高压氧吸氧持续时间与脑出血大鼠模型神经细胞损伤因子水平的关系

目的研究高压氧(HBO)吸氧持续时间与脑出血(ICH)大鼠模型神经细胞损伤因子水平的关系。方法健康清洁级成年雄性SD大鼠150只, 采用随机数字表法分为正常对照组、ICH组和4个HBO组(A组、B组、C组和D组), 每组25只。正常对照组大鼠不作处理, ICH组和HBO组大鼠以胶原酶诱导法建立ICH模型。4个HBO组于ICH造模后6 h进行HBO干预, 吸氧持续时间分别为40、60、80、100 min。每组分别于第1、3、5、7、14天各处死5只大鼠取材。观察各组大鼠不同时间点的脑组织含水量及病理学变化, 采用免疫组化法和实时荧光定量PCR法检测各组大鼠不同时间点血肿周边脑组织中B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)表达及其mRNA水平。结果第1天, ICH组、4个HBO组大鼠的脑组织含水量均高于正常对照组(P<0.05)。除正常对照组外, 其他各组大鼠的脑组织含水量均呈先增后减的趋势, ICH组大鼠在第3天达到最大值, 4个HBO组大鼠于第5天达到最大值。正常对照组大鼠脑组织血管结构清晰, 细胞核及核膜清晰可见, 未见明显组织肿胀、细胞坏死以及胶质...     

脑损伤后大鼠海马差异蛋白质组学分析

目的 研究脑损伤后大鼠海马组织蛋白质组差异表达变化情况.方法 采用侧方液压冲击装置,建立大鼠中度脑损伤模型,分别取外伤组(3只)与假手术组(3只)大鼠海马组织总蛋白,通过差异荧光双向凝胶电泳(DIGE)分离蛋白,获得蛋白质分离图谱,经胶内酶切、抽提酶解肽段、MALDI-TOF/TOF质谱分析研究差异的蛋白质点,鉴定出变化的蛋白质.结果 经De-Cyder 5.0及BVA图像分析软件比较,发现17个蛋白点表达水平具有显著差异变化.鉴定出的蛋白质考染点含有14个蛋白质,2个为同一种蛋白,实际差异蛋白数为13个.依其功能属于细胞骨架蛋白、介导能量代谢的酶类、参与核酸合成及氧化应激反应的蛋白质、神经突触功能蛋白、细胞内信号传递蛋白及未知蛋白. 结论脑损伤后大鼠海马组织蛋白质表达谱存在差异,并初步鉴定出脑损伤后差异表达蛋白,为深入研究脑损伤的病理机制奠定基础.     

siRNA沉默EPAS1基因对低氧条件下大鼠PASMCs增殖的影响

目的 探讨应用siRNA技术沉默EPAS1 (HIF-2α)基因表达对低氧条件下培养的大鼠肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖的影响.方法 原代培养大鼠PASMCs共采用免疫荧光法进行鉴定.构建特异性EPAS1 siRNA脂质体,转染PASMCs,从3个干扰靶点中选取效果最好的靶点进行干扰;在常氧(37℃、5％CO2、20％O2)和低氧(37℃、5％CO2、2％O2)条件下分别培养24、48、72h,采用Western blotting检测PASMCs中EPAS1、VEGF蛋白的表达水平,CCK-8法检测细胞增殖情况.结果 成功分离培养原代大鼠PASMCs并经免疫荧光鉴定证实.将特异性的EPAS1 siRNA脂质体转染到PASMCs,选择干扰效果最好的靶点2进行干扰.与常氧条件比较,低氧条件下PASMCs中VEGF蛋白的表达及细胞增殖水平均明显升高;沉默EPAS1后,无论低氧还是常氧条件下,PASMCs中VEGF蛋白的表达及细胞增殖水平均明显降低.结论 EPAS1基因参与了低氧条件下大鼠PASMCs增殖的调控,其调节可能是通过VEGF介导完成的.     

基于聚焦超声联合微泡诱导的脑出血大鼠模型

目的 探讨基于聚焦超声（FUS）技术联合超声微泡（MB）构建大鼠脑出血（ICH）模型的可行性。 方法 将20只成年SD雄性大鼠随机分为4组,每组5只。其中1组为实验组,静脉注射MB后立即接受FUS处理20 min;其余3组为对照组[FUS组、MB组、磷酸缓冲盐溶液（PBS）组]。模型建立后6 h,参照运动损伤评分量表（MDS）评估大鼠模型的运动功能损伤情况。所有大鼠均取脑组织标本行病理组织学分析。分析4组大鼠的T₂WI和磁敏感加权成像（SWI）影像表现,并与病理学特征进行对照。 结果 实验组5只（100%）大鼠建模成功,MDS评分为8.20±1.92分,均存在运动功能受损;3个对照组大鼠MDS评分均为0分,运动功能未见明显损伤。实验组大鼠于SWI上可见出血灶,表现为左侧尾状核区类圆形低信号影;T₂WI上出血灶呈不均匀低信号,伴周围高信号水肿带。脑组织切块标本示左侧尾状核区类圆形出血灶,HE染色切片显示该区域脑组织结构疏松、广泛出血,并可见血管内皮增生肿胀及炎性细胞浸润。3个对照组的大鼠左侧尾状核区MRI表现及组织病理学均表现正常。 结论 FUS联合MB建立大鼠ICH模型成功率较高,该方法无需手术、操作简单且可重复性高,应用前景广泛。     

大鼠脑出血后脑水肿演化规律及其神经行为学变化研究

目的：探讨脑内出血（ICH）后脑水肿形成和发展的演化规律及其与神经行为学缺陷的关系。方法：应用自体血注射建立ICH大鼠模型,分别于不同时间点观察脑组织含水量和神经行为学变化。结果：ICH后血肿周围纹状体和大脑皮层含水量在出血后3 h时即开始逐渐增加,24 h达到高峰,1周时恢复至对照组水平;对侧大脑组织具有明显的远隔影响效应,大脑皮层、纹状体含水量亦有增加,但程度较轻且恢复快,72 h后即可达到对照组水平;幕下结构小脑组织无明显影响。出血侧皮层和纹状体脑组织含水量与神经行为学评分呈负相关。结论：在ICH早期即可有脑水肿形成,24-72 h应为防治脑水肿的关键时期。     

脂肪间充质干细胞外泌体对脑创伤记忆障碍作用及机制研究

目的 探讨脂肪间充质干细胞外泌体对脑创伤记忆障碍的作用及机制。方法 采用差速离心法提取脂肪间充质干细胞外泌体。将24只SD大鼠随机分为对照组、脑创伤组、外泌体组,每组各8只。对照组大鼠不作处理,脑创伤组、外泌体组大鼠采用落体撞击法建立脑创伤模型,外泌体组在模型建立成功后静脉注射脂肪间充质干细胞外泌体300μg。7 d后,通过水迷宫评价大鼠记忆能力,通过湿干重、Tau和S100β蛋白评价脑组织损伤及修复情况。采用酶联免疫吸附法检测大鼠脑组织神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)的表达。采用蛋白免疫印迹法检测大鼠脑组织TrkA和TrkB蛋白表达。结果 脑创伤组大鼠湿干比、Tau和S100β蛋白表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05);外泌体组大鼠湿干比、Tau和S100β蛋白表达水平低于脑创伤组,差异均有统计学意义(P<0.05)。与脑创伤组比较,外泌体组大鼠第2～5天逃避潜伏期缩短,穿越平台次数增加,目标象限时间延长,脑组织NGF、BDNF、TrkA和TrkB蛋白表达升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 脂肪间充质干细胞外泌体能够...     

重型脑损伤大鼠脑组织蛋白质组差异表达

目的 寻找重型脑损伤(severe traumatic brain injury,sTBI)大鼠伤后不同时间的蛋白质组变化规律.方法 提取创伤后3,7和14 d的鼠脑组织总蛋白进行双向凝胶电泳,筛选和鉴定差异蛋白质点.结果 共筛选出17个差异蛋白质点,它们参与细胞代谢、应激与炎症反应等过程.结论 利用双向凝胶电泳技术可寻找到多种参与重型脑损伤病程演进的蛋白质.     

肝再生早期线粒体差异表达蛋白质组分析

目的 探讨线粒体在肝再生早期的作用,寻找肝再生早期的标志蛋白.方法 30只SD大鼠随机均分为70%肝部分切除组(PH组)和假手术组(SH组),每组再分为3个小组,每组5只,手术24h后处死大鼠,取相同部位的肝组织进行检测.PH组和SH组配对,独立重复实验3次;Nycodenz密度梯度离心分离线粒体,二维电泳(2-DE)分离线粒体蛋白质,采用PDQuest 7.4软件分析2-DE图谱;MALDI-TOF MS技术鉴定差异表达蛋白,采用Mascot方法 进行数据检索,对部分差异蛋白进行Western blotting验证.结果 共筛选出25个差异表达蛋白点(P＜0.05);与SH组比较,PH组中有3个蛋白点上调,22个蛋白点下调.质谱技术成功鉴定出其中22个差异蛋白.生物信息学分析显示这些差异蛋白参与了多条代谢途径,如糖代谢、脂代谢、呼吸链和氧化磷酸化、生物转化以及信号转导等.结论 肝再生早期,线粒体通过多条代谢途径对其进行调节;亚细胞蛋白质组学技术有利于寻找肝再生相关的标志蛋白,为肝再生的深入研究提供新的方向和思路.     

大黄素对大鼠颅脑爆震伤的影响及保护作用

目的 观察大鼠颅脑爆震伤后脑组织含水量、一氧化氮(NO)含量和一氧化氮合酶(iNOS)活性变化及大黄素对伤后脑组织含水量、NO含量和iNOS活性的影响. 方法 制作大鼠颅脑爆震伤模型,并应用大黄素进行干预,通过干湿法检测脑组织含水量,通过硝酸还原酶及比色法检测伤后不同时相脑组织NO含量和iNOS活性. 结果 伤后动物脑组织NO含量和iNOS活性均显著升高(P<0.01);模型组脑组织NO含量和iNOS活性均显著升高,2 h已达高峰,大黄素组各时相点NO含量和iNOS活性均明显低于模型组(P<0.01). 结论 大黄素可降低颅脑爆震伤大鼠脑组织含水量并抑制iNOS活性,可能对大鼠颅脑爆震伤后的病理过程有干预保护作用.     

结蛋白和波形蛋白在肌肉损伤和再生过程中的表达及意义

Ｌａｚａｒｉｄｅｓ和Ｈｕｂｂａｒｄ４于１９７６年首次证实结蛋白（ｄｅｓｍｉｎ）的存在，随后Ｆｒａｎｋ１０在１９７８年又从细胞中发现了波形蛋白（ｖｉｍｅｎｔｉｎ）。这两种细胞骨架蛋白的发现为肌肉病理研究开辟了一个新的领域。进入２０世纪９０年代后，关于这两种蛋白在肌肉病理过程中的表达、意义和作用的文献日益增多，研究涉及到肌病病理、肌源性肿瘤的判定、心肌动力学、以及血管平滑肌动力学等众多领域６，９，１７－１９。骨骼肌细胞中结蛋白和波形蛋白同为中等径细胞骨架纤维，又同属于波形蛋白类。中等径细胞骨架纤维遍…     

不稳定型心绞痛患者血浆蛋白标记物的蛋白质组学筛选

目的 分析冠心病不稳定型心绞痛(UAP)与稳定型心绞痛(SAP)患者血浆中的差异蛋白质,筛选可能与UAP早期诊断密切相关的血浆蛋白标记物.方法 分别收集2014年6月-2015年4月南方医科大学第三附属医院UAP及SAP血浆标本各60例,另收集体检科收集的血浆标本作为正常对照组(n=60).随机取对照组(n=10)、UAP组(n=10)与SAP组(n=10)空腹血浆标本各100μl,分别等量混合成3组样本,去除血浆高丰度蛋白后,利用双向差异凝胶电泳(DIGE)技术进行蛋白分离,经差异软件分析后,采集UAP和SAP之间变化2倍以上的差异蛋白质点,利用基质辅助激光解吸电离-飞行时间/飞行时间质谱(MALDI-TOF/TOF MS)对差异蛋白点进行鉴定.每组随机选取40份血浆样本,选取UAP特异性差异蛋白进行ELISA验证.结果 UAP与SAP组患者血浆相比较,共筛选出10个表达量差异2倍以上的差异蛋白点,包括9个上调蛋白点,1个下调蛋白点.经质谱鉴定后,表达上调的蛋白包括纤维蛋白原γ链(FGG)、补体C4-B(C4B)、免疫球蛋白κ链C结构域(IGKC)和血红蛋白α亚基(HBA1);表达下调的蛋白是结合珠蛋白(HP).与对照组比较后,在这些差异蛋白中共找到2个UAP特异性相关蛋白,即IGKC和HP.选取IGKC进行ELISA验证,结果表明,与对照组和SAP组相比较,UAP组样本中IGKC特异性表达上调(P<0.05),与DIGE验证结果一致.结论 筛选到UAP特异性相关蛋白IGKC和HP,IGKC有可能成为UAP早期筛查及诊断的特异性生物标记物.     

髋关节置换术后异位骨化的蛋白质组研究

目的使用蛋白质组方法,通过比较髋关节置换术后并发异位骨化与未并发异位骨化患者血清蛋白,寻找差异表达蛋白,筛选蛋白质标志物。方法收集2009年8月～2012年3月14例髋关节置换术后患者血清,以髋关节置换术后并发异位骨化（heterotopic ossification,HO）记为HO组,以未并发异位骨化为正常组,蛋白质芯片联合表面增强激光解析离子化飞行时间质谱（SELDI—TOF—MS）技术检测分析两组蛋白质表达谱,寻找差异蛋白。对每个质荷比峰值进行Wilconxon秩和检验,筛选P〈0．05的差异蛋白质峰。结果检测到154个高质量质谱蛋白质峰,其中质荷比为2748的蛋白点的峰值较正常组明显下调,匹配蛋白质为“一2一HS糖蛋白B链（Alpha一2一HS．glycoproteinchainB,AHSGB一链）。结论AHSGB一链的低表达与髋关节置换术后并发HO密切相关,可能为HO的敏感蛋白质标志物。     

三氧化二砷诱导NB4细胞凋亡相关基因表达改变的基因芯片研究

目的 利用基因芯片技术研究NB4细胞经三氧化二砷(As2O3)诱导凋亡后的凋亡相关基因表达变化.方法 检索NCBI的Entrez以及Human IPI数据库,通过染色体定位来排除冗余基因,共获得1 384个凋亡相关基因.探针使用软件OligoArray 2.0设计,并作Blast比对.设计基因特异寡核苷酸探针,合成后点样,制备寡核苷酸芯片.用2μmol/L的As2O3处理NB4细胞48h后,提取细胞总RNA,分别以Cy3,Cy5标记对照组及实验组,随后与含1 384个凋亡相关基因的寡核苷酸芯片杂交,使用基因芯片扫描仪对杂交信号扫描,软件分析Cy3和Cy5两种荧光信号的强度和比值,找出经As2O3处理后出现差异表达的基因,并挑选其中差异表达最明显的4条基因,设计引物后与CNDA产物进行PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳进行验证.结果 NB4细胞经2μmol/L As2O3作用48h后共有4个基因表达上调,12个基因表达下调,且RT-PCR验证结果与基因芯片结果完全相符.结论 As2O3可以诱导NB4细胞一系列基因表达的改变,这些涉及信号转导、转录调节、细胞周期、氧化应激、蛋白质的翻译合成及细胞分化等方面基因的差异表达,可能在NB4细胞凋亡中起着重要作用.     

三阴性乳腺癌中溶酶体相关膜蛋白-2表达水平的临床意义及预后价值

目的 探讨溶酶体关联膜蛋白2(lysosome-associated membrane protein 2,LAMP2)表达水平与三阴性乳腺癌(triple negative breast cancer, TNBC)患者临床病理特征及其预后的关系。方法 收集2015年1月至2017年1月在新疆医科大学附属肿瘤医院院确诊并行乳腺癌根治术的104例TNBC患者的临床病理资料,调取患者冻存癌组织及癌旁组织标本,使用蛋白质印迹法(Western Blot,WB)检测TNBC癌组织及癌旁组织中LAMP2表达,验证LAMP2表达水平与TNBC患者的临床病理特征及总生存(overall survival,OS)的关系。使用单因素及Cox多因素回归分析TNBC患者的预后因素。结果 WB实验结果显示,LAMP2在TNBC癌组织中表达水平显著高于癌旁组织(P<0.05)。LAMP2表达与TNBC患者TNM分期、淋巴结转移及组织学分级相关,结果有统计学差异(P均＜0.05)。生存分析结果显示,截至2022年1月25日,LAMP2高表达组5年生存率显著低于低表达组(P< 0.05)。单因素及Cox多因素回归分析：TNM分期及LAMP2表达水平是TNBC患者独立预后因素,结果有统计学差异(P＜0.05)。结论 LAMP2在TNBC癌组织及癌旁组织中差异表达,LAMP2高表达可能与患者TNM分期、淋巴结转移及组织学分级相关,更高的LAMP2的表达可能预示着患者更差的预后。     

鼻咽癌细胞放射敏感性的比较蛋白质组学研究

目的 探讨与鼻咽癌细胞放射敏感性相关的并可能预测鼻咽癌细胞放射敏感性的蛋白质。方法 以人鼻咽癌细胞株CNE-2诱导建立放射抗拒的鼻咽癌细胞株CNE-2(R743),通过克隆形成实验及流式细胞术检测以比较CNE-2和CNE-2(R743)细胞的放射敏感性及细胞周期的特征。提取细胞总蛋白质,进行双向凝胶电泳,Image Master 7.0图像分析软件分析图谱以识别差异蛋白质点,MALDI-TOF/TOF肽质量指纹图谱分析,蛋白质质谱数据库搜索鉴定差异蛋白。应用RT-PCR和Western blot验证2种细胞中相关差异蛋白的表达。 结果 得到7个差异表达较显著的蛋白质,与CNE-2相比较,CNE-2(R743)细胞中6个上调,1个下调。Western blot及 RT-PCR证实膜联蛋白A2、原肌球蛋白及糖调节蛋白78在CNE-2(R743)的表达均上调(t=24.22、24.20和29.19,P<0.05),与蛋白质组学结果一致。结论 不同放射敏感性鼻咽癌细胞存在差异表达的蛋白质,其中膜联蛋白A2、原肌球蛋白及糖调节蛋白78有可能成为预测鼻咽癌细胞放射敏感性的候选生物标志物。     

抗抑郁剂地昔帕明与氟西汀对慢性应激大鼠海马基因表达的影响

目的：研究抗抑郁剂相关的基因。方法：采用不同应激方式交替持续应激20d造成大鼠慢性应激损伤模型，提取大鼠海马组织总RNA，行逆转录聚合酶链反应。PCR产物上样于聚丙烯酰胺凝胶，银染法分离差异表达的条带，用斑点杂交方法对差异表达片段进行验证，将表达量有差异的条带测序。结果：与慢性应激组相比，地昔帕明可以上调微管相关蛋白基因的表达，氟西汀可以上调一种神经元肌动蛋白结合蛋白树状棘蛋白的基因表达。结论：结果提示地昔帕明与氟西汀可能通过上调中枢神经系统与神经再生有关的蛋白的基因表达而发挥抗抑郁作用。     

CDC42在HBx介导肝细胞恶性转化中作用的定量蛋白质组学研究

目的寻找在乙肝病毒 X 蛋白（HBx）诱发肝细胞恶性转化过程中 CDC42信号通路发挥作用的介导因子。方法利用基于质量亏损的准等重二甲基标记（pIDL）的定量蛋白质组学方法,检测 CDC42基因敲除前后HBx 转基因细胞蛋白质组的差异。筛选差异蛋白并对差异蛋白进行基因本体（gene ontology,GO）功能分析。结果与结论共定量到3409个蛋白,筛选出220个差异蛋白,通过 GO 分析发现与细胞骨架组织相关的 palladin、成蛋白样亚家族1（formin-like 1,FMNL1）和角蛋白-19均发生显著下调。该研究为 CDC42在 HBx 介导 Huh7细胞恶性转化的机制研究提供了候选基因和蛋白。     

iTRAQ串联质谱筛选尾吊小鼠感染空间诱变大肠杆菌后脾脏差异表达蛋白

目的应用同重同位素标记相对与绝对定量技术(iTRAQ),联合液相色谱串联质谱(LC-MS/MS),检测经空间诱变大肠杆菌(T1-13)感染尾吊模拟失重小鼠后,其脾脏组织中的差异蛋白,并探讨其生物学意义。方法 C57BL/6小鼠尾吊模拟失重后以空间诱变大肠杆菌灌胃建立感染模型,采用iTRAQ结合LC-MS/MS技术筛选脾脏组织差异表达蛋白,并对差异蛋白进行GO、pathway富集分析和STRING蛋白互作分析。结果共鉴定出2589个蛋白,尾吊组与对照组相比筛选出378个差异表达蛋白。尾吊染菌后与对照组相比,共筛选出452个差异表达蛋白,STRING蛋白互作网络中有286个差异蛋白间存在相互作用,这些差异蛋白经KEGG分析共得到32条存在显著性的通路,主要为氧化磷酸化通路,代谢通路、蛋白消化和吸收通路、蛋白酶体通路。结论成功筛选出了模拟失重后空间诱变大肠杆菌感染脾脏组织差异表达蛋白,这些差异蛋白可能通过调控代谢通路、不同环境下微生物代谢、颉氨酸/亮氨酸/异亮氨酸降解、溶酶体、碳代谢、吞噬体、丙酸代谢、蛋白酶体参与失重条件下免疫和炎症反应的发生。     

鼻咽癌细胞辐射抗拒的比较蛋白质组学分析

目的 通过分离并鉴定具有不同辐射抗拒的人鼻咽癌细胞株CNE-2R与CNE-2的差异表达蛋白,探讨与鼻咽癌细胞辐射抗拒相关的分子机制.方法 分别提取鼻咽癌辐射抗拒细胞株CNE-2R及其亲本细胞株CNE-2的总蛋白,采用双向凝胶电泳分离,经软件分析识别差异表达蛋白点,应用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱技术(MALDI-TOF-MS)鉴定差异蛋白质.结果 两种不同辐射敏感性的鼻咽癌细胞株CNE-2R和CNE-2中,共筛选出差异表达明显的蛋白质点有32个,其中11个蛋白质被鉴定成功,在CNE-2R中上调的蛋白有3个,下调的蛋白有8个.结论 不同辐射敏感性的鼻咽癌细胞的差异表达蛋白,主要涉及调节凋亡、DNA损伤与修复、细胞周期调控、RNA转录、细胞信号转导、细胞骨架组成及辐射应激反应等多个方面.