成人成骨细胞雌激素受体研究

目的研究雌激素受体(estrogen receptor，ER)在成人成骨细胞的分布；探讨雌激素调节骨代谢的作用机制及雌激素受体变化在骨质疏松症中的作用。方法用多次酶消化法进行人成骨细胞体外培养；用免疫组织化学法分别检测不同程度的骨质疏松病人和正常对照成人成骨细胞雌激素受体；显微镜下观察ER阳性细胞；计算各组人群ER阳性细胞率；t检验分析各组间ER阳性细胞率的差异。结果成骨细胞细胞核和／或细胞质有ER存在；各组人群阳性细胞标记率有明显差异。结论雌激素不仅通过调节钙调节激素间接影响骨重建，还可与成骨细胞ER结合调控骨代谢；ER存在于成骨细胞的细胞核和细胞质；人成骨细胞：ER减少可能是绝经后骨质疏松症的主要原因之一。     

不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律分析

目的:建立一种灵敏度高,特异性强的成骨细胞内雌激素受体检测方法,探讨不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体表达规律,以此拟描述不同年龄人类女性个体成骨细胞内雌激素受体表达的生理曲线.方法:以不同月龄雌性SD大鼠为标本,二次酶消化法收集成骨细胞并培养,倒置相差显微镜观察成骨细胞形态,钙钴法碱性磷酸酶染色、上清液碱性磷酸酶(ALP)及骨钙素(OCN)检测对成骨细胞进行鉴定,应用流式细胞仪对不同月龄雌性SD大鼠成骨细胞内雌激素受体进行检测, 根据每个成骨细胞被激发后标记-FITC的雌激素受体(ER)抗体荧光强度来表达细胞内ER的含量.结果:二次酶消化法获得的成骨细胞,形态呈多边形,碱性磷酸酶染色阳性细胞染色率80%,不同培养时间的成骨细胞和成纤维细胞上清液碱性磷酸酶和骨钙素含量相比较成骨组明显高于成纤维组,统计学检验有显著意义(p<0.01),流式细胞仪检测结果显示: 1、2月龄组ER荧光强度低表达,3月组ER荧光强度虽然呈低表达但已经显示出上升趋势,4月组以后ER荧光强度表达逐渐升高,至8、9、10月ER荧光强度表达至高峰,11月组之后各组ER表达荧光强度呈下降趋势.结论:二次酶消化法可获得较多的成骨细胞,符合成骨细胞的生物学特性,可作为成骨细胞相关研究的细胞来源.雌性SD大鼠成骨细胞内含有丰富的ER,其表达有赖于雌激素的存在.雌性SD大鼠成骨细胞内ER表达随月龄增加呈现出1、2、3月组ER低表达,4月组以后ER表达逐渐升高,至8、9、10月ER表达至高峰,11月组之后各组ER表达呈下降趋势的规律性变化.     

大豆苷原（DA）对成骨细胞雌激素受体（ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）

 目的 研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ (peroxisome proliferator-activated receptor γ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法 小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2% FBS)培养,分别用0.1和10 μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1 μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10 nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10 μmol/L的DA分别下调ERα 蛋白水平44%和38% (P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31% (P<0.05),上调PPARγ 74%和78% (P<0.05)。 ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβ mRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10 nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

大豆苷原(DA)对成骨细胞雌激素受体(ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)表达的调节作用及其受雌激素的影响(英文)

目的研究大豆苷原(daidzein,DA)对成骨细胞雌激素受体(estrogen receptor,ER)和过氧化物酶体增殖物激活受体γ(peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ)表达的调节作用,并观察雌激素对这种调节的影响。方法小鼠成骨细胞MC3T3-E1体外低血清(α-MEM,含2%FBS)培养,分别用0.1和10μmol/L的DA处理,采用实时定量PCR或Western blot分析细胞ERα、ERβ和PPARγ的表达变化。加入浓度均为0.1μmol/L的ER拮抗剂ICI182780或PPARγ拮抗剂GW9662,观察ER和PPARγ在DA调节中的作用。为观察雌激素的影响,采用无血清培养,在10nmol/L 17β-雌二醇(E2)条件下研究DA对细胞受体表达的作用。结果 DA抑制体外培养成骨细胞ER表达,而刺激其PPARγ表达。0.1和10μmol/L的DA分别下调ERα蛋白水平44%和38%(P<0.05),下调ERβ蛋白水平50%(P<0.05)和31%(P<0.05),上调PPARγ74%和78%(P<0.05)。ICI182780可阻断DA对ERα转录水平的抑制作用,DA对成骨细胞ERβmRNA水平的下调无统计学意义(P=0.087 4);GW9662可阻断DA对PPARγ表达的上调作用,提示成骨细胞ER和PPARγ参与自身表达调节。在10nmol/L 17β-雌二醇条件下,DA对无血清培养的成骨细胞ERα转录水平的抑制作用由28.0%～29.6%(P<0.05)增强至74.0%～82.8%(P<0.01),其对ERβ表达的抑制作用也明显增强,而对PPARγ的上调作用几乎丧失。结论 DA可通过调节ERs和PPARγ等受体表达间接影响成骨细胞的药物反应,雌激素可明显影响DA的受体调节作用。DA对细胞受体表达的调节作用可能是其对成骨细胞时间相关双相调节的重要机制之一。     

ERβ通过调控OPG/RANK/RANKL信号通路调控小鼠成骨细胞的成骨能力

目的 在细胞水平上,用RNA干扰(RNAi)技术研究雌激素受体β(ERβ)对OPG/RANK/RANKL信号通路的调控,及其调控小鼠成骨细胞的成骨能力.方法 取的小鼠成骨细胞株MC3T3-E1为对象,设立3组,其中2个组分别转染重组ERβ RNAi载体和阴性对照ERLRNAi载体,第3组为空白对照组.3组在相同条件下培养.然后,检测ERβ基因沉默后小鼠成骨细胞中骨保护素(OPG)、核因子κB配体的受体激活子(RANKL)表达的变化、各组成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)活性和各组成骨细胞形成钙结节的差异.用SPSS 16.0软件统计分析.结果 RNAi组OPG的Ct值较空白对照组和阴性干扰组小,基因表达增强;RNAi组RANKL的Ct值较其它两组大,基因表达降低;RNAi组的ALP活性较其它两组高.均有显著性差异,P＜0.05.RNAi组成骨结节较空白对照组和阴性干扰组的数量较多,体积较大.结论 根据ERβ沉默后的结果,可以反向推断,雌激素与ERβ结合,增强ERβ表达,降低OPG的合成和表达,增加RANKL的合成和表达,减少ALP的分泌,进而抑制新骨的生成.     

熟地黄对雌性小鼠老化进程中雌、孕激素受体含量的上调作用

目的 :探讨熟地黄对雌性小鼠老化进程中血清雌激素 (E2 )浓度、脾细胞雌激素受体 (ER)含量、成骨细胞孕激素受体(PR)含量的调节作用。方法 :应用放射免疫法、放射配体结合分析法技术 ,研究熟地黄对雌性小鼠老化进程中上述指标的调节作用。结果 :对照组随着老化进程的发展 ,血清中E2 浓度、脾细胞ER含量和成骨细胞PR含量均明显下降 ,并随老化程度呈阶段性变化 ;熟地黄组对应指标也有所下降 ,与对照组相比 ,PR、ER含量的下降速度明显减慢 (P <0 .0 1)。结论 :熟地黄有抵抗老化进程中血清E2 浓度、脾细胞ER含量和成骨细胞PR含量下降这种生理性变化的功能 ,即有抗衰老作用。     

骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原雌激素受体表达的影响

目的通过观察骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原、雌激素受体表达的影响,探讨骨松灵合剂对骨代谢的可能作用机制。方法不同浓度的骨松灵合剂刺激大鼠成骨细胞,采用噻唑蓝(MTT)法测定活细胞的数量,RT-PCR和免疫细胞化学染色方法来测定不同浓度的骨松灵合剂对去卵巢大鼠成骨细胞Ⅰ型胶原、雌激素受体表达的影响。结果与对照组相比,30,60,120,240mg/ml的骨松灵合剂对成骨细胞均有促增殖作用(P<0.05),48h、72h后,120mg/ml的骨松灵合剂仍有此作用,其他浓度对成骨细胞促增殖作用消失(P>0.05)。120mg/ml骨松灵合剂培养成骨细胞24h、48h、72h后均可增加成骨细胞Ⅰ型胶原mRNA表达,并有时间依赖性。120mg/ml骨松灵合剂培养成骨细胞24h、48h、72h后均可增加成骨细胞ERαmRNA,ERβmRNA表达,ERαmRNA表达在培养24 h后有所增加,48h、72h较24 h无明显变化;ERβmRNA表达增加有时间依赖性。结论骨松灵合剂可以促进去卵巢大鼠成骨细胞增殖及Ⅰ型胶原、雌激素受体表达,这些可能是骨松灵合剂对骨形成的作用机制。     

去卵巢大鼠成骨细胞雌激素受体表达的研究

目的 观察研究去卵巢SD大鼠成骨细胞内雌激素受体(ER)表达水平的变化规律.方法 SD雌性大鼠随机分为正常对照组和去卵巢(OVX)后第5周组、第7周组;采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠颅骨成骨细胞,进行钙钴法碱性磷酸酶(ALP)染色,I型胶原免疫组化染色来观察、鉴定大鼠成骨细胞.应用半定量Western blot对各组SD大鼠成骨细胞内雌激素受体进行检测.结果 通过ALP染色、I型胶原免疫组化及形态学观察符合成骨细胞特征.western blot显示雌激素受体表达OVX组明显低于正常组,第7周组低于第5周组.结论 随着去卵巢后时间延长,成骨细胞表达的雌激素受体下降,骨质疏松风险变大.     

雌性大鼠成骨细胞内雌激素受体表达的研究

目的：研究雌性大鼠一生中成骨细胞内雌激素受体(ER)表达水平的变化规律。方法：采用二次酶消化、反复贴壁法分离纯化培养大鼠成骨细胞并进行鉴定,应用半定量Western blot对不同月龄雌性Wistar大鼠成骨细胞内雌激素受体进行检测。结果：ER表达在1、2月龄组呈低度表达,3月组ER开始呈现上升趋势,至8、9、10月组ER达到高峰,10月组以后表达呈现下降趋势。结论：ER表达在不同月龄大鼠呈规律性分布,雌激素受体的表达应与雌激素水平是相一致的。     

雌激素促进ER阴性乳腺癌细胞中IL-6的表达

目的 :探讨雌激素作用下G蛋白偶联雌激素受体(G-protein coupled estrogen receptor,GPER)信号通路的活化对ER阴性乳腺癌细胞中白介素(interleukin,IL)-6表达的影响。方法:药物处理SKBR-3与MDA-MB-453细胞后,实时定量荧光PCR法检测细胞中IL-6 m RNA的变化,ELISA法检测细胞培养上清中IL-6的分泌量,Western blot法检测细胞中p-ERK与p-AKT的蛋白表达水平。结果:17-β雌二醇(E2)和GPER特异性激动剂(G1)显著促进SKBR-3与MDA-MB-453细胞中IL-6的m RNA表达以及细胞上清液中IL-6的分泌量,GPER特异性拮抗剂(G15)可显著抑制以上变化(P<0.05)。E2及G1药物处理SKBR-3细胞后显著活化细胞内GPER/AKT信号通路以及GPER/ERK信号通路(P<0.05),上调p-AKT与p-ERK的蛋白表达水平,p-AKT的相对表达量分别为对照组的(4.16±0.65)、(3.21±0.45)倍,p-ERK分别为对照组的(2.87±0.42)、(2.64±0.24)倍,在MDA-MB-453细胞中也可得到类似结果。用MEK特异性抑制剂(U0126)可明显阻断E2及G1所引发的IL-6表达变化(P<0.05),PI3K特异性抑制剂(Wortmannin)则不能。结论 :雌激素可促进ER阴性乳腺癌细胞中IL-6的m RNA表达及细胞上清液中IL-6的分泌量,其机制可能与GPER/ERK信号通路的上调有关,由GPER介导的炎症微环境可能在ER阴性乳腺癌进展中发挥重要作用。     

雌激素与绝经后骨质疏松症

雌激素(E)是由芳香化酶催化雄激素转化而来,他与靶细胞核内雌激素受体(ER)结合,与染色质结合并调节靶基因的转录,影响其靶组织的生长、分化与功能.E在骨代谢和稳态方面起重要作用.绝经后骨质疏松症(PMO)是老年妇女的多发病,其特征是单位体积内骨量减少,皮质骨变薄,松质骨变稀疏,孔隙增大,从而产生腰背、四肢疼痛,脊柱畸形甚至骨折.应用E替代疗法和选择性雌激素受体调节剂(SERM)是防治PMO、减少骨折发生的有效措施.现将E、ER与PMO的关系作一综述.     

健骨颗粒对大鼠成骨细胞雌激素受体表达的影响

目的探讨健骨颗粒对骨组织成骨细胞雌激素受体表达的影响。方法通过切除6月龄SD雌性大鼠卵巢,建立绝经后骨质疏松症动物模型,分假手术组、模型组、治疗组,运用RT-PCR实时荧光定量SYBR GREEN法检测雌激素受体ERα、ERβmRNA的表达。结果治疗组与模型组比较,ERα、ERβmRNA的相对表达量增加,差异有显著性(P0.01)。结论健骨颗粒能提高去卵巢骨质疏松模型大鼠的成骨细胞ERα、ERβ的表达,促进成骨细胞增殖。     

雌激素受体α和β在间充质干细胞体外成骨、成脂肪分化中的表达变化

目的：研究间充质干细胞（MSC）体外成骨、成脂肪分化与雌激素受体α和β表达变化的关系及其意义。方法：体外分离培养人MSC,流式细胞术鉴定其表型,加入成骨和成脂肪诱导剂,使用RTPCR法检测骨桥蛋白（Osteopontin）和脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase,LpL）的表达,半定量RT-PCR检测雌激素受体α（ERα）和β（ERβ）在成骨和成脂肪分化中的表达变化。结果：①体外分离培养的人MSC具有多向分化潜能,能向成骨细胞和脂肪细胞分化．分别表达Osteopontin和LpL。③MSC构成性表达雌激素受体α和β,雌激素受体α表达占优势。③在成骨分化中,雌激素受体α和β表达无明显改变,而在成脂肪分化中,雌激素受体α表达减低,β表达增高。结论：MSC成骨和成脂肪分化与雌激素受体α和β表达变化有关。调节雌激素受体α和β的表达,或使用一些雌激素受体激动剂、拮抗剂,将有可能抑制骨髓脂肪细胞的形成,促使MSC向成骨细胞分化,为骨质疏松及其它成骨障碍性疾病的治疗提供一个新的思路。     

雌激素受体和过氧化物酶体增殖物激活受体γ介导大豆苷原对骨形成的量效作用

目的：研究不同剂量大豆苷原（daidzein,DAI）对成骨细胞骨形成的作用及雌激素受体（estrogen receptor,ER）和过氧化物酶体增殖物激活受体γ（peroxisome proliferator-activated receptorγ,PPARγ）对DAI促进骨形成的调节作用。方法：以培养的未经处理的人类胎儿成骨细胞（human fetal osteoblast,hFOB）为对照组,用17β-戊酸雌二醇（β-estradiol-17-valerate,E2）和不同浓度DAI分别处理hFOB72h后,噻唑蓝（methyl thiazolyl tetrazolium,MTT）法测定细胞增殖情况,4-硝基苯基磷酸二钠盐（4-nitrophenylphosphate disodiumsalt,PNPP）偶氮法测定成骨细胞碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）活性。用ER拮抗剂ICI182780、ERα拮抗剂MPP（methyl-piperidino-pyrazole）、PPARγ拮抗剂GW9662分别阻断受体ER、ERα和PPARγ后,再给予E2及不同浓度的DAI处理,MTT法检测成骨细胞增殖情况并计算细胞增殖率,PNPP偶氮法测定ALP水平。结果：随着DAI剂量的增加,成骨细胞增殖率递减,DAI10-9mol/L组较对照组显著升高,DAI10-5mol/L组较对照组显著降低（P〈0.05）。随着DAI剂量的增加,成骨细胞ALP水平递减,但差异无统计学意义（P〉0.05）。ICI182780阻滞ER后,E2组,DAI10-9、10-7及10-5mol/L组的细胞增殖率分别为88.16%、76.30%、81.18%、83.19%,均显著低于阻滞前（P〈0.05）;MPP单纯阻滞ERα后,E2组,DAI10-9、10-7及10-5mol/L组的细胞增殖率分别为69.78%、63.31%、70.71%、78.43%,均显著低于阻滞前（P〈0.05）。MPP阻滞后,DAI10-9mol/L组的ALP水平显著低于阻滞前（P〈0.05）。GW9662阻滞PPARγ后,E2组,DAI10-9、10-7及10-5mol/L组的细胞增殖率分别为103.14%、96.99%、112.88%和122.22%,其中DAI10-7及10-5mol/L组均较阻滞前显著升高（P〈0.05）,DAI10-9mol/L组轻度降低但差异无统计学意义。DAI10-5mol/L组的ALP水平较阻滞前显著升高（P〈0.05）。结论：DAI的骨保护作用具有剂量依赖性的双相作用特点,即低剂量DAI促进成骨细胞增殖,高剂量DAI抑制成骨细胞增殖。低剂量DAI主要通过作用于ER促进成骨细胞增殖和分化,对PPARγ的作用不明显;高剂量DAI主要通过作用于PPARγ抑制成骨细胞增殖和分化,同时也可通过作用于ER产生一定促进成骨细胞增殖的作用。     

TNF-α与绝经后骨质疏松症研究进展

绝经后骨质疏松症(Postmenopausal osteoporosis，PMO)骨量丢失的高峰期多发生在绝经后5～10年内．既往研究表明，雌激素缺乏和钙摄入不足是绝经期骨量丢失、骨质疏松(Osteoporosis，OP)产生的主要原因．近年来研究发现，随着妇女更年期雌激素水平的下降，刺激骨吸收的细胞因子产生过多，使骨吸收活动增强．肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α，TNF-α)是重要的骨吸收因子之一，     

序贯使用降钙素和甲状腺激素对骨重建过程的作用

骨质疏松症的治疗是临床尚未解决的难题之一,随着老龄化社会的到来,这一问题日臻突出。按照药物作用于骨重建过程的时相来分类,骨质疏松症的治疗方法包括: (1)抑制破骨吸收:该类药物包括雌激素、降钙素、二磷酸盐和钙。由于在骨重建过程中骨形成与骨吸收在时间和空间上是耦联的,因而抑制骨吸收的同时也可能抑制骨形成,故可能不增加骨量。降钙素的主要作用是抑制破骨吸收,研究结果显示,降钙     

长期吸入糖皮质激素对儿童骨代谢的影响

吸入糖皮质激素 (i GCs)已被普遍认为是一种控制哮喘症状和炎症过程高度有效的方法 ,但长期应用的安全性和副作用仍是医患双方关注的焦点。现将近年来 i GCs对骨代谢影响的资料综述如下。1　糖皮质激素 (GCs)对骨代谢影响的机制　　骨代谢变化是指骨细胞、成骨细胞和破骨细胞的活性变化及骨基质、骨矿物质的代谢变化。正常骨骼处于转运稳定状态 ,骨形成和骨吸收保持平衡。目前认为 [1 ,2 ,3 ,4,5] :1GCs直接抑制成骨细胞的活性 ,抑制成骨细胞 m RNA、DNA的合成 ,减少骨基质合成 ,抑制骨形成 ;2 GCs抑制小肠钙吸收和肾小管上皮细胞钙…     

SLE患者雌激素受体α基因多态性与Th1/Th2细胞因子漂移的相关性

目的探讨系统性红斑狼疮(SLE) 患者雌激素受体α基因多态性与Th1/Th2 细胞因子漂移的关系。方法用聚合酶链反应-限制性片断长度多态性（PCR-RFLP）方法检测ERα基因1号内含子Xba-Ⅰ和PvuⅡ酶切位点多态性，RT-PCR方法检测外周血单个核细胞（PBMC）IL-10、IL-4、IFN-γ及IL-2mRNA的表达。结果PpXx基因型SLE患者IL-10和IL-4的表达比对照组升高(P＜0.01，P＜0.05)； Ppxx基因型SLE患者IFN-γ、IL-2表达比对照组降低(P＜0.05)；在对照组，4种细胞因子表达差异均无统计学意义。结论不同的ER基因型与不同个体中细胞因子的表达显著相关，ER的不同基因型有可能在一定程度上作为基因背景影响体内细胞因子的表达。     

解剖、生理和组胚学

020807雌激素通过调节骨髓来源的成骨细胞所产生的细胞因子抑制破骨细胞功能/曲强…//中国骨质疏松杂志一2002,8(1)一8一9 目的:通过观察雌激素对骨髓来源的成骨细胞所产生的细胞因子的调节作用,探讨雌激素抑制破骨细胞功能的机制。方法:在诱导小鼠骨髓细胞分化为成骨细胞后,于成骨细胞培养中加人雌激素,应用抗体荧光免疫标记法检测成骨细胞培养液中IL一1,IL一6和TNF一a水平。结果:与对照组比较,经0.01一InM雌激素处理后,成骨细胞所产生的IL一1和IL一6水平呈浓度依赖性下降,TNF一a水平则无明显变化。结论:雌激素具有调节成骨细胞分泌…     

甲状旁腺素促进成骨的研究

人体成骨作用的增强或是消退取决于体内骨转换过程中骨吸收与骨形成两方面综合作用的结果。现已知多种化学因素，包括激素及其受体、细胞因子、某些细菌代谢物、微量元素等都能参与调节成骨。郭世绂等将促进成骨的生物活性物质分为主要抑制骨吸收和主要促进骨形成的两大类，前者主要有：雌激素及选择性雌激素受体调节剂、降钙素、二磷酸盐等；后者主要有甲状旁腺素（PTH）、他汀类化合物、锶剂、氟化物、护骨素等等。