8法检测各组细胞活性,流式细胞术检测各组细胞凋亡情况。结果 与正常对照组比较,重组腺病毒组小鼠血清中TRAb和T4水平显著上升,TSH水平显著下降（均P＜0.05）。NaHS 溶液干预后,GD小鼠血清中TRAb和T4的水平显著下降,TSH水平显著升高（均P＜0.05）;甲状腺组织病变得到明显的改善,PCNA与CyclinD1阳性表达显著降低,NIS、TPO与Tg蛋白表达量显著下降（均P＜0.05）。与正常对照组比较,H2O 2组甲状腺滤泡上皮细胞活性在培养24、48、72 h显著下降,细胞凋亡率显著升高（均P＜0.05）;与H2O 2组比较,NaHS+H2O 细胞在培养48 h和72 h时,甲状腺滤泡上皮细胞活性显著升高,细胞凋亡率显著降低（均P＜0.05）。结论 气体信号分子 H2S 对GD小鼠的甲状腺功能减退具有一定的改善作用,机制可能与其抑制PCNA、CyclinD1及NIS、TPO、Tg蛋白表达有关,并对H2O 诱导的甲状腺滤泡上皮细胞损伤具有保护作用。     

多囊蛋白1基因对人宫颈癌HeLa细胞的抗凋亡作用

目的：研究多囊蛋白1（PC1）对人宫颈癌HeLa细胞凋亡的影响,为进一步阐明PC1对凋亡的作用提供依据。方法：采用PC1基因重组质粒pEGPF-PC1-5TMC和空白对照质粒pEGFP分别转染HeLa细胞,Western blotting法进行验证。采用MTT法分别检测转染组（转染PC1重组质粒）、空白对照组（转染空白对照质粒pEGFP）和正常对照组（正常HeLa细胞）转染后48和72 h时细胞增殖活性,采用TUNEL法检测转染组和空白对照组细胞凋亡率。结果：转染后48和72 h,与正常对照组比较,转染组细胞增殖活性差异无统计学意义（P>0.05）;与空白对照组比较,转染组细胞增殖活性明显升高（P<0.05）。转染组细胞凋亡率明显低于空白对照组（P<0.01）。结论：PC1基因对人宫颈癌HeLa细胞有抗凋亡作用。     

Cbl-b基因沉默增强T细胞对人喉鳞癌细胞Hep-2的免疫杀伤效果

目的研究泛素连接酶（Cbl-b）基因沉默对H9 人T淋巴细胞免疫杀伤人喉鳞癌细胞Hep-2 作用的影响和相关机制。方 法选择12例喉鳞癌患和12例健康对照者,用磁性细胞分离技术分离外周血CD4+T细胞应用RT-PCR法检测Cbl-b的表达水 平。同时,将人T淋巴细胞H9 接种培养于96 孔板,分为4 组：以脂质体转染法将Cbl-b-siRNA 重组序列转染人T淋巴细胞 H9,作为Cbl-b-siRNA组;Cbl-b-siRNA重组序列转染T细胞成功后,在其培养液中加入IL-2 中和抗体,作为anti-IL-2+Cbl-bsiRNA 组;以脂质体转染法将随机阴性对照序列转染的人T淋巴细胞H9 作为阴性组（NC组）;以不做任何处理人T淋巴细 胞H9 为空白组（BC组）。采用倒置荧光显微镜观察人T淋巴细胞H9 的转染效率、以实时荧光定量PCR法和蛋白免疫印迹 法检测各组人T 淋巴细胞H9 中Cbl-b mRNA和蛋白表达情况。以细胞计数试剂盒（CCK-8）检测各组人T 淋巴细胞H9 对 Hep-2细胞的杀伤作用;流式细胞仪检测各组人T淋巴细胞H9表面活化分子CD69、CD25阳性表达率;采用ELISA法检测T细 胞上清液中白介素-2（IL-2）、γ干扰素（INF-γ）水平。结果Cbl-b mRNA在喉鳞癌患者CD4+T细胞中表达升高,与健康对照差异 有显著性（P<0.05）。Cbl-b-siRNA组和阴性组的转染效率分别为（78.30±6.06）%、（77.25±6.38）%,转染效果良好;Cbl-b-siRNA 组人T淋巴细胞H9 的Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量与anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组无显著差异（P>0.05）,但显著低于空白组 和阴性组（P<0.05）;不同效靶比时,Cbl-b-siRNA组Hep-2 肿瘤细胞杀伤率均显著高于anti-IL-2+Cbl-b-siRNA组、阴性组和空 白组（P<0.05）。Cbl-b-siRNA 组人T淋巴细胞H9 表面活化分子CD69、CD25 阳性表达率均显著高于anti-IL-2+Cbl-b-siRNA 组、空白组和阴性组（P<0.05）;Cbl-b-siRNA 组人T 淋巴细胞H9 上清液中INF-γ、IL-2 水平均显著高于空白组和阴性组（P< 0.05）;空白组与阴性组人T淋巴细胞H9 的Cbl-b mRNA和蛋白相对表达量、肿瘤细胞杀伤率、表面活化分子CD69、CD25 阳 性表达率、上清液中IL-2、INF-γ水平比较差异均不显著（P>0.05）。结论应用siRNA技术沉默T细胞Cbl-b 基因可有效增强 人T淋巴细胞H9 对人喉鳞癌细胞株Hep-2 体外免疫杀伤作用,其机制可能与T细胞Cbl-b 基因沉默促进人T淋巴细胞H9 分 泌IL-2、加强T淋巴细胞激活有关。     

表达高亲和PD-1突变体和嵌合抗原受体的双效CBNK细胞的构建及其生物学特性评价

目的 开发一种共表达PD-L1高亲和受体PD-1（HAPD1）和嵌合抗原受体（CAR）的新型双效 CBNK（HAPD1-CAR-CBNK）细胞,进一步提高肿瘤免疫治疗的疗效。方法 首先构建可同时表达高亲和PD-1（HAPD1）的靶向CD19的CAR的双效慢病毒载体,并包装慢病毒感染从脐血中分离扩增的单个核细胞获得双效脐血CAR-NK细胞。检测分析感染效率、细胞扩增能力、表面标志物表达率;然后通过体外共培养检测细胞在不同效靶比条件下对靶细胞杀伤效率以及不同扩增时期细胞的杀伤效率。最后在免疫缺陷小鼠（24只）体内验证双效CBNK细胞在体内对靶细胞的杀伤能力。结果 HAPD1和CAR基因利用慢病毒载体可高效转导至CBNK细胞（[18.63±1.88）%],病毒感染对细胞扩增倍数有一定影响（10.97±2.77 vs 24.84±3.17,P<0.05）,但对细胞表面标志物表达没有显著影响（P?0.05）;双效NK细胞在效靶比为5:1和10:1时的靶细胞杀伤效力高于普通CAR-CBNK细胞（[ 68.38±8.08)% ,（79.11±7.42）% vs（49.65±13.60）%,（59.78±9.32）%,P<0.05）。病毒感染后第9~12天双效NK细胞具有最强靶细胞杀伤能力。体内实验进一步证实,双效NK细胞移植28 d后动物白细胞中肿瘤细胞比例低于普通CAR-CBNK细胞移植组（[ 19.21±3.07）% vs（29.08±3.15）%,P<0.05]。结论 本研究成功构建了一种共表达HAPD1和CAR双效CBNK细胞,并在体外和体内实验证实其高效的靶细胞杀伤能力,为肿瘤免疫细胞治疗提供了一个新的有效方案。     

人脐带间充质干细胞抑制前列腺癌转移的作用及机理研究

目的观察人脐带间充质干细胞(UMSCs)是否能抑制前列腺癌的生长和转移,并探讨其机制。方法 以组织贴壁法分离人UMSCs。UMSCs与LNCaP、PC-3前列腺癌细胞Transwell共培养12 h、24 h、48 h和72 h,检测前列腺癌细胞的增殖状态,计算共培养72 h时UMSCs对前列腺癌细胞增殖的抑制率。UMSCs与LNCaP、PC-3前列腺癌细胞Transwell共培养48 h,检测UMSCs对前列腺癌细胞侵袭力的抑制情况,计算抑制率。采用MILLIPLEX MILLIPLEX?_MAP液相芯片技术检测共培养72 h后培养上清液中基质金属蛋白酶(MMP)-2、MMP-9和基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1、TIMP-2的表达。结果与UMSCs共培养后,前列腺癌细胞的增殖受到了抑制。LNCaP增殖速度在共培养72 h时低于对照组（P<0.05）,细胞增殖抑制率为37.21%;PC-3增殖速度在共培养48 h和72 h时低于对照组（P<0.05）,72 h时细胞增殖抑制率为31.27%。Transwell侵袭实验结果提示共培养48 h后,前列腺癌细胞侵袭力受到抑制,侵袭力抑制率分别为48.35%（LNCaP）和46.91%（PC-3）。共培养72 h后,LNCaP和PC-3分泌的MMP-2、MMP-9较对照组减少（P<0.05）,TIMP-1、TIMP-2的表达较对照组增加（P<0.05）。结论UMSCs可通过分泌MMPs的拮抗剂TIMPs来抑制前列腺癌细胞的增殖和侵袭转移能力。     

靶向ROR1的嵌合抗原受体修饰T细胞的构建及对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用

目的探讨靶向Ⅰ型受体酪氨酸激酶样孤儿受体(ROR1)的嵌合抗原受体修饰的T细胞（chimeric antigen receptor T cell,CAR-T）治疗ROR1阳性肿瘤细胞的体外杀伤作用。方法设计并合成CAR基因,通过慢病毒载体质粒pWPXLd,构建靶向ROR1 的CAR-T核心质粒,采用BamHⅠ/EcoRⅠ双酶切鉴定,应用流式细胞术检测多种实体瘤癌细胞株表面ROR1的表达,并采用流式细胞术、乳酸脱氢酶(LDH)检测试验检测CAR-T对ROR1阳性肿瘤细胞的杀伤作用,ELISA检测试剂盒测定培养细胞上清中γ-干扰素(IFN-γ)含量。结果构建的CAR-T质粒双酶切鉴定有CAR基因插入,流式细胞术检测结果显示CAR-T感染效率约为47.23%。多种肿瘤细胞不同程度表达ROR1。流式细胞术、LDH检测试验结果提示CAR-T能特异性地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞。CAR-T针对ROR1阳性靶细胞能释放更多的IFN-γ（P<0.05）。结论成功构建靶向ROR1的CAR-T,并能特异地杀伤ROR1阳性肿瘤细胞,释放大量IFN-γ,为临床应用提供了实验基础。     

手术创伤动员血管内皮祖细胞入血与移植瘤生长的关系

目的 研究手术创伤动员荷瘤裸鼠血管内皮祖细胞（EPC）入血与实体瘤生长的关系。方法 将42只荷瘤裸鼠随机分为非手术1 d组、单纯麻醉组、手术创伤组（术后24 h、48 h、72 h、30 d组）及非手术30 d组,每组6只。单纯麻醉组24 h后取血及获取移植瘤组织,手术创伤组分别在术后24 h、48 h、72 h、30 d取血及获取移植瘤组织。流式细胞仪检测各组外周血EPC百分比;ELISA检测血清血管内皮生长因子(VEGF)水平;免疫组织化学法检测移植瘤组织VEGF表达及微血管密度（MVD）。结果 术后24 h、48 h、72 h组EPC百分比与非手术1 d组比较,差异均有统计学意义（P<0.05）;术后24 h组、48 h组、72 h组、单纯麻醉组VEGF水平与非手术1 d组比较,差异有统计学意义（P<0.05）;各组MVD差异无统计学意义（P>0.05）。Pearson相关性分析显示,血清VEGF水平与外周血EPC百分比呈正相关（r=0.695 6,P<0.01）,外周血EPC百分比与MVD无相关性（r=0.221 4,P>0.05）,血清VEGF水平与MVD也无相关性（r=0.224 9,P>0.05）。结论 手术创伤对移植瘤生长无明显促进作用。     

硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的 探讨硝呋齐特对甲状腺乳头状癌细胞BCPAP和TPC-1的增殖、迁移及侵袭的影响。方法 用不同浓度（0、1.25、2.5、5、10、20 μmol/L）硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞,采用MTT法和克隆形成实验观察硝呋齐特对细胞增殖的影响;采用Hoechst 33258染色及流式分选技术观察对细胞凋亡的影响;通过Western blot法检测硝呋齐特处理后BCPAP细胞凋亡相关蛋白及迁移侵袭相关蛋白的表达情况;采用Transwell小室观察细胞迁移和侵袭能力。结果 硝呋齐特0、1.25、2.5 μmol/L处理BCPAP细胞,0、1.25 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均未受到明显抑制（ P>0.05）;硝呋齐特5、10、20 μmol/L处理BCPAP细胞,10、20 μmol/L处理TPC-1细胞,24、48、72 h后细胞增殖力均受到明显抑制（ P<0.05）,且随浓度增加和时间延长其抑制作用逐渐增强;此外,2.5、5 μmol/L硝呋齐特对TPC-1细胞的增殖抑制作用分别从72 h和48 h起效（ P<0.05）。暴露于10 μmol/L硝呋齐特10 d后,BCPAP和TPC-1细胞的克隆形成均受到抑制（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理48 h后,BCPAP和TPC-1细胞均出现细胞核改变,凋亡小体出现;流式分析显示BCPAP及TPC-1凋亡细胞增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP细胞48 h,促凋亡蛋白CC-3、Bax的表达增加（ P<0.05）,而抗凋亡蛋白Bcl-2表达减少（ P<0.05）;促迁移侵袭相关蛋白基质金属蛋白酶（MMP）-2、MMP-9的表达减少（ P<0.05）,MMPs家族抑制剂——金属蛋白酶组织抑制剂（TIMP）-2表达增加（ P<0.05）。10 μmol/L硝呋齐特处理BCPAP和TPC-1细胞48 h,BCPAP细胞及TPC-1细胞迁移率与侵袭率均下降（ P<0.05）。结论 硝呋齐特于体外抑制人甲状腺癌细胞系BCPAP和TPC-1的增殖,通过上调CC-3和Bax蛋白的表达诱导细胞凋亡,通过降低MMP-2和MMP-9蛋白的表达阻断细胞的迁移与侵袭。     

HIF-1α siRNA对非小细胞肺癌A549细胞TIMP1、MMP1表达的影响

目的 探讨HIF-1α基因沉默对非小细胞肺癌(NSCLC) A549细胞基质金属蛋白酶1(matrix metalloproteinase 1,MMP1)、基质金属蛋白酶抑制剂1(matrix metalloproteinase inhibitor,TIMP1)表达的影响。 方法 将siRNA-HIF-1α质粒载体稳定转染至A549细胞中,于缺氧环境下培养。应用MMT法和Transwell试验分别检测转染细胞的增殖、迁移和侵袭能力。应用qRT-PCR和蛋白免疫印迹分别检测转染细胞内TIMP1、MMP1 mRNA和蛋白表达水平。 结果 与Control组相比,A549组HIF-1α mRNA和蛋白表达显著增加(均P<0.05)。与Blank组和si-NC组相比,si-HIF-1α组HIF-1α mRNA表达水平显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组在转染24、48和72 h后细胞增殖率均显著降低(均P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组A549细胞在转染24 h后的迁移和侵袭数量均显著降低(P<0.05)。与Blank组相比,si-HIF-1α组细胞内MMP1表达水平显著降低,而TIMP1表达水平显著增加(均P<0.05)。 结论 在缺氧状态下,HIF-1α siRNA靶向沉默HIF-1α在A549细胞内的表达,并可以通过下调MMP1表达和上调TIMP1的表达而抑制细胞的增殖、迁移和侵袭。      

胶原酶盘外溶核术中曲安奈德对糖尿病患者血糖影响的观察

目的观察胶原酶盘外溶核术中曲安奈德对糖尿病患者血糖的影响。方法将腰椎间盘突出症经骶裂孔硬膜囊前间隙和椎旁椎间孔行胶原酶盘外溶核术,单纯腰椎间盘突出症患者作为对照组(n=20)与合并糖尿病患者作为观察组(n=20),术中均注入曲安奈德,术前、术后24、48、72 h测定血糖值。结果两组患者组内比较术后24h血糖增高均有统计学意义 (P<0．01),术后48、72 h血糖与术前比较无统计学差异(P>0．05),两组间比较术后24、72 h差异有统计学意义(P<0．05),术后48h无统计学差异(P>0．05)。结论胶原酶盘外溶核术中糖尿病患者可以注入曲安奈德,但血糖必须控制在一定范围内。     

MiR200对肾癌细胞增殖的影响分析

目的：研究MiR200对肾癌细胞增殖的影响。方法整群选取2013年1月—2015年1月于齐齐哈尔医学院第三附属医院就诊的51例肾癌患者病理细胞和正常癌旁组织细胞，以及构建裸鼠肾癌模型，测量MiR-200在不同细胞中的表达量和肿瘤增殖情况。结果MiR-200在裸鼠的SN12-PM6和人的786-o 、A498表达中均低于正常组织的表达(P<0.05)，在48 h后能够抑制肾癌细胞增殖(P<0.05)，48~72 h抑制情况最为显著(P<0.05)。结论 MiR-200在肿瘤细胞中呈低表达水平，能够抑制肾癌细胞增殖并能够抑制裸鼠肾癌细胞生长。     

促酰化蛋白促进脂肪细胞分化过程中的克隆增殖

目的　观察促酰化蛋白 (ASP)对 3T3 L1前脂肪细胞的分化过程中克隆增殖的影响 ,以进一步探讨ASP诱导前脂肪细胞分化的可能机制。方法　采用3 H胸腺嘧啶掺入法和MTT法分别检测ASP诱导 3T3 L1前脂肪细胞分化过程中DNA合成量及细胞增殖的情况 ,并采用流式细胞术检测诱导分化后细胞周期构成的变化。结果　①ASP组在诱导分化 2 4h时 ,DNA合成量明显增加 ,与对照组相比差异有极显著性意义 (P <0 0 1) ,在 4 8h和 72h时DNA合成量降低 ,与对照组相比差异无显著性意义 (P >0 0 5 )。②诱导分化 2 4h时 ,ASP组细胞增殖明显 ,与对照组相比差异有显著性意义 (P <0 0 5 ) ;诱导分化 4 8h、 72h时 ,ASP组细胞增殖不明显。③ASP组可促进处于生长停滞期的前脂肪细胞重新进入细胞周期 ,G0 /G1期细胞减少 ,S期的细胞明显增多 ,细胞处于分裂增殖状态。结论　诱导分化过程中 ,ASP可促进 3T3 L1前脂肪细胞发生克隆增殖。ASP促进细胞克隆增殖的作用 ,可能是其诱导前脂肪细胞分化的分子机制之一。     

二巯基丙磺酸钠对食管癌EC109细胞系和小鼠艾氏腹水癌的作用研究

目的观察二巯基丙磺酸钠(DMPS)对食管癌EC-109细胞和小鼠艾氏腹水癌的作用。方法在体外培养的食管癌EC-109细胞株中,通过MTT实验,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞生长增殖的抑制作用;通过荧光显微镜和细胞凋亡-Hoechst33258染色试剂盒,观察不同浓度的DMPS对肿瘤细胞凋亡的诱导作用。在小鼠艾氏腹水癌中,观察不同浓度的DMPS对小鼠生存期的影响。结果体外实验中,终浓度为8、4、21、mmol/L的DMPS应用24 h和48 h后,对肿瘤细胞的生长增殖有显著地促进作用(P<0.01);应用72 h后,则显著地抑制肿瘤细胞的生长增殖(P<0.01)。终浓度为8、4、2、1 mmol/L的DMPS应用24 h和48 h后,肿瘤细胞凋亡数量无显著改变(P>0.05),但应用72 h后,各浓度组可显著增加肿瘤细胞凋亡数量(P<0.01)。体内实验中,751、50 mg/kg的DMPS腹腔注射,每天1次,连续10 d,可显著地延长小鼠生存时间(P<0.01)。结论DMPS应用72 h后,可能通过诱导肿瘤细胞的凋亡而显著地抑制体外食管癌EC109细胞系的生长增殖;腹腔注射751、50 mg/kg连续10 d,可延长艾氏腹水癌小鼠的生存时间。