GDF11对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞细胞凋亡的影响及其信号机制

 目的 探讨生长分化因子11(GDF11)对糖尿病小鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)细胞凋亡的影响及其信号机制。方法 复苏BMSCs并将其分为4组:正常小鼠BMSCs组(Nor),糖尿病小鼠BMSCs组(DB),GDF11干预组(DB+GDF11;GDF11),抑制剂组(DB+GDF11+ LY294002;LY)。各组细胞培养3 d后,台盼蓝染色观察细胞凋亡率。Western blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2和磷酸化(p)-PI3K、p-Akt的表达水平。结果 与正常小鼠BMSCs相比,糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率显著升高[(36.2±3.3)% vs. (3.1±1.1)%,P＜0.05];GDF11可降低糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡率[(18.9±1.9)% vs. (36.2±3.3)%,P＜0.05],提高Bcl-2/Bax的蛋白表达比[(1.63±0.10) vs. (0.26±0.09);P＜0.05],同时激活PI3K[p-PI3K/PI3K:(0.98±0.08) vs. (0.42±0.11);P＜0.05]/Akt[p-Akt/Akt:(0.94±0.10) vs. (0.32±0.15);P＜0.05]信号通路。而且,当抑制PI3K/Akt信号通路后,GDF11抑制糖尿病小鼠BMSCs凋亡的作用明显减弱[细胞凋亡率:(41.1±3.9)% vs. (18.9±1.9)%,P＜0.05]。结论 GDF11可通过激活PI3K/Ak信号通路抑制糖尿病小鼠BMSCs细胞凋亡。     

生长分化因子11对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响

 目的 探讨生长分化因子11(growth differentiation factor 11,GDF1)对高糖环境中人甲状腺乳头状癌K1细胞凋亡的影响。方法 将人甲状腺乳头状癌K1细胞分为3组:对照组(Vehicle)、高糖组(HG)和GDF11组(HG+GDF11;GDF11)。各组细胞培养3 d后,流式细胞术检测细胞凋亡率,western blot检测凋亡相关蛋白Bax与Bcl-2的蛋白水平,实时荧光定量逆转录PCR检测核转录因子E2相关因子(nuclear factor erythroid2-related factor 2,Nrf2)的转录表达,活性氧(ROS)试剂盒检测细胞内的ROS水平。结果 与对照组相比,高糖环境中K1细胞的凋亡率降低,Bcl-2/Bax蛋白表达比升高,Nrf2基因表达上调,细胞内ROS水平下降;而GDF11干预显著提高高糖环境中K1细胞的凋亡率,降低Bcl-2/Bax蛋白表达比,下调Nrf2基因转录表达,并提高细胞内的ROS水平。结论 GDF11可能通过提高高糖环境中K1细胞内的氧化应激反应促进细胞凋亡。     

hHO-1联合GATA-4修饰大鼠骨髓间充质干细胞抗凋亡及向心肌分化的实验研究

目的 探讨经人血红素加氧酶1 (hHO-1)基因和GATA-4基因联合修饰的大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在缺血缺氧环境中抗凋亡及体外分化为心肌细胞样细胞的能力是否优于hHO-1或GATA-4单基因修饰的BMSCs.方法 采用全骨髓贴壁法分离、培养BMSCs并进行鉴定,重组腺病毒转染BMSCs,Western blotting法确定基因表达的最佳时间;以缺氧无血清条件模拟体内缺血缺氧微环境培养基因修饰的BMSCs,采用CCK-8试剂盒和台盼蓝染色法分别检测缺血缺氧培养12、24、48、72h细胞存活率,流式细胞术检测缺血缺氧培养24h细胞凋亡情况,Western blotting及细胞免疫荧光法检测特异性心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)表达情况.结果 缺血缺氧培养12、24、48、72h的hHO-1 +GATA-4组细胞生存率均高于hHO-1组(P＜0.05)和GATA-4组(P＜0.05).缺血缺氧培养24h的hHO-1 +GATA-4组细胞凋亡率低于hHO-1组(P＜0.05)和GATA-4组(P＜0.05);GATA-4组与hHO-1 +GATA-组的cTnI表达差异无统计学意义.结论 hHO-1与GATA-4联合修饰可明显增强缺血缺氧BMSCs的存活;与GATA-4单基因修饰相比,联合修饰并没有增强BMSCs向心肌细胞分化的能力.     

骨髓基质干细胞移植对脑挫伤大鼠神经行为学和Bax表达的影响

目的 探讨骨髓基质干细胞(bone morrow stromal cells,BMSCs)移植对脑挫伤大鼠神经功能的影响,并探讨其分子机制。方法 24只SD大鼠按随机数字表法分为假手术组、脑挫伤组（采用自由落体砸伤制备大鼠运动皮质区脑损伤模型）和BMSCs移植组（将培养纯化的BMSCs移植入损伤位点周围）,每组8只大鼠。术后对动物进行神经损伤严重程度评分(neurological severity scores,NSS);14 d后取脑组织观察移植细胞在体内存活、迁移情况;用RT - PCR技术检测宿主脑组织内凋亡基因Bax的表达变化。结果 脑挫伤组NSS为(12±3)分,较BMSCs移植组NSS(7±1)分明显升高(P＜0.05)。移植的BMSCs能在宿主脑内存活并迁移;RT - PCR显示BMSCs移植组凋亡基因Bax表达（0.9±0.1）较脑挫伤组(1.1±0.2)明显减少(P＜0.05)。结论 BMSCs移植能有效促进脑挫伤大鼠神经功能恢复,其作用机制可能与抑制促凋亡基因Bax表达有关。     

实时定量PCR检测GDNF基因转染大鼠BMSCs后的转录水平

目的 了解外源性胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)基因在大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)中的转录水平.方法 体外分离培养大鼠BMSCs,将其随机分为GDNF基因转染组、空质粒转染组和未转染组3组;GDNF基因转染组和空质粒转染组分别用GDNF基因和空质粒重组腺病毒感染BMSCs,并按感染后培养时间的不同(3、6、9和12天)又分为4个亚组.采用实时定量PCR技术检测GDNF基因在BMSCs中的转录水平.结果 空质粒转染组和未转染组无GDNF mRNA的表达,GDNF基因转染组在转染后3～12天的GDNF mRNA相对表达量为0.007 51±0.000 67.结论 腺病毒介导的基因转染技术将GDNF基因转染至骨髓间充质干细胞中,有外源性基因GDNF mRNA的表达,这为进一步研究以GDNF基因转染的BMSCs治疗中枢神经系统疾病奠定了基础.     

脑红蛋白修饰的骨髓间充质干细胞在促红细胞生成素治疗大鼠急性脊髓损伤中的作用

目的探讨脑红蛋白(neuroglobin,Ngb)修饰的骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)在促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)治疗大鼠急性脊髓损伤中的作用。方法清洁级雄性SD大鼠36只(湖南斯莱克景达实验动物有限公司),体重250~300g。随机分为3组,各12只,建立脊髓损伤模型后不予以特殊处理(不处理组);在建立脊髓损伤模型术后30min予以腹腔注射EPO治疗(EPO组);在脊髓损伤模型造模后立即予以10μL Ngb修饰的BMSCs悬液局部注射,造模术后30min予以腹腔注射EPO(BMSCs悬液局部注射组)。统计分析造模后3、7d的脊髓损伤行为学评分、脊髓组织细胞凋亡率以及血清肿瘤坏死因子(TNF)-α与白介素(IL)-6、脊髓组织丙二醛(MDA)水平。结果BMSCs悬液局部注射组造模后3、7d的脊髓损伤行为学评分(BBB)[(5.33±0.77)分、(6.72±0.81)分]显著高于EPO组与不处理组[(5.18±0.80)分、(5.87±0.82)分和(4.09±0.77)分、(5.47±0.89)分,P<0.05],EPO组造模后7d的BBB评分显著高于不处理组(P<0.05)。BMSCs悬液局部注射组造模后3、7d的脊髓组织细胞凋亡率均显著高于EPO组与不处理组(P<0.05),造模后7d EPO组与不处理组对比差异亦有统计学意义(P<0.05)。EPO组与BMSCs悬液局部注射组造模后3、7d的血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白介素(IL)-6、脊髓组织丙二醛(MDA)水平均显著低于不处理组(P<0.05),BMSCs悬液局部注射组造模后7d的MDA表达水平显著低于EPO组(P<0.05)。结论Ngb修饰的BMSCs在EPO治疗大鼠急性脊髓损伤中的应用能抑制炎症因子的表达与脂质过氧化,抑制细胞凋亡,从而促进神经功能的恢复。     

小干扰RNA抑制核因子-κB增强131I治疗甲状腺癌疗效的研究

目的 探讨小干扰RNA (siRNA)抑制核因子-κB (NF-κB)对131I致DTC细胞凋亡能否产生协同作用.方法 2×104 MBq/L 131I作用人甲状腺乳头状癌细胞株KTC-1 24 h后做DNA结合实验,48 h后做细胞存活分析.Western blot鉴定131I作用6h后细胞NF-κB p65的变化,24 h后凋亡抑制因子[X-染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)、细胞凋亡抑制因子1(clAP1)、B细胞淋巴瘤因子大亚基(Bcl-xL)]、凋亡关键因子[半胱氨酸蛋白酶(caspase 3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)]的变化.p65和凋亡抑制因子的Western blot检测分4组:未转染(A)组、未转染+131I(B)组、转染对照siRNA+ 131I(C)组和转染p65 siRNA+131I(D)组;其余实验分为6组:未转染(1)组、转染对照siRNA(2)组、转染p65 siRNA(3)组、未转染+131I(4)组、转染对照siRNA+131I(5)组和转染p65 siRNA+131I(6)组.多组间均数比较采用单因素方差分析,均数两两比较采用q检验.结果 1至6组DNA结合率分别为(100.00±11.65)％、(96.00±17.98)％、(9.28±5.01)％、(322.72±50.81)％、(311.36±44.81)％和(36.96±15.66)％,差异有统计学意义(F=137.74,P＜0.01);131I作用后KTC-1细胞NF-κB活性均增强(q4∶1组=10.90,q5∶2组=11.38,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制NF-κB功能(q1∶3组=18.25,q4∶6组=13.71,均P＜0.01).6组细胞存活率分别为(100.00±11.65)％、(96.32±9.44)％、(70.88±7.41)％、(64.16±9.50)％、(62.24±9.37)％和(28.64±6.74)％ (F=52.76,P＜0.01);3、4和6组比,q=10.76和7.79,均P＜0.01.Western blot结果显示A、B、C和D组p65相对表达水平分别为(56.60 ±7.37)％、(111.07±13.31)％、(113.16±15.04)％和(12.46±2.74)％,差异有统计学意义(F=60.17,P＜0.01);131I作用后p65浓度增高(qB∶A组=6.20,qc∶A组=5.85,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制其浓度增高(qB∶D组=12.57,qc∶D组=11.41,均P＜0.01).4组XIAP、cIAP1和Bcl-xL分别为(17.59±1.96)％、(16.45±1.85)％和(19.92±2.22)％,(98.37±17.92)％、(109.81±19.16)％和(95.59±22.20)％,(98.43±18.71)％、(98.86±15.88)％和(100.99±21.70)％,(7.00±0.95)％、(5.86±0.35)％和(9.52±0.90)％,差异均有统计学意义(F =44.22、56.51和29.11,均P＜0.01);131I作用后三者表达增加(qB∶A组 =7.76、8.40和5.88,均P＜0.01);p65 siRNA可抑制三者表达(qB∶D组=8.82、9.40和6.71,均P＜0.01).6组caspase 3亚基p19和p17、PARP活性蛋白p116和失活产物p89差异均有统计学意义(F=39.03、48.45、32.56和52.20,均P＜0.01);3、4和6组比q =3.18 ～9.98,均P＜0.05.结论 131I通过活化NF-κB导致甲状腺癌细胞内凋亡抑制因子表达升高,p65 siRNA可抑制这种变化;联合使用p65 siRNA对131I致DTC细胞凋亡产生协同效应.     

骨髓间充质干细胞移植对老年性痴呆大鼠中枢胆碱能系统的保护作用研究

目的 探讨骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗对老年性痴呆(AD)大鼠中枢胆碱能系统的保护作用及机制.方法 雄性Wistar大鼠45只,采用随机数字法分为)双侧穹隆海马伞(FF)切断模型组(模型组,复制AD模型),假手术对照组(SOC组,除不切断双侧FF以外,其他操作同模型组),骨髓间充质干细胞(BMSCs)移植治疗组(BMSCs组,在模型制作成功2周后,每只大鼠接受1×106个BMSCs治疗).采用免疫组化法检测海马胆碱能神经纤维胆碱乙酰转移酶(CHAT)的表达,RT-PCR检测基底前脑神经生长因子(NGF)mRNA表达.结果 模型组在FF切断术后6周,其海马ChAT阳性神经纤维的积分光密度值(1 249.71±143.25)明显低于SOC组(2 059.58±166.69,P<0.05),BMSCs组(1 807.02±133.85)与模型组相比,ChAT阳性纤维数量增多(P<0.05).模型组基底前脑神经元NGF mRNA表达水平(0.45±0.08)与SOC组(1.14±0.12)比较明显降低(P<0.05),BMSCs组(0.78±0.09)较模型组有所升高(P<0.05).结论 BMSCs移植治疗对AD模型大鼠中枢胆碱能系统有保护作用,其机制可能与BMSCs移植上调基底前脑神经元NGF的表达有关.     

肿瘤微环境中间充质干细胞的相关生物学特性分析

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在肿瘤微环境中是否获得肿瘤细胞的相关生物学特性而导致恶性转化。方法通过6孔板结合Transwell小室建立间充质干细胞和大鼠C6胶质瘤细胞的共培养体系,以共培养组为实验组,另设单独培养的间充质干细胞作为对照组。于相差显微镜下观察培养后两组细胞的形态学改变;采用流式细胞术(FCM)分析细胞周期变化;采用荧光定量PCR和免疫荧光法检测间充质干细胞mdm2、p53mRNA水平及共培养后两组细胞中p53突变蛋白和mdm2癌蛋白的表达。结果共培养后实验组细胞表现为胶质瘤细胞样形态。细胞周期检测结果显示共培养7d后,对照组G1期细胞占90.48%±6.62%,实验组占82.22%±2.74%,两组间差异无统计学意义(P>0.05);对照组S期细胞占4.66%±4.16%,实验组占7.35%±1.93%,两组间差异亦无统计学意义(P>0.05)。定量PCR及免疫荧光检测显示,实验组p53mRNA水平明显降低,为对照组的0.24倍(P<0.05);部分实验组细胞(24.8%)中表达突变型p53蛋白,而对照组无突变p53蛋白表达(P<0.05)。实验组mdm2mRNA及其蛋白的表达水平...     

核因子κB抑制剂对131I导致甲状腺癌细胞凋亡的协同作用

目的 研究核因子kB(NF-kB)抑制剂Bay 11-7082和131I导致DTC细胞凋亡的效果,并探讨二者的协同作用.方法 用Western blot鉴定131I、Bay 11-7082以及两者联合处理DTC细胞24 h后细胞内NF-kB调控的凋亡抑制因子[X染色体相关凋亡抑制蛋白(XIAP)和生存素蛋白(survivm)]以及凋亡关键因子[天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(caspase 3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)]相对表达水平的变化,以β-actin作内参,进行半定量分析.用膜黏连蛋白-5-异硫氰酸荧光磺/碘化丙啶双标记染色流式细胞技术鉴定不同方式处理后癌细胞的凋亡变化.多组间均数比较采用单因素方差分析,两两比较采用q检验进行统计分析.结果 Western blot证实对照组DTC癌细胞内XIAP和survivin相对表达水平为(16.62±0.73)％和(15.20±0.53)％,131I作用24 h后两者增至(95.22±3.27)％和(71.80±2.76)％,而131I联合Bay 11-7082作用后两者分别被抑制至(8.29±0.35)％和(6.87±0.28)％.不同处理方式作用后XIAP和survivin表达水平差异均有统计学意义(F =1823.47和1406.12,P均＜0.01),联合处理组与131I组,对照组两两比较q值13.37至45.38(P均＜0.01).对照组caspase 3的2个亚基p19和p17以及PARP失活水解产物p89相对表达水平为(4.93±0.49)％、(4.67±0.34)％和(4.87±0.64)％,131I作用24h后增高至(25.07±1.26)％、(18.29 ±1.14)％和(34.97±1.90)％,Bay 11-7082作用后增至(60.32±3.59)％、(41.29±3.23)％和(66.49±2.96)％;联合用药后增高更为明显,分别为(104.62±5.02)％、(94.72±4.28)％和(101.59 ±4.04)％.不同处理方式间三者差异均有统计学意义(F=575.13、625.95和712.87,P均＜0.01),联合处理组与单独用药组比较q值15.95 ～ 86.01(P均＜0.01).流式细胞技术同样证明联合用药导致凋亡细胞比例增高的幅度较单独用药更为明显,131I和Bay 11-7082单独作用后凋亡早期细胞比例分别为(9.44±0.66)％和(18.92±1.84)％,联合用药后增至(47.02±4.53)％,差异有统计学意义(F =201.12,P ＜0.01),联合处理组与131I组和Bay 11-7082组两两比较q值为13.86和17.13,P均＜0.01.结论 131I通过活化NF-kB途径导致DTC细胞内凋亡抑制因子表达升高,而联合使用Bay 11-7082可以明显抑制这种变化.联合用药对131I导致DTC细胞的凋亡可产生协同效应.     

Radiation Chemical and Physical Mechanisms of Radiosensitization of Single Cell Systems by Iothalamate

Summary

The radiosensitizing effect of iothalamate (ITA) has been investigated in bacterial and mammalian cells in order to obtain a better understanding of the physical and radiation chemical mechanisms of sensitization displayed by the drug. In order to distinguish between the two, Escherichia coli B/r cells were irradiated with 9 MeV electrons, which allow only the radiation chemical mechanism to operate, and V79 cells with 250 KVp X-rays, which instead make possible the occurrence of both mechanisms.

It has been shown that: (a) Maximum sensitization already occurs in bacteria with 10^?2 mol dm^?3 ITA (enhancement ratio (ER) 11·2 in oxygen, 2·7 in nitrogen), while in mammalian cells a concentration higher by a factor of 10 is required (ER 2·2 both in air and nitrogen). (b) ITA sensitization is inhibited when bacteria are irradiated in growth medium instead of buffer. Such inhibition does not occur with V79 cells. (c) Cysteine and glycerol completely cancel the sensitizing effect of ITA on bacterial cells in both gas phases. Dimethylsulphoxide (DMSO) does the same in nitrogen, while in oxygen it only reduces ITA sensitization to about 50 per cent of the level observed in control conditions. With mammalian cells, all the three scavengers do not modify significantly the enhancement produced by ITA, either in air or in nitrogen. The experimental results are consistent with both postulated mechanisms of sensitization.     

急、慢性髓性白血病细胞低温冻存后诱生的树突状细胞生物特性研究

目的 观察急、慢性髓性白血病原代细胞经低温冻存后诱生的白血病源性树突状细胞的生物特性.方法 取急、慢性髓性白血病原代细胞,一部分细胞立即培养,一部分细胞用5%二甲基亚砜-6%羟乙基淀粉为保护剂,-80℃冰箱降温,液氮保存一定时间后复温培养.培养时细胞内加重组人粒-巨噬细胞集落刺激因子、白介素-4、肿瘤坏死因子-α等细胞因子,培养12 d,为白血病源性树突状细胞,观察细胞形态及免疫表型、自身混合淋巴细胞反应及细胞毒T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞活性.结果 急、慢性髓性白血病新鲜或冻存的原代细胞,经组合细胞因子培养,细胞均不同程度地出现典型的树突状形态,细胞表面CD80、CD54、人白细胞表面抗原DR、CD1a、CD83、CD86表达上调,CD14下调;冻存原代细胞经培养生成的白血病源性树突状细胞,还表现为自体混合淋巴细胞反应和T淋巴细胞杀伤自体白血病细胞活性明显.结论 急、慢性髓性白血病新鲜或经低温冻存的原代细胞可诱生为白血病源性树突状细胞,这种细胞可诱导T淋巴细胞杀伤自身白血病细胞,为用树突状细胞免疫治疗微小残留病提供了实验依据.     

TPO基因修饰的基质细胞对巨核系细胞的定向扩增作用

目的研究TPO基因修饰的基质细胞对CD34+造血细胞向巨核系细胞定向增殖分化的影响.方法将TPO cDNA构建到pBabe/pura中,通过"乒乓转染法"获得产高滴度逆转录病毒载体的包装细胞;利用所获的病毒上清转染基质细胞HFCL,用Northern blot检测细胞中TPO基因的表达,并利用TPO依赖株检测上清中的TPO活性;以未转基因的HFCL为对照,将CD34+造血细胞在TPO基因修饰的HFCL支持下扩增,用流式细胞仪检测扩增细胞中表型为CD34+CD41+和表型为CD41-CD61+细胞的比例.结果基质细胞HFCL能够有效表达外源性TPO基因,在HFCL/TPO培养上清中有0 75 ng/ml水平的TPO活性;并且在HFCL/TPO支持下,CD34+造血细胞经过7 d扩增后,CD34+CD41+细胞的比例为(13.7±2.0)%,HFCL为(6.5±1.8)%(P＜0.01);CD41+CD61+细胞的比例为(11.9±0.7)%,略高于HFCL的(10.6±1.5)%(P＞0.05).结论基质细胞能够有效表达外源性TPO基因和其蛋白,而且TPO基因修饰的基质细胞能显著促进CD34+CD41+巨核祖细胞的扩增,但对较成熟的CD41+CD61+巨核细胞影响不明显.     

High Radiosensitivity of the MOLT-4 Leukaemic Cell Line

Summary

Radiation survival of MOLT-4, a leukaemic T-lymphocyte cell line, was measured by counting colonies formed in 0·8 per cent methyl cellulose. The survival curve was a simple exponential and showed the cells to be radiation sensitive, with D₀ = 0·49 ± 0·02 Gy and extrapolation number n = 0·92 ± 0·09. No increase in survival as measured by colony-forming ability or trypan blue dye exclusion was seen when the dose was split into two fractions, separated by a 5 h incubation period. Electron microscopy and trypan blue dye exclusion showed that 5 h after exposure to high doses, MOLT-4 cells began to die and displayed condensed, marginated chromatin and cellular vesticulation.     

人胎盘来源干/祖细胞生物学特性研究进展

胎盘通过分离可得到许多表型可塑性的细胞类型,现已成为再生医学新的细胞来源途径。目前已发表的众多文献使用了不同的分离鉴定方法,描述了来自胎盘不同区域的干细胞。本文系统整理人胎盘来源的各种干/祖细胞的生物学特性,并提示这些细胞在将来临床应用的可能性。     

脂肪间充质干细胞分化为肾小管上皮细胞的实验研究

目的 探讨脂肪间充质干细胞(adipose-derived mesenchymal stem cells,ADMCSs)是否能分化为肾小管上皮细胞,用于急性肾损伤(acute kidney injury,AKI)的治疗.方法 体外分离和培养ADMSCs,用一种携带有荧光素酶和红色荧光蛋白(fluc-mrfp)报告基因的慢病毒转染ADMSCs;构建SD大鼠缺血再灌注诱导的AKI模型,将病毒转染ADMSCs直接从肾实质注射移植2×106细胞量.使用生物发光成像仪(bioluminescence imaging,BLI)示踪移植后的ADMSCs在大鼠体内的分布;免疫荧光染色法检测ADMSCs在体内的分化.结果 ADMSCs高表达CD29、CD90,不表达CD31、CD45、CD34;慢病毒转染后的ADMSCs稳定表达fluc和mrfp报告基因.体内ADMSCs移植后,BLI可以检测到荧光信号一直持续到第14天;免疫荧光结果进一步证实移植的ADMSCs可能分化为肾小管上皮细胞.结论 ADMSCs在体内可以分化为肾小管上皮细胞,为进一步研究ADMSCs治疗AKI提供实验基础.     

豚鼠前庭单个毛细胞的分离

从７只豚鼠前庭中取出壶腹嵴、位觉斑，放置在胶原酶溶液中孵育５０ｍｉｎ～６０ｍｉｎ后行机械分离。可获得均含有皮板和纤毛的两种类型活性毛细胞８３（±２３）个，其中Ⅰ型毛细胞呈烧瓶状，细胞中部有明显的颈；Ⅱ型毛细胞呈圆形或椭圆形，胞体比Ⅰ型毛细胞小；Ⅰ、Ⅱ型毛细胞的比例是６２１９；分离后５ｈ仍有４０％的毛细胞具有活性。另外，笔者还观察到失活的早期变化是胞内出现颗粒。实验结果表明，酶消化后辅以机械分离，可获得大量单个、离体的活性毛细胞，并且能够进行哺乳动物前庭的生理学研究。     

低温等离子体联合辐射对三种癌细胞系放射增敏效应的研究

目的 探讨低温等离子体对人肝癌细胞系HepG2、非小细胞肺癌细胞系A549及人宫颈癌细胞系HeLa的放射增敏作用及其机制。方法 应用克隆形成实验观察低温等离子体对3种细胞的放射增敏作用;流式细胞仪分析3种细胞周期分布、凋亡率及活性氧含量;Western blot法检测单纯照射(R组)、单纯等离子体作用(P组)及其联合辐射(P+R组)对3种细胞中Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响。结果 低温等离子体对HepG2、A549及HeLa细胞均有放射增敏作用,放射增敏比(SER_D0)分别为1.28、1.32、1.29。HepG2、A549及HeLa细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与R组比较均明显增高(t_G2/M期=9.52、8.24、9.53,P<0.05;t_凋亡率=10.67、38.56、6.74,P<0.05;t_{活性氧含量}=9.41、15.42、13.53,P<0.05)。HepG2和A549细胞P+R组G₂/M期比例、凋亡率及活性氧含量与P组比较均明显升高(t_G2/M期=8.75、20.37,P<0.05;t_凋亡率=8.43、9.99,P<0.05;t_{活性氧含量}=4.82、5.27,P<0.05)。3种癌细胞中P+R组Bcl-2蛋白表达较R组降低,而Caspase-3蛋白表达升高。结论 低温等离子体可提高HepG2、A549及HeLa细胞系的放射敏感性,其对HepG2及A549细胞系的放射增敏机制可能与抑制亚致死损伤修复,使细胞周期阻滞在G₂/M期,以及提高细胞内ROS水平诱导细胞凋亡有关。     

猴骨髓间充质干细胞的分离及原代培养特性的研究

目的：探讨猴骨髓间充质干细胞(MSCs)低分化干细胞方面的特性。方法：以Percoll(质量密度1073g/L)非连续密度梯度离心分离出骨髓悬液中的骨髓间充质干细胞，用含100mL/L胎牛血清的DMEM培养液培养，观察细脑的形态、生长状况及其超微结构。结果：原代培养的骨横间充质干细胞增殖缓侵，细胞增殖率和形态分化不均一。如有一些细脑在4wk的培养时间内末见明显增殖，这些增殖不明显的细胞有的未见明显的伸展，呈圆形，有的伸展充分，成片状；在培养2wk后也可见一些明显增殖的细胞，分别形成克隆团状或条状的增生细胞群；培养过程中可见有神经元样及多核细胞出现。原代培养的骨髓间充质干细胞的超微结构也显示了低分化的干细胞特点，如细胞表面具有微绒毛，脑浆内内质网丰富、激离核糖体数量多、线粒体小，核仁大而不规则、可见核裂，超微结构还显示了一些中胚层来源于细瘤的结构特点，如大量的微丝。结论：经Percoll细胞分离介质分离出的骨髓间充质干细胞，在非诱导条件下原代培养过程中，从形态分化、增殖率等方面显示了其多向分化潜能；从超微结构等方面显示了其中胚层来源低分化细胞的特点。这些特点可作为骨髓间充质干细胞鉴定的佐证之一，说明Percoll非连续密度梯度离心法对骨髓间充质干细胞的分离具有可靠性。     

Uptake and Clearance of Plutonium-238 from Liver Cells Transplanted into Fat Pads of F344 Rats

Summary

This research is directed toward understanding the role of liver cells and the liver environment in plutonium biokinetics. Animals injected with liver cells and control animals received a single intraperitoneal injection of 37 kBq (1 µCi) ²³⁸Pu citrate and were serially sacrificed 1, 5, 10, 15, 30, 60 or 70 days later. Uptake, retention and distribution of Pu in intact liver and in liver cells growing in fat pads were determined. From these measurements, it was observed that the cells of the intact liver took up about twice as much ²³⁸Pu as liver cells transplanted into the fat pads of the same animal. The retention half-life was 8·3 days for the total activity in the liver, 20 days using tracks/cell measurements in the liver and 16 days for the tracks/cell measurements in the liver cells translocated to fat pads. When the data on tracks/cell were standardized relative to the amount of Pu present at 5 days after the injection, there was no significant difference between the retention of Pu in liver cells from intact animals and liver cells transplanted into the fat pads. About 20 per cent of the 5-day Pu liver burden in both liver cells and liver cells transplanted into fat pads was retained at 70 days. The smaller retention and clearance for liver cells in different environments indicate that uptake and clearance of Pu from the body is dependent, to a major extent, upon hepatocyte function.