姜黄素介孔二氧化硅纳米粒载药系统的制备及其载药性能

目的 制备姜黄素介孔二氧化硅纳米粒载药系统以提高水难溶性姜黄素的溶出度。 方法 采用扫描电镜观察介孔二氧化硅纳米粒形貌和粒径,采用X射线衍射检测姜黄素与介孔二氧化硅纳米粒载体的负载情况,体外溶出实验检测姜黄素介孔二氧化硅纳米粒药物溶出的效果。 结果 姜黄素以非晶体的形式负载于介孔二氧化硅纳米粒孔道内,姜黄素介孔二氧化硅纳米粒载药系统可显著提高姜黄素的溶出速率和溶出度。 结论 姜黄素介孔二氧化硅纳米粒载药系统的制备,在改善水难溶性药物的口服吸收方面具有潜在价值,为提高水难溶性药物的生物利用度提供了新思路。     

姜黄素固体脂质纳米粒制备及体外释放的研究

[目的]以单硬脂酸甘油酯为载体材料制备姜黄素固体脂质纳米粒及其体外释放行为的研究。[方法]采用乳化蒸发-低温固化法制备姜黄素固体脂质纳米粒,高速离心法测其包封率,激光粒径仪测定其粒径、电位,用差示扫描量热仪(DSC)表征其性质,采用透析法考察固体脂质纳米粒中姜黄素的体外释放行为。[结果]姜黄素固体脂质纳米粒的平均粒径为(89.24±2.06)nm,Zeta电位为(-18.77±1.27)m V,药物平均包封率为(89.55±1.84)%,DSC结果表明其理化性质稳定可靠,体外12 h累计释放率为(43.12±1.02)%。[结论]制备的姜黄素固体脂质纳米粒粒径小且分布均匀,具有良好的缓释作用。     

w-3不饱和脂肪酸功能性纳米载体的设计及逆转肝癌多药耐药作用研究

目的设计二十二碳六烯酸（DHA）为代表的ω-3不饱和脂肪酸功能性纳米载体，探究其协同阿霉素（DOX）给药对肝癌多药耐药（MDR）的影响及其作用机制。方法以DHA和DOX为油相，通过高压乳化法制备DOX纳米粒。将DOX或DOX纳米粒与HepG2细胞或HepG2/ADM细胞共培养后，分为HepG2/ADM组、HepG2+DOX组、HepG2+DOX纳米粒组、HepG2/ADM+DOX组、HepG2/ADM+DOX纳米粒组。采用CCK-8法检测并计算细胞存活率，倒置荧光显微镜观察细胞摄取，分光光度法检测细胞内DOX的药物浓度，Westernblot法检测各实验组MDR相关蛋白（MRP）、肺耐药相关蛋白（LRP）、乳腺癌抗药性蛋白（BCRP）、凋亡相关蛋白（Bcl-2）的表达水平。结果与HepG2/ADM组比较，HepG2+DOX组、HepG2+DOX纳米粒组、HepG2/ADM+DOX组、HepG2/ADM+DOX纳米粒组细胞存活率均明显为低（均P＜0.01）；与HepG2/ADM+DOX组比较，HepG2/ADM+DOX纳米粒组细胞存活率低（P＜0.05）。随着药物作用时间的延长，细胞药物摄取能力增强。HepG2/ADM+DOX纳米粒组细胞药物摄取能力最强，HepG2+DOX纳米粒组次之，HepG2+DOX组最弱。随着药物作用时间的延长，HepG2与HepG2/ADM细胞内DOX浓度均持续增长；HepG2+DOX纳米粒组与HepG2+DOX组、HepG2/ADM+DOX纳米粒组与HepG2/ADM+DOX组相比，细胞内DOX浓度高且增长速率较快，但差异均无统计学意义（均P＞0.05）。与HepG2/ADM组相比，HepG2+DOX组、HepG2+DOX纳米粒组和HepG2/ADM+DOX纳米粒组细胞中MRP、LRP、BCRP与Bcl-2蛋白表达水平均明显为低（均P＜0.05）。结论基于ω-3不饱和脂肪酸功能性纳米载体的DOX可以在一定程度上逆转肝癌MDR。     

姜黄素对缺血-再灌注H9c2心肌细胞的保护作用及对热休克蛋白27表达的影响

目的 探讨姜黄素对缺血-再灌注损伤的H9c2心肌细胞热休克蛋白27(Hsp27)表达的影响及意义.方法 利用缺血台氏液对体外培养的H9c2心肌细胞模拟缺血-再灌注处理,同时随机分为缺血-再灌注、缺血-再灌注+姜黄素组和对照组,采用流式细胞术检测各组细胞凋亡率,JC-1法检测各组线粒体膜电位情况,噻唑蓝法检测各组细胞存活率,Western blot法检测各组Hsp27蛋白表达水平.结果 姜黄素组干预后的早期、晚期和总细胞凋亡率[分别为(4.9±0.6)%、(5.8±1.3)%和(10.7±1.5)%]均较缺血-再灌注组[分别为(8.6±2.1)%、(19.3±2.4)%和(27.9±3.2)%]明显降低,差异均有统计学意义(P<0.05或0.01).姜黄素组低电位细胞比例数[(38.2±2.4)%]较缺血-再灌注组[(59.3±7.5%)%]明显降低,而姜黄素组细胞的后续存活率和Hsp27蛋白表达水平[分别为(81.3±1.3)%和(109.1±9.3)%]均显著高于缺血-再灌注组[分别为(30.5±2.0)%]和(78.6±6.6)%],差异均有统计学意义(均P<0.01).结论 诱导Hsp27蛋白高表达可能是姜黄素减轻心肌细胞缺血-再灌注损伤的重要机制之一.     

姜黄素白蛋白纳米粒对胆囊恶性肿瘤GBC-SD细胞增殖的影响

目的探讨姜黄素白蛋白纳米粒对胆囊恶性肿瘤GBC-SD细胞株增殖的影响,为姜黄素的临床应用及胆囊恶性肿瘤的临床治疗提供新的思路。方法将实验对象分为空白对照组、阳性药物5-Fu对照组、姜黄素组、姜黄素白蛋白纳米颗粒组、空白纳米粒组,并利用CCK-8及RT-PCR评估其体外抗肿瘤活性,检测姜黄素及姜黄素白蛋白纳米粒对凋亡相关基因bcl-2、bax表达水平的影响。结果 (1)姜黄素及其纳米粒、5-Fu对GBC-SD细胞的生长有抑制作用;(2)三种药物均能通过调节胆囊恶性肿瘤GBC-SD细胞中bcl-2,bax的表达,抑制GBC-SD增殖。结论姜黄素白蛋白纳米粒对胆囊恶性肿瘤GBC-SD细胞株增殖有明显的抑制作用,而且抑制作用相较于单独的姜黄素要更强,这种作用机制与上调Bax基因表达,下调Bcl-2基因表达,导致细胞凋亡有关。     

新型姜黄素纳米粒制备、表征及其体外抗肿瘤活性评价

目的制备高载药量姜黄素纳米粒,并考察其体外稳定性和抗肿瘤活性。方法用油酸(OA)对姜黄素(Cur)进行化学修饰。采用改良的溶剂挥发法制备聚乙二醇聚乳酸乙酸酯(mPEG-PLGA)载Cur-OA2纳米粒(mPEG-PLGA-Cur-OA2,PPCO)。并以纳米粒载药量(drug loading,DL)、包封率(entrapment efficiency,EN)为指标,通过3因素3水平正交试验对工艺进行优化。采用正交确定工艺制备3批载药纳米粒,应用动态光散射粒度仪和透射电镜测定载药纳米粒的zeta电位、粒径与形态。采用体外37℃水浴降解特性来评价其稳定性。最后利用MTT法对纳米粒体外抗肿瘤活性进行初步评价。结果正交实验,包封率影响因素为:有机相与水相的量(B)>超声时间(C)>药物与材料比(A)。载药量影响因素为:有机相与水相的量(B)>药物与材料比(A)>超声时间(C)。利用正交设计筛选出的方法制备纳米粒,其载药量达(24.870±0.029)%,包封率为(81.250±0.101)%,zeta电位-23.9±1.6mV,平均粒径235.0±25.8nm,粒度分布均匀,呈单峰分布。载药纳米粒在37℃,前4h降解了20%,而其后的70h里,只降解了5%左右,相比姜黄素稳定性得到了极大提高。纳米粒体外抗肿瘤活性研究表明,所制备的纳米粒对HepG2细胞仍然具有较好的抑制作用,经48h处理后,其IC50为40.61μmol/L,但相比姜黄素15.76μmol/L有所下降,表现为减毒效应。结论 PPCO纳米粒呈均匀球形、载药量高,稳定性好,并有较好的体外抗肿瘤活性。     

姜黄素纳米粒的制备及药动学研究

目的 研究姜黄素纳米粒大鼠尾静脉注射后的药动学特性。方法 采用乳化溶剂扩散法制备姜黄素纳米粒,大鼠尾静脉注射姜黄素纳米粒和游离姜黄素后,利用HPLC测定不同时间点血浆中药物浓度,DAS 3.0软件处理数据,求算药动学参数。结果 姜黄素纳米粒给药后的药时曲线下面积AUC显著提高,分布容积和清除率显著降低。采用较大分子量聚合物制备的纳米粒具有更高的AUC、更低的分布容积和清除率,显示了更加优异的长循环特性,与体外释放的结果相吻合。结论 姜黄素纳米粒在大鼠体内消除慢,能显著提高姜黄素的生物利用度。      

载酞菁锌靶向新生血管相变纳米粒体外超声显像与光热治疗实验研究

目的 制备一种新型靶向新生血管诊疗一体化的超声分子探针,体外评价其靶向性、增强超声显像及光热治疗能力.方法 采用双乳化法制备搭载全氟己烷(perfluorohexane,PFH) 和酞菁锌(zinc phthalocyanine,ZnPc) 的PLGA纳米粒;用碳二亚胺法将纳米粒与血管内皮生长因子受体-2(vascular endothelial growth factor receptor-2,VEGFR-2) 抗体相偶联制备靶向纳米粒;检测其一般特性、体外寻靶能力;经激光辐照后检测其增强超声显像以及光热治疗能力.结果 成功制备出靶向纳米粒,粒径(256. 40 ± 57. 14) nm;CCK-8检测结果表明纳米粒没有明显的细胞毒性(F = 0. 402,P = 0. 837);激光共聚焦显微镜及流式细胞仪结果均证明靶向纳米粒具有良好的靶向能力,流式细胞仪检测非靶向组、抗体封闭组、靶向组中,纳米粒与细胞连接率分别为(9. 52 ± 2. 14) ％、(9. 92 ± 1. 62) ％、(61. 89 ± 3. 62) ％,差异有统计学意义(F = 463. 7,P＜0. 05),非靶向组(q = 40. 21,P＜0. 05) 、抗体封闭组(q = 30. 91,P＜0. 05) 分别与靶向组比较差异有统计学意义.经激光(1 W/cm2,5 min) 辐照后纳米粒能够发生相变,增强超声显像并能使局部温度升高超过42 ℃,对细胞具备光热治疗的能力,而靶向组诱导细胞凋亡比例[(79. 49 ± 2. 22) ％]明显高于非靶向组[(24. 23 ± 1. 95) ％,P＜0. 05].结论成功制备了靶向新生血管诊疗一体化超声分子探针,其具有良好的靶向能力,可用于增强超声显像及光热治疗.     

载吲哚菁绿与阿霉素靶向纳米粒用于视网膜母细胞瘤体外成像的实验研究

目的：制备一种靶向叶酸受体的载吲哚菁绿（indocyanine green,ICG）及阿霉素（adriamycin,ADM）的相变型多功能脂质纳米粒（ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM）并研究其基本性质,检测其靶向能力、光热效应、超声及光声双模态显像能力,为视网膜母细胞瘤的诊断提供新策略。方法：采用双乳化法制备ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒,透射电镜观察纳米粒形态,马尔文粒径分析仪检测粒径及电位,紫外分光光度计检测纳米粒的包封率、载药量;流式细胞术量化及激光共聚焦显微镜下观察纳米粒表面叶酸表达情况和体外寻靶能力;CCK-8法检测ICG/FA/Pct-PFPNP纳米粒的生物安全性;近红外激光（808 nm）激发ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒,检测其超声/光声双模态显像能力。结果：成功制备了ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒,其外观呈球形,平均粒径为（374.40±23.48） nm,平均电位（-28.0±4.5） mV。测得ICG包封率为（91.85±2.98）%,载药量为（9.19±0.29）%;ADM包封率为（62.04±5.10）%,载药量为（6.20±0.51）%。流式细胞术和激光共聚焦显微镜结果均显示纳米粒表面叶酸表达情况良好,靶向组与Y79细胞连接率为（96.57±3.17）%,与非靶向组、抗体封闭组相比差异具有统计学意义（F=1537.6,P＜0.05）。CCK-8结果显示ICG/FA/Pct-PFPNP纳米粒没有明显的细胞毒性。ICG/FA/Pct-PFPNP：ADM纳米粒经激光辐照后能发生液气相变,增强超声显影并能使局部温度上升至60.8 ℃。光声信号随纳米粒浓度升高而增强,具有良好的线性关系。结论：成功制备了载吲哚菁绿与阿霉素的靶向相变型纳米粒,其靶向能力好,光热效应佳,增强超声及光声显像效果好,可以用于视网膜母细胞瘤的诊断。     

靶向壳聚糖新型纳米药物体外抗胰腺癌细胞的实验研究

目的 合成靶向表皮生长因子受体（EGFR）壳聚糖吉西他滨纳米粒,研究其在体外胰腺癌细胞的靶向性及对细胞增殖的影响。方法 采用壳聚糖制备EGFR-吉西他滨-壳聚糖纳米粒（G-GC-Dox）、吉西他滨-壳聚糖纳米粒（GC-Dox）。在体外实验研究中将药物作用于EGFR+胰腺癌细胞系SW1990细胞,研究胰腺癌细胞体外摄取实验,并采用四甲基偶氮唑蓝法（MTT）法观察该体系对胰腺癌SWl990细胞生长增殖的影响。结果 EGFR-吉西他滨-壳聚糖纳米粒组体外SW1990胰腺癌细胞平均摄取纳米药物的量明显强于同一时间点吉西他滨-壳聚糖纳米粒组平均摄取纳米药物的量。G-GC-Dox组处理12、24、48h后细胞存活率（43.14%±2.51%、31.21%±2.37%、18.26%±2.75%）对比GC-Dox组（64.22%±3.11%、45.43%±3.04%、35.23%±3.15%）对肿瘤细胞具有更好的抑制作用（P<0.05）。结论 本实验成功研制了靶向EGFR壳聚糖吉西他滨纳米粒,并证实了该纳米粒能提高药物在体外胰腺癌细胞的靶向性,同时对胰腺癌SW1990细胞增殖具有明显抑制作用,可能为将来靶向治疗胰腺癌提供新的研究思路。     

3种体外培养方法诱导骨髓间充质干细胞向心肌细胞分化效果比较

目的：采用3种体外培养方法对骨髓间充质干细胞（BMSCs）进行诱导分化,探讨体外诱导BMSCs向心肌细胞分化的最佳方法。方法：采用密度梯度离心法结合贴壁培养法体外分离培养大鼠BMSCs,分为5-氮胞苷（5-aza）组、扩张型心肌病（DCM）模型大鼠心肌细胞裂解液组和DCM模型大鼠血清+5-aza组,同时设对照组（同等条件下在含10%胎牛血清的L-DMEM培养基中培养）,观察细胞形态表现,采用RT-PCR法、Western blotting法和免疫组织化学染色法检测细胞中肌钙蛋白T（cTnT）的表达。结果：密度梯度离心法结合贴壁培养法获得大鼠BMSCs,BMSCs高表达间充质干细胞（MSCs）的特征性表面标记CD44、CD29和CD105,不表达造血干细胞的特征性表面标志CD34;特定诱导条件下,BMSCs可以向成骨细胞及脂肪样细胞分化。体外3种培养方法均可诱导BMSCs表达cTnT,分化为心肌样细胞;5-aza组细胞生长状态差,其余2组细胞生长状态较好,DCM模型大鼠血清+5-aza组细胞中cTnT阳性表达率最高。结论：采用DCM模型大鼠血清联合5-aza诱导BMSCs向心肌细胞分化的效果最佳。     

人皮下和髌下脂肪垫干细胞治疗大鼠骨关节炎的疗效比较

 目的 比较人皮下和髌下脂肪垫干细胞体外增殖、成软骨分化潜能以及体内治疗大鼠骨关节炎的疗效差异。方法 获取上海市东方医院未患代谢性相关疾病患者的皮下和髌下脂肪垫组织,从髌下脂肪垫中分离原代脂肪干细胞（adipose-derived stem cells,ASCs）,体外诱导成脂、成骨、成软骨方向分化。EdU检测人皮下脂肪干细胞（subcutaneous ASCs,Sc-ASCs）和髌下脂肪垫干细胞（infrapatellar fat pad derived stem cells,IPFP-ASCs）体外增殖能力,流式细胞术检测干细胞表面标记蛋白CD34、血管相关标记蛋白CD31的表达。阿尔新蓝染色及Western blot检测Sc-ASCs和IPFP-ASCs体外成软骨潜能。体内实验采用8周SD大鼠随机分为对照（control,CON）组、内侧半月板不稳术（destabilisation of the medial meniscus,DMM）组和DMM手术后Sc-ASCs治疗组,DMM手术后IPFP-ASCs治疗组,通过大体观察、番红固绿染色及OARSI评分比较体内治疗效果。结果 人髌下脂肪垫组织中分离获得ASCs,形态呈长梭形,在体外具有成脂、成骨、成软骨分化潜能。Sc-ASCs和IPFP-ASCs表面标记蛋白CD34和血管相关标记蛋白CD31表达无显著性差异,但人IPFP-ASCs体外增殖能力较强。阿尔新蓝染色及Western blot显示IPFP-ASCs体外成软骨能力较强。体内大鼠实验大体形态学观察显示DMM组骨赘增多,软骨表面缺损,Sc-ASCs治疗组骨赘减少,IPFP-ASCs治疗组表面较光滑,无明显骨赘生成;番红固绿染色显示DMM组软骨层出现垂直裂缝且到达钙化软骨,Sc-ASCs治疗组关节面纤维化且软骨浅表层存在垂直裂隙,IPFP-ASCs治疗组软骨层较为连续,仅存在轻微纤维化;OARSI评分显示IPFP-ASCs治疗骨关节炎疗效更好。结论 人IPFP-ASCs体外增殖能力、成软骨分化潜能以及体内治疗大鼠骨关节炎的效果优于Sc-ASCs。     

JNK酶活性下调对人前列腺癌、肝细胞癌和乳腺癌细胞生长的抑制作用

目的：通过c-Jun氨基末端激酶（JNK）抑制剂SP600125和脂质纳米粒子包裹的JNK-siRNA 2种方法在体内和体外分别对JNK基因的表达进行干扰,探讨下调JNK酶活性在肿瘤治疗中的作用。方法：体外实验,将实验分为siRNA组和抑制剂SP600125组。在siRNA组中,使用JNK-siRNA及其对照NC-siRNA分别转染人前列腺癌细胞（PC细胞）、人肝细胞癌细胞（SMMC-7721细胞）和人乳腺癌细胞（MCF-7细胞）;在抑制剂SP600125组中将SP600125导入肝细胞癌细胞中,采用Western blotting法检测转染JNK-siRNA和SP600125后人前列腺癌、肝细胞癌和乳腺癌细胞中JNK或磷酸化JNK（p-JNK）蛋白表达水平;采用WST-1增殖实验检测各组肿瘤细胞的细胞活力。体内实验,通过皮下注射SMMC-7721细胞建立小鼠皮下肝细胞癌移植瘤动物模型,将8只小鼠饲养至肿瘤生长至3 mm×3 mm,再将模型小鼠随机分为抑制剂SP600125组和阴性对照组,JNK-siRNA组和NC-siRNA对照组,共4组,各组小鼠分别瘤内注射5 nmol SP600125、阴性对照溶液、脂质纳米粒子包裹的JNK-siRNA和NC-siRNA阴性对照,观察各组小鼠肿瘤体积;采用免疫组织化学染色检测肿瘤组织中JNK或p-JNK蛋白表达。结果：体外实验,与NC-siRNA对照组比较,JNK-siRNA组人前列腺癌、肝细胞癌和乳腺癌细胞中JNK蛋白表达水平降低（P<0.01）,抑制剂SP600125组肝细胞癌细胞中p-JNK蛋白表达水平较其阴性对照组明显降低（P<0.01）。体内实验,以肝细胞癌细胞为例,抑制剂SP600125组小鼠肿瘤体积较阴性对照组明显减小,而JNK-siRNA组与其阴性对照组比较肿瘤体积变化不明显。免疫组织化学染色,抑制剂SP600125组小鼠移植瘤组织中p-JNK蛋白表达量和JNK-siRNA组小鼠移植瘤组织中JNK蛋白表达量较各自阴性对照组降低（P<0.01）。结论：在体外和体内实验中下调JNK酶活性在体内和体外均能降低JNK基因的表达水平,进而抑制肿瘤细胞的生长。     

T淋巴细胞体外发育方法的研究进展

T淋巴细胞（简称T细胞）在细胞过继免疫治疗（ACT）中发挥重要作用,利用T细胞体外发育方法可获得来源稳定且获取简便的T细胞,相比从自体或同种异体组织分离得到T细胞的传统方法更有优势。目前T细胞体外发育方法有胎儿胸腺器官培养、重组胸腺器官培养和Notch信号驱动的二维培养三种。其中胎儿胸腺器官培养操作简便,离体胸腺在体外培养即可支持T细胞分化发育至成熟,但完整的胸腺导致培养物维持时间有限、细胞收获困难;重组胸腺器官培养将各类胸腺基质细胞分散再重组构建三维培养环境,在体内外实验中均可支持T细胞成熟,但生物材料和三维环境导致培养物维持时间和细胞产量均受限;Notch信号驱动的二维培养采用人工呈递Notch信号通路配体来驱动T细胞分化发育,培养体系结构简单且稳定,但仅能支持T细胞发育至早期未成熟阶段。本文综述了上述培养方法的研究进展和不足之处,并讨论了T细胞体外发育未来发展的要求和方向,以助力ACT的推广和应用。     

小鼠骨髓耐受性树突状细胞的体外培养与鉴定

目的 建立一种简单经济的小鼠骨髓耐受性树突状细胞(DC)的培养方法,为进一步研究耐受性DC在自身免疫性疾病治疗中的运用打下基础。方法 取小鼠的骨髓细胞作为DC的前体细胞,加入细胞因子rmGM-CSF和IL-4,分成磷酸酯多糖(LPS)-DC和单纯DC两组,前者在培养结束前18h加入LPS,后者不加;培养6d后收集疏松贴壁细胞进行形态、细胞表面标记以及免疫功能的鉴定。结果 用此方法培养的细胞其表面CD11c的表达率超过76%,具有典型的DC形态。单纯组DC的细胞中度表达MHCⅡ类分子,低水平表达共刺激分子,刺激T细胞增殖的能力较弱;LPS-DC组细胞高水平表达MHCII类分子和共刺激分子,能够诱导T细胞大量增殖。结论 利用此法能在体外培养出大量的未成熟DC,具有耐受性,为其在治疗自身免疫性疾病的应用奠定了基础。     

表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)与Ni2+共同作用对舌鳞癌细胞cyclinD1和survivin基因表达的影响

 目的 研究表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)及镍离子(Ni2+)共同作用对舌鳞癌细胞系Cal-27 cyclinD1和survivin基因表达的影响。方法 MTT法检测Cal-27的细胞存活率;real-time PCR法检测cyclinD1及survivin mRNA水平表达的影响;Western blot法检测cyclinD1和survivin蛋白水平的表达情况。结果 高浓度EGCG(>100 μmol/L)可明显抑制Cal-27生长,且对细胞cyclinD1和survivin基因转录及蛋白表达有明显下调作用(P<0.05);Ni2+与EGCG 共同作用增加了对Cal-27的抑制作用,cyclinD1和survivin表达更加显著下降(P<0.05)。结论 Ni2+与EGCG 共同作用后可增强EGCG对细胞生存率及cyclinD1和survivin基因表达的抑制作用,两者起协同作用。     

槐耳浸膏对嘌呤霉素氨基核苷所致体外小鼠肾小球足细胞损伤的保护作用及其机制

目的：探讨槐耳浸膏对嘌呤霉素氨基核苷（PAN）处理小鼠体外肾小球足细胞滤过率、活动力和细胞骨架重排的影响,阐明槐耳浸膏对足细胞损伤的保护作用及机制。方法：体外培养的足细胞随机分为对照组、模型组和实验组,其中模型组足细胞以50 mg·L^-1 PAN作用24 h,实验组足细胞经10 g·L^-1槐耳浸膏处理1 h后再换用含50 mg·L^-1 PAN的培养液作用24 h。采用两室弥散系统检测足细胞对异硫氰酸荧光素标记的白蛋白（FITC-BSA）的滤过率,细胞划痕实验检测足细胞划痕修复率,Transwell细胞迁移实验检测穿膜细胞数,激光共聚焦显微镜观察Invitrogen鬼笔环肽直接荧光标记足细胞纤维状肌动蛋白（F-actin）后细胞骨架的重排情况。结果：与对照组比较,模型组足细胞FITC-BSA滤过率明显升高（P<0.01）;与模型组比较,实验组足细胞FITC-BSA滤过率明显降低（P<0.01）。与对照组比较,模型组足细胞划痕修复率和穿膜细胞数均明显升高（P<0.05）;与模型组比较,实验组足细胞划痕修复率和穿膜细胞数均明显降低（P<0.05）。与对照组比较,模型组足细胞F-actin表达水平明显降低（P<0.01）,F-actin重排率明显升高（P<0.01）,足细胞骨架结构紊乱;与模型组比较,实验组足细胞F-actin表达水平明显升高（P<0.01）,F-actin重排率明显降低（P<0.01）,骨架重排情况明显缓解。结论：槐耳浸膏能够降低病理状态下的体外足细胞对牛血清白蛋白的滤过率,其机制可能与槐耳浸膏降低了足细胞活动力,进而改善体外足细胞骨架的重排有关。     

微型CT检测随机负荷疲劳试验后不同根管充填材料对牙根抗折性的影响

目的：采用微型CT检测体外疲劳试验后牙根的裂纹，探讨2种不同根管充填材料对牙根抗折性的影响。方法：60颗新鲜拔除的人单根管前牙随机分为对照组、OrthoMTA组和Gutta-Percha+AH-plus组，每组20颗。全部样本去除牙冠后使用BLX镍钛系统预备根管，对照组不进行根管充填，OrthoMTA组采用OrthoMTA根管充填，Gutta-Percha+AH-plus组采用Gutta-Percha和AH-plus封闭剂充填。将所有样品置于机械循环机（500~1 500N，2Hz正弦交替，循环7 200次）进行体外疲劳试验。采用微型CT检测各组牙根内部裂纹并进行裂纹严重程度评分。结果：微型CT扫描，受力后对照组、OrthoMTA组和Gutta-Percha+AH-plus组大部分牙根出现了不同程度裂纹，包括不完全裂纹、完全裂纹以及2种裂纹并存，且绝大多数裂纹方向为近远中方向。OrthoMTA组牙根裂纹评分低于对照组，但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）；Gutta-Percha+AH-plus组牙根的裂纹评分高于对照组，但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）；OrthoMTA组牙根裂纹评分低于Gutta-Percha+AH-plus组，但组间比较差异无统计学意义（P>0.05）。结论：随机负荷疲劳试验证实体外牙体阻力模型制备成功。OrthoMTA完全根管充填和Gutta-Percha+AH-plus根管充填对牙根抗折性的影响无明显差异。     

孕激素受体靶向聚乳酸-羟基乙酸-超顺磁性氧化铁分子探针的制备及其性能

目的：探讨载孕激素受体（PR）靶向聚乳酸-羟基乙酸（PLGA）-超顺磁性氧化铁（SPIO）及全氟己烷（PFP）分子探针（PR-s-PFP/PLGA）的构建方法及其对乳腺癌细胞体外靶向结合的可行性。方法：制备s-PFP/PLGA纳米颗粒,检测s-PFP/PLGA纳米颗粒的直径和平均电位。细胞毒性实验不同浓度s-PFP/PLGA条件下检测各组细胞相对增殖率（RGR）。观察不同浓度s-PFP/PLGA纳米颗粒的体外磁共振成像（MRI）、体外光声成像和体外超声成像,高强度聚焦超声（HIFU）检测s-PFP/PLGA纳米颗粒辐照后回声强度值。采用碳二亚胺法制备PR-s-PFP/PLGA探针,体外培养高表达PR的乳腺癌细胞株T-47d,将DiO绿色荧光标记的T-47d细胞分为靶向显像剂组、非靶向组和空白对照组,观察探针与各组细胞的结合情况。结果：透射电镜下s-PFP/PLGA呈球形,SPIO颗粒均匀分布在外壳上,平均粒径为（738.5±181.2） nm,平均电位为（-15.8±5.7） mV,并检测到明显光声信号。体外超声显像中s-PFP/PLGA纳米颗粒呈点状高回声,HIFU辐照后其回声强度值增大。s-PFP/PLGA纳米颗粒在T1加权图像上的信号得到增强。在激光扫描共聚焦显微镜下,靶向显像剂组被T-47d细胞吞噬的s-PFP/PLGA纳米颗粒发出红色荧光。结论：PR-SPIO-PLGA具有优良的理化性质及稳定性,生物安全性好,肿瘤靶向结合能力强。     

低频脉冲电磁场通过IGF-1R/NO信号通路促进大鼠颅骨成骨细胞成熟及矿化

目的: 观察低频脉冲电磁场（PEMF）是否通过胰岛素样生长因子1受体（IGF-1R）/一氧化氮（NO）信号通路促进大鼠颅骨成骨细胞成熟及矿化。方法: 体外分离培养乳鼠颅骨成骨细胞,传代后随机分成9组,每天用50 Hz 0.6 mT PEMF处理不同的时间,通过检测成骨细胞中NO含量确定PEMF最佳处理时长。将传代后的成骨细胞随机分成空白对照组、PEMF组、GSK（IGF-1R阻断剂）组、PEMF+GSK组,PEMF处理成骨细胞3 d后,采用蛋白质印迹法检测蛋白激酶（AKT）、诱导型一氧化氮合酶（iNOS）和cGMP依赖性蛋白激酶（PKG）蛋白表达水平;PEMF处理第6天时测定碱性磷酸酶（ALP）活性;PEMF处理第12天时采用茜红素染色法观察钙化结节形成情况。结果: 经1.5 h电磁场处理后的成骨细胞中NO含量显著提高（P < 0.01）,遂后续采用PEMF处理1.5 h。与空白对照组比较,PEMF组AKT、iNOS、PKG蛋白表达量增加（均P < 0.01）,ALP活性升高（P < 0.05）,且茜红素染色面积增大（P < 0.01）;GSK组AKT、iNOS、PKG蛋白表达量减少,ALP活性降低（P < 0.05）,茜红素染色面积最小（P < 0.01）;PEMF+GSK组上述实验结果均高于GSK组但低于PEMF组（P < 0.05或P < 0.01）。结论: PEMF可能通过IGF-1R/NO信号通路促进大鼠颅骨成骨细胞成熟与矿化。