实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的周期时相性研究

精索静脉曲张(varicocele,VC)为泌尿外科常见疾病,其中约21%～41%系因不育而就诊,但截至目前精索静脉曲张导致不育的机制仍不十分清楚[1].由于生精细胞凋亡与不育关系密切,本研究应用流式细胞术(flow cytometry,FCM),分析实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的周期时相性,从细胞分子生物学角度探讨精索静脉曲张所致不育的病理机制.     

茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响

目的:研究茶多酚对精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡的影响,分析茶多酚对精索静脉曲张大鼠生精功能是否具有保护作用。方法:清洁级青春期Wistar大鼠32只随机分为4组,每组8只:假手术组(仅模拟手术过程,不结扎血管)、模型组(建立左精索静脉曲张模型)、茶多酚低剂量组[建立精索静脉曲张模型并给予10 mg/(kg·d)茶多酚干预]、茶多酚高剂量组[建立精索静脉曲张模型并给予40 mg/(kg·d)茶多酚干预]。建立左侧精索静脉曲张模型4周后,假手术组及模型组均给予生理盐水1 ml/100 g,茶多酚低剂量组及茶多酚高剂量组分别给予茶多酚10 mg/kg(用生理盐水配置成浓度为1 mg/ml)和40 mg/kg(用生理盐水配置成浓度为4 mg/ml),灌胃,1次/日,持续4周。4周后4组大鼠均处死并分别取左侧睾丸组织,检测低氧诱导因子-1(HIF-1)、Bcl-2、Bax、细胞色素C(Cyt C)和caspase-3在睾丸组织中的表达及生精细胞的凋亡并计算凋亡指数(AI)。结果:茶多酚干预组大鼠Bcl-2表达高于模型组(110.03±3.07),低于假手术组(154.18±2.96);茶多酚低剂量组大鼠Bcl-2(127.67±1.28)表达低于茶多酚高剂量组(136.41±1.95),差异有统计学意义(P0.05)。茶多酚干预组大鼠HIF-1、Bax、Cyt C和caspase-3的表达低于模型组,高于假手术组;茶多酚低剂量组大鼠HIF-1、Bax、Cyt C和caspase-3的表达高于茶多酚高剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。假手术组AI最低,茶多酚干预组AI低于模型组,茶多酚高剂量组AI低于茶多酚低剂量组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:茶多酚能显著降低精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞的凋亡。     

精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡的实验研究

目的 :探讨外科所致的精索静脉曲张对大鼠生精细胞凋亡的影响。　方法 :采用成年雄性Wistar大鼠复制左精索静脉曲张模型 ;用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法 (TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡。　结果 :实验组的细胞凋亡率显著高于假手术对照组 (P <0 .0 5 )。　结论 :外科所致的精索静脉曲张大鼠睾丸生长减缓 ,生精细胞凋亡增加 ,这可能是其影响生育能力的机制之一。     

生精冲剂对实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡状况的影响

目的:探讨实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡状况以及生精冲剂对其凋亡的影响。方法:将60只成年雄性W istar大鼠随机抽出20只为对照组,其余按石津和彦改良法制成左精索静脉曲张大鼠模型,再随机分为模型组20只,治疗组20只。用末端脱氧核苷酸转移酶介导的原位缺口末端标记法(TUNEL)检测睾丸生精细胞凋亡。结果:模型组大鼠睾丸生精细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.01)和治疗组(P<0.01),治疗组与对照组比较有明显差异(P<0.01)。结论:实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡增加,这可能是影响生育力的机制之一;生精冲剂能够减少精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,对睾丸生精功能具有保护作用,进而可提高睾丸的生殖能力。     

实验性精索静脉曲张对大鼠同侧睾丸的影响

目的:利用大鼠动物模型来研究实验性精索静脉曲张(EV)对其同侧睾丸的影响。方法:EV模型的制作是通过在雄性SD大鼠左侧精索内静脉和肾上腺静脉内侧部分结扎左肾静脉。60只雄性青春期SD大鼠随机分为EV持续6、12、18周组(EV6、EV12、EV18组,每组12只)和相应的接受假手术的对照组(每组8只)。于6、12、18周,摘取成功复制成EV模型大鼠(分别为10,8,9只)以及各自接受假手术的对照组大鼠左侧睾丸,检测其Johnsen's评分、生精小管超微结构、睾丸组织睾酮浓度(ITC)和生精细胞的凋亡指数(AI)。结果:EV6、EV12、EV18组Johnsen's评分(6.92±0.52,4.83±0.41,2.95±0.26)和ITC(6.32±0.85,5.17±0.76,4.11±0.69)均显著低于各自对照组[(9.56±0.35,9.63±0.31,9.39±0.46)和(9.64±1.23,9.38±0.69,9.73±0.49)](P<0.05),并且随着精索静脉曲张持续时间的增加而逐渐降低;EV6、EV12、EV18组AI(5.32±1.23,15.21±0.97,21.13±1.12)显著高于各自对照组(3.21±1.15,3.43±1.21,3.61±1.15),并且随着精索静脉曲张持续时间的增加而逐渐升高;各EV组生精小管的超微结构损伤也随着精索静脉曲张持续时间的增加而逐渐严重。结论:EV导致同侧睾丸ITC下降、生精功能的进行性损害、生精细胞AI增加。     

通精灵对实验性精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡及Bcl-2表达的影响

目的：探讨实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡状况及通精灵对精索静脉曲张大鼠睾丸生精功能的保护作用。方法：成年清洁级雄性Wistar大鼠50只,按Sapyol法制作左精索静脉曲张大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、通精灵低剂量组、通精灵中剂量组、通精灵高剂量组各10只。造模1个月后,各组予以不同药物灌胃1次／d。2个月后处死,用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法检测睾丸生精细胞凋亡,免疫组化法检测睾丸组织Bcl-2表达。结果：模型组大鼠左睾丸凋亡指数明显高于假手术组及通精灵各组（P〈0．01）,通精灵各组左睾丸凋亡指数显著低于模型组（P〈0．05）。与假手术组比较,模型组大鼠睾丸组织Bcl-2蛋白表达下降（P〈0．05）,与模型组比较,通精灵中、高剂量组睾丸组织Bcl-2蛋白表达显著上升（P〈0．05）。结论：通精灵能降低实验性精索静脉曲张大鼠睾丸生精细胞凋亡,减轻实验性精索静脉曲张大鼠睾丸组织的病理损害,上调凋亡抑制基因Bcl-2表达。     

精索静脉曲张大鼠睾丸自噬对生精细胞的影响

目的:研究精索静脉曲张(VC)大鼠模型中睾丸不同水平自噬对生精细胞凋亡的影响。方法:雄性SD大鼠54只随机分为6组:空白对照组、雷帕霉素对照组、氯喹对照组各6只,VC组、VC+雷帕霉素组、VC+氯喹组各12只。采用HE染色观察睾丸、附睾组织形态学变化,并对睾丸及附睾中精子形成情况进行评分,TUNEL染色检测生精细胞凋亡指数(AI),Western印迹检测LC3、p62、Bax、Bcl-2的表达。结果:空白对照组、雷帕霉素对照组、氯喹对照组大鼠睾丸及附睾组织均未发生明显形态学变化,精子形成情况评分及AI亦无显著差异(P>0.05);VC组大鼠睾丸及附睾组织发生明显病理损伤,精子形成情况评分显著降低(P<0.01),AI显著升高(P<0.01),但VC+雷帕霉素组较VC组明显改善,而VC+氯喹组较VC组轻度加重。此外,与空白对照组比较,VC组自噬相关蛋白LC3(包括LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ的比值)和促凋亡蛋白Bax表达显著增加(P<0.01),抑凋亡蛋白Bcl-2表达则显著降低(P<0.01);且VC+雷帕霉素组LC3与Bcl-2表达显著高于VC组(P<0.01),p62和Bax表达则显著低于VC组(P<0.01);而VC+氯喹组LC3与Bcl-2表达显著低于VC组(P<0.01),p62和Bax的表达则显著高于VC组(P<0.01)。结论:VC可诱导大鼠睾丸自噬和生精细胞凋亡,上调自噬可抑制生精细胞凋亡,阻滞自噬则可促进生精细胞凋亡。     

实验性精索静脉曲张大鼠生精状态评价

目的 通过对大鼠实验性精索静脉曲张(varicocele,VC)模型睾丸生精小管生精上皮结构、性激素水平的分析,探讨精索静脉曲张致不育的机制.方法 40只雄性青春期Wistar大鼠随机分为VC8周组(n=12)、VC12周组(13=12)和相应对照组(分别n=8);左肾静脉部分结扎建立实验性大鼠VC模型.术后8周或12周,分别测量各组大鼠:(1)左侧精索静脉直径、睾丸温度及体质量、睾丸生精小管生精上皮;(2)外周血中促卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)和睾酮(T)的水平.结果 VC8周和VC12周组大鼠左侧精索静脉明显扩张,与对照相比血管直径差异有统计学意义(P<0.01);VC8和VC12周组大鼠左侧睾丸体质量均低于自体右侧睾丸和对照组睾丸,差异有统计学意义(P<0.05);光镜下,VC组大鼠双侧睾丸生精小管生精上皮精子发生阻滞、细胞脱落和细胞层数减少等,VC12周组损伤程度较VC8周组明显加重,左侧较右侧显著;与对照组相比,VC组大鼠外周血FSH、LH升高,T降低,差异均有统计学意义(P<0.01).结论 本研究提示:VC对大鼠双侧睾丸生精小管生精上皮产生明显的损害作用,并导致大鼠血中T水平降低和FSH、LH水平升高.     

精索静脉曲张导致睾丸生精细胞增殖与凋亡的变化

精索静脉曲张（VC）是男性不育的原因之一，在正常人群中VC的发生率为15％～17％，而不育者中VC的发生率占30％～40％。本研究旨在通过观察左侧VC患者双侧睾丸生殖细胞的增殖、凋亡的变化，探讨该病的病理生理机制。     

α-生育酚对精索静脉曲张大鼠生殖细胞凋亡的影响

目的:探讨α-生育酚对精索静脉曲张(VC)大鼠睾丸生殖细胞损害的保护作用。方法:采用成年雄性Wistar大鼠10只复制精索静脉曲张疾病模型,4周后开始每日肌注α-生育酚0.5mg/(100g体重),共4周(生育酚组)。同时设手术组及假手术组进行对照。8周后用原位末端脱氧核苷酸转移酶标记法(TUNEL)检测睾丸生殖细胞凋亡指数(AI)。结果:生育酚组动物左侧睾丸重量显著高于手术组(P<0.05),低于假手术组(P<0.05);生育酚组细胞凋亡率[左侧(5.34±1.28)%,右侧(5.87±1.25)%]高于假手术组[左侧(4.72±1.02)%、右侧(4.88±1.28)%](P<0.05),而显著低于手术组[左侧(9.05±2.51)%,右侧(7.22±1.35)%](P<0.05)。结论:α-生育酚能降低精索静脉曲张大鼠生殖细胞的凋亡指数,延缓睾丸细胞损害的病程,对精索静脉曲张导致的睾丸损害具有一定的保护作用。     

实验性精索静脉曲张大鼠睾丸组织IL-1和NO的变化

目的 :研究精索静脉曲张 (VC)对大鼠睾丸组织中IL 1和NO含量的影响。　方法 :采用部分结扎左肾静脉及左髂总静脉之间的交通支 ,制备Wistar大鼠VC模型。将大鼠随机分为手术结扎组 (VC组 ,n =30 )和假手术组 (n =2 0 ) ,分别测定 2组大鼠睾丸组织中IL 1和NO的含量 ,并加以比较。　结果 :①IL 1、NO含量在左侧睾丸组织中VC组均显著高于假手术组 (P <0 .0 1) ,而在右侧睾丸组织中 2组比较差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;②IL 1与NO呈正相关关系 (r =0 .5 72 ,P <0 .0 1)。　结论 :VC时睾丸组织IL 1和NO的变化 ,可能是造成睾丸损伤、精子发生障碍甚至不育的原因     

大鼠睾丸局部热作用对生精细胞凋亡的影响

目的 :研究大鼠睾丸局部受热后生精细胞凋亡的情况。　方法 :70只雄性SD大鼠随机分为热处理组 ( 43℃ )和对照组 ( 2 2℃ ) ,分别按睾丸局部处理后 12h、1d、3d、6d、10d、5 0d和 80d分成 7个亚组。应用电镜、流式细胞术和原位末端标记法 (TUNEL) ,检测各亚组大鼠睾丸生精细胞凋亡情况。　结果 :电镜显示热处理各组均出现生精细胞凋亡表现 ;流式细胞术检测发现热处理各组亚单倍体细胞百分率明显升高 (P <0 .0 1) ;TUNEL法显示热处理各组生精细胞凋亡率明显高于对照组 (P <0 .0 1) ,各类生精细胞对热的敏感性不同。　结论 :大鼠睾丸局部受热后生精细胞凋亡增加 ,初级精母细胞受热后最敏感 ,其次为精子细胞和精子 ,并且精原细胞凋亡在受热后一个长时期内均有增加     

沙眼衣原体感染与生精细胞凋亡

目的 :探讨沙眼衣原体 (Ct)感染与生精细胞凋亡的关系。　方法 :采用瑞 姬染色和末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT)介导的脱氧核苷酸原位末端标记法 (TUNEL)检测凋亡生精细胞。　结果 :Ct感染组中生精细胞凋亡率明显高于正常对照组 (P <0 .0 1 )。　结论 :Ct感染可引起生精细胞凋亡 ,为阐明Ct感染引起男性不育的机制提供了客观依据     

精索静脉曲张病人手术前后生殖激素的变化

目的 :观察精索静脉曲张不育病人手术前后血浆生殖激素LH、FSH、E2 、PRL、T的变化情况。　方法 :运用时间分辨免疫荧光法对 3 2例精索静脉曲张不育病人手术前后血浆生殖激素进行检测。 3 2例病人中 2 8例( 87.5 0 % )为Ⅱ度 (中度 )精索静脉曲张 ,4例 ( 12 .5 0 % )为Ⅲ度 (重度 )精索静脉曲张。　结果 :治疗前 ,生殖激素异常者 18例 ,手术后生殖激素异常的病人有 11例转至正常范围。但原来生殖激素正常的 14例病人中有 2例出现异常。经统计学检验 ,全部病人手术前后生殖激素总体水平并无显著性差异。　结论 :精索静脉曲张不育病人的生殖激素多数有异常。治疗前后总体生殖激素水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。     

大鼠精索静脉曲张后附睾上皮细胞凋亡及管腔α-1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量观察

目的:探讨大鼠左侧精索静脉曲张后同侧附睾上皮细胞凋亡与附睾管腔中-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量改变的关系及意义。方法:16只雄性SD大鼠建立左侧精索静脉曲张模型,分为对照组和实验组,每组8只。缺口末端转移酶标记技术检测附睾上皮细胞凋亡;硝基酚法和5-甲基苯二酚法分别检测附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶和唾液酸含量。结果:大鼠左侧精索静脉曲张模型建立后的第7 d,实验组同侧附睾上皮细胞凋亡指数显著高于对照组(P<0.001);实验组附睾管腔液-α1,4-葡糖苷酶、唾液酸含量显著低于对照组(P<0.05,P<0.005)。结论:大鼠左侧精索静脉曲张可导致同侧附睾上皮细胞凋亡增加,进而影响该侧附睾上皮细胞的合成和分泌功能。     

Varicocele in the rat: a new experimental model

Summary With no consistent animal prototype for the study of varicocele, we set out to create a model in the rat by complete ligation of the main branch of left spermatic vein (MBSV) or by partial ligation of the left renal vein. Three months later, the histology, ultrastructure and temperature of the testis and epididymis were studied. Microscopically, spermatogenic arrest was the most frequent anomaly seen. The most frequently noted ultrastructural change of the testis was distension of smooth endoplasmic reticula in Sertoli cells. The microvilli of columnar epithelia in epididymis were sparse and showed local defects. Lesions and increased temperatures in the testis and epididymis induced by the ligation of the left MBSV were similar to those seen in partial ligation of the left renal veins, with no significant differences between left and right. Significant differences were found, however, on comparison with the controls.     

大鼠原位肝移植动物模型制作要点

目的建立稳定的大鼠原位肝移植模型。方法参照Kamada等法建立大鼠原位肝移植模型，经门静脉灌注肝脏，改进肝上下腔静脉吻合法为单线连续缝合法。结果210只大鼠原位肝移植24h存活率为91．0％(191／210)，平均无肝期17min，1周生存率为85．2％(179／210)。结论改进大鼠原位肝移植肝上下腔静脉吻合法，可缩短受体无肝期，减少手术并发症发生率，并能提高原位肝移植大鼠的生存率。     

精索静脉曲张大鼠生精细胞凋亡与caspase-3蛋白的表达

目的:探讨caspase-3在精索静脉曲张大鼠生精细胞中的表达及其与生精细胞凋亡的关系。方法:雄性SD大鼠24只,随机分为假手术组(SOG)、30 d术后组(PG1)、60 d术后组(PG2),每组8只。建立左精索静脉曲张模型,TUNEL法检测生精细胞凋亡,免疫组化SABC法检测caspase-3表达。结果:SOG、PG1、PG2大鼠左、右侧睾丸每生精小管截面caspase-3阳性细胞数分别为0.117 5±0.012 9、0.246 3±0.042 1、0.293 8±0.051 1及0.165 0±0.019 2、0.253 8±0.021 9、0.277 5±0.034 3。与SOG相比,PG1和PG2组大鼠双侧睾丸生精细胞caspase-3表达均增加,差异有显著性(P=0.011 5及P=0.014 4)。结论:精索静脉曲张可能是大鼠生精细胞caspase-3表达增加且生精细胞凋亡增多的机制之一。