食管癌端粒酶活性的研究

目的　探讨食管癌端粒酶活性检测的临床意义。方法　建立并应用ＰＣＲ 技术为基础的端粒重复序列扩增,对３６ 例食管癌及其癌旁组织进行检测。结果　３６ 例食管癌组织中２９ 例端粒酶活性呈阳性,阳性检出率为８０ ．５０ ％ ,癌旁组织中２ 例呈阳性,阳性检出率为６．００％ ;二者比较差异有非常显著性（χ２ ＝ ４１．３０,Ｐ＜０ ．００１）;３６ 例食管癌均为鳞状细胞癌,其中１７ 例伴随淋巴结转移的标本中端粒酶活性均呈阳性,而在１９ 例未伴随淋巴结转移的病人中仅有１２ 例检出端粒酶活性,其活性检出率为６３．１５％ ,二者比较差异有非常显著性（ Ｐ＝ ０ ．００６）。结论　端粒酶活性的检测可作为食管癌诊断的指标之一,同时对判断食管癌的预后具有重要参考价值。     

结肠灌洗脱落细胞端粒酶活性诊断结肠癌的价值

目的端粒酶作为核糖核酸蛋白酶能使端粒延长而克服细胞衰老，与细胞永生和癌变密切相关，正常的躯体细胞无端粒酶活性，大多人类原发肿瘤均可探及端粒酶阳性．本研究旨在探讨结肠脱落细胞端粒酶检测对结肠癌的临床诊断价值．方法采用端粒重复序列扩增法（ＴＲＡＰ）检测１６例结肠癌外科手术新鲜标本、相邻的正常组织及其肠腔灌洗物，６例ＩＢＳ患者的结肠镜抽取物的端粒酶活性．结果结肠癌组织１６例，端粒酶强阳性１０例，弱阳性３例和阴性３例，阳性率为８１３％；结肠癌远端正常肠粘膜组织的端粒酶强阳性、弱阳性和阴性分别为０，２和１４例，阳性率为１２５％，两组Ｐ＜００１．结肠癌结肠灌洗液１６例中有５例端粒酶阳性，而６例ＩＢＳ结肠镜抽取液全部为端粒酶阴性，其诊断的敏感性和特异性分别为３１３％和１００％，阳性预测值和阴性预测值分别为１００％和６４７％．结论结肠灌洗脱落细胞的端粒酶检测对结肠癌有良好的诊断价值．     

全反式维甲酸和5-Fu对胃癌细胞端粒酶活性和细胞生长的影响

目的观察ATRA,5-Fu单独和联合应用对体外培养的胃癌细胞端粒酶活性及细胞生长的影响.方法分别用ATRA,5-Fu单独和联合处理胃癌MGC-803细胞,采用MTT法测定细胞活力,采用端粒重复序列扩增法测定端粒酶活性.结果胃癌细胞活力随ATRA,5-Fu浓度增高、作用时间的延长其细胞活力逐渐下降,ATRA d1,d3,d 5的IC50分别为>40μmol/L,(20～40)μmol/L,(10～20)μmol/L;5-Fu d1,d3,d5的IC50分别为>25μmol/L,(2～5)μmol/L,(2～5)μmol/L;40μmol/L ATRA,5μmol/L 5-Fu及40μmol/LATRA+5μmol/L 5-Fu处理胃癌细胞3 d其细胞活力分别为46%,47%,8%(P<0.01),端粒酶活性分别为45.68%(P<0.01),100.00%,46.10%(P<0.01).结论ATRA,5-Fu均能抑制胃癌细胞的生长,其抑制作用具有时间和浓度依赖性,且二者合用具有协同抑制作用;ATRA能抑制胃癌细胞端粒酶活性,而5-Fu对胃癌细胞端粒酶活性无影响,二者合用对胃癌细胞端粒酶活性无协同抑制作用.抑制端粒酶活性可能是ATRA抗癌机制之一.     

端粒酶活性检测在结肠癌诊断的临床研究

目的通过检测结肠癌及癌周组织标本的端粒酶活性,用于结肠癌诊断的临床研究.方法30例结肠癌外科手术标本及5例结肠腺瘤手术标本,全部结肠癌及距癌肿5cm以上肠粘膜组织.术后行病理组织学检查.全部病例采用TRAP-PCR及ELISA方法检测癌及非癌组织端粒酶活性.将端粒酶活性检测结果与外科手术病理学检测结果进行配对比较.结果25、例结肠癌端粒酶活性检测阳性(83%),癌周组织端粒酶活性检测阳性2例(7%),结肠腺瘤端粒酶活性检测阳性1例(1/5),腺瘤周围粘膜组织端粒酶活性检测阴性.全部病历经手术后病理检查证实为结肠癌或结肠腺瘤.30例结肠癌组织端粒酶活性检测与外科手术病理学检查经配对计数资料的卡方检验,x2=0.57<3.84,P>0.05无显著差异.结论作为一种分子生物学诊断方法,端粒酶活性检测可用于胃癌、结肠癌、肝癌等各种肿瘤的快速诊断,对肿瘤良恶性的鉴别诊断亦有显著的临床意义.肝癌及某些分化良好的肿瘤早期病理学诊断有一定困难.该研究为癌症诊断提供临床应用的可能性.并可为肿瘤的治疗提供疗效依据.     

不同胃粘膜病变组织端粒酶活性表达

1材料和方法 1.1材料胃粘膜组织标本72例来自1998-10/1999-10我院内镜胃粘膜活检标本.每例患者在胃粘膜相邻部位取6块粘膜组织.2块立即放入经处理的试管中后置入液氮中,然后送-80℃低温冰箱保存待检.4块作病理检查.胃粘膜标本72例经病理证实胃腺癌(GC)33例,胃粘膜重度异型增生8例,轻度异型增生5例,胃粘膜肠上皮化生(ICM)7例,慢性浅表性胃炎(CSG)19例.     

促胃液素及其受体拮抗剂丙谷胺对人胃癌细胞系生长的影响

目的观察和分析五肽促胃液素ＰＧ及其受体拮抗剂丙谷胺ＰＧＭ对人胃癌细胞系ＭＧＣ生长的影响,为临床应用促胃液素受体拮抗剂协助治疗胃癌提供依据．方法选用５ｍｇ／Ｌ,１０ｍｇ／Ｌ,１５ｍｇ／Ｌ,２０ｍｇ／Ｌ４种浓度的ＰＧ和３０ｍｇ／Ｌ的ＰＧＭ分别作用于体外培养的浓度为２５×１０８／Ｌ的ＭＧＣ,分别培养２４,４８,７２ｈ,于酶标仪上选用波长５４０ｎｍ测定吸光值Ａ,并对数据进行比较分析．结果４种浓度的ＰＧ作用于ＭＧＣ,ＭＧＣ连续３ｄ的生长状态与对照组无明显差异,而ＭＧＣ在ＰＧＭ作用下,其连续３ｄ的平均Ａ值分别为００２９,００４６和００８４,而未被ＰＧＭ作用的ＭＧＣ的平均Ａ值分别是０１０１,０１１５和０１８２,ＭＧＣ在ＰＧＭ作用下生长明显低于对照组（Ｐ＜００５）．结论外源性的ＰＧ对ＭＧＣ无营养促进作用,而ＰＧＭ能抑制ＭＧＣ的生长     

血清CA-50含量对消化系肿瘤的诊断价值

目的评价血清ＣＡ＿５０对消化系肿瘤的诊断价值．方法消化系肿瘤患者１７２例，其中肝癌５４例，胃癌４３例，大肠癌５７例，胰腺癌１８例；消化系良性疾病患者８８例，其中肝硬变３６例，胃良性病变（胃炎、胃溃疡）５２例；正常对照者６０例．全部受测对象均抽空腹静脉血，分离血清，－２０℃贮存备测．采用ＲＩＡ法测定血清ＣＡ５０含量．放免药盒由中国医学科学院肿瘤研究所提供，使用国产ＦＪ６３０型γ计数仪．数据均用ｘ±ｓ表示，以正常ｘ＋２ｓ作为上限计算阳性率．结果肝癌、胃癌、胰腺癌和大肠癌血清ＣＡ５０含量分别为２４０ｋＵ／Ｌ±２１８ｋＵ／Ｌ，１２１ｋＵ／Ｌ±１０６ｋＵ／Ｌ，１８２ｋＵ／Ｌ±１０７ｋＵ／Ｌ和１６１ｋＵ／Ｌ±１１３ｋＵ／Ｌ．显著高于正常对照组及消化道良性病变组（分别为５６ｋＵ／Ｌ±４４ｋＵ／Ｌ和５６ｋＵ／Ｌ±２１ｋＵ／Ｌ，Ｐ＜００１）．消化道肿瘤有腹腔及远处转移者，其血清ＣＡ５０含量升高更为明显．结论ＣＡ５０是较好的肿瘤标记物，有助于诊断消化道肿瘤．     

PCR法检测胃癌组织中幽门螺杆菌

１对象和方法１．１对象本研究选用河北医科大学第二医院１９９５年度经外科手术病理证实为胃癌的１０例患者，年龄４７岁～５６岁，男７例，女３例，其中贲门胃底癌１例、胃窦癌６例、胃体小弯侧癌３例，病理均为腺癌．对此１０例切除具有癌灶标本用石蜡包埋备用．１．２...     

支气管活检标本的端粒酶活性检测对肺癌的诊断价值

目的：探讨肺癌组织端粒酶活性检测对肺癌的诊断价值。方法采用端粒酶重复序列扩增法检测纤维支气管镜活组织检查的肺癌病变组织（７０例）、肺癌对侧支气管组织（７０例）及非癌性肺疾病支气管组织（２０例）的端粒酶活性,并和病理学及细胞学检查结果进行比较。结果肺癌病变组织端粒酶检出率为８１％,明显高于肺癌对侧支气管组织（１４％）（Ｐ〈０．０１）及非癌性肺疾病支气管组织（１０％）的检出率（Ｐ〈０．０１）;肺癌组织     

An improvement method for the detection of in situ telomerase activity: in situ telomerase activity labeling

ＩＮＴＲＯＤＵＣＴＩＯＮＴｅｌｏｍｅｒａｓｅｉｓａｓｐｅｃｉａｌｒｅｖｅｒｓｅｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅｗｈｉｃｈｃｏｎｓｉｓｔｓｏｆａｔｅｍｐｌａｔｅＲＮＡａｎｄｐｒｏｔｅｉｎ,ａｎｄｕｓｅｓｔｈｅＲＮＡｔｅｍｐｌａｔｅｔｏｃａｔａｌｙｚｅｔｈｅａｄｄｉｔｉｏｎｏｆｔｅｌｏｍｅｒｉｃＤＮＡｔｏｃｈｒｏｍｏｓｏｍｅｅｎｄｓ［１－５］．Ｔｈｅｅｎｚｙｍｅｉｓａｃｔｉｖｅｉｎａｄｕｌｔｍａｌｅｇｅｒｍｌｉｎｅｃｅｌｌｓ,ｅｍｂｒｙｏｎｉｃｃｅｌｌｓａｎｄｈｅｍｏｐｏｉｅｔｉｃｓｔｅｍｓ,ｂｕｔｉｓ…     

Application of laser scatering spectrumin diagnosis and treatment of gastric and duodenal malignant tumors

ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆｌａｓｅｒｓｃａｔｅｒｉｎｇｓｐｅｃｔｒｕｍｉｎｄｉａｇｎｏｓｉｓａｎｄｔｒｅａｔｍｅｎｔｏｆｇａｓｔｒｉｃａｎｄｄｕｏｄｅｎａｌｍａｌｉｇｎａｎｔｔｕｍｏｒｓＬＩＵＺｈｉＧｕａｎｇ１，ＷＡＮＧＪｉｎｇＹｉｎ２，ＷＡＮ...     

采用改进的差示PCR技术分离胃癌差异表达基因的研究

目的建立优化的mRNA差示PCR条件;运用建立的条件及GQS-9600分离胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株之间的差异表达基因片段;根据获取的序列,设计引物并运用于胃癌组织、血、活检胃粘膜标本检测,拟从中筛选出检出率与符合率高的数对引物,建立胃癌基因诊断方法.方法以胃癌GC7901与胃粘膜GES-1细胞株为研究对象,探索mRNA差示PCR的最佳反应条件,运用优化的条件分离细胞株之间的差异表达基因片段;以回收的片段作探针,打点杂交证实为真正的差异片段后,对纯化产物进行直接序列分析及GenBank同源性检索,同源性低的序列递交给GenBank;设计引物,采用RT-PCR方法对胃癌组织、血、活检胃粘膜进行检测,筛选出检出率与符合率高的5对引物建立多重PCR诊断胃癌方法.结果①优化的差示PCR条件为:前5轮PCR循环采用94℃ 35s,40℃ 2min,72℃ 30s,后35轮PCR循环采用94℃ 45s,55℃ 2min,72℃ 1min,最后在72℃延伸7min;②确认并分离出差异条带154条,胃癌细胞株泳道中存在而胃粘膜细胞株泳道中缺失的有82条,胃粘膜细胞株泳道中存在而胃癌细胞株泳道中缺失的有35条,胃癌细胞株泳道中表达高于胃粘膜细胞株泳道中的有23条,胃粘膜细胞株泳道中表达高于胃癌细胞株泳道中的有14条,分别来自于H-T11G,H-T11A,H-T11C锚定引物的差异条带为61条,47条及46条;③从胃癌细胞株泳道中存在而胃粘膜细胞株泳道中缺失的82条带中随机挑选出17个差异片段作探针,进行打点杂交,证实在两细胞株之间呈差异表达;④对17个片段进行直接测序及同源性检索分析,其中7个新序列被GenBank接受,接受号为AF071052至AF071058;⑤GCYS-1,GCYS-4,GCYS-8,GCYS-10,GCYS-11号序列引物在26例胃癌标本中检出覆盖率为100%,在9例病理确诊的胃癌患者活检胃粘膜中检出率为100%,在17例病理确诊为胃癌患者血标本中检出率为53%,在其他组织中检出率较低.结论①建立了优化的mRNA差示PCR技术的条件;②分离出了154个差异表达的基因片段;③对17个差异片段进行了测序及分析,其中7个新序列被GenBank接受;④建立多重PCR诊断胃癌方法.     

PCR直接法检测HBsAg阴性肝病的价值

目的研究ＨＢｓＡｇ阴性肝病患者和自然人群中乙肝病毒（ＨＢＶ）携带者。方法采用ＤＮＡＰＣＲ直接法测定急、慢性肝炎，肝硬变和单项ＡＬＴ增高者共２３１例ＨＢｓＡｇ阴性患者中ＨＢＶＤＮＡ，２４０例ＨＢＶ标志阴性的自然人群对照。结果检出率在患者组和对照组分别为３３．７％（７８／２３１）和１１．５％（２８／２４０），Ｐ＜０．０１。单项ＡＬＴ增高组最高，达６６．７％（１０／１５），其他依次为慢肝组（ＣＨ）４１．９％（１３／３１）、肝硬变组（ＬＣ）３０．７％（５２／１６９）和急肝组１８．７％（３／１０）。单项ＡＬＴ增高组与ＬＣ、急肝组有显著差异（Ｐ＜０．０１）。结论在ＨＢｓＡｇ阴性的肝病患者和自然人群中均有ＨＢＶ携带者     

Clinical significance of PCR in Helicobacter pylori DNA detection in human gastric disorders

ＣｌｉｎｉｃａｌｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＰＣＲｉｎＨｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒｐｙｌｏｒｉＤＮＡｄｅｔｅｃｔｉｏｎｉｎｈｕｍａｎｇａｓｔｒｉｃｄｉｓｏｒｄｅｒｓＸＵＧｕｏＭｉｎｇ，ＪＩＸｕＨｕａｉ，ＬＩＺｈａｏＳｈｅｎ，ＭＡＮＸｉａｏＨｕａ...     

荧光定量PCR技术在肺结核诊断中的临床应用研究

目的评价荧光定量PCR技术在肺结核病诊断中的应用价值。方法采用荧光定量PCR、金胺O染色荧光镜检和培养法同时检测860例肺结核患者的痰标本,对检测结果进行比较。结果荧光定量PCR检测灵敏度可达10~100 cfu/ml,重复性好,对其他呼吸道病原体检测结果均为阴性。肺结核患者痰标本荧光定量PCR检测阳性率要高于金胺O染色荧光镜检和培养法的阳性率,差异有统计学意义(P0.01)。结论应用荧光定量PCR方法检测结核杆菌,具有特异、灵敏、简便、快速的特点,可作为结核病诊断的方法之一。     

石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应检测在结核病诊断中的价值

目的探讨石蜡包埋组织实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测结核分枝杆菌DNA在结核病诊断中的价值。方法275例组织标本行常规组织病理学检查、抗酸染色,并对石蜡包埋组织应用实时荧光定量聚合酶链反应检测结核分枝杆菌DNA。结果275例FQ-PCR检测结核分枝杆菌DNA阳性211例(76.7%),病理诊断为结核183例(66.5%),抗酸染色阳性23例(8.4%)。病理诊断为结核者FQ-PCR阳性率为93.4%,抗酸染色阳性者FQ-PCR阳性率95.7%。结论实时荧光聚合酶链反应技术敏感性高、其与组织病理学相结合可以提高诊断率。