氟化钠抗非特异性酯酶NAE活性敏感度测定的研究

[目的]本文通过氟化钠对非特异性酯酶NAE活性抑制试验，探讨其在疾病诊断中的应用价值。[方法]使用10个不同浓度的氟化钠，对2060份骨髓涂片标本进行抑制前后非特异性酯酶活性强度观察。采用王氏改良α-醋酸奈酯酸测定非特异性酯酶（NAE）组化法，观测NAE的阳性率和阳性指标。[结果]不同浓度的氟化钠均不能完全抑制各类骨髓细胞所呈现的不同强度的NAE反应。仅有部分细胞呈现轻度或中度部分抑制。氟化钠处理前后两组的NAE活性阳性率和阳性指数无显著差异（P〈0.05）。[结论]通过氟化钠抑制前后NAE组化染色的大量实验结果，说明氟化钠抑制试验对骨髓细胞种类和白血病类型鉴别无大参考价值。本实验结果也为重新评估NAE的价值提出了新的观点和实践依据。     

急性白血病的细胞化学和免疫分型

对５２例急性白血病进行多种细胞化学染色和单克隆分型,并与以ＦＡＢ为基础的形态学分型比较。结果表明,氯醋酸酯酶在鉴别粒细胞系统,醋酸萘酯加氟化钠抑制试验在鉴别单核细胞系有重要作用。     

原代培养猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性与氟化钠的影响

目的:流行病学调查结果显示,地方性氟中毒与甲状腺肿的流行有很大的重叠性。探讨氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性的影响。方法:实验于2006-10/2007-05在辽宁医学院科学实验室中心完成。①实验方法:在猪死亡1h内取其甲状腺组织,去除甲状腺组织包膜及外层活性差的组织,选取中央活性高的部位,剪成1mm3组织块,用胰蛋白酶、胶原酶Ⅳ消化分离,得到含猪甲状腺细胞的消化液,沉淀悬于含体积分数为0.15的胎牛血清、1U/L牛促甲状腺素、80万U/L庆大霉素的F12培养基中,过滤,调整细胞浓度至5×105L-1,接种培养,每3d更换培养液。常规培养48h的猪甲状腺细胞接种于96孔培养板,按氟化钠终浓度不同分为0,40,80,160mg/L组。②实验评估:染毒48h后,采用噻唑蓝法测定细胞存活量,采用改良愈创木酚法测定甲状腺过氧化物酶活性。结果:①氟化钠对原代培养猪甲状腺细胞存活量的影响:与0mg/L氟化钠比较,40mg/L氟化钠染毒后猪甲状腺细胞的存活量基本相似;80,160mg/L氟化钠染毒后猪甲状腺细胞的存活量均明显下降(P<0.01)。②氟化钠对甲状腺过氧化物酶活性的影响:与0mg/L氟化钠比较,40,80,160mg/L氟化钠染毒后的甲状腺过氧化物酶活性均明显下降(P<0.01),呈剂量-效应关系。结论:氟化钠对原代培养的猪甲状腺细胞及甲状腺过氧化物酶活性均具有抑制作用。     

试验条件对酸性磷酸酶活性的影响研究

目的：探讨不同试验条件对酸性磷酸酶活性的影响。方法：用不同类型的样品管同时采集同一受试对象的静脉血标本，并在不同的试验条件下检测总酸性磷酸酶和耐酒石酸性磷酸酶活性。结果：采血后低温分离血清ACPT和TrACP活性在1h内无明显变化，室温放置2.5h后活性下降约9％，离心后未及时吸出血清或全血静置2.5h再离心检测，ACP活性上升约20％。促凝胶可使ACP总活性明显上升，柠檬酸钠和氟化钠一草酸钾对ACP活性产生抑制，尤以后者更为显著。胆红素对ACP活性测定有明显的负干扰。结论：ACP活性易受多种试验条件的明显影响，应加强分析前的质量控制。     

黄连素对多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨黄连素对多发性骨髓瘤细胞活性和凋亡的影响。方法:通过CCK-8试验检测不同浓度黄连素作用下多发性骨髓瘤U266细胞的增殖;ELISA试验检测不同浓度黄连素作用下U266分泌IL-6的情况;细胞凋亡试验检测不同浓度黄连素作用下U266骨髓瘤细胞凋亡行为变化;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)和扫描电子显微镜(scanning electron microscope,SEM)观察U266细胞的超微结构。结果:随着浓度(40~160μmol/L)的改变,黄连素以剂量和时间依赖的方式抑制U266细胞细胞增殖和IL-6分泌;黄连素以剂量依赖的方式诱导U266细胞G2/M期停滞和凋亡,80μmol/L黄连素处理后的U266细胞的超微结构发生凋亡的形态特征。结论:黄连素能抑制人多发性骨髓瘤细胞的活性,诱导骨髓瘤细胞G2/M期停滞并诱导细胞凋亡。     

氟对成骨细胞活性影响的一种新的检测方法

[目的]研究不同浓度氟化物对大鼠成骨细胞活性的影响。[方法]用AlamarBlue摄入法检测细胞增殖。[结果]100μmol／L～1mmol／L氟化钠在体外可刺激细胞增殖，AlamaxBlue的还原率明显升高，2mmol／L以上氟化钠可抑制细胞增殖，AlamarBlue的还原率下降，与对照组相比有显著性差异。[结论]AlamaxBlue摄入法是一种简单、快速、客观地评价细胞活力的检测方法，并可对细胞活力的变化进行连续观察。     

雌激素通过NF-κB信号通路影响肝癌细胞的肿瘤学行为研究

目的探讨雌激素对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖及迁移能力的抑制和诱导凋亡的作用及其相应机制。方法利用MTS试验检测不同浓度的雌激素在不同时间点对HepG2和BEL7402两种肝癌细胞增殖能力的影响。Annexin V/PI流式细胞术检测不同浓度的雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞凋亡的情况。Transwell迁移实验检测雌激素对HepG2和BEL7402细胞迁移能力的影响。采用Western blotting法检测不同浓度下雌激素对肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性及其下游相关基因c-Myc、Cyclin D1、基质金属蛋白酶(MMP-9)、血管内皮生长因子(VEGF)和Bcl-2表达的影响。结果 MTS试验结果显示,在不同时间点雌激素有效抑制了HepG2和BEL7402细胞的增殖,并随着雌激素浓度的升高其抑制肝癌细胞增殖的效果逐渐增强,与此同时,雌激素也降低了c-Myc、Cyclin D1等增殖相关基因的表达。Annexin V/PI流式细胞术数据显示雌激素诱导HepG2和BEL7402细胞的凋亡并呈明显剂量依赖性,而抗凋亡蛋白Bcl-2的表达出现下降。Transwell迁移实验证明雌激素明显抑制了HepG2和BEL7402细胞的迁移能力并且降低了MMP-9和VEGF的表达。验证了雌激素可有效抑制HepG2和BEL7402肝癌细胞中NF-κB信号通路的活性。结论雌激素通过下调NF-κB信号通路的活性及下游相关分子的表达,而抑制肝癌细胞的增殖与迁移并诱导其凋亡。     

不同浓度氟化钠抗凝血对POCT血糖仪校准结果干扰影响的研究

目的研究不同浓度氟化钠抗凝血对POCT血糖仪结果干扰情 况。方法20例研究对象每人采集1支EDTA-K2样本管和6支含不同 浓度氟化钠的(NaF)EDTA-K2样本管静脉血,每管2 ml,POCT血糖仪与生化仪检测每管血 糖水平,比较不同浓度氟化钠组间样本管血糖水平差异及相同氟化钠浓度样本管POCT血糖仪 与生化仪检测血糖水平差异。结果POCT血糖仪检测不同浓度氟化钠 样本管血糖水平组间比较,其差异有统计学意义( F=12.192,P <0.001);采用LSD法进 行多重比较,不含NaF组血糖水平与其它含NaF组血糖水平比较,不含NaF组血糖水平明显高 于其它含NaF组血糖水平( t=13.556,14.223,13.512,14.012,13.876,13.864, 均P <0.001),含NaF不同组间血糖水平比较,差异无统计学意义( t=0.352,0.412,0 .386,0.411,0.395,0.414,均P >0.05);生化仪检测不同浓度氟化钠组间血糖水 平比较,其差异无统计学意义( F=0.428,P =0.829)。不含氟化钠样本管两仪器检测血 糖水平比较,差异无统计学意义( t=0.457,P =0.358);含相同浓度氟化钠样本管两仪 器检测血糖水平比较,生化仪检测血糖水平明显高于POCT血糖仪水平( t=-14.415,-14. 746,-13.613,-14.108,-15.253,-14.069,均P <0.01)。结论 氟化钠对采用葡萄糖脱氢酶法POCT血糖仪结果有明显抑制作用,抑制程度与氟化钠浓 度无明显相关,氟化钠不宜作为葡萄糖脱氢酶法POCT血糖仪比对标本的糖酵解抑制剂。     

c—myc反义寡核苷酸对省腺黏液表皮样癌细胞增殖的影响

目的：探讨硫代磷酸化修饰的c-myc反义寡核苷酸（ASODN）对涎腺黏液表皮样癌MEC－1细胞增殖活性的影响，方法：c-myc ASODN作用于液表皮样癌MEC－1细胞，分别采用软琼脂克隆形成试验，3H－TdR掺入试验，裸鼠成瘤能力观察等方法研究对细胞增殖活性的影响，结果：c-myc ASODN使MEC－1细胞DNA的合成受到显著抑制，且表现出浓度依赖性，用ASODN处理后的细胞接种于裸鼠后，细胞在裸鼠体内成瘤数量减少，肿瘤生长减慢，结论：经c-mycASODN作用后，黏液表皮样癌MEC－1细胞的增殖受到明显的抑制，细胞的恶性表型得到了一定程度的逆转。     

华蟾素抑制NIH／3T3细胞增殖对防治器官组织纤维化的作用

目的：观察华蟾素对NIH／3T3细胞的抑制作用，为治疗纤维化有关疾病提供实验依据。方法：体外培养NIH／3T3细胞株，加入不同浓度的华蟾素，24h后观察细胞形态学，以碱性磷酸酶为指标观察细胞毒性，用四甲基偶氮唑盐法检测其增殖活性。结果：不同浓度的华蟾素均能改变成纤维细胞形态，抑制细胞增殖，浓度在10mg／L以下无明显的细胞毒作用。结论：华蟾素对NIH／3T3细胞具有抑制作用，并呈剂量依赖关系，具有防治纤维化有关疾病的应用前景。     

氟化钠通过调控Bcl-2和Bax基因的表达诱导大鼠肾脏细胞凋亡机制的研究

目的研究氟化钠(NaF)中毒对大鼠肾脏细胞凋亡的影响,并从抗凋亡的角度探究其凋亡的机制。方法48只体重80~100 g的雄性SD大鼠,随机分成四组:对照组、低氟组、中氟组、高氟组,每组12只,分别饮用浓度为0mg/L、50 mg/L、100 mg/L、200 mg/L NaF的去离子水,连续染毒120 d。观察大鼠的一般状态,氟斑牙形成情况,测量体重变化及尿氟含量;制备肾脏细胞悬液,用流式细胞术检测肾脏细胞凋亡率;实时荧光定量RT-PCR和Western blot检测肾脏组织中Bcl-2和Bax基因的表达。结果在氟化钠染毒的第60天和120天,髙氟组大鼠体重显著低于对照组(P0.05);三个NaF处理组氟斑牙发生率、尿氟含量及肾脏细胞凋亡率均显著高于对照组(P0.05);随着氟化钠浓度的升高,Bcl-2 mRNA和蛋白的表达呈现上调趋势,而Bax mRNA和蛋白的表达则呈下调趋势,并且差异具有显著性(P0.05)。结论氟化钠可通过抑制Bcl-2和促进Bax的表达诱导肾脏细胞凋亡,并且随着氟化钠浓度的升高,凋亡率逐渐升高。     

姜黄素对γδT细胞和神经胶质瘤细胞的作用比较

目的:比较姜黄素对γδT细胞和神经胶质瘤细胞的作用.方法:不同浓度姜黄素诱导γδT细胞和3株神经胶质瘤细胞,检测姜黄素的抑制率和测定γδT细胞的杀伤活性,检测诱导前后的细胞凋亡率.结果:姜黄素时神经胶质瘤细胞的生长抑制率明显高于对γδT细胞.姜黄素在低浓度时对γδT细胞杀伤活性影响不明显,2.5～10μm/L时,姜黄素诱导的γδT细胞杀伤活性最高,浓度超过20μmol/L时杀伤活性呈下降趋势.结论:一定浓度的姜黄素对肿瘤细胞有抑制作用,能增强γδT细胞杀伤活性,超过该浓度可明显抑制γδT细胞的增殖能力和杀伤活性及增加其凋亡率,而对肿瘤细胞作用不明显.γδT细胞杀伤活性增强可能与细胞内穿孔素和颗粒酶含量相关.     

延迟分离血浆对葡萄糖耐量试验结果解释的影响

众所周知,血糖标本于收集后应立即测定。但通常不可避免地会耽误一些时间,因此常用保存剂如氟化钠以抑制糖酵解。据知,氟化钠是最佳的化学保存剂。但已有实验表明,加氟化钠的血糖标本放置2～4小时后,其浓度平均约降低0.5mmol/L,且主要发生在第一小时,这种程度的减低可能会导致诊断上的错误。     

细胞形态误诊为APL的CD56+急性单核细胞白血病1例

目的报道1例细胞形态误诊为急性早幼粒细胞白血病(APL)的CD56+急性单核细胞白血病,为临床上对其鉴别诊断提供依据。方法回顾性分析我院收治的1例形态似APL的CD56+急性单核细胞白血病患者的病历资料,并对其进行骨髓细胞形态、化学染色、免疫表型检测、染色体核型分析、融合基因等检查分析。结果患者骨髓细胞形态示:骨髓有核细胞增生明显活跃,以早幼粒细胞增生为主(占59.2%),考虑AML-M3;细胞化学染色示:髓过氧化物酶(POX)阴性,非特异性酯酶乙酸萘酯酶(NAE)和丁酸萘酯酶(NBE)双染色阳性,且阳性反应可被氟化钠抑制;免疫表型检测结果示:表达CD56,CD4dim,CD33,CD14,CD64,CD123,CD9,CD13,CD11b,MPOdim;部分表达HLA-DR,CD15;不表达CD7,CD117,CD34,CD16,CD19,CD22,CD20,c CD3,c CD79a,诊断为恶性幼稚单核细胞;染色体核型分析示:染色体核型正常(46,XY[20]);白血病43种融合基因筛查结果均为阴性。结论免疫表型分析可确诊形态特征不典型的无特定重现性遗传学异常的急性单核细胞白血病。     

丙戊酸诱导白血病HL-60细胞凋亡及其对h-tert基因表达的影响

为了探讨丙戊酸（valproic acid,VPA）对白血病HL-60细胞诱导凋亡的作用及其可能的机制,采用细胞毒性试验（CCK-8法）观察不同浓度VPA在不同作用时间对HL-60细胞增殖的影响,采用荧光显微镜检及流式细胞术检测细胞凋亡,并观察VPA作用后HL-60细胞端粒酶亚单位h-tert基因、凋亡相关蛋白表达和caspase-3活性的变化。结果表明：VPA呈剂量依赖性抑制HL-60细胞增殖（r=-0.87）.,诱导细胞凋亡;同时,抗凋亡蛋白BCL-2表达明显下降,促凋亡蛋白BAX表达上调,caspase-3活性增强,h-tert mRNA表达逐渐下降,HL-60细胞的凋亡率与h-tert mRNA表达呈负相关。结论：VPA可抑制白血病HL-60细胞增殖,诱导细胞凋亡;VPA可能通过下调h-tert mRNA、BCL-2蛋白表达,上调BAX表达及增强caspase-3活性而发挥抗白血病作用。     

金丝桃素和盐酸赖氨酸抗疱疹病毒作用体外试验研究

目的：通过评价金丝桃素、盐酸赖氨酸体外抗疱疹病毒活性，为进一步研究疱疹后遗神经痛(PHN)以及继发抑郁的治疗提供更多理论支持。方法：采用对病毒昕致细胞病变(CPE)抑制法，观察金丝桃素和盐酸赖氨酸对Vero细胞和2BS细胞的细胞毒性，以及对单纯疱疹病毒1型(HSV-1)和水痘-带状疱疹病毒(VZV)的抗病毒活性。结果：金丝桃素对HSV-1和VZV抑制的最小有效浓度和治疗指数相同，分别为0．39mg／L和32；盐酸赖氨酸对HSV-1和VZV抑制的最小有效浓度都是19．5mg／L，治疗指数分别为64和129。结论：金丝桃素和盐酸赖氨酸在体外具有抗HSV-1和VZV作用。     

DNA甲基转移酶在骨髓瘤细胞株中的表达异常及其意义

本研究旨在探索多发性骨髓瘤细胞株U266 DNA甲基转移酶(DNMT)活性、基因表达情况并分析其生物学意义。用ELISA方法检测U266细胞DNMT活性,用半定量RT-PCR技术分析DNMT 1、3a、3b mRNA在U266细胞中的表达,体外用不同浓度去甲基化化合物异硫氰酸苯己酯(phenyl hexyleisothiocyanate,PHI)处理U266细胞,分析DNMT活性变化及DNMT1、3a、3b在瘤细胞中的表达改变。结果表明,骨髓瘤细胞U266中DNMT总活性升高,DNMT1、3a、3b mRNA均高表达,不同浓度PHI处理U266细胞后,细胞增殖抑制,DNMT活性亦被显著抑制,DNMT1、DNMT3a以及DNMT3b mRNA表达下降并呈浓度依赖性。结论:DNMT活性及其表达增高是骨髓瘤细胞特征之一,当DNMT活性或mRNA表达抑制时瘤细胞发生凋亡,因此DNMT可作为骨髓瘤治疗的新靶点。     

鸢尾黄酮通过促进自噬抑制结肠癌细胞增殖并诱导其凋亡[基金项目：福建省自然科学基金项目（2016J01617）]

背景与目的：探究鸢尾黄酮对结肠癌细胞自噬的影响及其对细胞增殖能力和凋亡的影响。方法：鸢尾黄酮对结肠癌细胞的半抑制浓度（IC50）采用CCK-8法检测;结肠癌细胞的长期增殖能力采用克隆平板实验检测;CCK-8法检测不同抑制剂预处理后鸢尾黄酮对结肠癌细胞增殖活性的影响;蛋白免疫印迹法检测自噬相关蛋白的变化情况;透射电镜观察结肠癌细胞中自噬体的数量;小干扰RNA（siRNA）沉默自噬关键蛋白ATG5,CCK-8法检测联合凋亡抑制剂作用下鸢尾黄酮对结肠癌细胞增殖活性的影响。结果：通过CCK-8法分析不同浓度鸢尾黄酮作用下结肠癌细胞系SW480的生长抑制情况后绘制半抑制浓度（IC50）曲线,确定其半抑制浓度（IC50）为（221.9±35.31）μM;克隆平板实验表明鸢尾黄酮对结肠癌细胞的长期增殖能力具有抑制作用;凋亡抑制剂Z-VAD显著逆转了鸢尾黄酮对结肠癌细胞的增殖抑制作用;Western blot实验结果表明随着鸢尾黄酮作用浓度的升高,SW480细胞内LC3-II含量逐渐增高,p62含量下降;电镜结果表明鸢尾黄酮作用后SW480细胞内自噬体含量明显增加;沉默ATG5部分逆转鸢尾黄酮对SW480细胞的增殖抑制作用。结论：鸢尾黄酮通过促进自噬抑制了结肠癌细胞的增殖能力并诱导结肠癌细胞的凋亡。     

PATZ-P53相互作用参与调控宫颈癌细胞凋亡与侵袭的分析

目的探讨PATZ-P53相互作用参与调控宫颈癌细胞凋亡与侵袭的机制。方法宫颈癌Hela细胞株分别给予PATZ处理(人重组PATZ终浓度分别为10 ng/ml,100 ng/ml)与对照处理(含血清的DMEM培养基,不加入任何试剂)。各组细胞均在培养48 h后,采用MTT法检测宫颈癌细胞增殖活性,采用流式细胞仪检测凋亡指数,采用侵袭小室检测侵袭情况,采用Western Blot方法检测P53、Casepase-3蛋白表达水平。结果与对照组比较,PATZ处理48 h后,随着PATZ浓度的增加细胞增殖活性增大,且不同组别的细胞增殖活性比较差异有统计学意义(P 0. 05);随着PATZ浓度的增加细胞凋亡指数减小,不同组别的细胞凋亡指数比较差异有统计学意义(P 0. 05);随着PATZ浓度的增加细胞侵袭穿透指数增加,不同组别的细胞侵袭穿透指数比较差异有统计学意义(P 0. 05); PATZ能够呈现剂量依赖性的抑制Casepase-3与P53蛋白,不同组别的Casepase-3与P53蛋白相对表达量比较差异有统计学意义(P 0. 05)。结论 PATZ-P53相互作用能抑制宫颈癌细胞凋亡,促进细胞侵袭与增殖,抑制Caspase-3蛋白的表达,从而发挥促癌作用。     

bFGF对大鼠胚胎中脑神经细胞分化和增殖作用的研究

目的：研究碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)对大鼠胚胎中脑神经细胞分化和增殖的作用。方法：在培养孕14d的大鼠胚胎中脑神经细胞中加入不同浓度bFGF，通过体外培养计数存活中脑神经细胞集落数及测定细胞相对蛋白质的含量。通过免疫组织化学方法鉴别中脑神经细胞的形态及利用图象分析细胞形态变化。结果：中脑神经细胞胞体较大，突起较长，而且有丰富的神经纤维连结成网络状，细胞相对蛋白质含量增加，显示浓度一效应关系。结论：bFGF能促进中脑神经细胞分化和增殖，增加中脑神经细胞突起的长度，促进中脑神经细胞的活性。