改良法培养鼠腹膜间皮细胞

目的：建立一种从腹腔灌注消化液分离鼠腹膜间皮细胞的培养模型。方法：用0.125%的胰蛋白酶－0.01％EDTA Na2消化液注入鼠腹腔，抽取腹腔灌注液进行培养，采用相差`镜电镜和免疫组化鉴定间皮细胞。结果：分离并培养的细胞融合后在相差显微镜下呈铺路卵石状，纯度达95％以上。电镜下可见丰富的微绒毛。免疫组化鉴定角蛋白和波形蛋白阳性。Ⅷ因子和白细胞CD45抗原阴性。结论：鼠腹膜间皮细胞培养模型建立成功，该模型可为进一步研究腹膜透析并纤维化的防治提供实验基础。     

Culture and Identification of Peritoneal Mesothelium Cells in Rats

目的 建立大鼠腹膜间皮细胞的体外培养方法.方法 用0.25％胰酶-0.016％ EDTA消化大鼠腹膜组织,用免疫组化鉴定细胞.结果 免疫组化细胞角蛋白和波形蛋白染色均为阳性,2种染色胞浆均呈棕色;第Ⅷ因子相关抗原及白细胞CD45抗原染色均为阴性.确定了所培养的细胞为RPMCs.结论 大鼠腹膜间皮细胞培养成功,该方法可为进一步研究腹腔粘连的防治提供实验基础.     

腹膜间皮细胞的培养及TGF-β1 CTGF蛋白含量测定

目的建立简便有效的腹膜间皮细胞体外培养鉴定及TGF-β1、CTGF蛋白含量测定方法。方法胰蛋白酶-EDTANa2消化网膜组织培养腹膜间皮细胞;用形态学、免疫组化鉴定细胞。结果分离培养的细胞符合间皮细胞特征;ELISA法测定细胞培养液中TGF-β1、CTGF蛋白含量简便可行。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离腹膜间皮细胞的方法;ELISA法测定细胞培养液中TGF-β1、CTGF蛋白含量,可能成为衡量预防术     

鼠动脉内皮细胞的培养和鉴定

目的：建立体外培养原代鼠动脉内皮细胞（RAEC）的方法,并对培养的细胞进行鉴定,为研究血管疾病打下基础。方法：组织块法分离RAEC,用含胎牛血清的M199营养液培养。相差显微镜、电镜、免疫组化ABC方法进行鉴定。结果：分离的RAEC体外培养一周左右可成长单层,光镜下为扁平多角形,呈铺路石子状排列。电镜可见内皮细胞特性。免疫染色Ⅳ因子相关抗原阳性。结论：所培养的细胞为RAEC。     

人腹膜间皮细胞的体外培养

目的:建立简便有效的人腹膜间皮细胞(HPMC)的体外培养方法.方法:采用0.2%胰蛋白酶-0.02?TANa2消化人大网膜组织,细胞悬液经100目筛网滤过后进行培养.用形态学、免疫组化(SP 法)鉴定细胞.结果:分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状.免疫组化鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子、白细胞CD45抗原阴性,证实培养的细胞的确是HPMC.结论:胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离HPMC的方法.     

腹膜透析流出液中人腹膜间皮细胞的培养

目的建立从腹膜透析(PD)流出液中培养人腹膜间皮细胞(HPMC)方法。方法从10例PD患者PD流出液标本中收集HPMC并在体外进行原代培养,采用相差倒置显微镜、扫描电镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定。结果8例PD患者流出液中HPMC在体外原代培养成活,经相差倒置显微镜观察原代培养的HPMC呈典型的铺路石样外观;免疫组化显示培养的HPMC胞浆角蛋白、波形蛋白表达均阳性,白细胞CD45抗原阴性;扫描电镜见培养细胞表面有许多长短不一呈丝状的微绒毛。结论成功建立了从PD流出液中HPMC原代培养方法,该方法将对进一步PD的研究提供实验基础。     

腹膜透析流出液中人腹间膜皮细胞的培养

目的建立从腹膜透析（PD）流出液中培养人腹膜间皮细胞（HPMC）方法。方法从10例PD患者PD流出液标本中收集HPMC并在体外进行原代培养,采用相差倒置显微镜、扫描电镜和免疫组化染色对培养的细胞进行鉴定。结果8例PD患者流出液中HPMC在体外原代培养成活,经相差倒置显微镜观察原代培养的HPMC呈典型的铺路石样外观;免疫组化显示培养的HPMC胞浆角蛋白、波形蛋白表达均阳性,白细胞CD45抗原阴性;扫描电镜见培养细胞表面有许多长短不一呈丝状的微绒毛。结论成功建立了从PD流出液中HPMC原代培养方法,该方法将对进一步PD的研究提供实验基础。     

人脐静脉内皮细胞分离培养的改进及其鉴定

目的 改进静脉内皮细胞原代培养的方法，提高体外培养血管内皮细胞的成功率。方法 采用5号带柄一次性静脉输液针灌注消化液，分别用0．125％、0．25％胰蛋白酶和0．1％胶原酶消化脐静脉内膜，比较三种酶液消化的结果，并在倒置相差显微镜下观察其形态特点，同时用免疫组织化学的方法对所得细胞进行鉴定。结果 0．125％、0．25％胰蛋白酶和0．1％胶原酶的最佳消化时间分别为15min，10min，12min，倒置相差显微镜下观察内皮细胞为单层生长，鹅卵石样镶嵌排列。免疫组织化学检测表明细胞内有Ⅷ因子相关抗原。结论 胶原酶是分离培养脐静脉内皮细胞的首选消化液，且0．1％胶原酶消化12min获得的细胞数量多，成活率高。     

高纯度原代大鼠肝细胞的分离与培养

目的 :分离及培养高纯度的原代大鼠肝细胞。　方法 :用含EGTA的D Hanks液及含DNaseⅠ的胶原酶消化液分两步原位灌注大鼠肝脏 ,分离细胞经 3次低速离心 (5 0 g ,5min)后获得纯化的肝细胞。肝细胞存活率检测用锥虫蓝拒染法 ,纯度检测用苏木精 伊红染色。采用加入特殊营养成分的RPMI 16 4 0培养液培养 ,用倒置相差显微镜观察细胞活力。　结果 :每只 180～ 2 0 0 g的大鼠平均可获 (1.0～ 1.5 )× 10 8的细胞 ,存活率 >5 0 % ,纯度高于98%。培养 1、3、5天肝细胞的存活率分别为 10 0 %、94 .5 %、89.5 % ,形态良好。　结论 :改良原位灌注消化法分离肝细胞产率较高 ,活性较好 ,加入特殊营养成分的RPMI 16 4 0培养液培养能保持肝细胞良好的形态。     

人腹膜间皮细胞的分离培养

目的体外培养的人腹膜间皮细胞（ＨＰＭＣ）是研究腹膜功能的有用模型,我们为此建立了一种改良消化法,以从人大网膜分离腹膜间皮细胞。方法用０．２％胰蛋白酶－０．０２％ＥＤＴＡＮａ２消化人大网膜组织碎片,细胞悬液经１００目筛网滤过后进行培养：瑞士姬姆萨染色观察细胞形态,计算细胞纯度：免疫组化（ＡＢＣ法）鉴定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路鹅卵石状,纯度达９５％以上。细胞表面标志鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子相关抗原、白细胞ＣＤ４５抗原阴性,证实分离培养的确是ＨＰＭＣ。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的分离ＨＰＭＣ的方法。     

大鼠软脑膜间皮细胞的原代培养与鉴定

目的建立一种有效的大鼠软脑膜间皮细胞体外培养方法。方法用机械吹打法和2.5 g.L-1胰蛋白酶轻消化法剥离SD乳鼠软脑膜组织后培养。采用倒置相差显微镜、苏木素-伊红染色、扫描电子显微镜、细胞免疫荧光及免疫细胞化学法鉴定细胞。结果倒置显微镜示细胞融合后呈多边形;苏木素-伊红染色显示细胞呈多角形,胞浆薄染为淡红色;扫描电子显微镜下见细胞有丰富的微绒毛;细胞免疫荧光显示大鼠软脑膜间皮细胞可表达细胞角蛋白;免疫细胞化学法鉴定显示细胞角蛋白、波形蛋白抗原阳性表达,第Ⅷ因子相关抗原及磷酸盐缓冲液空白对照呈阴性。结论机械吹打法和胰蛋白酶轻消化法培养软脑膜间皮细胞的方法切实可行,可为脑膜纤维化及脑积水的形成机制研究提供实验模型。     

腹透液相关浓度葡萄糖对体外腹膜间皮细胞的影响

目的 研究腹透液相关的三种浓度葡萄糖（1．5％、2．5％、4．25％）对体外培养的腹膜间皮细胞凋亡及其形态的影响。方法 胰蛋白酶消化法从腹膜组织中分离间皮细胞，建立体外培养模型。采用Hoechst 33258荧光染色法及流式细胞仪技术测定体外培养的腹膜间皮细胞在腹膜透析液相关浓度葡萄糖作用下的凋亡率；采用透射电子显微镜技术观察高浓度葡萄糖对体外培养的腹膜间皮细胞形态学的影响。结果Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞仪结果显示：与对照组比较，1．5％、2．5％、4．25％葡萄糖均能引起明显的腹膜间皮细胞的凋亡（P〈0．05），三种浓度葡萄糖组间也有显著的差异（P〈0．05），4．25％甘露醇能引起明显的凋亡（P〈0．01），4．25％葡萄糖与4．25％甘露醇比较，前者能引起明显的凋亡（P〈0．05）；与正常对照组比较，1．5％葡萄糖分别作用于腹膜间皮细胞24h、72h、120h，各时间组均出现明显的凋亡（P〈0．05）。腹膜间皮细胞的凋亡率与葡萄糖浓度和作用时间呈正相关（r〉0．7．P〈0.05）。透射电子显微镜观察4．25％葡萄糖作用72h后大鼠腹膜间皮细胞的形态变化：细胞表面的微绒毛倒伏、脱失；细胞质内出现线粒体空泡样变；细胞核内的染色质浓缩、边集；出现凋亡小体。结论 腹膜透析液相关的三种浓度葡萄糖和4．25％的甘露醇均能引起腹膜间皮细胞的凋亡；葡萄糖诱导的腹膜间皮细胞凋亡具有浓度和时间依赖性；葡萄糖引起的细胞凋亡不仅与其渗透压有关，还与葡萄糖代谢有关；葡萄糖引起的细胞形态改变有：腹膜间皮细胞表面的微绒毛倒伏、缺失；细胞质内的线粒体出现空泡样变：细胞核内出现染色质浓缩、边集的改变。     

人腹膜间皮细胞的原代培养及传代

目的探讨建立一种有效的HPMC体外原代培养及传代的方法。方法用0.25%的胰蛋白酶0.02%EDTANa2消化腹部择期手术者大网膜组织,细胞悬液经100目筛网滤过后进行培养。采用形态学、免疫组织化学（ABC法）、电镜等鉴定细胞。结果分离培养的细胞光镜下呈铺路样鹅卵石状,免疫组化鉴定显示角蛋白、波形蛋白抗原阳性,第Ⅷ因子、白细胞CD45抗原阴性,电镜下可见细胞表面的微绒毛,证明培养的细胞的为HPMC。结论胰蛋白酶消化法是一种简单实用的培养HPMC的方法 。     

自体腹膜管替代血管后内膜变化的实验研究

目的 观察自体腹膜管替代血管后内膜的超微结构变化。研究自体腹膜管作为一种新型替代血管材料的可行性。方法 选取１４只狗的自体带腹４直肌后鞘的腹膜,制成腹膜管并间置于切断的腹主动脉间,通过移植后不同时期连续扫描电镜观察腹膜移植后的内膜变化。结果在移植后的中期,腹膜管内膜开始修复;在移植的后期,膜腹管内膜有血管内皮样细胞长入管工覆盖于内膜上,结论 自体腹膜管可以作为一种新型的血管替代材料。     

多聚赖氨酸对胎鼠颌下腺细胞培养的影响

目的：研究以多聚赖氨酸为生长底物对体外培养胎鼠颌下腺上皮细胞生长的影响。方法：以多聚赖氨酸包被培养板，对胎鼠颌下腺上皮细胞进行分离培养，应用相差显微镜及电镜观察细胞生长特性，免疫组织化学方法对细胞来源进行鉴定。结果：颌下腺细胞在包被有多聚赖氨酸的培养皿表面生长分化良好，呈单层生长；免疫组织化学检测单克隆角蛋白、上皮膜抗体呈阳性表达。结论：多聚赖氨酸在体外培养的过程中，可以促进细胞的黏附与生长。     

改良组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞及鉴定

目的以简捷、高效的方法获取原代和传代的大鼠血管平滑肌细胞(VSMC),为进一步的科学研究提供实验材料。方法采用改良的组织块贴壁法培养原代大鼠VSMC,2.5 g.L-1胰蛋白酶消化传代,并用相差显微镜、电镜、荧光显微镜及激光共聚焦显微镜对细胞进行鉴定。结果95%的组织块接种成活,相差显微镜下细胞呈典型的"峰-谷"状生长,胞体长梭形;电镜下可见粗、细肌丝沿细胞长轴平行排列;荧光显微镜及激光共聚焦显微镜检测α-肌动蛋白可见细胞胞浆内呈阳性显色,细胞核不显色。结论本方法培养VSMC简便、易操作,获得的细胞纯度和成活率较高。     

氧化应激在腹膜纤维化大鼠模型腹膜间皮细胞转分化中的作用

目的:研究氧化应激在腹膜纤维化大鼠腹膜间皮细胞转分化中的作用;观察抗氧化剂普罗布考的干预效应.方法:采用4.25%高糖腹透液以100 mL/kg 腹腔注射法复制腹膜纤维化大鼠模型,实验分为正常对照组、生理盐水对照组、腹膜纤维化模型组和普罗布考干预组.4周后行腹膜平衡试验,处死大鼠,准确测量超滤量,检测腹膜功能;取肠系膜...     

不同浓度葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞表达p21WAF1的影响

【目的】观察不同浓度的葡萄糖对大鼠腹膜间皮细胞p2 1WAF1表达的影响。【方法】大鼠腹膜间皮细胞在含糖13 8g/L和 38 6g/L的无血清培养基培养 2 4h后 ,用流式细胞仪分析细胞周期分布 ,用RT PCR法测定p2 1WAF1的表达水平。【结果】经含糖 13 8g/L和 38 6g/L培养基培养 2 4h后腹膜间皮细胞大多出现细胞肥大和停滞于细胞周期的G1期 ,以 38 6g/L组明显。高浓度葡萄糖刺激p2 1WAF1mRNA表达 ,38 6g/L组表达明显增高 (P <0 0 5 ) ;无血清常规培养基组和甘露醇组几乎无表达。【结论】高糖可刺激间皮细胞p2 1WAF1的表达 ,且可能与高糖作用下细胞肥大及G1期阻滞有关。     

Destruction of gastric cancer cells to mesothelial cells by apoptosis in the early peritoneal metastasis

This study examined the mechanism by which the gastric cancer cells lead to early peritoneal metastasis. HMrSV5 cells, a human peritoneal mesothelial cell line, were co-incubated with the supernatants of gastric cancer cells. Morphological changes of HMrSV5 cells were observed. The cell damage was quantitatively determined by MTT assay. The apoptosis of HMrSV5 cells was observed under transmission electron microscope. Acridine orange/ethidium bromide-stained condensed nuclei was detected by fluorescent microscopy and flow cytometry. The expressions of Bcl-2 and Bax was immunochemically evaluated. The results showed that conspicuous morphological changes of apoptosis were observed in HMrSV5 cells 24 h after treatment with the supernatants of gastric cancer cells. The supematants could induce apoptosis of HMrSV5 cells in a time-dependent manner. The supernatants could up-regulate the expression of Bax and suppress that of Bcl-2 in HMrSV5 cells. These findings demonstrated that gastric cancer cells can induce the apoptosis of HPMCs through supernatants in the early peritoneal metastasis, The abnormal expressions of Bcl-2 and Bax may contribute to the apoptosis. Anti-apoptosis drugs promise to be adjuvant chemotherapeutic agents in the treatment of peritoneal metastasis of gastric cancer.