m6A修饰相关的长链非编码RNA 对肾透明细胞癌预后和免疫治疗的研究

目的 探究与N6-甲基腺嘌呤(m6A)相关的长链非编码RNA(long non-coding RNA, lncRNA)对肾透明细胞癌(renal clear cell carcinoma, ccRCC)预后和免疫治疗的特征。方法 通过TCGA数据库下载532例ccRCC患者组织和72例正常肾组织的转录组数据和临床特征数据,利用共表达和单因素COX回归分析筛选与预后和m6A相关的lncRNA。基于预后和m6A相关的lncRNA的表达进行聚类分析,分析两种聚类分型与免疫检查点程序性死亡配体1(programmed death-ligand 1, PD-L1)和细胞毒性T淋巴细胞相关抗原-4(cytotoxic T lymphocyte-associated antigen-4, CTLA-4)表达的相关性。构建LASSO COX回归风险预后模型,验证其临床应用价值,利用ESTIMATE方法比较ccRCC肿瘤微环境的差异,免疫表观评分(immunophenoscore,IPS)预测ccRCC对免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitor, ICI)的敏感度。结果 通过共表达和单因素COX回归分析筛选出29个与预后和m6A相关的lncRNA,大多数在ccRCC组织中表达上调,而COL18A1-AS1、AC007066.2和AC018752.1则表达下调。通过聚类分析将532例ccRCC组织样本分为cluster1组和cluster2组,cluster2组预后更差,PD-L1和CTLA4表达更高。利用LASSO COX回归算法确定8个与预后和m6A相关的lncRNA,建立ccRCC风险预后模型,该模型在不同临床特征中均有较好的预测价值。依据模型计算风险值将患者分为高风险组和低风险组。高风险组患者预后更差,富含更多免疫细胞成分,对ICI治疗更敏感。结论 m6A相关的lncRNA对ccRCC患者的预后预测和免疫治疗指导具有重要意义。     

RNA m6A修饰与免疫功能调控

目前,在编码和非编码RNA中已经发现超过100种化学修饰。N6-甲基腺苷（N6-methyladenosine, m6A）是真核细胞中最常见和最丰富的转录后水平RNA修饰,m6A甲基转移酶及去甲基化酶参与m6A修饰水平的动态可逆调节,m6A修饰识别蛋白特异性识别m6A修饰并调控RNA的剪接、转运、稳定性和翻译。 m6A修饰几乎参与了从正常发育到疾病的所有主要生物过程,包括对免疫系统的调控。免疫系统的正常发育和功能行使依赖于相关基因表达的精准调控,而m6A修饰在该调控中起到关键作用。本文围绕m6A修饰的概念、功能和作用机制,特别是其在免疫系统功能调控中的作用进行综述,讨论了目前该研究领域的挑战并展望未来的研究方向,以期为m6A修饰参与免疫调控的研究提供理论依据和参考。     

CD155依赖m6A修饰调控宫颈癌细胞的恶性行为

目的:探究CD155在宫颈癌中的作用和依赖m6A修饰的调控机制。方法:应用数据库预测宫颈癌细胞中CD155（PVR）的表达情况,CD155对患者预后的影响,运用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法测定宫颈癌细胞HeLa和宫颈永生细胞S12中CD155的表达水平。分别运用MTT、平板克隆、迁移侵袭等实验评估CD155对宫颈癌细胞HeLa生长、增殖、迁移和侵袭的影响。应用Western印迹法测定E-钙黏蛋白（E-cad）和波形蛋白（Vimentin）的表达水平并评价CD155对EMT的影响。MeRIP-RT-qPCR检测CD155是否受m6A 调控,Western印迹法和qRT-PCR测定METTL3是否影响CD155蛋白和RNA的表达水平。放线菌素D处理细胞后检测METTL3对CD155RNA半衰期的作用,利用预测网站m6ATaget预测CD155RNA甲基化位点的识别者（Reader）,运用Western印迹法和qRT-PCR分析YTHDF1是否影响CD155蛋白和RNA的表达水平,放线菌素D处理细胞后检测YTHDF1对CD155RNA半衰期的作用,RIP-RT-qPCR实验进一步确定YTHDF1和YTHDF1-mut对CD155RNA下拉能力。结果: CD155在宫颈癌组织和细胞中表达较高,体内高表达CD155的患者生存率较低。相比S12细胞,HeLa细胞中CD155的表达增加（t=3.749,P<0.05）。CD155的高表达促进了体外宫颈癌细胞的生长（t=3.152,P<0.05）、增殖（t=3.706,P<0.05）、迁移（t=5.422,P<0.01）和侵袭（t=3.599,P<0.05）,抑制E-cad的表达促进了Vimentin的表达。MeRIP-RT-qPCR结果显示CD155RNA受m6A调控,METTL3促进了CD155蛋白和RNA（t=6.725,P<0.05）的表达,敲降METTL3之后CD155RNA半衰期降低（t=5.622、6.063、5.857,均P<0.05）。敲降YTHDF1之后CD155的蛋白水平降低,CD155RNA半衰期降低（t=10.93、5.602、4.359,均P<0.05）。在YTHDF1高表达的细胞中,CD155RNA被有效免疫沉淀（t=4.686,P<0.01）,但在YTHDF1-mut转染的细胞中,免疫沉淀结果显示下拉的CD155RNA水平明显降低（t=4.462,P<0.05）。结论:CD155RNA在m6A修饰的情况下,被YTHDF1特异性识别,进而稳定性增强和翻译增加,CD155表达增加促进了宫颈癌细胞的恶性行为。     

m6A甲基化修饰在乳腺癌中作用及调控机制研究进展

乳腺癌(breast cancer,BC)是全球女性发生率最高的恶性肿瘤,也是危及女性健康的主要危险因素。N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)是高等真核生物mRNA中富含的内部修饰物,对于mRNA代谢和多项生物过程都具有关键作用。近年来研究表明,m6A与多种类型的肿瘤发展息息相关,但是其与BC之间的关联还不十分明确。本文综述了m6A甲基化修饰在癌症中作用的研究进展,包括m6A甲基转移酶、去甲基化酶、甲基识别蛋白各自的生物功能,以及m6A甲基化修饰在BC的增殖、侵袭、耐药及预后等方面的作用。开发针对m6A的化学调节剂为BC的治疗提供了一个全新的可能,同时m6A甲基化修饰因子有望成为BC诊断、预后以及疗效监测的重要治疗靶点。     

基于TCGA数据库分析m6A调节因子甲基化修饰对肺腺癌预后的影响

目的 通过生物信息学分析探究m6A甲基化调节因子在肺腺癌中的表达及预后。方法 通过TCGA数据库下载516例肺腺癌患者的转录组数据及其临床数据,使用R软件分析比较肺腺癌组织和癌旁组织中20个m6A甲基化调节因子的表达差异,并通过单变量Cox回归分析进行生存分析。通过Consensus Cluster Plus R非监督类的方法进行m6A聚类生存分析。结果 16个m6A甲基化调节因子在肺腺癌中差异表达,其中有5个m6A甲基化调节因子(IGF2BP1、IGF2BP3、HNRNPC、RBMX、YTHDC2)与肿瘤分期、7个m6A甲基化调节因子(IGF2BP1、IGF2BP3、HNRNPC、RBMX、METTL3、YTHDF2、METTL14)与T期和2个m6A甲基化调节因子(IGF2BP3、YTHDC2)与N期显著相关。Cox回归分析结果表明6个m6A甲基化调节因子(IGF2BP1、IGF2BP2、IGF2BP3、HNRNPA2B1、HNRNPC、RBM15)是影响肺腺癌患者预后的独立危险因素。结论 m6A甲基化调节因子与肺腺癌进展有关,6个m6A甲基化调节因子可以作为预测肺腺癌患者预后的潜...     

HPV相关宫颈癌的筛查与免疫治疗

宫颈癌是世界范围内第二大常见妇科肿瘤,每年有＞230000人死于宫颈癌.导致宫颈癌的危险因素主要为持续性高危型人乳头状瘤病毒感染宫颈的移行带上皮,其机制可能是机械性原因,也可能是生物性原因.通过免疫干预可以打破免疫耐受,重新激发机体免疫系统消除肿瘤细胞的能力,随着免疫学和基因工程学的发展,免疫治疗已成为临床肿瘤治疗的第4种治疗模式.本文对近年来宫颈癌的HPV相关筛查和免疫治疗进展进行综述.     

RNA m6A修饰及在肿瘤中的作用

6?甲基腺嘌呤（N6?methyladenosine,m6A）是真核生物RNA内部序列中最常见的一种修饰方式,该过程依赖于书写器、擦除器、阅读器等三类分子的精准调控。m6A修饰参与调控基因表达,与肿瘤、神经系统疾病、胚胎发育迟缓等多种疾病相关,近年来该领域成为表观转录组学中新的研究热点。文章详细阐述了m6A修饰在肿瘤发生发展中的作用,包括m6A修饰参与肿瘤干细胞自我更新与分化,调控肿瘤细胞增殖以及参与放化疗抵抗,讨论靶向m6A治疗可能带来的临床干预措施,以期为肿瘤精准治疗提供新手段。     

冠心病m6A修饰差异关键基因的筛选与验证

目的 应用网络平台和生物信息学探讨冠心病m6A修饰差异基因,为临床研究和分子诊断提供理论支持.方法 下载基因芯片数据集GSE113079和GSE64554,使用R语言limma对数据进行标准化,基于贝叶斯函数鉴定数据集的差异表达基因.筛选出所有m6A甲基化修饰基因,qPCR验证差异倍数排名前10的基因在冠心病患者PBM...     

肝细胞癌中lncRNA SNHG25的高表达与不良预后相关

目的：评价lncRNA SNHG25在肝细胞癌中的表达及其临床意义、预后价值以及潜在有相互作用的分子。方法：通过用qRT-PCR方法检测肝细胞癌细胞系和正常人肝细胞系中lncRNA SNHG25的表达。其次通过UALCAN和仙桃学术,并使用TCGA数据库分析lncRNA SNHG25在肝癌组织和正常肝脏组织中的表达水平、临床应用意义以及临床病理因素与lncRNA SNHG25表达的相关性。然后使用GEPIA来分析lncRNA SNHG25表达与患者预后之间的关系。最后使用Starbase 3.0预测了可能与lncRNA SNHG25相互作用的分子。结果：通过qRT-PCR方法检测,在大部分肝细胞癌细胞系中lncRNA SNHG25的表达量高于正常肝细胞系。与正常组织相比较,肝细胞癌组织中lncRNA SNHG25的表达显著升高;lncRNA SNHG25的表达与组织分级、甲胎蛋白（AFP）水平、种族相关,但与年龄、性别无明显相关。GEPIA结果表明lncRNA SNHG25的高表达与无病生存期显著相关,而与总生存期无明显相关。Starbase 3.0分析得到GNPTAB、C19orf2...     

RNA m6A甲基化修饰在脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用机制

目的 探讨RNA m⁶A甲基化修饰在脂肪细胞胰岛素抵抗中的作用及机制。方法 收集2型糖尿病患者术中赘余皮下脂肪组织,以非2型糖尿病患者同样组织为对照,检测组间RNA m⁶A水平。高脂饮食诱导C57BL/6J小鼠构建胰岛素抵抗（insulin resistance,IR）模型（HFD组,n=5,60%高脂饲料喂养16周）,对照组10%低脂饲料喂养16周（CD组,n=5）。模型构建成功后,取附睾周围脂肪组织行表观转录组学m⁶A甲基化修饰芯片检测,并借助MeRIP-qPCR实验、RT-qPCR以及RNA结合蛋白免疫沉淀测定（RNA Binding Protein Immunoprecipitation Assay,RIP）实验验证胰岛素信号转导相关基因变化;进一步观察METTL3小分子抑制剂STM2457对高脂饮食诱导下小鼠胰岛素信号转导基因的影响。结果 2型糖尿病患者和小鼠IR模型脂肪组织中总体m⁶A修饰水平均升高（患者200 ng RNA t=-8.375,P<0.001;患者100 ng RNA t=-3.722,P=0.006;患者50 ng RNA t=-4.937;P=0.001;小鼠100 ng RNA t=-3.590,P=0.023;小鼠50 ng RNA t=-2.760,P=0.025）。表观转录组学检测证实IR的脂肪组织中1 175个基因发生高m⁶A修饰,55个基因发生低m⁶A修饰,同时有182个基因呈现高m⁶A修饰且低表达,包括AKT2、INSR、PIK3R1、ACACA、SREBF1等5个胰岛素信号转导关键基因,其中AKT2、INSR、ACACA、SREBF1等4个基因被确证并证实其与METTL3存在直接结合,其m⁶A修饰水平受METTL3正向调控。STM2457作用下,胰岛素敏感性提高,且AKT2、INSR、ACACA、SREBF1转录水平上调,提示IR表型改善明显。结论 高脂饮食通过METTL3诱导脂肪细胞胰岛素信号转导基因AKT2、INSR、ACACA、SREBF1发生m⁶A高甲基化修饰,诱导其低表达,阻滞胰岛素信号转导,进而参与诱发IR。     

m6A结合蛋白YTHDC2对人骨髓间充质干细胞分化的影响

目的 研究N6-腺苷酸甲基化(N6-methyladenosine,m6A)结合蛋白YTH结构域蛋白2(YTH domain-containing protein 2,YTHDC2)对人骨髓间充质干细胞(human bone marrow mesenchymal stem cells,hBMSCs)成骨及成脂分化的调控...     

p53蛋白蓄积与肺癌预后的研究

应用抗ｐ５３单克隆抗体（ＤＯ—１），采用Ｓ—Ｐ免疫组织化学方法，对８６例原发性肺癌进行了研究。总阳性率５３．４８％，其中细支气管肺泡癌（６／１５）例，腺泡状腺癌（３５／６３）例，大细胞肺癌（５／８）例。ｐ５３的表达与肺癌的分型、细胞分化程度及ＴＮＭ分期无关，与术后平均存活月数相关。ｐ５３阳性与阴性之间差异显著（Ｐ＜０．０５）。在ｐ５３表达阳性例中，ｐ５３染色越强则术后平均存活月数越短。因此，ｐ５３的过表达是判定肺癌预后的指标之一     

宫颈癌存活蛋白的表达及其与预后的关系

目的研究宫颈癌组织及癌旁组织存活蛋白的表达及其与患者预后的关系。方法收集2007年1月至2009年12月徐州市中心医院收治的70例手术切除的临床病理资料保存完整的宫颈癌石蜡切块,癌旁组织取自距癌组织0.5¹.0 cm,应用免疫组织化学S-P法检测宫颈癌组织及癌旁组织中存活蛋白的表达情况,分析其与宫颈癌临床病理特点及预后的关系。结果存活蛋白在宫颈癌组织中的表达阳性率高于癌旁组织(65.7%vs 21.4%),差异有统计学意义(P<0.05)。存活蛋白表达与患者性别、年龄、淋巴结转移、临床分期均无关(P>0.05),其阳性表达与肿瘤细胞分化程度、临床分期有关(P<0.05)。生存曲线提示存活蛋白低表达组与高表达组比较具有生存优势,差异有统计学意义(P<0.05)。结论存活蛋白可能与宫颈癌的发生、发展有关,对判断宫颈癌的预后有一定的价值。     

CD_(44)基因在卵巢癌中的表达及其与预后的关系

目的探讨CD44v6在人卵巢癌组织中的表达及其与卵巢癌预后的关系。方法用半定量反转录聚合酶链反应技术,检测CD44v6在50例卵巢癌组织、10例交界性卵巢肿瘤组织、10例良性卵巢肿瘤组织、10例正常卵巢组织中的表达水平。结果①CD44v6在卵巢癌组织中的阳性表达率为95.45%,高于在交界性卵巢肿瘤(60%)的表达(P<0.05),显著高于在良性卵巢肿瘤(20%)及正常卵巢组织中(0%)的表达(P<0.01);②CD44v6 mRNA的相对含量与上皮性卵巢癌的分化程度呈反比,与上皮性卵巢癌的分期呈正比;③CD44v6 mRNA的相对含量与患者的生存时间呈反比;④Cox多因素分析表明CD44v6相对含量的高低是影响术后生存时间的独立预后因素。结论①卵巢癌组织中CD44v6阳性表达率高;②CD44v6 mRNA相对含量的高低与组织学分级、临床分期和淋巴结转移均有关;③CD44v6 mRNA相对含量的高低有可能成为预测卵巢癌预后的指标。     

C5/C6颈椎间盘突出症患者颈髓受压程度与颈椎MRI测量值相关性分析

目的 探讨C5/C6颈椎间盘突出症患者颈髓受压比例(E值)与颈椎磁共振成像测量值间相关性.方法 回顾性分析2017年4月至2019年4月我院放射科接诊的80例C5/C6颈椎间盘突出症患者,入院后均行MRI检查,根据颈椎MRI矢状位成像上按照E值分为1组(E值≥66％,n=24)、2组(E值33％～66％,n=29)、3...     

弹性成像参数与宫颈癌患者病理特征、预后及血清蛋白酶含量的相关性

目的研究弹性成像参数与宫颈癌患者病理特征、预后及血清蛋白酶含量的相关性。方法选择2014-01/2016-01月在作者医院接受手术切除并经术后病理诊断为宫颈癌的患者86例作为研究对象,纳入宫颈癌组,另取同期经病理诊断为宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasias, CIN)的50例患者作为CIN组,体检的健康女性50例作为对照组。采用弹性成像检测平均弹性模量、最大弹性模量,采用酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)试剂盒检测血清蛋白酶含量,随访宫颈癌患者的3年复发情况。结果宫颈癌组患者的平均弹性模量、最大弹性模量均明显高于CIN组和对照组(P均<0.05)。浸润深度≥5 mm、低未分化、国际妇产科协会(federation international of gynecology and obstetrics, FIGO)分期Ⅲ期、发生淋巴结转移、3年复发宫颈癌组患者的平均弹性模量、最大弹性模量均明显高于浸润深度<5 mm、中高分化、FIGO分期Ⅰ～Ⅱ期、未发生淋巴结转移、...     

APC基因在宫颈癌及其癌前病变中的表达及相关性

目的:探讨APC基因在HPV16感染的宫颈癌及其癌前病变中的表达情况及相关性.方法:将接受手术的33例宫颈癌患者和28例宫颈上皮内瘤变(CINⅢ)患者分为宫颈癌组和CINⅢ组,同期手术的31例子宫肌瘤或子宫腺肌症患者作为对照组;3组患者术前均行宫颈细胞凯普导流杂交人乳头瘤病毒DNA(HPV DNA)检测HPV16,计算HPV16 DNA阳性表达率;RT-PCR及免疫组化方法检测APC mRNA及APC蛋白的表达,分析宫颈癌及CINⅢ组中HPV16 DNA阳性率与APC mRNA及蛋白表达的相关性.结果:宫颈癌组与CIN Ⅲ组的HPV16 DNA阳性率明显高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05);宫颈癌组APC mRNA及蛋白的阳性表达率低于照组,差异有统计学意义(P ＜0.05);CINⅢ组APC mRNA表达率与对照组差异无统计学意义(P＞0.05);宫颈癌及CINⅢ组中HPV16 DNA阳性率与APC mRNA及蛋白的表达呈负相关性(r=-0.573,-0.616;r=-0.573,-0.654;P＜0.05).结论:APC基因与HPV16可能共同参与了宫颈由正常至CIN进而发展为宫鳞癌的恶性转变过程.     

中性粒-淋巴细胞比值与胃癌患者预后的关系

目的 探讨术前外周血中性粒细胞淋巴细胞比值（neutrophil to lymphocyte ratio,NLR）与胃癌患者预后的关系。方法 回顾性分析2012年10月~2016年12月在郑州大学第五附属医院普外科行胃癌根治术且有完整临床数据162例患者的资料,采用时间依赖性受试者工作特征（receiver operating characteristic,ROC）曲线确定NLR预测术后患者生存情况的最佳截断值,并将患者分为高NLR组和低NLR组,比较两组患者的临床病理特征及预后情况,采用单因素和多因素COX回归模型分析影响患者预后的临床因素。结果 NLR最佳截断值为3.11,由此将患者分为低NLR组（NLR≤3.11,n=116）和高NLR组（NLR>3.11,n=46）。两组患者的年龄、T分期、术前白蛋白含量、CA242水平及术后生存情况比较,差异有统计学意义（P值均<0.05）。单因素分析显示年龄、分化程度、TNM分期、T分期、N分期、术前血红蛋白含量、术前白蛋白含量、CEA水平、CA199水平、CA242水平及NLR与患者预后显著相关（P均<0.05）。多因素分析结果显示,年龄（HR=3.086,95% CI：1.835~5.192）、术前白蛋白含量（HR=0.405,95% CI：0.242~0.679）、CA199水平（HR=2.773,95% CI：1.033~7.448）及NLR（HR=2.736,95% CI：1.645~4.551）是影响胃癌患者预后的独立因素（P均<0.05）。结论 术前外周血NLR可作为胃癌患者的预后标志物,高NLR值提示预后较差。