EBV转化技术中小鼠腹腔巨噬细胞的作用

EBV转化—融合技术是制备人单克隆抗体(McAb)的重要途径之一。但是,EBV转化技术的难点是在转化后,由于同时被EBV激活的特异性记忆T细胞的细胞毒作用,B细胞     

抗单纯疱疹病毒单克隆抗体的研究——Ⅳ、抗HSV-2淋巴细胞杂交瘤的建立及人脐带血清在杂交瘤建株中的作用

单纯疱疹病毒(HSV)有二个血清型(HSV-1和HSV-2),二型病毒具有不同的生物学特性。对HSV感染进行型别签定,有助于疾病的治疗、预后及流行病学研究。由于二型病毒间存在广泛的交叉反应,用常规抗血清难以鉴别。本文应用细胞杂交技术,建立了产生抗HSV-2型特异性McAb的杂交瘤细胞系,并对人脐带血清在杂交瘤细胞建株中的作用,以及McAb用于临床HSV分离株的分型做了初步探讨。     

杂交瘤细胞的复苏及分泌单克隆抗体稳定性的观察

单克隆抗体(McAb)杂交瘤技术已在医学生物学各个领域中得到广泛应用。为了解杂交瘤细胞冻存一般时间复苏后产生McAb的稳定性,我们复苏了30株杂交瘤细胞,并用其中一部分细胞株制备McAb腹水。本文就杂交瘤细胞复苏后的生长情况及细胞冻存后分泌McAb的稳定性等进行了探讨。     

血红蛋白单克隆抗体的制备及其特性研究

本文报告应用淋巴细胞杂交瘤技术制备了抗人血红蛋白单克隆抗体(Hb-McAb)。经实验证明，Hb—McAb局有特异性强，效价高、使用简便，安全等优点，可作为大肠癌早期诊断的初筛指标。     

人用鼠源性单克隆抗体中鼠源性病毒的检测

加强对人用鼠源性McAb中的鼠源性病毒的检测,对加强McAb人体内应用的质量控制,促进体内应用单抗于临床诊断,预防和治疗均有重要意义。按照我国目前制定的《人用鼠源性McAb生产和质量控制要点》(简称要点)的要求,我们对不同来源的8株分泌McAb杂交瘤细胞株进行了鼠源性病     

恶性疟原虫乳酸脱氢酶单克隆抗体的制备及其特性鉴定

为制备抗恶性疟原虫乳酸脱氢酶（LDHp)单克隆抗体（McAb),并对其特异性进行鉴定。用纯化的LDHp重组抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备McAb,筛选出分泌高滴度McAb的杂交瘤细胞株,测定其免疫球蛋白亚类及其效价,ELISA,Westen blotting试验分析其特异性。结果,制备出2A5和1H10两株能稳定分泌抗LDHpMcAb的杂交瘤细胞株,两株单抗均为IgG2b,2A5和1H10培养上清的ELISA效价分别为1：512和1：256,腹水效价分别为1：25600和1：12800,两株单抗与间日疟,红细胞,弓形虫,日本血吸虫等抗原均不发生交叉反应,能识别恶性疟原虫的33Kda虫源蛋白。证明制备的抗LDHp杂交瘤细胞株能分泌高滴度和高特异性的单抗。     

表面表位包埋法制备肿瘤表面抗原P185neu/c-erbB-2单克隆抗体及其性质研究

目的 :细胞表面表位包埋法 (SEM)是一种选择细胞表面特定的表达分子制备单克隆抗体的新途径。由于P185 neu c erbB 2 是乳腺癌及其他肿瘤的一个重要表面标志 ,这个研究旨在应用SEM法制备特异性好 ,灵敏度高的P185单克隆抗体并分析其特性以便于临床。方法 :采用细胞表面表位包埋法免疫BALB C小鼠 ,常规杂交瘤技术进行细胞融合 ,ELISA法测定 ,有限稀释法克隆化。结果 :筛选得到 3株能稳定分泌抗人癌基因erbB 2产物P185蛋白的McAb杂交瘤细胞。经间接免疫过氧化物酶染色和流式细胞术分析证明该McAb特异性与P185阳性细胞膜结合 ,而不与结构类似的EGFR膜阳性细胞结合。免疫印迹实验证明这些McAb特异地与P185蛋白结合 ,病理切片免疫组化结果证明该单抗对乳腺癌组织呈特异膜阳性反应。结论 :SEM法制备的肿瘤表面抗原P185的McAb杂交瘤具有很好的用于临床诊断肿瘤抗原P185的价值及工程化改造的前景。     

基因重组制备鼠/人嵌合McAb研究进展

利用淋巴细胞杂交瘤技术建立分泌特异性McAb杂交瘤细胞系,从中提取已重排的编码功能性Ig DNA 基因组(组建DNA文库)或成熟的IgH,L链mRNA片段(组建cDNA文库及制备探针),从而获得编码特异性McAb的V区基因。利用基因重组技术,将此来源于小鼠特异性IgH、L链的V区基因分别与编码人IgH、L链的C区基因相重组,构成鼠/人嵌合的Ig重组基因。然后将此重组嵌合Ig基因导入真核表达质粒(多为pSV2-ypt和pSV2-neo)_4经磷酸钙沉淀技术,原生质体融合技术或电穿孔导入技术(以后2种方法较为实用且转化频率较高),将此质粒转染哺乳动物非分泌型骨髓瘤细胞如Sp2/0等,经选择性培养基培养,从中筛选分必完整功能性的鼠/人嵌合McAb。将此cMcAb临床应用于人体内进行诊断和治疗时,具有原鼠亲本McAb特异性结合抗原的能力,同时还具备优于亲本鼠McAb的介导补体,细胞对靶抗原的杀伤和吞噬作用。而且不引起过敏反应或干扰治疗效果。从而给临床诊断,治疗恶性肿瘤。病毒,细菌等感染提供了一种新颖的免疫治疗试剂、本文对近年来鼠/人嵌合McAb的研究进展,基本技术及原理,优越性及不足之处作了简要阐述,并认为制备嵌合McAb是今后制备并取代人McAb研制及应用的一种发展趋向。     

SmIgM~+与SmIgG~+B细胞对EB病毒转化敏感性的比较

EB病毒(EBV)转化的B细胞具有优势分泌人IgH的特点。本文应用Panning法分离正常人外周血中SmIgM~+和SmIgG~+B细胞亚群,分别用EBV转化,再与人-鼠骨髓瘤细胞系SHM-D33融合,以转化率和融合率两个指标比较两种B细胞亚群在转化和融合水平的差异。结果表明,SmIgM~+B细胞亚群对EBV转化的敏感性是SmIgG~+B细胞亚群的4～5倍:而融合率无显著差异。部分解释了EBV转化和EBV-杂交瘤技术中人IgM优势分泌现象的原因。所采用的Panning技术还可用于定向生产IgG类人单抗。     

用胰癌患者淋巴细胞制备人型单克隆抗体

作者用胰癌患者淋巴细胞,经人-人杂交细胞瘤法,制备出人型单克隆抗体,报告如下。 材料与方法:用胰癌患者的淋巴细胞与人淋巴母细胞株HO323融合,经克隆培养,制备出人-人杂交瘤细胞。从建立的融合细胞中,选择出对肿瘤特异性高的人型McAb OC_2D,用其对培养细胞株的反应性和免疫细胞化学染色法,探讨此McAb的肿瘤特异性。     

抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原单克隆抗体的研制

目的应用杂交瘤技术制备抗脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的单克隆抗体。方法用脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原免疫雌性Balbc小鼠,取其致敏脾脏淋巴细胞与SP20小鼠骨髓瘤细胞融合。间接ELISA法筛选阳性克隆,制备腹水。检测McAb效价、抗体亚类和杂交瘤细胞核型。结果获得4株阳性杂瘤细胞株,选择一株制备腹水,ELISA效价为1∶2.4×106,中和试验效价1∶1.3×104,蛋白浓度为27.2mgmL。McAb与Ⅱ型Sabin株C抗原(ⅡC)、Ⅰ型Sabin株及Ⅲ型Phizer株D抗原(ⅠD、ⅢD)不发生交叉反应,具有高度特异性。结论成功的制备了针对脊髓灰质炎病毒Ⅱ型Sabin株D抗原的McAb,为进一步研究IPV效力检测奠定了基础。     

抗入巨细胞病毒极早期抗原单克隆抗体的制备（文摘）

作者用杂交瘤技术制备出抗人巨细胞病毒(HCMV)极早期抗原的单克隆抗体(McAb)，探讨HCMV感染的早期临床诊断。     

H5N1流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体的研究

目的 制备抗人流感病毒H5N1株M1蛋白的单克隆抗体,为流感的快速诊断和研究提供新的工具.方法 应用在大肠埃希菌中表达的人H5N1亚型禽流感病毒(A/Anhui/1/2005)株M1蛋白,以纯化的表达产物免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与sp2/0细胞系作细胞融合后,间接ELISA法筛选阳性的杂交瘤细胞,并应用间接免疫荧光法对抗体的特异性进行鉴定.结果 获得3株能稳定分泌抗禽流感病毒M1抗原的McAb杂交瘤细胞株,交叉反应试验及间接免疫荧光检测表明,三株McAb具有型特异性.结论 用H5N1禽流感病毒M1蛋白免疫制备的单克隆抗体,具有一定的交叉反应性,可用于多种亚型甲型流感病毒的检测.     

小鼠杂交瘤腹水、实体瘤及血清中单抗滴度观察

<正> 单克隆抗体(McAb)的生产常规都是将杂交瘤细胞注入同系小鼠腹腔诱发其产生腹水而获得。但在制备腹水的过程中,常可见到小鼠腹腔生长成大量实体瘤而影响腹水的产生。为了能及时获得所需的McAb,我们在制备抗B型葡萄球菌肠毒素(SEB)McAb腹水的过程中,比较了实体瘤与相应鼠腹水和血清中所含特异性McAb的滴度。     

抗人甲胎蛋白单克隆抗体的研制及其应用

本文报告将自制的人甲胎蛋白(AFP)抗原免疫小鼠,采用常规杂交瘤技木融合小鼠的脾细胞和SP2/0细胞。经有限稀释法克隆出九株分泌抗人AFP单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。分别用血凝抑制试验、琼脂双扩散、ELISA和放射免疫分析等方法鉴定了McAb对抗原的表位特异性、亲和力及其稳定性和小鼠Ig亚类属性。实验结果表明几种McAb分别作用于AFP抗原上相同或不同的抗原表位。其中大多数McAb具有较高的亲和力。抗原表位特异性不同的McAb在免疫沉淀反应中有协同作用。本文报告的AFP McAb双位点夹心ELISA,对一些临床标本的检测结果与AFP放射免疫试剂盒的结果有着良好的相关性。     

人促甲状腺激素单克隆抗体的制备及鉴定

目的：制备特异性强、灵敏度高的人促甲状腺激素（hTSH）单克隆抗体,为建立高灵敏性和高特异性的hTSH检测方法奠定基础。方法：人工合成人促甲状腺激素（hTSH）上的28个氨基酸,采用戊二醛交联法与牛血清白蛋白（BSA）构建完全抗原。用人工免疫原免疫BALB／c小鼠,利用杂交瘤技术建立分泌抗hTSH单克隆抗体的杂交瘤细胞,并对得到的单抗进行鉴定。结果：建立了一株杂交瘤细胞4E5,制备了腹水单抗,经鉴定,抗体重链属于IgG1类型,轻链属于K型,McAb腹水ELISA效价达1：1．6×10^5,与促黄体生成激素（LH）、促卵泡激素（FSH）、人绒毛膜促性腺激素（HCG）无明显交叉反应,细胞株冻存复苏后抗体分泌稳定。结论：本实验建立的细胞株显示稳定性好,特异性高,McAb腹水效价高,为进一步提高hTSH检测的灵敏性和简便性提供依据。     

妊娠相关血浆蛋白-A单克隆抗体的制备和初步鉴定

目的制备娠相关血浆蛋白-A（PAPP-A）单克隆抗体（McAb）。方法利用PAPP-A抗原免疫Balb／c小鼠，应用杂交瘤技术将免疫小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞（SP2／0）融合，间接ELISA方法对细胞培养上清检测、筛选，建立分泌PAPP—A单克隆抗体的杂交瘤细胞株，扩人培养后，Balb／c小鼠腹腔注射杂交瘤细胞株，产生腹水后，对腹水进行收集、纯化、签定．结果筛选出稳定分泌PAPP—AMcAb的杂交瘤细胞株，Western—blot分析证实McAb与PAPP—A有较高的特异性及敏感性。结论本实验成功制备了抗PAPP—A特异性的McAb，可用于PAPP—A免疫检测方法的建立。     

人单克隆抗体及其在乙肝病毒中的研究

七十年代中期,Kohler和Milstein运用小鼠B细胞杂交瘤技术,开创了体外产生单克隆抗体(McAb)的新纪元。在此基础上,国内外各实验室在不断完善和改进这一新技术的同时,建立了分泌各种各样McAb的杂交瘤细胞系。并且在生物医学的分析研究,疾病的诊疗中,由于McAb的应用也取得了显著成绩。但由于产生的McAb多为异源性的啮齿类抗体,要把它们广泛地用于人类疾病的体内诊疗和预防中受到了很大限制。因此,近年来对制备人源性McAb,建立分泌人McAb的杂交瘤细胞系进行了研究。本文旨在对近年来国内外人McAb研制及其在乙肝病毒(HBV)中的研究概况做一简要回顾。     

抗入巨细胞病毒极早期抗原单克隆抗体的制备(文摘)

作者用杂交瘤技术制备出抗人巨细胞病毒(HCMV)极早期抗原的单克隆抗体(McAb),探讨HCMV感染的早期临床诊断。 作者将HCMV用moiI法感染人胚肺纤维母细胞(HEL)后分离细胞核,与Freund氏佐剂一起免疫BALB/c小鼠,每隔2周追加免疫一次,共4个月。腹腔内追加注入后,将脾细胞和鼠骨髓瘤细胞融合,用酶联免疫吸附法筛选,经过克隆化获得杂交瘤细胞纯株后,     

DNA免疫法研制抗猪繁殖与呼吸综合征病毒M蛋白中和性单克隆抗体

目的：研制抗PRRSVM蛋白的单克隆抗体（McAb），以期获得中和性单克隆抗体。方法：将PRRSVM蛋白的基因克隆入真核表达载体pcDNA3．1，利用构建成的重组真核质粒免疫BALB／c小鼠，采用杂交瘤技术制备抗PRRSVM蛋白的单抗，建立间接ELISA方法筛选阳性克隆。利用试剂盒检测Ig亚类。通过免疫印迹（Western blot）、间接免疫荧光试验（IFA）鉴定McAb的特异性。间接ELISA和病毒中和试验检测杂交瘤细胞上清McAb效价和腹水McAb效价。结果：获得3株可分泌特异性抗PRRSVM蛋白抗体的杂交瘤细胞株，分别命名为1A7、4G3、51：3。1A7和4G3的Ig亚类为IgM。ELISA检测杂交瘤细胞培养上清效价为1：54～1：1024，腹水效价为1：3200～1：10240。同时用Western blot、IFA检测，结果均是阳性。4G3和1AT相对亲和力不同，证明其识别不同抗原位点。1AT和4G3具有病毒中和活性，中和效价达到1：96。结论：获得2株特异性抗PRRSVM蛋白的中和性单抗，为PRRSV诊断和免疫预防研究奠定了重要基础。