乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨胰岛素样生长因子-1受体及其结合蛋白-2、4 mRNA表达的影响

目的探讨乳铁蛋白对去卵巢大鼠骨组织中胰岛素样生长因子-1受体(insulin-like growth factor-1 receptor,IGF-1R)、胰岛素样生长因子结合蛋白-2(insulin-like growth factor binding protein-2,IGFBP-2)、胰岛素样生长因子结合蛋白-4(insulin-like growth factor binding protein-4,IGFBP-4)mRNA表达的影响。方法50只清洁级雌性SD大鼠采用数字表法随机分为去卵巢模型组(Ovx组)40只与假手术组(Sham组)10只,同时把去卵巢大鼠模型组随机分为模型组(蒸馏水2 m L/d)(Con组)、乳铁蛋白(0.1 g/kg·d)组(LF1)、乳铁蛋白(1 g/kg·d)组(LF2)、乳铁蛋白(2 g/kg·d)组(LF3),每组10只,连续干预治疗6个月后,采用实时荧光定量PCR检测各组大鼠骨组织中IGF-1R、IGFBP-2、IGFBP-4 mRNA表达的情况,分析其异同。结果 HE染色结果显示:Sham组骨小梁排列密集,细胞数量多;而Con组骨小梁排列稀疏,细胞数量少;LF组介于Sham组和Con组之间,不同的乳铁蛋白干预后,与Con组相比,随着乳铁蛋白剂量增大,其骨小梁排列密度增大,细胞数量增多。与Sham组比较,Con组大鼠骨组织中IGFBP-2、IGFBP-4 mRNA相对表达量明显增高,IGF-1R mRNA相对表达量明显降低(均P0.01)。与Con组比较,LF1组、LF2组、LF3组大鼠骨组织中IGFBP-2 mRNA相对表达量明显下降为0.085±0.01、0.013±0.00、0.012±0.00,IGFBP-4 mRNA下降为0.329±0.07、0.040±0.01、0.032±0.01,二者下降量均与乳铁蛋白浓度正相关(均P0.01);而IGF-1R mRNA相对表达量升高为1.977±0.55、3.139±0.53、3.600±2.46,呈剂量依赖性升高。结论乳铁蛋白可能抑制去卵巢大鼠骨组织IGFBP-2、IGFBP-4 mRNA的表达,促进其IGF-1R mRNA的表达。     

乳铁蛋白对糖皮质激素性骨质疏松大鼠骨密度及骨形态学的影响

目的探讨乳铁蛋白对糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)大鼠骨密度及骨组织形态学的影响。方法 60只雌性4月龄Wistar大鼠,随机分为对照组、模型组、乳铁蛋白治疗组和阿仑膦酸钠治疗组。除对照组外,各组均予地塞米松2.0mg/kg肌肉注射(2次/周)诱导糖皮质激素性骨质疏松模型。造模同时分别给予乳铁蛋白3g/kg·d~(-1)、阿仑膦酸钠160mg/kg·d~(-1)预防性治疗,对照组、模型组予0.9%氯化钠注射液灌胃。3个月后行骨密度及骨形态学检测。结果 (1)与对照组相比,模型组左侧股骨及椎骨骨密度、骨小梁厚度及面积、成骨细胞计数明显降低,破骨细胞计数明显升高(P0.01)。(2)乳铁蛋白治疗组大鼠骨密度较模型组明显升高(P0.01),与阿仑膦酸钠治疗组、对照组比较差异无统计学意义;(3)乳铁蛋白治疗组大鼠成骨细胞计数较模型组显著增多(P0.01),与阿仑膦酸钠治疗组差异无统计学意义;(4)乳铁蛋白治疗组大鼠破骨细胞计数较模型组显著降低(P0.01),较阿仑膦酸钠治疗组显著增多(P0.01);(5)乳铁蛋白治疗组大鼠左侧股骨及椎骨骨小梁厚度与面积较模型组厚度显著增厚、面积显著变大(P0.01),较阿仑膦酸钠治疗组厚度显著变薄、面积显著减少(P0.01)。结论 (1)乳铁蛋白可改善GIOP大鼠骨微结构,增加成骨细胞数目,降低破骨细胞数目。(2)乳铁蛋白与阿仑膦酸钠在增加骨密度、阻止成骨细胞数目降低方面疗效相似,但在降低破骨细胞数目、增加骨小梁厚度、骨小梁面积方面乳铁蛋白疗效不如阿仑膦酸钠。     

降钙素基因相关肽对维甲酸致老年骨质疏松大鼠OPG/RANKL信号通路的影响及疗效

目的探讨降钙素基因相关肽(CGRP)对维甲酸致老年骨质疏松大鼠骨保护素(OPG)/核因子κB受体活化因子配体(RANKL)信号通路的影响及疗效。方法 72只15月龄雄性SD大鼠随机分为对照组、维甲酸组、CGRP组和CGRP8-37(CGRP拮抗剂)组,每组18只;后3组用维甲酸80 mg·kg-1·d-1灌胃,1次/d,连续灌胃2 w。维甲酸组腹腔注射生理盐水1 ml,1次/d,6次/w;CGRP组腹腔注射1 ml CGRP(30μg/kg),1次/d,6次/w;CGRP8-37组先腹腔内注射1 ml CGRP8-37(30μg/kg),再向腹腔内注射1 ml CGRP(30μg/kg),1次,6次/w;以上各组均干预2 w。采用双能X射线骨密度仪检测大鼠股骨骨密度(BMD);比较各组血清白细胞介素(IL)-6、IL-1、肿瘤坏死因子(TNF)-α、OPG和RANKL水平;RTPCR法检测各组大鼠骨组织OPG mRNA和RANKL mRNA表达。结果与对照组比较,维甲酸组大鼠左、右股骨BMD明显降低(P0.05);与维甲酸组比较,CGRP组大鼠左、右股骨BMD均显著升高(P0.05);而CGRP8-37组大鼠左、右股骨BMD均明显低于CGRP组(P0.05)。与对照组比较,维甲酸组大鼠血清OPG水平和骨组织OPG mRNA表达明显下降,而血清RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α水平和骨组织RANKL mRNA表达明显升高(P0.01);与维甲酸组比较,CGRP组大鼠血清OPG和骨组织OPG mRNA明显升高,而血清RANKL、IL-1、IL-6、TNF-α水平和骨组织RANKL mRNA表达显著降低(P0.01);CGRP8-37组大鼠血清OPG水平和骨组织OPG mRNA明显低于CGRP组,而血清RANKL、IL1、IL-6、TNF-α水平和骨组织RANKL mRNA显著高于CGRP组(P0.01)。结论降钙素基因相关肽可明显提高维甲酸老年骨质疏松大鼠股骨BMD,其作用可能与抑制机体IL-1、IL-6、TNF-α水平从而调节OPG/RANKL平衡有关。     

NLRP3/Caspase-1/GSDMD细胞焦亡信号轴在六味地黄丸防治大鼠骨质疏松症中的作用

目的 基于NLRP3/Caspase-1/GSDMD信号轴探讨六味地黄丸抗骨质疏松的作用。方法48只健康SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、六味地黄丸组以及阿仑膦酸钠组,每组12只。除假手术组外,其余各组经双侧卵巢切除造模后,六味地黄丸组予以六味地黄丸157.5 mg/(kg·d)灌胃,阿仑膦酸钠组予以阿仑膦酸钠片7.35 mg/(kg·d)灌胃,假手术组与模型组给予等量生理盐水灌胃,干预12周后取得大鼠骨组织以备分析。采用骨组织转录组学(RNA-Sequence)对模型组和六味地黄丸组进行测序分析;分析大鼠骨矿含量、弹性模量、股骨刚度、右侧股骨和腰椎骨密度(bone mineral density, BMD)水平变化;采用酶联免疫吸附测定法(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)检测血清半胱氨酸蛋白酶-1(cysteinyl aspartate specific proteinase-1, Caspase-1)、白细胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6, IL-6)、肿瘤坏死...     

去卵巢大鼠血清乳铁蛋白与骨密度的相关性研究

目的 探讨去卵巢大鼠血清乳铁蛋白(LF)水平与骨密度(BMD)的关系,为临床应用乳铁蛋白提供实验依据.方法 采用4月龄Wistar雌性大鼠,随机分为假手术组(sham,20只)与去卵巢模型组(ovariectomy,OVX,40只,分为OVX I组与OVX Ⅱ组,各20只),分别于术后14与18周处死OVX I组与OV...     

山茶籽与葛根素对去卵巢大鼠骨质疏松的防治作用比较

目的探讨山茶籽与葛根素对去卵巢大鼠的骨组织形态结构、骨密度和碱性磷酸酶的影响。方法5月龄雌性大鼠32只,分成4个试验组(每组8只):(1)假手术(Sham)组;(2)去卵巢模型(OVX)组;(3)山茶籽治疗(Ts)组:山茶籽醇提物灌胃,10 ml/kg,1次/d(5 g/g生药);(4)葛根素治疗(Pr)组:皮下注射葛根素,50 mg/kg,1次/d。各试验组在4、12 w,麻醉大鼠采血测定碱性磷酸酶,12 w后处死右侧股骨切片染色镜观骨组织结构,右侧股骨烘干测量骨密度,数据常规计算分析。结果与Sham组比较,OVX组骨组织镜下观骨质疏松明显,血碱性磷酸酶升高明显(P<0.01)。Ts组、Pr组、Sham组骨切片组织结构、骨密度和碱性磷酸酶差异无统计学意义(P>0.05)。结论山茶籽和葛根素对去卵巢大鼠的骨质疏松有防治作用,疗效相近。     

去铁斯若治疗去卵巢小鼠铁蓄积骨量下降

目的观察去铁斯若(deferasirox,DFR)对加枸橼酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)铁蓄积绝经后小鼠骨丢失的治疗作用。方法 32只2月龄小鼠采用数字表法随机分为4组。假手术(Sham)组采用0.9%氯化钠注射液干预;去卵巢(ovariectomy,OVX)对照组切除双侧卵巢;去卵巢(OVX+FAC)组切除双侧卵巢后给予枸橼酸铁铵80 mg/kg(溶于0.9%氯化钠注射液)腹腔注射,每周3次,共持续5周;去卵巢加枸橼酸铁铵加去铁斯若(OVX+FAC+DFR)组在枸橼酸铁铵干预基础上给予去铁斯若100 mg/kg(溶于0.9%氯化钠注射液)灌胃,每周5次,持续6周。最后检测各组铁蛋白水平、骨铁含量以及股骨远端松质骨micro-CT扫面分析和三维重建。结果血清铁蛋白、骨Perl's染色提示OVX+FAC组铁蛋白(220.7±28.3)μg/L,显著高于Sham组(112.8±6.0)μg/L和OVX组(103.8±22.4)μg/L,DFR干预后OVX+FAC+DFR组铁蛋白(151.5±36.1)μg/L有所下降,差异有统计学意义(P0.05)。三维重建示OVX+FAC组小鼠骨小梁稀疏,骨密度(0.074±0.010)mg/mm~3减低,DFR干预后骨小梁稍有增加,骨密度(0.110±0.015)mg/mm~3显著恢复。结论 DFR可部分逆转铁蓄积导致的骨量下降,从而提高骨密度,改善骨微结构。     

白藜芦醇对去卵巢骨质疏松大鼠血同型半胱氨酸和氧化应激指标的影响

目的 观察白藜芦醇对去卵巢骨质疏松大鼠血同型半胱氨酸(Hcy)和氧化应激指标的影响.方法 32只3月龄雌性Sprague-Dawley (SD)大鼠,按随机数字表法分为4组:去卵巢组、乙烯雌酚组、白藜芦醇组和假手术组,每组8只.去卵巢组、乙烯雌酚组和白藜芦醇组大鼠行双侧卵巢切除术复制骨质疏松模型.术后1周开始灌胃给药,假手术组和去卵巢组大鼠给予蒸馏水(每日一次),其余两组大鼠分别予乙烯雌酚0.03 mg·kg-1·d-1和白藜芦醇20 mg·kg-1·d-1.治疗10周后,测定大鼠血浆总Hcy (tHcy)、总抗氧化能力(TAC)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和丙二醛水平,取L5椎体和右股骨进行骨密度测定.结果 与假手术组相比,去卵巢组血浆tHcy和丙二醛水平升高,TAC和GSH-Px水平下降;与去卵巢组相比,乙烯雌酚组和白藜芦醇组血浆tHcy和丙二醛浓度均明显降低,TAC和GSH-Px水平显著升高(F=19.709,117.219,7.020,20.544,P均＜0.01);白藜芦醇组血浆丙二醛浓度较乙烯雌酚组升高(F=117.219,P＜0.01).与假手术组相比,去卵巢组腰椎和股骨骨密度均明显降低;与去卵巢组相比,乙烯雌酚组腰椎和股骨骨密度明显升高,接近假手术组水平(P＞0.05);白藜芦醇组腰椎和股骨骨密度升高,但仍低于乙烯雌酚组和假手术组(F=48.518,43.263,P均＜0.01).血浆tHcy与腰椎和股骨骨密度呈负相关(r=-0.663,P＜0.001;r=-0.520,P =0.002),TAC与股骨骨密度呈正相关(r=0.539,P=0.001).结论 高Hcy血症和氧化应激与去卵巢大鼠骨质疏松关系密切.白藜芦醇可能通过降低血浆tHcy水平和改善氧化应激,对去卵巢大鼠骨质疏松发挥保护作用.     

阿仑膦酸钠和甲状旁腺素对糖皮质激素性骨丢失的作用

目的比较并探讨甲状旁腺素和阿仑膦酸钠治疗糖皮质激素性骨质疏松(GIOP)的疗效和作用机制。方法动物实验:将40只9月龄雄性SD大鼠分为对照组:0.9%氯化钠注射液皮下注射;糖皮质激素(GC)组:甲泼尼龙琥珀酸钠2.5mg/kg·d皮下注射;GC+双膦酸盐组:甲泼尼龙琥珀酸钠2.5mg/kg·d皮下注射+阿仑膦酸钠4mg/kg·d灌胃;GC+甲状旁腺激素(PTH)组:甲泼尼龙琥珀酸钠2.5mg/kg·d皮下注射+rPTH80μg/kg·d皮下注射。所有动物喂养3个月后处死。采用双能X线骨密度仪检测大鼠腰椎和股骨骨密度,用骨形态计量学方法分析大鼠股骨力学参数,收集外周血检测抗酒石酸酸性磷酸酶和骨钙素。细胞实验:将原代培养大鼠成骨细胞分为对照组;GC组:地塞米松(Dex)10-5mol/L;阿仑膦酸钠(ALN)组:ALN10-7mol/L;PTH组:人重组PTH1-3410-7mol/L;GC+ALN组:Dex10-5M+ALN10-7mol/L;GC+PTH组:Dex10-5mol/L+PTH10-7mol/L;分别采用MTT、碱性磷酸酶活性检测和茜素红染色法观察各组成骨细胞的增殖、分化和矿化情况;采用Real-timePCR检测各组成骨细胞FGF23和SOST基因表达情况。结果动物实验结果显示,GC组大鼠腰椎骨密度(0.232±0.021)和股骨骨密度(0.203±0.018)较各自对照组(0.247±0.03和0.226±0.037)明显降低(P<0.05);GC+ALN组股骨骨密度(0.224±0.03)和GC+PTH组腰椎骨密度(0.271±0.018)较GC组明显升高(P<0.05)。与对照组相比,GC组骨小梁容积、骨形成率、矿化沉积率和血BGP明显降低(P<0.05),破骨细胞表面积和血TRAP5b明显升高(P<0.05)。GC+PTH组骨小梁容积显著增加(P<0.05),GC+ALN组骨小梁容积与对照组持平。与GC组相比,GC+PTH组骨形成率和血BGP明显升高(P<0.05),GC+ALN组矿化沉积率升高(P<0.01),破骨细胞表面积和血TRAP5b降低(P<0.05)。细胞实验结果显示,GC可降低成骨细胞的增殖率和碱性磷酸酶活性,减少矿化结节形成(P<0.05),GC+PTH和GC+ALN使碱性磷酸酶活性升高至对照组水平,但PTH能著抑制矿化,ALN促进矿化。Realtime-PCR结果提示经GC干预后骨硬化蛋白(SOST)和纤维生长因子23(FGF23)表达显著升高(P<0.05),PTH抑制SOST表达(P<0.01),ALN抑制SOST和FGF23的表达(P<0.05)。结论过量GC可增加SOST和FGF23表达,与糖皮质激素性骨质疏松的骨形成降低和骨矿化受损有关。PTH和ALN可提高骨量,改善骨强度;PTH可降低SOST表达,促进骨形成;ALN可降低FGF23表达,促进骨矿化。     

斑蝥黄质抗去势雌性大鼠骨质疏松的实验研究

目的 探讨斑蝥黄质对去卵巢骨质疏松(OP)模型大鼠股骨的密度、骨矿含量的影响及机制.方法 将72只15周龄SD大鼠随机分为6组,空白组行假手术,其余5组行卵巢切除术,术后用药12 w后处死,测定右侧股骨骨密度、骨矿含量、血清雌二醇(E_2)、碱性磷酸酶(ALP)含量及子宫湿重.结果 与模型组相比,斑蝥黄质高(20 mg/kg)、中(15 mg/kg)、低剂量(10 mg/kg)组和尼尔雌醇组(1.05 mg/kg)能缓解因去势后造成的雌鼠骨密度、骨矿含量、血清E_2及子宫指数的下降(P＜0.05),同时可以抑制血清ALP水平的升高(P＜0.05).结论 斑蝥黄质可以改善骨质量,抑制雌性大鼠去卵巢OP的发生,可能具有类似雌激素的效应.