门静脉注射pSilencer质粒观察DA大鼠移植肝脏EOLA1的表达变化研究

目的观察EOLA1在大鼠移植肝脏中的表达和功能。方法采用近交系雄性DA大鼠60只,Lewis大鼠120只,分为3组,改良“二袖套”法建立肝脏移植模型90例。A组Lewis为供体(n=30),Lewis为受体;B组DA为供体(n=30),Lewis为受体;C组以DA大鼠为供体(n=30),Lewis为受体,受体肝在移植后于门静脉注射RNA抑制性干扰质粒。观察平均存活时间;术后1、3、5、7、10时相点血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、总胆红素(TBIL)水平以及移植肝脏的病理学变化;半定量检测EOLA1蛋白的表达变化。结果平均存活时间A组超过100d,B组(16.2±1.4)d,C组平均存活时间(11.8±1.6)d;术后第5天B、C组血清ALT和TBIL升高较A组非常显著(P<0.01),B组高于C组差异显著;B、C组病理检查为明显的炎性反应,A组不明显;A组移植肝组织EOLA1表达最高,B组次之,C组最低,B、C组与A组比较差异非常显著(P<0.01),B、C两组间比较差异显著(P<0.05)。结论EOLA1蛋白表达水平的高低与肝组织内炎症反应的严重程度存在负相关;门静脉注射pSilencer质粒可以明显的抑制EOLA1在移植肝脏的表达。     

mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导大鼠肝移植免疫耐受

目的 探讨mdr-1基因骨髓造血干细胞移植诱导肝移植术后免疫耐受的可行性及其可能机制.方法 选用雄性Wistar大鼠30只为肝移植供体,另选雌性SD大鼠20只为异基因肝移植受体,随机分为mdr-1基因骨髓造血干细胞移植联合肝移植组(A组)和单纯肝移植组(B组).雌性Wistar大鼠10只为同基因肝移植受体(C组).比较A、B两组大鼠肝移植术后1周生存率、生存状况、生存时间,以及移植肝脏的病理变化.结果 C组大鼠生存时间均达60 d以上,A组为(31.2±4.9)d,明显高于B组[(12.1±4.7)d],差异有统计学意义(P<0.05).B组病理组织切片可见中、重度急性排斥反应,肝内单核细胞浸润较为明显,主要集中在汇管区;A组移植肝内组织损伤程度明显减轻;C组基本无排斥反应,接近正常肝组织.结论 mdr-1基因骨髓造血干细胞可明显减轻大鼠肝移植后免疫排斥反应.     

IDO基因转染延长同种异基因大鼠移植心脏的存活

目的:了解逆转录基因载体介导的吲哚胺-2,3-加双氧酶(IDO)基因转染能否延长同种异基因大鼠移植心脏的存活时间及机理。方法:把同种异基因大鼠心脏移植模型(Lewis→BN)分成4组,A组为对照组,同种异基因大鼠心脏移植(Lewis→BN);B组:IDO基因转染后的供体心脏移植给受体大鼠;C组:空载体转染供体心脏,再移植给受体大鼠;D组:同种异基因大鼠心脏移植 CsA组(CsA5mg/kg/d×7天)。观察记录移植心脏的存活时间及术后6天组织病理学检查明确排斥反应的诊断和分级,RT-PCR检测术后6天移植心脏TNF-α的mRNA表达,FCM检测外周血活化的T细胞(CD3 CD25 )、有核细胞CD86 表达等方法探讨其机理。结果:A、B、C、D组移植心脏平均存活时间为7.2±0.45、13.2±2.16、7.1±0.62和15.6±3.21天,其中B、D组术后6天CD3 CD25 、有核细胞CD86 表达、供心组织急性排斥反应的强度和TNF-α的mRNA表达较A、C组显著降低(P<0.05),A、C组具有典型重度急性排斥反应特征而B、D组最轻。结论:逆转录基因载体介导的IDO基因转染能够延长移植心脏存活时间的作用,其机理包括抑制反应性T细胞、抑制有核细胞共刺激信号CD86表达、抑制心肌组织表达TNF-α等。     

EOLA1基因在DA大鼠移植肝脏急性排斥反应中表达的初步研究

目的：观察新基因EOLA1在DA大鼠移植肝脏中的表达情况。方法：采用近交系雄性DA大鼠30只,Lew is大鼠90只,分为AB两组,改良＂二袖套＂法建立肝脏移植模型60例。A组：移植耐受组（n=30）,Lew is大鼠60只,30只为供体,30只为受体,建立30例肝脏移植耐受模型;B组：急性排斥组（n=30）,DA大鼠30只为供体,Lew is大鼠30只为受体,建立30例肝脏移植急性排斥模型。观察平均存活时间;术后1、3、5、7、10天各时相点血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、总胆红素（TB IL）水平以及移植肝脏的病理学变化;半定量检测EOLA1的表达情况。结果：平均存活时间A组超过100天,B组（16.2±1.4）天;术后第五天B组血清ALT和TB IL升高较A组非常显著（p〈0.01）;B组病理检查为明显的炎性反应,A组不明显;A组移植肝组织EOLA1表达较高,B组较低,两组比较相差非常显著（p〈0.01）。结论：EOLA1基因表达水平的高低与移植肝组织急性排斥反应的的严重程度呈负相关,对大鼠移植肝脏急性排斥反应可能具有保护性调控意义。     

调节性T细胞和共刺激通路阻断剂抑制大鼠肝移植急性排斥反应的研究

目的探讨CD4^＋CD25^＋调节性T细胞、共刺激通路阻断剂CD154单抗及两者联合应用在抑制大鼠肝移植急性排斥反应中的作用。方法48例原位肝移植大鼠（DA→Lewis）分为A组：对照组;B组：术前7d回输经DA大鼠脾细胞体外激活的Lewis大鼠CD4^＋CD25^＋细胞;C组1术后第1、2d腹腔注射CD154单抗（15m/kg）;D组：联合应用CD4^＋CD25^＋细胞和CD154单抗。术后7d各组处死6只受体,观察移植肝病理变化,检测移植肝内T细胞亚群和细胞因子白细胞介素之（IL-2）、IL4、IL-10和转化生长因子B1（TGFβ1）表达情况;分离脾淋巴细胞与供体行单向混合淋巴细胞反应观察刺激指数。余大鼠观察生存情况。结果D组平均存活时间（52．00±10．64）d明显长于其他各组（P〈0．01）;移植肝内淋巴细胞浸润数量（2．47±0．61）×10^6和CD8^＋细胞百分比（14．2±3．0）％明显低于B、C组（P〈0．05、P〈0．01）,而CD4^＋CD25^＋细胞比例（16．4±4．3）％高于B、C组（P〈0．05,P〈0．01）。移植物内IL-2mRNA表达A组最高,D组最弱;IL4mRNA各组均弱表达;IL-10mRNAB、D组高表达,A、C组未表达;TGFβ1mRNAB、D组表达明显强于A、C组。单向混合淋巴细胞反应D组刺激指数最低（P〈0．05）。结论CD4^＋CD25^＋调节性T细胞和共刺激通路阻断剂CD154单抗均能抑制大鼠肝移植急性排斥反应;联合应用CD154单抗明显增强CD4^＋CD25^＋调节性T细胞对急性排斥反应的抑制作用。     

血红素氧化酶-1在鼠异种肝移植中的抗排斥作用及其机制研究

目的探讨血红素氧化酶1(HO1)在异种肝移植中的作用及其机制方法采用豚鼠对大鼠肝移植模型,实验动物分为3组,每组10对鼠。A组供体鼠术前24h腹腔注射5ml/kg生理盐水作为对照;B组供体术前24h腹腔注射HO1诱导剂钴原卟啉(CoPP),C组供体注射CoPP的同时给予HO1抑制剂锌原卟啉(ZnPP)。每组受体均接受眼镜蛇毒因子(CVF)。分别以RTPCR和western印迹法观察HO1mRNA及蛋白表达。通过凝胶电泳迁移率改变法(EMSA)检测移植肝核转录因子(NF)κB的活化,免疫组化观察E选择素表达,来评价HO1对内皮细胞活化的抑制作用。并比较各组受体鼠存活时间。结果各组均未发生超急性排斥反应。CoPP预处理可以诱导HO1mRNA和蛋白过度表达,进而显著抑制移植肝内NFκB的活化和内皮细胞E选择素表达;B组与(0.112±0.039)A组(0.211±0.030)、C组(0.283±0.075)相比差异有统计学意义(P<0.05)。HO1过度表达组与其它组相比,移植肝内皮细胞肿胀减轻,浸润细胞数减少,肝脏功能改善,而且受体鼠存活时间显著延长;B组(15.5h±3.8h)比A组(7.3h±2.1h)差异有统计学意义(P<0.01)。这种保护效应可被同时给予HO1抑制剂ZnPP所取消;B组比C组(6.7h±2.9h)差异有统计学意义(P<0.01)。结论HO1通过抑制内皮细胞活化,延缓异种移植肝排斥反应发生。     

血红素加氧酶-1在大鼠原位肝移植急性排斥反应中的作用

目的 探讨血红素加氧酶-1(hemooxygenase-1,HO-1)在大鼠原位肝移植急性排斥反应中的作用.方法 建立大鼠原位肝移植排斥模型后分为3组:对照组(A组),ZnPP组(B组)和CoPP组(C组).3组分别于3、7 d处死,取血及肝脏标本.进行肝功测定(AST、ALT、TBIL、ALB);肝组织HE染色;荧光RT-PCR检测HO-1表达.结果 ①3组肝功能3、7 d时比较有明显的统计学意义(P＜0.05).②HE染色:A组3 d出现I、Ⅱ级为主的排斥反应,7 d时出现Ⅱ级为主的排斥反应;B组3 d出现Ⅱ级为主的排斥反应,7 d时出现Ⅱ、Ⅲ级为主的排斥反应;C组3 d出现排斥反应0～Ⅱ级,以I级为主,7 d时出现排斥反应0～Ⅱ级,以I、Ⅱ级为主.③HO-1在C组表达明显升高,B组不明显,A组介于两组之间.结论 血红素加氧酶-1(HO-1)过表达能减轻急性排斥反应.     

血红素加氧酶-1与肝移植

在肝移植过程中,移植物的缺血缺氧是不可避免的,肝缺血再灌注损伤(ischemia reperfusion injury,IRI)限制了肝移植存活率,通过某种方式上调血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)的表达在许多动物移植模型中被证实具有减轻移植物再灌注损伤(reperfusion injury,RI)和慢性排斥反应的作用。同时,人为诱导时,HO-1可减缓病理进展、促进供体特异性耐受。本文综述了HO-1的生物学特性、     

趋化因子受体CCR5在同种大鼠心脏移植局部的表达

目的探讨急性排斥反应过程中CCR5基因与蛋白在移植心脏局部表达的意义及环孢素(CsA)的影响。方法施行大鼠异位心脏移植术,移植大鼠分为3组,每组45只,对照组5只:SD大鼠间的移植为同系移植组(A组),Wistar至SD大鼠的移植分为未用CsA干预组(B组)及CsA干预组(C组),健康SD大鼠为对照组。分别采用RT-PCR方法和免疫组化方法检测CCR5 mRNA和蛋白的表达。结果CCR5 mRNA在A组各时间点和对照组均呈阴性表达,在B组的表达变化与急性排斥反应的进程相关,术后第3天CCR5 mRNA表达上调至峰值(1.4±0.33);C组应用CsA后,CCR5 mRNA表达峰值(0.5±0.29)显著低于B组(t=2.11,P<0.05)。CCR5蛋白定位于移植心脏间质单个核浸润细胞。结论CCR5基因与蛋白的表达上调与急性排斥反应过程中移植物间质CCR5阳性单个核细胞浸润密切相关,可能为急性排斥反应的早期诊断提供帮助;CsA抑制CCR5阳性细胞的浸润及CCR5的表达水平。     

靶向CD40的小RNA干扰抑制大鼠异体肢体移植急性排斥反应及细胞凋亡表达的研究

目的 探讨靶向CI40的小RNA干扰对大鼠异体肢体移植急性排斥反应及细胞凋亡的影响.方法 以纯系SD大鼠为供体,纯系Wistar大鼠为受体,行同种异体右后肢移植.27只大鼠肢体移植后随机分为3组:A组:注射梭华.Sofast(15μL).siCD45-2/pSilencer(100 μg)载体复合物600 μL;B组:在肢体移植后,即注射Sofast(15μL).pSileater4.1-CMV neo(100μg)空载体复合物600μL;C组:在肢体移植后注射生理盐水600μL.观察移植物排斥反应征象及存活情况,并于第7天对产生免疫耐受大鼠进行混合淋巴细胞反应(MLR),同时进行组织学检查.结果 与其它实验组相比,A组移植物发生排斥反应的时间及存活时间均显著延长(P<0.01)(>13d),未见排斥反应征象,其它组均于术后近期发生排斥反应;A组大鼠对供体的淋巴细胞呈现低反应性,移植的供体同系大鼠的肢体得以存活.A组移植物细胞凋亡率低于其他组.A组表达CD40的B细胞低于B、C组.结论 在术后不应用免疫抑制剂的情况下,靶向CD40的shRNA干扰可以抗大鼠异体肢体移植急性排斥反应.     

乌司它丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1的影响

目的:探讨乌司他丁对油酸致急性肺损伤大鼠肺组织血红素氧化酶-1表达的影响.方法 30只成年SD大鼠,随机分为3组(n＝10).正常组(A组)经大鼠尾静脉注射0.2mL/kg生理盐水;急性肺损伤组(B组)、乌司他丁组(C组)经大鼠尾静脉注射油酸0.2mL/kg制成急性肺损伤模型,随后立即给予A组、B组腹腔注射生理盐水10mL/kg,C组100ku/kg的乌司他丁腹腔注射.测取动物4h时间点呼吸频率和左心室动脉血氧分压,并于4h后取右下肺组织行HE染色和HO-1免疫组织化学检查,观察光镜下病理改变以及血红素氧化酶-1的表达.结果: 乌司他丁能显著改善油酸所致急性肺损伤所致的呼吸窘迫;肺组织血红素氧化酶-1在对照组仅有少量表达,急性肺损伤组表达增多,乌司他丁干预组表达明显增强.结论:乌司他丁可通过增加肺组织中血红素氧化酶-1的表达而发挥保护作用.     

趋化因子RANTES和受体CCR5在心脏移植慢性排斥反应中的表达

目的探讨调节活化正常T细胞表达和分泌因子(RANTES)及其受体CCR5在心脏移植慢性排斥反应中的表达及意义。方法健康近交系Sprague-Dawley(SD)大鼠为受者,Wistar大鼠为供者,采用"套管连接技术"建立颈部心脏移植的实验模型。将SD大鼠随机分为3组:A组(n=12)供、受者均未采用任何治疗;B组(n=12)移植手术后使用环孢素A(CsA)10 mg.kg-1治疗受者,术后2～3个月采集移植心脏;C组(n=24)使用供者脾细胞(SPC)及环磷酰胺(CP)预处理受者,其中12只在术后15～60 d采集移植心脏(C1组),另外12只术后至少观察半年(C2组)。采用H-E染色观察移植心脏组织排斥反应病理改变程度,Van Gieson染色观察移植心脏血管病变(CAV)的血管狭窄程度,免疫组化检测RANTES和CCR5的表达水平。结果 SPC和CP预处理后,移植心脏的存活时间明显延长,RANTES和CCR5在冠状血管和心肌组织中呈低水平表达,移植心脏血管病和心肌纤维化明显减轻;而在急性排斥反应和CsA治疗的移植心脏组织中,RANTES和CCR5的表达水平明显增强,差异有统计学意义(P<0.05)。结论移植心脏组织中RANTES和CCR5的表达水平与移植排斥反应的程度密切相关。     

Heme oxygenase-1 expression in rats with acute lung rejection and implication

This study investigated the expression of hemeoxygenase-1 （HO-1） in rats with acute lung rejection and its implication. A valid rat orthotopic left lung transplantation model （SD rat→Wistar rat） was established by using an improved three-cuff anastomosis technique. The rats were divided into control group, CoPP （HO-1 inducer）-treated group and ZnPP （HO-1 inhibitor）-treated group. The severity of acute rejection was graded on the basis of the morphologic changes of the lung samples stained with HE. The expression of HO-1 protein in lung tissue was detected by using immunohistochemistry and Western blot, and HO-1 mRNA activity was assayed by RT-PCR. The results showed that the expression of HO-1 protein was significantly increased with the acute rejection grading in rats （P〈0.01）. As compared with control and ZnPP-treated groups, the severity of acute rejection was not alleviated and the grade not reduced significantly in CoPP-treated group （P〉0.05）. It was concluded that HO-1 protein might be involved in the pathological process of post-graft acute rejection. The expression of HO-1 protein was increased gradually with aggravation of acute rejection, and HO-1 protein might be used as an index to monitor acute rejection after lung transplantation.     

丹参对大鼠离体肝脏血红素氧合酶-1表达的作用

目的：研究丹参在大鼠离体肝保存时对HO-1mRNA及蛋白的表达的作用。方法：模拟临床供肝保存,大鼠肝脏切取后置4℃保存液中。实验根据灌注保存液不同分为平衡液组(A 组)、丹参组（B组）、丹参＋抑制剂预处理组（C 组）,每组分别为24只动物,根据保存时间各组分为4个亚组（0、1、3、6h）,每亚组6只动物。术前24小时,A、B组用生理盐水腹腔注射预处理,C组用锌原朴啉腹腔注射预处理。以RT-PCR和免疫组化半定量检测HO-1mRNA及蛋白表达的情况,对各组大鼠肝组织行病理切片,观察形态学改变并评分,并作HO-1的与肝脏损伤评分相关分析。结果：(1) B组各亚组肝组织HO-1的mRNA及蛋白的表达水平明显较A、C两组高（p﹤0.05）;(2) 除0h亚组外,各组同时间点亚组比较,以B组肝组织损害最轻,保存时间最长, C组的肝组织损伤明显重于A、B两组;（3）HO-1的mRNA及蛋白的表达与肝脏损伤评分呈相关性。结论：大鼠离体肝脏保存时,丹参可以诱导HO-1过表达;丹参诱导HO-1的表达可能是丹参对肝脏保护作用机制。 关键词：丹参; 血红素氧合酶-1;器官保存     

细胞间黏附分子1与血管细胞黏附分子1在心脏移植慢性排斥反应中的表达及意义

目的研究细胞间黏附分子1（ICAM-1）与血管细胞黏附分子1（VCAM-1）在心脏移植慢性排斥反应中的表达及作用。方法采用供体脾细胞（SPC）和环磷酰胺（CP）预处理移植受体,然后行异位心脏移植术,免疫组织化学检测移植心脏中VCAM-1和ICAM-1的表达。结果SPC和CP预处理后,移植心脏中ICAM-1、VCAM-1的表达水平明显减低,而ICAM-1和VCAM-1在急性排斥反应和环孢素A（CsA）治疗组中的表达明显增强（均P〈0．05）。急性排斥反应与CsA治疗组比较差异无统计学意义。结论ICAM-1和VCAM-1的表达水平与心脏移植排斥反应的程度密切相关。     

血红素加氧酶-1诱导对移植肾的保护作用

目的探讨HO-1在大鼠肾移植模型中的肾保护作用。方法实验分三组,分别为肾移植组(A组)、HO-1诱导剂氯化高铁血红素(hemin)预处理组(B组)和假手术组(C组)。各组在术后4、12、24和48h测血肌酐值,并取肾组织做常规病理切片。用免疫组织化学法检测HO-1表达。结果与C组相比,A、B组HO-1表达明显增加,hemin预处理后,B组表达较A组高。而肾移植后,A、B组肾功能均明显受损,但预处理后B组明显轻于A组。结论HO-1对肾移植后早期肾功能具有保护作用,HO-1诱导可能成为一种新的有效的肾移植后肾保护措施。     

糖尿病大鼠肝脏过氧化物增殖体受体γ辅激活子-1的表达及其意义

目的 探讨糖尿病肝脏过氧化物增殖体受体γ辅激活子-1(PGC-1)与糖尿病及高血糖的关系.方法 将大鼠分为3组:链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠11只为糖尿病组(A组);链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠经胰岛素治疗6只为胰岛素治疗组(B组);正常雄性Wistar大鼠9只为对照组(C组).测定大鼠肝脏PGC-1蛋白及mRNA的表达.同时测定血脂、空腹血糖(FBG)水平.结果 链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠FBG明显高于正常组大鼠(P<0.01).链脲佐菌素诱导出糖尿病后,其肝脏PGC.1蛋白表达高于正常大鼠(P相似文献   

核因子κB的小干扰RNA防治自体移植静脉再狭窄的实验研究

目的   探讨核因子κB（NF-κB）的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA)对大鼠自体静脉移植术后血管内膜增殖及相应炎性细胞因子表达的影响。方法    雄性Wistar大鼠80只,随机分为空白组（A组,n=10）;自体静脉移植组（B组,n=18）;空载体组（阴性质粒脂质体医用蛋白胶复合物转染移植静脉,C组,n=26）和基因转染组（NF-κB siRNA阳离子脂质体医用蛋白胶复合物转染自体移植静脉,D组,n=26）。B、C及D组需制作大鼠自体颈外静脉——腹主动脉移植模型,每组4个时点( 3,7,14,21d),相应时间点取移植静脉观察病理形态学变化,免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）,PCR测定单核细胞趋化因子（MCP-1）和肿瘤坏死因子-α（TNF α）的mRNA含量,Western blot测定NF-κB p65蛋白的表达。结果    自体静脉移植术后,B、C和D组移植静脉血管桥均出现内膜增生变厚,新生内膜有大量PCNA阳性细胞,中膜平滑肌细胞增生活跃。术后3d,B组和C组 MCP-1 mRNA及TNF-αmRNA表达水平明显高于A组（P＜0.05）,但D组水平明显低于C组（P＜0.05）。术后7d,B、C组NF-κB p65蛋白表达水平明显高于A组（P＜0.05）,与C组相比,D组NF κB p65蛋白水平明显降低（P＜0.05）。结论     NF-κB的基因表达产物和MCP-1mRNA、TNF-αmRNA的表达有一定相关性,自体静脉移植术后新生内膜增生及炎性细胞因子表达在不同时相点呈动态变化。转染NF-κB siRNA阳离子脂质体复合物可抑制NF-κB的表达,减少MCP-1及TNF-αmRNA的表达,从而抑制移植静脉内膜增生和VSMC增殖,减轻再狭窄。     

兔胚胎卵巢细胞团同种异体移植研究

本实验随机将18只NZW雌兔分为4组。A组(5只):系内移植,供、受体同系,B组(5只):系间移植,供体为NZW封闭群,受体为NZW近交系;C组(5 只);系间移植,供、受体情况同B组,移植物预培养2～3天;D组(3只):移植部位注射等体积培养液,其余条件同前。实验结果显示;①A、B、C3组受体兔在卵巢细胞团移植后,血浆E2水平明显上升(P<0.01),提示移植物有E2分泌;移植后30天内,A组较B、C组E2水平高(P<0.05或<0.01),提示同系移植卵巢功能恢复校好;移植后30～60天,C组E2较B组高(P<0·01),提示培养后移植优于未培养直接移植。②同期移植部位有生长卵泡存在,生殖道组织学也与此结果吻合。