软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织α-SMA、TGFβ1表达和I型胶原水平的影响

目的观察软肝化坚颗粒对肝纤维化模型C57小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子(TGF)β1表达和I型胶原水平的影响。方法 40只C57小鼠随机分为4组,分别为正常对照组、模型对照组、软肝化坚颗粒低剂量组及高剂量组,每组10只。采用四氯化碳(CCl4)腹腔注射制造小鼠肝纤维化模型,通过免疫组织化学染色方法检测肝组织中α-SMA、TGFβ1和I型胶原的表达,同时进行肝组织纤维化评分(S)。结果各模型组肝组织α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原表达和纤维化评分与正常对照组比较,差异均具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组、高剂量组肝组织α-SMA和TGFβ1及Ⅰ型胶原评分和纤维化评分较模型对照组均明显降低,差异具有统计学意义(P<0.05);软肝化坚颗粒低剂量组和高剂量组α-SMA、TGFβ1及Ⅰ型胶原评分及肝纤维化评分之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论软肝化坚颗粒可能通过抑制C57小鼠肝组织TGFβ1的产生,进而抑制肝星状细胞(HSC)的活化,减少细胞外基质(ECM)的合成,从而降低I型胶原增生,达到预防和治疗肝纤维化的作用。     

神经生长因子对肝星状细胞生物行为学的影响

目的 探究神经生长因子(NGF)对肝星状细胞(HSCs)增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 对数生长期HSC-T6细胞随机分为对照组(0 ng/ml)、NGF低剂量组(100 ng/ml)、NGF中剂量组(200 ng/ml)和NGF高剂量组(300 ng/ml),采用CCK-8法检测HSC-T6的增殖情况;采用流式细胞仪检测HSC-T6的凋亡情况;采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、Ⅰ型胶原及基质金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP)-1的mRNA表达水平;采用Western印迹检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、p53的蛋白表达变化.结果 与对照组比较,NGF低、中、高剂量组的细胞增殖均受到显著抑制,细胞凋亡率则显著增加,且各NGF处理组之间的这种变化呈明显的剂量依赖效应(P<0.05).NGF低、中、高剂量组细胞中α-SMA、Ⅰ型胶原及TIMP-1的mRNA相对表达水平较对照组均显著下调,并且该变化趋势随着NGF剂量的增加而增强(P<0.05).与对照组比较,NGF低、中、高剂量组细胞中Caspase-3、p53的表达水平均显著增加,各NGF剂量组之间的蛋白表达变化具有明显的剂量依赖性(P<0.05).结论 NGF通过调控TIMP-1、Ⅰ型胶原、Caspase-3和p53等基因的表达抑制HSCs的增殖并诱导其凋亡,这可能为肝纤维化的临床治疗开辟新的思路.     

干扰素α对Ⅰ型胶原及转化生长因子β1基因表达的影响

目的 观察干扰素α(IFN α)对血小板衍生生长因子-BB(PDGF-BB)刺激的大鼠肝星状细胞(HSC)分泌Ⅰ型胶原及转化生长因子β1(TGF β1)基因表达的影响,探讨IFN α抗肝纤维化的可能机制.方法 体外培养大鼠HSC系rHSC-99,分别用0、0.0125、0.0250、0.0500,0.1000、0.2000,0.4000 ng/ml IFN α,PDGF-BB干预和两者共同干预,用四甲基偶氮唑盐实验观察各组对HSC细胞活力的影响,采用逆转录聚合酶链反应方法测定各组对HSC细胞Ⅰ型胶原mRNA和TGF β1 mRNA表达的影响.结果 (1)HSC细胞活力(A值)PDGF-BB干预组为1.35±0.22,空白对照组为0.89±0.12,两组比较,F=16.311,P＜0.05,差异有统计学意义,说明PDGF-BB可提高HSC细胞活力.0.025,0.050、0.100、0.2000,0.400ng/ml IFN α加PDGF-BB共干预组,A值分别为0.84±0.18.0.45±0.15、0.26±0.01、0.33±0.07,0.30±0.06,较空白对照组明显降低,F=7.430,P＜0.05,差异有统计学意义,说明IFN α与PDGF-BB共同作用可抑制HSC细胞活力,且在0.025-0.100 ng/ml范围内随着IFN α浓度的增加其抑制作用越明显.(2)0.050、0.100、0.200ng/ml IFN α加PDGF-BB共干预各组Ⅰ型胶原mRNA相对表达值分别为0.94±0.19、0.61±0.12,0.52±0.02,空白对照组为1.41±0.01,共干预各组比空白对照组均明显降低,F=127.921,P＜0.05,差异有统计学意义.0.050、0.100,0.200ng/mlIFN α加PDGF-BB共干预组各组TGFβ1 mRNA相对表达值分别为1.18±0.06、1.15±0.10、1.39±0.04,空白对照组为1.62±0.12,共干预各组比空白对照组均明显降低,F=82.115,P＜0.05,差异有统计学意义,说明IFN α与PDGF-BB共同作用对HSC细胞Ⅰ型胶原、TGFβ1基因的表达有抑制作用,且随着浓度的增加其抑制作用越明显.结论 IFN α对PDGF-BB诱导的HSC细胞活力及Ⅰ型胶原、TGF β1基因的表达有抑制作用,且随着浓度的增加其抑制作用越明显.这可能是IFN α发挥抗肝纤维化作用的途径之一.     

胶原和生长因子对大鼠肝星状细胞迁移及细胞骨架的影响

目的 观察胶原、生长因子刺激后肝星状细胞迁移变化,并观察生长因子刺激后细胞骨架的变化.方法 分离原代大鼠肝星状细胞,用Transwell小室观察Ⅰ型胶原、Ⅳ型胶原、血小板衍生生长因子-BB、转化生长因子β1直接及趋化刺激后细胞迁移改变,并按不同处理方式分为对照组、转化生长因子β1趋化刺激组、PDGF-BB趋化刺激组、Ⅰ型胶原趋化刺激组、Ⅳ型胶原趋化刺激组、转化生长因子β 1直接刺激组、PDGF-BB直接刺激组、Ⅰ型胶原直接刺激组、Ⅳ型胶原直接刺激组.异硫氰酸荧光素标记的鬼笔环肽标记F-肌动蛋白,共聚焦激光扫描显微镜观察血小板衍生生长因子-BB、转化生长因子β 1刺激后细胞骨架的变化.多组样本均数间差异比较用单因素方差分析.结果 对照组迁移细胞数为每高倍视野(102.93±1.01)个,转化生长因子β 1趋化刺激组及直接刺激组迁移的细胞数分别为每高倍视野(210.17±1.78)个、(131.37±3.15)个,与对照组相比,F值分别为40.84,64.53,P值均<0.05,差异均有统计学意义; PDGF-BB趋化刺激组及直接刺激组迁移细胞数为每高倍视野(319.56±11.71)个、(203.67±7.54)个,与对照组相比,F值分别为40.90、54.57,P值均<0.05,差异均有统计学意义;Ⅰ型胶原趋化刺激组及直接刺激组迁移细胞数为每高倍视野(201.52±11.28)个、(127.20±6.47)个,与对照组相比,F值分别为41.01、36.49,P值均<0.05,差异均有统计学意义;Ⅳ型胶原趋化刺激组及直接刺激组迁移细胞数为每高倍视野(108.14±4.35)个、(108.60±4.10)个,与对照组相比,F值分别为4.94、5.42,P值均>0.05,差异均无统计学意义.血小板衍生生长因子-BB及转化生长因子β1刺激后细胞形态改变,随时间不同出现层状伪足、丝状伪足及应力纤维的改变. 结论 Ⅰ型胶原、血小板衍生生长因子-BB、转化生长因子β1可促进肝星状细胞迁移,血小板衍生生长因子-BB、转化生长因子β1刺激后肝星状细胞的细胞骨架改变.     

白细胞介素10对肝星状细胞激活的调节

目的 探讨白细胞介素10(IL-10)通过血小板衍生生长因子(PDGF)和丝裂原活化激酶(MAPK)信号通路蛋白对肝星状细胞(HSC)激活的影响。 方法 将培养的HSC随机分为4组:1组:对照组;2组:加入1 ng/ml IL-10;3组:加入5 ng/ml IL-10;4组:加入25 ng/ml IL-10。培养2d后,逆转录-聚合酶链反应法检测各组细胞中PDGF mRNA的表达;western blot法检测各组细胞PDGF、MAPK信号通路蛋白细胞外信号调节激酶(ERK)和p38以及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。 结果 1、5、25 ng/ml的IL-10作用后,与对照组相比HSC的ERK、p38以及α-SMA的表达显著降低(F值分别为240.47、21.39、28.86,P值均<0.01),并呈量效依赖关系;5、25 ng/ml的IL-10可以使PDGF表达显著降低(P值均<0.01),并呈量效依赖关系。 结论 IL-10可通过PDGF/MAPK信号通路抑制肝星状细胞激活。     

Wnt3a对肝星状细胞增殖活化以及转化生长因子β/Smad表达的影响

目的 研究Wnt3a对肝星状细胞(HSC)的增殖、活化以及转化生长因子(TGF)β/Smad表达的影响. 方法 重组Wnt3a刺激HSC后,用EDU法测定其对HSC增殖的影响;用Westem blot法检测HSC表达α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGFβ 1、Smad3和Smad7的蛋白水平并比较四者之间的关系,多组间数据的比较用单因素方差分析,双变量相关分析研究数据间相关性.结果 200 ng/ml Wnt3a刺激HSC24h后,其增殖率达到最大(63.00％±2.30％),显著高于未处理组、50 ng/ml、100 ng/ml及150 ng/ml组(P值均＜0.05),而和250、300ng/ml组的差异无统计学意义(P值均＞0.05);随着Wnt3a浓度的增加和刺激时间的延长,HSC表达α-SMA、TGFβ1和Smad3的蛋白水平也随之升高,均在300 ng/ml刺激48h后达到最大值(与3-磷酸甘油醛脱氢酶的灰度比值分别为1.0860±0.0101、1.0346±0.0118、1.0306±0.0122),而Smad7的蛋白水平却随之降低,在300ng/ml Wnt3a刺激48h后达到最小(与GAPDH的灰度比值为0.7736±0.0139),差异均具有统计学意义(P值均＜0.05),并且α-SMA的蛋白表达与TGFβ 1、Smad3的蛋白表达呈正相关(r=0.968,P＜ 0.05;r=0.997,P＜0.01),而和Smad7的蛋白表达呈负相关(r=0.960,P＜0.05).结论 重组Wnt3a能促进HSC的增殖、活化,并上调TGF β/Smad的表达,可能对肝纤维化的形成具有促进作用.     

奥曲肽抗肝纤维化的实验研究

目的 观察奥曲肽(Oct)对大鼠实验性肝纤维化的治疗效果,并探讨其作用机制。方法 用四氯化碳诱导大鼠肝纤维化模型,将实验动物随机分为正常对照组、治疗前模型组、治疗后模型组和Oct治疗组。Oct治疗组给予Oct(50ng/100g)皮下注射,每日2次,连续用药30d,分别用放射免疫法检测血清层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原(PC Ⅲ)及透明质酸(HA)。VG染色法组织切片观察组织病理变化,免疫组织化学法检测肝组织平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子β_1(TGFβ_1)表达及逆转录聚合酶链反应法检测Ⅰ型和Ⅲ型前胶原mRNA表达。结果 治疗前和治疗后模型组大鼠血清HA(ng/L)为121.8±9.5和110.3±13.4,正常对照组为33.1±3.7、LN(μg/L)为85.7±12.1和78.2±7.9,正常对照组为37.1±6.3、PC Ⅲ(ng/L)为35.9±3.5和33.7±2.6,正常对照组为15.6±2.8。Oct组大鼠血清HA为55.8±7.2、LN为43.1±3.4、PC Ⅲ为27.8±3.4,与模型组大鼠比较,差异有显著性,t=2.76～11.07,P<0.05。Oct能显著降低纤维化大鼠肝组织纤维化积分,下调α—SMA和TGFβ_1蛋白质及I型和III前胶原mRNA表达水平。结论 Oct抑制肝星状细胞激活和转化、下调TGFβ_1蛋白质及I型和III型前胶mRNA表达而发挥抗肝纤维化作用。     

生长因子对HSC-T6细胞c-fos和c-jun基因表达的影响

目的 了解血小板衍生生长因子(PDGF)和转化生长因子β(TGF β)分别对肝星状细胞c～fos和c-jun基因表达的影响.方法 在培养的肝星状细胞系HSC-T16细胞中分别加入不同浓度的PDGF(终浓度分别为8、40、200 ng/ml)和TGF β(终浓度分别为0.2,1.0、5.0 ng/ml);于8、24,48、72h四个时间点分别收集细胞,提取细胞总RNA;用逆转录定量PCR法测定c～los和c-jun的基因表达水平.结果 PDGF处理的3组HSC-T6细胞8、24、48、72h时,c-fos基因表达水平均明显高于对照组,并呈剂量依赖性l培养8 h时达到表达最高峰,对照组,PDGF 8 ng/ml组,PDGF 40 ng/ml组,PDGF 200ng/ml组c-fos表达分别为0.63±0.13,1.13±0.19、1.75±0.20、2.40±0.23,3组间差异有统计学意义(F=7.03,P<0.01).TGF β处理的3组HSC-T6细胞8、24,48、72 h时,c-iun基因表达水平均明显高于对照组,并呈剂量依赖性,培养8 h时达到表达最高峰,对照组,TGF β 0.2ng/ml组、TGF β 1.0ng/ml组、TGF β 5.0ng/ml组cjun基因表达分别为0.93±0.13、1.69±0.26、2.34±0.30、2.96士0.37; 3组间差异有统计学意义(F=6.34,P<0.01).结论 PDGF和TGF β分别对肝星状细胞c-los和c-jun基因表达有明显的上调作用.     

结缔组织生长因子和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1shRNA表达质粒对肝星状细胞细胞因子表达及细胞外基质分泌的影响

目的 研究结缔组织生长因子(CTGF)和基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的短发夹RNA(shRNA)表达质粒分别及共转染肝星状细胞(HSC)对CTGF、TIMP-1、I型前胶原(PCI)mRNA表达及细胞外基质(ECM)分泌的影响. 方法 筛选并成功构建靶向大鼠CTGF和TIMP-1有效RNA干扰靶位的shRNA表达质粒,分别及共转染转化生长因子β1刺激活化的大鼠HSC-T6细胞,荧光定量PCR检测各组细胞中CTGF、TIMP-1、PCI mRNA的表达;放射免疫法分析细胞上清液中Ⅲ型前胶原(PCⅢ)、透明质酸(HA)和层黏连蛋白(LN)的含量.组间比较采取方差分析;多组间两两比较采用SNK-q检验. 结果 CTGFshRNA转染和双质粒共转染HSC-T6的CTGFmRNA相对表达量分别为0.59±0.03、0.62±0.01,与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1.00±0.07比较,CTGF mRNA表达量均明显下降,F=66.515,P值均＜0.05,差异有统计学意义;而TIMP-1 shRNA组和双质粒共转染组的TIMP-1 mRNA相对表达量分别为0.66±0.04、0.68±0.03,与空白对照组、CTGFshRNA转染组的1和1.05±0.03比较,TIMP-1 mRNA表达量均明显下降,F=83.835,P值均＜0.05,差异有统计学意义;CTGFshRNA转染、TIMP-1shRNA转染和共转染组的PCI rnRNA相对表达量分别为0.55±0.02、0.57±0.02和0.41±0.01与空白对照组的1比较,PC I mRNA表达量均明显下降,F=709.905,P值均＜0.05,差异有统计学意义;双质粒联合转染对CTGF、TIMP-1、PC I的mRNA表达量抑制作用优于单质粒转染.CTGF shRNA转染、CIGF shRNA转染和双质粒共转染组的PCⅢ含量分别为(78.02±6.50) ng/ml、(79.03±5.47) ng/ml、(53.91±4.01)ng/ml,与空白对照组的(113.79±15.88)比较,PCⅢ含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义; CTGF shRNA转染、CTGF shRNA转染和双质粒共转染组的HA含量分别为(127.36±8.33)ng/ml、(116.55±3.37) ng/ml、(82.84±9.03) ng/ml,与空白对照组的(163.10±7.01)ng/ml比较,HA含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义CTGFshRNA转染、CTGF shRNA转染和双质粒共转染组的LN含量分别为(55.41±9.37)ng/ml、(49.77±6.70) ng/ml、(30.72±1.22) ng/ml,与空白对照组的(83.99±4.67) ng/ml比较,LN含量均明显下降,P值均＜0.05,差异有统计学意义.CTGF shRNA与TIMP-1 shRNA双质粒联合转染对PCⅢ、HA、HA分泌的抑制作用优于单质粒转染.结论 CTGF shRNA.TIMP-1 shRNA可明显抑制HSC的CTGF、TIMP-1、PCI基因表达及ECM的分泌,且shRNA联合干扰效果更显著,有望成为抗肝纤维化基因治疗的有效方法.     

虫草酸和虫草素对肝星状细胞炎症及纤维化发生特性的影响

目的 探讨虫草酸和虫草素对肝星状细胞(HSC)的炎症表型和纤维化发生特性的影响.方法 以内毒素(LPS,100 ng/ml)刺激传代培养的小鼠HSC株JS1的炎症反应,药物处理组在LPS刺激同时用不同浓度(10、50或200 μmol/L)的虫草酸和虫草素处理,采用实时定量逆转录PCR法检测炎症趋化因子单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA的表达;酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中MCP-1蛋白的分泌.用转化生长因子p 1(TGF β 1,10 ng/ml)刺激HSC纤维化反应,药物处理组在TGF β1刺激同时用不同浓度虫草酸和虫草素药物处理,采用Western blot法检测I型胶原和α-平滑肌肌动蛋白的表达.采用双侧t检验作统计学分析. 结果 200 μ mol/L虫草酸和虫草素处理可显著抑制LPS刺激下JS1细胞MCP-1的mRNA和蛋白表达的增加,[mRNA相对表达量:(2.07±0.29)比(3.35±0.26),t=15.90,(1.15±0.23)比(4.17±0.61),t=8.93;蛋白表达量:(1.88±0.06)比(2.33±0.06),t=10.39,(1.47±0.25)比(1.97±0.04),t=4.6,P值均＜0.05];此外各不同浓度药物组可抑制TGF β1刺激下JS1细胞的Ⅰ型胶原和α-平滑肌肌动蛋白蛋白表达的上调,以200μmol/L药物组抑制作用最为明显. 结论 虫草酸和虫草素可减轻LPS刺激下的HSC的炎症表型以及TGF β1刺激下HSC的纤维化反应,这可能是其对肝纤维化治疗作用的主要机制.     

CCl4诱导的肝纤维化小鼠和HSC-T6细胞miR-122水平变化及其意义探讨*

目的 研究微小RNA(miR)-122在肝星状细胞活化/增殖及肝纤维化发生过程中的水平变化及其可能的作用机制。方法 建立CCl₄诱导的C57BL/6小鼠肝纤维化模型,以10 ng/ml转化生长因子-β1(TGF-β1)处理HSC-T6细胞,分别在小鼠体内和肝星状细胞转染miR-122 激动剂和miR-122模拟物以过表达miR-122。采用RT-PCR和Western-blot法检测组织和细胞miR-122、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原、金属蛋白酶组织抑制因子1(TIMP-1)和血小板衍生生长因子(PDGF)表达,采用CCK-8法检测HSC-T6细胞增殖。结果 模型组小鼠肝组织α-SMA表达水平显著高于对照组(9.92±2.12对1.12±0.54,P＜0.01),而miR-122水平显著低于对照组(0.95±0.31对2.07±0.28,P＜0.01);在CCl₄诱导的肝纤维化小鼠,miR-122激动剂转染组肝组织miR-122水平显著高于miR-122激动剂对照组(6.27±1.73对2.78±0.21,P ＜ 0.01);miR-122 激动剂转染组肝组织α-SMA、I型胶原、TIMP-1和PDGF蛋白水平显著下降;在TGF-β1处理的HST-T6细胞,随着处理时间的延长,肝星状细胞α-SMA水平逐渐升高(0h:0.61±0.02,12 h:0.69±0.05, 24 h:0.75±0.01,48 h:1.01±0.03,P＜0.05),而miR-122水平随TGF-β1处理时间的延长而逐渐下降(0 h:0.72±0.05,12 h:0.45±0.01, 24 h:0.37±0.03,48 h:0.29±0.08, P＜0.05);与miR-122 阴性对照转染组比,miR-122模拟物转染组细胞miR-122水平显著增加(178.45±30.62对12.18±2.39,P ＜0.01);Western Blot检测发现miR-122模拟物转染组细胞α-SMA蛋白表达水平显著下调;采用TGF-β1处理HST-T6细胞,与miR-122 阴性对照转染组比,miR-122 模拟物转染组细胞增殖活力显著降低(P＜0.05)。结论 肝纤维化组织细胞miR-122水平下调,而过表达miR-122可抑制肝星状细胞的活化和增殖,从而可能抑制肝纤维化的发生和发展。     

生长素在人肝星状细胞中的抗纤维化作用

目的观察生长素（Ghrelin）对血小板源生长因子-BB（PDGF-BB）刺激的体外培养人肝星状细胞（HSCLX2）前胶原I合成及α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）生成的影响。方法体外培养HSC-LX2,分别行Ghrelin、PDGF-BB干预和按0.05、0.1、0.15μmol/L Ghrelin＋PDGF干预细胞。采用定量PCR方法检测各组前胶原I mRNA的表达及Western印迹方法检测α-SMA表达情况。结果定量PCR结果显示PDGF处理组前胶原I mRNA的表达（6.91±0.46）较空白对照组（1.00±0.08）明显升高（P〈0.05）,证明PDGF能够促进HSC胶原合成。Ghrelin组前胶原I mRNA的表达（0.60±0.13）与空白对照组相比无明显变化,差异无统计学意义（P〉0.05）。0.05、0.1、0.15μmol/L Ghrelin＋PDGF共同处理组前胶原I mRNA表达分别为：（3.11±0.28）、（2.03±0.23）、（0.70±0.06）,与PDGF组相比显著降低,差异有统计学意义（P〈0.05）,且随着Ghrelin浓度的增加其抑制作用越明显,呈浓度依赖性关系。Western印迹结果显示Ghrelin＋PDGF共同处理组α-SMA较PDGF组表达降低。结论 PDGF刺激HSC活化后,Ghrelin可抑制其前胶原I及α-SMA生成,具有抗肝纤维化作用,可能成为防治肝纤维化的新途径之一。     

瘦素对乙醛诱导肝星状细胞活化过程中Ⅰ型胶原及α-平滑肌肌动蛋白表达的影响

目的:观察瘦素对乙醛诱导肝星状细胞(HSC)活化过程中α-SMA和I型胶原表达的影响,旨在从体外探讨瘦素在酒精性肝病中的可能作用。方法:采用SD大鼠肝脏原位灌流消化的方法获得并原代及传代培养HSC,分乙醛(200μmol/L)处理组,瘦素(100nmol/L)处理组及联合处理组(乙醛200μmol/L加瘦素100nmol/L)。用实时荧光定量PCR方法检测各组细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA(α-平滑肌肌动蛋白)mRNA表达水平,Western blot检测各组细胞α-SMA表达量,ELISA法检测培养上清中TGF-β1及Ⅰ型胶原含量。结果:①乙醛处理组中TGF-β1和Ⅰ型胶原基因及蛋白表达量明显高于空白对照组(P<0.05),α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);②瘦素处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量与对照组相比差异无显著性意义(P>0.05);③联合处理组TGF-β1、Ⅰ型胶原及α-SMA表达量明显高于对照组(P<0.05),但TGF-β1、Ⅰ型胶原表达量与乙醛处理组相比差异无显著性意义(P>0.05)。结论:在乙醛诱导肝星状细胞活化过程中,瘦素能协同上调α-SMA的表达;但对TGF-β1及Ⅰ型胶原的表达无影响,Ⅰ型胶原和α-SMA的表达可能是依赖于不同的调控机制来实现。     

肝素对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖及分泌的影响及其作用机制

目的观察肝素在体外对肝纤维化大鼠肝星状细胞增殖及分泌的影响,并探讨其作用机制。方法应用Nycodenz分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞置培养板中,并分为三组。A、B组分别加入1000μg/ml及2000μg/ml肝素,C组不用药。应用MTT比色法检测各组肝星状细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、层粘连蛋白(LN)的表达。结果OD值A组为0.0626±0.0137,B组为0.0746±0.0131,C组为0.1106±0.0198,A、B组均显著低于C组(P均<0.05),B组低于A组(P>0.05);C组肝星状细胞胞质中可见α-SMA、TGF-β1和LN明显表达,A、B组各指标表达均低于C组(P分别<0.01和<0.05),A组表达低于B组(P<0.05)。结论肝素可抑制肝纤维化大鼠肝星状细胞的增殖及胶原分泌,作用机制可能是抑制肝星状细胞表达TGF-β1。     

蒙药额力根II号对肝纤维化大鼠的保护作用研究

目的 观察蒙药额力根II号对CCl₄诱导的肝纤维化大鼠的保护作用。方法 随机将58只SD大鼠分为对照组、模型组、蒙药额力根II号小、中、大剂量干预组,制备CCl₄肝纤维化模型,并给予蒙药干预。观察肝组织病理学变化,并采用免疫组化法检测肝组织α-SMA、I型胶原和III型胶原的表达。结果 与模型组比,中剂量药物处理组动物血清ALT、AST和透明质酸(HA)水平显著降低(P＜0.05),大剂量药物处理组血清ALT、AST、TBIL、HA、III型前胶原(PIIINP)和IV型胶原(CIV)水平降低更显著(P＜0.05);对照组、中和大剂量药物干预组肝组织α-平滑肌肌动蛋白表达水平分别为(0.0±0.0)、(4.9±1.0)、(3.4±0.9),显著低于模型组【(6.1±1.2),P＜0.05】,III型胶原蛋白分别为(2.4±1.3)、(5.0±2.4)和(3.7±1.8),显著低于模型组【(6.4±2.4),P＜0.05】;对照组和大剂量干预组肝组织I型胶原蛋白分别为(2.1±0.2)和(3.3±1.0),显著低于模型组【(6.0±2.5),P＜0.05】;与模型组比,中和大剂量药物处理组大鼠肝组织纤维化程度显著改善。结论 蒙药额力根II号对CCl₄诱导的肝纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制了肝星状细胞活化,减少了细胞外基质的合成有关。     

罗格列酮对肝星状细胞增殖与胶原合成的影响

目的 观察罗格列酮对肝星状细胞增殖与Ⅰ型胶原合成的影响.方法 采用HSC-T6肝星状细胞系,将培养的肝星状细胞(HSC)分为对照组、不同浓度的罗格列酮组(5、10、20 μmol/L).采用MTT法观察罗格列酮对HSC增殖的影响,采用ELISA法检测细胞培养液上清中Ⅰ型胶原的含量.结果 与对照组相比,在10、20μmol/L罗格列酮组,罗格列酮可以抑制HSC的增殖(P<0.05),同时细胞堵养液上清中Ⅰ型胶原含量分别为135.72±6.00 ng/ml、128.65±5.34 ng/ml,均低于对照组(149.35±6.65 ng/ml),差异有统计学意义(P<0.05).结论 罗格列酮可以抑制HSC的增殖,抑制肝星状细胞Ⅰ型胶原的合成.     

金钗石斛多糖对肝纤维化大鼠TGF-β1、α-SMA、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原表达的影响

目的 探讨金钗石斛多糖(DNP)对肝纤维化(HF)大鼠肝组织转化生长因子(TGF)-β1、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响.方法 SD大鼠随机分为正常组,模型组,秋水仙碱组(0.2 mg/kg),扶正化瘀组(0.415 g/kg),DNP低、中、高剂量组(5、10、20 g/kg),采用50％四...     

肝脏前体细胞移植对CCl4诱导的肝纤维化自发逆转大鼠肝组织学的影响

目的研究肝脏前体细胞(HPCs)移植对纤维化自发逆转大鼠肝脏组织学的影响。方法采用四氯化碳(CCl_4)腹腔注射制备大鼠肝纤维化模型,取14只模型大鼠,随机分为自发逆转组7只和HPCs移植组7只,后者采用经脾内注射HPCs。取肝组织行苏木精-伊红和天狼猩红染色,观察组织病理学变化;采用免疫组织化学法检测肝组织OV6和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达;采用Western blot法测定α-SMA、基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)-1蛋白表达;采用ELISA法测定血清I型胶原和白蛋白水平。结果在CCl_4腹腔注射8 w后动物肝组织OV6阳性细胞数量达到高峰,12 w时开始下降;与自发逆转组比,HPCs移植组肝组织纤维化和炎症程度减轻,胶原面积显著降低【(3.14±0.99)对(5.05±0.89),P0.05】;自发逆转组肝组织α-SMA和TIMP-1蛋白相对表达量分别为(1.22±0.10)和(0.43±0.09),均显著高于HPCs移植组的【(0.31±0.08)和(0.25±0.032),P0.05】;自发逆转组血清I型胶原水平为(41.33±8.08)ng/ml,显著高于HPCs移植组的【(31.12±10.08)ng/ml,P0.05】,自发逆转组白蛋白为(33.18±4.69)g/L,显著低于HPCs移植组的【(48.30±2.15)g/L,P0.05】。结论肝脏前体细胞移植能加速肝纤维化的逆转,改善肝功能。     

整合素连接激酶在重组结缔组织生长因子诱导大鼠肝星状细胞表型转化中的作用

目的研究整合素连接激酶(ILK)在重组结缔组织生长因子(rCTGF)诱导大鼠原代肝星状细胞(HSC)表型转化中的作用。方法应用胶原酶原位灌注+密度梯度离心法分离SD大鼠原代HSC,细胞贴壁培养24 h后以rCTGF处理,24 h后转染ILK小干扰RNA(siRNA)或对照siRNA,设rCTGF对照及空白对照。应用RT-PCR及Western Blot检测转染siRNA 24、48及72 h时HSCα平滑肌肌动蛋白(αSMA)、ILK及I型胶原基因表达水平变化。计量资料采用t检验。结果与空白对照相比,rCTGF处理可显著上调大鼠HSCαSMA、ILK蛋白及I型胶原mRNA表达。转染ILK siRNA可特异性抑制rCTGF诱导的ILK表达上调,与rCTGF对照相比,转染ILK siRNA 24、48及72 h时,HSC ILK蛋白表达分别下调72%±6%(t=21.39,P0.01)、87%±9%(t=68.25,P0.01)及47%±3%(t=18.25,P=0.003);αSMA蛋白及I型胶原mRNA表达分别下调5%±1%(t=2.52,P0.05)及6%±3%(t=1.63,P0.05)、31%±7%(t=34.77,P0.01)及20±5%(t=6.71,P0.05)和67%±8%(t=58.82,P0.01)及43%±6%(t=15.21,P0.01);转染对照siRNA时,HSC ILK、αSMA及I型胶原mRNA表达在相同时点无显著变化。结论 ILK可能部分介导了rCTGF诱导的大鼠HSC表型转化。     

原代培养大鼠肝星状细胞、枯否氏细胞及肝素的干预作用

目的同步分离培养大鼠肝星状细胞及枯否细胞,应用肝素进行干预,观察肝素在体外对肝星状细胞及枯否细胞的影响.方法应用Nycodenz一步密度梯度离心法一步分离肝纤维化大鼠的肝星状细胞及枯否细胞.分别将不同浓度的肝素加入肝星状细胞和枯否细胞培养板中,应用MTT比色法检测各组肝星状细胞和枯否细胞的增殖状况,免疫细胞化学检测各组肝星状细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、层连蛋白(LN)的表达.结果加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的肝星状细胞0D值分别为0.0626±0.0137、0.0746±0.0131和0.1106±0.0198.加入高浓度肝素、低浓度肝素及未用药的枯否氏细胞0D值分别为0.1340±0.0270、0.1540±0.270和0.2120±0.0444.二肝素组肝星状细胞、枯否氏细胞0D值均显著低于未加药组.高浓度肝素组肝星状细胞及枯否氏细胞0D值较低浓度肝素组为低,但无显著性差异.加入肝素的肝星状细胞α-SMA、TGF-β1,LN的表达较未用药的肝星状细胞为弱.高浓度肝素组α-SMA、TGF-β1 LN的表达较低浓度肝素组弱.结论肝素可抑制肝星状细胞的增殖、活化及胶原的分泌,且对枯否氏细胞也具有抑制作用.