P2X7R在结核分枝杆菌感染中的作用研究进展

结核病是一种全球范围内的人畜共患病,由结核分枝杆菌（Mycobacterium tuberculosis,MTB）引起,其防治形势日趋严峻。嘌呤能离子通道型受体7（purinergic ligand-gated ion channel 7 receptor,P2X7R）是嘌呤受体的一个亚型,在机体抗MTB感染过程中发挥重要作用。现对P2X7R在MTB感染中的作用研究进展进行综述,有助于阐明结核病的发病机制并为其治疗提供新的策略。     

“黄芪-川芎”药对减轻脑缺血再灌注大鼠多糖包被与血脑屏障损伤

目的:研究"黄芪-川芎"药对减轻脑缺血大鼠的血管内皮多糖包被和血脑屏障(blood brain barrier, BBB)损伤的作用。方法:50只SD大鼠行大脑中动脉梗塞(MCAO)模型后随机分为5组:假手术组、模型组、黄芪给药组、川芎给药组、黄芪-川芎给药组;给药3 d后观察各组大鼠神经功能评分,伊文思蓝渗漏实验检测BBB通透性,ELISA检测血清多糖包被降解产物和白介素IL-1β的水平。结果:各给药组的BBB通透性均比模型组降低、血清多糖包被降解产物及IL-1β含量减少,其中黄芪-川芎给药组的BBB及多糖包被损伤减轻作用最为显著。结论:黄芪-川芎药对可明显减轻脑缺血再灌注大鼠的多糖包被和血脑屏障损伤,发挥脑梗死血管保护作用。     

miR-373通过P2X7R影响抑郁症小鼠行为的作用机制

  目的  探讨miR-373对抑郁症小鼠模型抑郁样行为，小胶质细胞激活和焦亡的影响。  方法  采用慢性不可预知应激构建抑郁症小鼠模型。蔗糖偏好，强迫游泳，尾部悬挂和社会实验评估小鼠的抑郁样行为。免疫荧光双染小胶质细胞标志物Iba-1和小胶质细胞活化标志物OX-42以评估小鼠海马层中小胶质细胞增殖和活化状态。TUNEL试剂盒检测小胶质细胞的凋亡。荧光定量PCR检测miR-373的表达水平。蛋白质印记检测P2X7R和细胞焦亡相关蛋白的表达水平。双荧光素酶报告基因实验验证miR-373和P2X7R的靶向关系。  结果  慢性不可预知应激处理的小鼠，蔗糖偏好度和社交时间显著下调，并且强迫游泳和尾部悬挂不动时间显著增加（P < 0.05）。miR-373在抑郁症模型小鼠中异常高表达，且能够缓解小鼠的抑郁样行为（P < 0.05）。miR-373靶向负调控小鼠海马层小胶质细胞中P2X7R的表达水平（P < 0.01）。miR-373抑制小鼠海马层中小胶质细胞增殖和激活（P < 0.01）。miR-373抑制小胶质细胞中Caspase-1，C-caspase-1，NLRP3，IL-1β和IL-18表达，并抑制小胶质细胞凋亡（P < 0.05）。  结论  miR-373通过靶向抑制P2X7R的表达，从而缓解抑郁症小鼠模型的抑郁样行为，并抑制其海马层中小胶质细胞活化和焦亡。     

结肠扩张刺激对肠易激综合征大鼠DCN核团及骶髓后角中P2X4及P2X7受体表达的影响

目的观察肠易激综合征(irritable bowel syndrome,IBS)致内脏高敏感化大鼠在结肠扩张刺激时大鼠腹直肌肌电变化,并观察骶髓后联合核(dorsal commissural nucleus,DCN)和脊髓后角中P2X4和P2X7受体表达的变化情况,为探讨IBS内脏敏化的神经机制提供理论依据。方法以旋毛虫感染大鼠建立IBS大鼠模型,并以正常大鼠作为对照,实验共分4组:正常大鼠无刺激组,正常大鼠结肠扩张刺激组,IBS大鼠无刺激组,IBS大鼠结肠扩张刺激组。采用免疫组织荧光化学方法,将P2X4和P2X7受体分别标记,观察其在骶髓后角及DCN核团上的表达变化,并同步测定大鼠腹直肌肌电变化。结果 IBS结肠刺激组大鼠腹直肌肌电变化、大鼠骶髓后角及DCN核团中的P2X4和P2X7受体表达较正常大鼠对照组及IBS未刺激组均显著增强。结论 P2X4和P2X7受体可能是IBS致内脏敏感性增高的重要因素。     

嘌呤受体P2X7激活介导大鼠视网膜神经节细胞死亡的实验研究

 【目的】研究嘌呤受体P2X7激动剂、拮抗剂对大鼠视网膜神经节细胞（RGCs）的影响。【方法】（1）对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine以标记RGCs。检测P2b激动剂BzATP（0、50、100、500μmol／L）和特异性拮抗剂OxATP（100μmol／L）对体外培养RGCs存活率的影响；（2）体外培养未经Aminostilbamidine标记的新生大鼠RGCs，以10μmol／L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2标记后。利用Ca^2＋影像测定仪分别测定P2X7激动剂BzATP（50μmol／L）和拮抗剂OxATP（100μmol／L）对RGCs胞内Ca^2＋浓度的影响。【结果】P2X7受体激动剂BzATP可引起体外培养的RGCs死亡，反应呈剂量依赖性，EC50=35μmol／L。在50μmol／L浓度下，BzATP约杀死30％的RGCs；而100μmol／L OxATP则可明显减轻BzATP对RGCs的毒性作用，使RGCs存活率从77％±4％提高至96％±3％（P〈0．001）。BzATP可引起RGCs胞内Ca^2＋持续升高，在50μmol／L浓度下可使胞内Ca^2＋升高（1022±113）nmol／L。在OxATP作用下，BzATP介导的Ca^2＋升高幅度显著降低，仅升高（63±13）nmol／L（P〈0．001）。【结论】嘌呤能P2X7受体激活可导致大鼠视网膜神经节细胞死亡和胞内钙离子浓度升高。     

P2X7受体在OPCs缺氧缺血性损伤中作用的初步研究

目的了解P2X7受体在离体培养的少突胶质前体细胞(OPCs)缺氧缺血性损伤中的作用。方法建立离体OPCs培养模型,通过乳酸脱氢酶(LDH)释放百分比评估细胞死亡;Western blot分析缺氧缺血前后OPCs P2X7受体表达变化。结果 (1)缺氧缺糖(OGD)后2 h,近40%OPCs死亡。OGD前预先给予P2X7受体拮抗剂BBG起到部分保护作用;OGD条件下,P2X7受体激动剂BzATP加重OPCs缺氧缺血性损伤,并且这种增强的毒性作用不能被BBG拮抗。(2)Western blot显示,OGD后2 h,P2X7受体蛋白表达迅速下调。结论 P2X7受体可能参与了OPCs缺氧缺血性损伤过程。     

P2X7受体阻断剂亮蓝G对氧化应激所致红细胞氧化损伤的保护机制

目的探讨P2X7受体阻断剂亮蓝G(BBG)对偶氮二异丁脒盐酸盐(AAPH)所致红细胞氧化损伤的保护机制。方法取雄性Wistar大鼠红细胞,配成体积分数6.25%的红细胞悬液,分为对照组、AAPH组、AAPH+BBG组,对照组加入林格液1,AAPH组加入林格液1、AAPH液,AAPH+BBG组加入林格液1、AAPH液及BBG液,分别将3组标本放入水浴恒温振荡器中孵育1.5 h,检测比较3组标本的红细胞溶血率、渗透脆性及细胞内Ca~(2+)浓度变化。结果与对照组比较,AAPH组红细胞溶血率、渗透脆性及红细胞内Ca~(2+)浓度显著增高(P<0.01);与AAPH组比较,AAPH+BBG组红细胞溶血率、渗透脆性及红细胞内Ca~(2+)浓度显著降低(P<0.05)。结论 P2X7受体阻断剂BBG可抑制氧化应激所致红细胞Ca~(2+)内流,降低红细胞的渗透脆性,从而抑制AAPH对红细胞造成的氧化损伤。     

P2X7受体在肾脏相关疾病中作用的研究进展

P2X7受体作为离子通道型嘌呤能受体,主要由各种免疫细胞,包括巨噬细胞和淋巴细胞表达,并在大脑、骨骼肌、肺等组织中均有表达。P2X7受体在炎症的调节过程中发挥关键作用,其激活后可导致白细胞介素1β、白细胞介素18等炎性因子的释放,这些炎性因子促使组织变性、损伤及细胞的死亡。P2X7受体在正常肾脏中也有表达,但出现肾脏疾病时其表达会显著升高,影响肾脏的多种功能,从而导致肾纤维化、产生蛋白尿,并影响肌酐清除率等,故P2X7受体在肾脏疾病的进展中亦发挥重要作用。     

P2X7受体拮抗剂BBG抗大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧损伤的作用

目的:观察P2X7受体拮抗剂亮蓝G(BBG)抗大鼠星形胶质细胞缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)损伤的作用,并探讨其可能机制.方法:取新生24 h内的SD大鼠10只,原代培养星形胶质细胞,实验分为正常对照组、缺氧/复氧(H/R)组和50 nmol/L BBG+H/R组.MTT法检测星形胶质细胞存活率;荧光示踪法检测星形胶质细胞缝隙连接(GJ)功能,Western blotting检测星形胶质细胞connexin 43(Cx43)、Bax和Bcl-2蛋白表达;Hoechst 33258染色法检测星形胶质细胞凋亡率.结果:MTT法检测结果显示H/R损伤后星形胶质细胞存活率明显下降(P<0.01),50 nmol/L BBG预处理后,H/R损伤的星形胶质细胞存活率明显增加(P<0.01);荧光示踪法检测结果显示H/R损伤后星形胶质细胞GJ功能增强(P<0.01),Western blotting法检测结果显示H/R损伤后Cx43和Bax/Bcl-2比值显著表达增高(P<0.01),50 nmol/L BBG预处理后,H/R损伤的星形胶质细胞间GJ功能下降(P<0.05),Cx43及Bax/Bcl-2比值明显下降(P<0.05);Hoechst 33258染色法检测结果显示,H/R损伤后,星形胶质细胞凋亡率明显增加(P<0.05),BBG预处理后,H/R损伤的星形胶质细胞凋亡率减少(P<0.01).结论:BBG拮抗P2X7受体对H/R损伤后的星形胶质细胞起保护作用,其机制可能与抑制Cx43组成的GJ有关.     

脑疏宁对颅脑创伤后大鼠血脑屏障通透性及MMP-9表达的影响

目的观察中药脑疏宁对创伤性脑损伤(TBI)大鼠血脑屏障(BBB)通透性及脑组织基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达的影响,探讨中药保护血脑屏障的作用机理.方法按Feeney自由落体撞击法造成TBI模型,采用免疫组织化学技术观察大鼠脑组织MMP-9表达.结果模型组创伤后24h BBB破坏,脑组织含水量增加,病灶区MMP-9蛋白表达增高,脑疏宁组BBB通透性、脑组织含水量及MMP-9表达较模型组降低(P＜0.01).结论颅脑损伤后MMP-9表达增高,促使BBB破坏,导致血管源性脑水肿.中药脑疏宁可以保护BBB,降低脑组织含水量,其作用可能与抑制MMP-9在损伤脑组织中的表达有关.     

胆固醇敏感器SCAP功能失调通过上调P2X7受体表达促进THP-1源性巨噬细胞炎症小体活化

目的 探讨胆固醇调节原件结合蛋白裂解激活蛋白(sterol regulatory element binding proteins cleavage-activating protein,SCAP)功能失调促进THP-1源性巨噬细胞炎症小体活化及IL-1β成熟的分子机制.方法 采用基因转染方法在THP-1源性巨噬细胞中过表达SCAP,结合使用P2X7受体(P2X7 receptor,P2X7R)激动剂ATP(5 mmol/L)或抑制剂A438079(100 μmol/L)处理THP-1源性巨噬细胞,将细胞分为:①对照组、②ATP处理组、③A438079处理组、④ATP+A438079组、⑤过表达SCAP组、⑥过表达SCAP+ATP组、⑦过表达SCAP+ A438079组、⑧过表达SCAP+ATP+A438079组.RT-PCR检测过表达SCAP以及激动或抑制P2X7R对P2X7R、pro-IL-1β、NLRP3、pro-caspase-1基因表达水平的影响.流式细胞术检测细胞表面P2X7R的表达.Western blot检测SCAP、pro-IL-1β、NLRP3、caspase-1(p20)以及培养上清中IL-1β的蛋白水平.同一实验在细胞水平重复4次.结果 ①过表达SCAP组与对照组比较,其pro-IL-1β、P2X7R基因表达水平显著升高(P＜0.01),细胞表面P2X7R表达明显上调.②P2X7R激动剂ATP与抑制剂A438079对THP-1源性巨噬细胞SCAP及P2X7R mRNA表达无影响(P＞0.05).P2X7R激动剂ATP能够显著促进THP-1源性巨噬细胞pro-IL-1β mRNA表达(P＜0.05),在过表达SCAP基础上激动P2X7R能够进一步激活pro-IL-1β基因转录(P＜0.01),同时显著促进细胞内pro-IL-1β剪切成熟并向细胞外分泌(P＜0.01),抑制P2X7R活性并不影响过表达SCAP致pro-IL-1β表达上调的作用,但将减少上清中成熟IL-1β的含量.过表达SCAP并不影响NLRP3及caspase-1表达(P＞0.05),但在过表达SCAP基础上充分激动P2X7R将显著上调NLRP3及caspase-1基因及蛋白水平(P＜0.01),上述变化能够被P2X7R抑制剂A438079抵消.结论 胆固醇敏感器SCAP功能失调能够促进THP-1源性巨噬细胞内pro-IL-1 β表达,同时通过上调细胞表面P2X7R表达激活NLRP3炎症小体,促进pro-IL-1β成熟及其向细胞外分泌.     

P2X7受体通过激活AKT信号通路促进小鼠Lewis肺癌细胞的迁移和侵袭

目的 探究P2X7受体(P2X7R)对小鼠Lewis肺癌(LLC)细胞迁移和侵袭能力的影响及其作用机制,同时探究体内P2X7R对荷LLC小鼠成瘤能力的影响。方法 体外实验：RT-PCR检测LLC细胞P2X7R表达。将LLC细胞分别给予P2X7R激动剂三磷酸腺苷(ATP)、2’-3’-O-(4-苯甲酰-苯甲酰)ATP(BzATP)干预或预先给予P2X7R拮抗剂oxATP、A438079然后再给予激动剂干预,共分为7组。使用细胞划痕实验和Transwell实验检测LLC细胞的迁移和侵袭能力;Western blot检测蛋白激酶B(AKT)信号通路关键蛋白的活化水平。将LLC细胞给予BzATP、A438079、磷酸肌醇3-激酶(PI3K)/AKT信号通路抑制剂LY294002干预,共分为5组。利用Transwell实验检测LLC细胞的迁移和侵袭能力。体内实验：构建荷LLC细胞的皮下移植瘤的野生(WT)型和P2X7R基因敲除(P2X7^-/-)型小鼠模型,比较两组肿瘤的体积及质量。结果 LLC细胞中表达P2X7R。划痕实验和Transwell实验结果显示：与对照组相比,激动...     

嘌呤P2X7 受体介导对氯苯丙酸致大鼠 前额皮质蛋白激酶的变化

目的 探讨脑内5- 羟色胺（5-HT）含量下降后大鼠前额皮质受体后信号P38 MAPK、PKC 和 CaMK Ⅱ蛋白和基因表达的变化及P2X7 受体在其中的作用。方法 大鼠分为正常组、对照组、对氯苯丙氨酸 （PCPA）组、P2X7 受体拮抗剂及激动剂干预组。腹腔注射PCPA 使脑内5-HT 合成下降,脑室注射P2X7 受 体拮抗剂和激动剂,采用免疫组织化学、Western blot 和实时荧光定量PCR 检测前额皮质P38 MAPK、PKC 和 CaMK Ⅱ蛋白和mRNA 的表达。结果 与对照组比较,PCPA 组的P38 MAPK 蛋白和mRNA 表达增加,而PKC 和CaMK Ⅱ的蛋白和mRNA 表达水平下降。与PCPA 组比较,P2X7 受体拮抗剂能使P38 MAPK 蛋白和基因 mRNA 表达下降,PKC 和CaMK Ⅱ的蛋白表达水平升高及mRNA 表达水平上升;而P2X7 受体激动剂引起 P38 MAPK 蛋白和mRNA 表达水平升高,PKC 和CaMK Ⅱ的蛋白表达下降和基因mRNA 表达水平下降。结论 P2X7 受体介导了脑内5-HT 下降所致的前额皮质受体后信号P38 MAPK、PKC 和CaMK Ⅱ蛋白和基因表达 的变化。     

P2X7受体和肾脏疾病

P2X7受体是三磷酸腺苷(ATP)门控阳离子通道受体,是嘌呤受体P2X家族受体亚型之一。P2X7受体信号通路与IL-1β、IL-6、COX-2等多种炎症因子的生成和释放相关,在多种疾病的发病过程中起到了至关重要的作用。目前以此受体为治疗靶点的P2X7受体拮抗剂已进入临床试验阶段,表现出良好的安全性和疗效。最新研究表明P2X7受体与多种肾脏疾病有关,P2X7受体拮抗剂具有潜在的肾脏疾病治疗作用。本文综述P2X7受体在肾脏疾病中的作用及其可能的作用机制,以期为肾脏疾病治疗的新靶点和新策略提供理论依据。     

嘌呤受体P2X7激活谷氨酸受体NMDA引起视网膜神经节细胞凋亡

【目的】研究嘌呤受体P2X7和谷氨酸受体NMDA激活诱导大鼠视网膜神经节细胞（RGC）凋亡的相互作用机制。【方法】①对新生Long-Evan大鼠进行上丘注射荧光标记物Aminostilbamidine标记RGC,NMDA受体通道拮抗剂MK-801、APV和Memantine分别与P2X7受体激动剂BzATP共培养,检测它们对体外培养RGC存活率的影响;②未经Aminostilbamidine标记的新生大鼠RGC,以10μmol/L钙离子（Ca^2＋）荧光染料Fura-2标记后,利用Ca^2＋影像测定仪分别测定BzATP及三种NMDA拮抗剂对RGC胞内Ca^2＋浓度的影响。【结果】（1）三种NMDA拮抗剂均分别不同程度阻断BzATP引起的RGC凋亡。BzATP在50μmol/L浓度下,约杀死（36%±2%）的RGC,而MK-801（10μmol/L）、APV（100μmol/L）和Memantine（100μmol/L）则均可明显减轻BzATP对RGC的毒性作用,使RGC存活率分别提高至（96%±4%,P〈0.001）、（80%±5%,P=0.010）和（76%±9%,P=0.144）。（2）BzATP可引起RGC胞内Ca^2＋持续升高,在50μmol/L浓度下可使胞内Ca^2＋升高至（1183±109）nmol/L。而MK-801（10μmol/L）、APV（300μmol/L）和Memantine（30μmol/L）则均可显著降低BzATP介导的Ca^2＋升高幅度,分别为（76%±7%,P=0.003）、（51%±17%,P=0.033）和（55%±16%,P=0.025）。【结论】NMDA受体拮抗剂可阻断嘌呤受体P2X7激活诱导的RGC凋亡。P2X7受体和NMDA受体通道激活可能共同介导着兴奋性神经毒作用且P2X7在NMDA受体的上一环节先起作用。     

中枢神经系统P2X_7受体的结构与功能

中枢神经系统P2X7受体是参与介导胶质细胞和神经元通讯过程的关键介质,激活后可促进促炎因子、谷氨酸及ATP等物质的释放,参与多种炎症及神经损伤所导致的慢性疾病的发生。P2X7受体大量表达在胶质细胞,且在病理性疼痛的发生中起着非常重要的调节作用。现从其结构及药理学特性等方面,分析胶质细胞P2X7受体在介导病理性疼痛发生、发展中的重要作用。     

配体门控性离子通道P2X7受体在肿瘤中的意义

ATP等核苷酸类物质作为细胞间通讯的载体可结合细胞膜上的嘌呤受体调节细胞的功能。嘌呤受体根据结构不同分为P2Y和P2X。P2X7受体是P2X家族配体门控离子通道型嘌呤受体的一员,广泛表达于多种组织,生理功能呈多样性,可受多种因素调控。P2X7受体表达及功能异常与多种肿瘤尤其是血液肿瘤相关,进一步阐明P2X7受体在肿瘤发生、发展中的作用机制具有重要的理论意义和潜在的应用前景。