纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

用血清药理学方法探讨纳米钙补肾中药血清对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响.按照随机对照原则设立7个实验组:假手术组、模型空白组、中药复方小剂量组、中药复方中剂量组、中药复方大剂量组、骨疏康颗粒组、牡蛎碳酸钙咀嚼片组,在相同条件下分别制备含药血清和对照血清.采用多次胶原酶消化法获得足够数量的成骨细胞进行实验研究.用MTT法观察各组不同浓度血清在不同作用时间段对成骨细胞增殖的影响.采用SPSS 10.0软件进行均数比较和多元线性分析.结果表明,3个中药复方组均能促进成骨细胞增殖,其中20%血清浓度下中剂量中药复方增殖作用最为明显,有显著的统计学意义(P＜0.01).表明血清浓度与成骨细胞增殖率有较强的相关关系.     

中药骨康含药血清对TNF-α致大鼠成骨细胞凋亡的影响

为观察中药骨康含药血清对新生大鼠成骨细胞凋亡的影响.将实验动物随机分成中药组、罗盖全组和蒸馏水组3组,通过体外分离和培养成骨细胞体系,应用肿瘤坏死因子(TNF-α)作为诱导成骨细胞凋亡的介质,在透射电镜下观察细胞超微结构.在用空白血清培养7天的成骨细胞中加入TNF-α24h时,电镜下出现明显的细胞调亡形态,表现为核膜不均匀肿胀,粗面内质网扩张,核染色质浓集,细胞表面的微绒毛明显减少,可伴见细胞体积缩小,而用骨康血清和罗盖全血清培养7天的成骨细胞虽然仍有细胞凋亡的形态改变,但可部分对抗TNF-α所致的成骨细胞调亡作用.表明中药骨康含药血清能抑制TNF-α诱导的新生大鼠成骨细胞凋亡.     

海螵蛸对骨愈合相关基因表达的影响

为揭示中药海螵蛸在骨折愈合过程中的干预作用,了解海螵蛸的调节靶点,探索建构中药基因组学的途径.通过在大鼠胫骨打孔的方法建立单因素干扰模型,在不同时间点采用原位杂交方法对各类mRNA的变化进行动态观察骨愈合过程中Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA、转化生长因子(TGG)-β1 mRNA、骨形态发生蛋白(BMP)-2mRNA、血管内皮生长因子(VEGF) mRNA表达情况.结果显示,海螵蛸在骨折早期对Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA、VEGFmRNA、BMP-2mRNA的表达升高,而对Ⅱ型前胶原mRNA、TGF-β1 mRNA的表达量无明显影响;但达到峰值后,Ⅱ、Ⅲ型前胶原mRNA表达水平下降,VEGFmRNA、TGF-β1mRNA表达量中后期维持于较高水平.表明海螵蛸与血管形成有关,对骨折软骨形成早期具有促进骨诱导的作用,并对成骨细胞的增殖及合成活性有较大影响.     

牡蛎钙补肾中药血清对骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制的调控作用

目的:用血清药理学方法研究牡蛎钙补肾中药血清对离体大鼠成骨细胞中骨形成蛋白-4诱导成骨信号转导机制的调控作用.方法:采用多次胶原酶消化法获得足够数量的成骨细胞(OB),用改良钙钴法测定碱性磷酸酶(ALP)活性以鉴定0B.用含药血清进行细胞培养48h后,用逆转录多聚酶链反应技术(RT-PCR)检测各组0B中BMP-4和Smad5、6mRNA表达.结果:与模型空白组比较,牡蛎钙补肾中药组可明显上调OB中BMP-4和Smad5 mRNA表达,下调Smad6mRNA表达.结论:牡蛎钙补肾中药血清可以提高OB中BMP-4和Smad5基因表达、降低Smad6基因表达,这可能是其防治骨质疏松症的重要机制之一.     

中药骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞体外成骨分化的影响

为观察骨碎补提取液促进骨髓基质细胞体外向成骨细胞分化的作用,探讨该药促进骨折愈合、治疗预防骨质疏松的细胞学基础.采用不同浓度的骨碎补乙醇提取液对骨髓基质细胞培养,进行形态学和组织学鉴定.结果显示中、低浓度药物促进了骨髓基质细胞在体外向成骨细胞分化,说明该药含有诱导骨髓基质细胞向成骨细胞分化的成分.     

昆山接骨片对体外培养大鼠成骨细胞骨的影响

为研究昆山接骨片对体外成骨细胞骨形成功能的影响,探讨昆山接骨片促进骨折愈合的机理,分别用MTT法观察了含昆山接骨片Ⅰ号和昆山接骨片Ⅱ号的药物血清对成骨细胞增殖功能的影响,用PNPP法观察昆山接骨片Ⅰ号对成骨细胞碱性磷酸酶比活性的影响,以及用矿化结节计数法观察了昆山接骨片Ⅰ号对成骨细胞矿化功能的影响。成骨细胞增殖率测定结果显示,昆山接骨片Ⅰ号组为0.092±0.016,与对照组比较有显著性差异(P＜0.05);而Ⅱ号组为0.230±0.026,与对照组比较无差异。ALP比活性测定结果显示,昆山接骨片Ⅰ号组为0.034±0.021,对照组为0.026±0.008,两组比较有显著性差异(P＜0.05))。矿化结节计数结果提示,昆山接骨片Ⅰ号组为25.833±7.782,对照组为13.333±6.153,两组比较有显著性差异(P＜0.05)。综合研究结果表明,以活血化瘀药物为主制成的昆山接骨片Ⅰ号具有促进成骨细胞的增殖、分化与矿化、成骨细胞的骨形成功能,从而发挥其促进骨折愈合的作用,单纯用螃蟹粉制成的昆山接骨片Ⅱ号则无此作用。     

浅议生态环境对单味中药功效发挥方向的影响

目的:探求单味中药功效发挥的环境因素。方法:从地域、温度、品种、南北医家用药等诸方面浅谈生态环境对单味中药功效发挥方向的影响。结论:分析认为生态环境是控制单味中药功效发挥方向的因素之一,品种以及产地决定了单味中药的不同偏性,即质不同则性不同,从而影响其"体",则其"用"必然受到影响,进而影响其功效的发挥。     

补肾复方含药血清对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达的影响

为研究补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。以补肾活血方、补肾健脾方、龟鹿二仙膏、金匮肾气丸、六味地黄丸、左归丸6种补肾中药复方及生理盐水给体重为250g左右的大鼠灌胃,提取含药血清;采用酶消化法从初生2天SD大鼠头盖骨中分离出成骨细胞,用含药血清及生理盐水进行成骨细胞传代培养;取第2代细胞,培养至细胞铺满培养瓶约80%时,更换含药血清培养液24小时;用含药血清培养液24小时后终止培养,提取总RNA,应用RT-PCR方法观察六种补肾复方对大鼠成骨细胞OPG、ODF表达影响。结果显示补肾活血方、补肾健脾方、金匮肾气丸、六味地黄丸和左归丸含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量高于生理盐水对照组,龟鹿二仙膏含药血清培养的大鼠成骨细胞OPG的表达量低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组大鼠成骨细胞OPG表达量明显高于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。6种补肾复方含药血清培养的大鼠成骨细胞ODF表达量均低于生理盐水对照组,其中补肾活血方组、补肾健脾方组和金匮肾气丸组大鼠成骨细胞ODF表达量明显低于生理盐水对照组,统计学有显著性差异(P<0.05)。表明补肾活血方、补肾健脾方含药血清能增加大鼠成骨细胞OPG表达量,降低大鼠成骨细胞ODF表达量。     

健骨灵对骨质疏松症相关基因表达的影响

为探讨健骨灵对雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达的影响.以成年雌性卵巢切除大鼠作为骨质疏松症模型,通过原位杂交技术观察雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达.结果原位杂交显示运用中药健骨灵治疗后雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA表达水平提高(P＜0.01).表明健骨灵对雌激素受体mRNA及Ⅰ型胶原mRNA的表达水平具有增强作用.     

浅谈生态环境对单味中药功效发挥方向的影响

目的:探求单味中药功效发挥的环境因素.方法:从地域、温度、品种、南北医家用药等诸方面浅谈生态环境对单味中药功效发挥方向的影响.结论:分析认为生态环境是控制单味中药功效发挥方向的因素之一,品种以及产地决定了单味中药的不同偏性,即质不同则性不同,从而影响其“体”,则其“用”必受到影响,进而影响其功效的发挥.     

辛伐他汀对成骨细胞一氧化氮合酶的影响

为观察辛伐他汀对成骨细胞一氧化氮合酶(NOS)表达及成骨能力的影响,探讨辛伐他汀刺激成骨细胞的作用机制.体外培养新生SD大鼠成骨细胞,A组加入辛伐他汀,B组加入辛伐他汀和一氧化氮生成抑制剂N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME),C组作空白对照.检测成骨细胞中内皮型一氧化氮合酶(eNOS)mRNA的表达及碱性磷酸酶(ALP)活性,测定培养基中一氧化氮(NO)及骨钙素(BGP)含量.结果A组成骨细胞中eNOS mRNA表达及ALP活性,培养基中NO及BGP含量均高于C组,差异有显著性(P《0.05),B组与C组无明显差异.认为辛伐他汀的成骨作用可能与其促进成骨细胞NOS合成有关.     

补骨脂注射液对体外培养大鼠成骨细胞增殖的影响

为研究补骨脂对体外成骨细胞增殖的影响.以出生24h以内的wistar大鼠为来源,酶消化法分离培养新生大鼠颅盖骨成骨细胞,胰蛋白酶消化后,传代培养大鼠成骨细胞;取一定量接种于24孔培养板细胞贴壁后,分成实验组1-5与空白对照组,分别用含补骨脂注射液5%、12.5%、25%、50%、100%、0%的DMEM培养基进行培养,连续观察7天,绘制细胞生长曲线;另取一定量接种于96孔培养板,分组及加入培养基同上,MTT法观察细胞存活和增殖能力.结果显示原代成骨细胞逐渐形成成纤维细胞集落,有成纤维细胞型表现;传代成骨细胞逐渐被细胞分泌的基质所包埋,形成钙化.补骨脂对新生大鼠成骨细胞的增殖有显著促进作用.表明利用胰酶消化法可以分离培养出纯度高,数量较多且培养时间明显缩短的成骨细胞.补骨脂抗骨质疏松的作用与其增加成骨细胞的数量和促进成骨细胞的增殖能力有关.     

续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡和细胞周期的影响

在动物实验的基础上,探讨续断对成骨细胞增殖、分化、凋亡、细胞周期和Ⅰ型前胶原αmRNA表达影响.根据文献方法培养大鼠成骨细胞株UMR-106/01,采用3H-Tdr法检测细胞增殖,PNPP法、RIA法、茜素红染色法以及定量RT-PCR法分别检测碱性磷酸酶活性、骨钙素活性、矿化结节形成和Ⅰ型胶原αmRNA的表达,从而了解续断对成骨细胞增殖、分化的影响;FCM法检测细胞周期.结果显示续断中、高剂量能显著促进成骨细胞的增殖、增加碱性磷酸酶的表达及矿化结节形成的数量,促进成骨细胞骨钙素和Ⅰ型前胶原mRNA的表达(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异无显著性.续断高剂量组细胞增殖率、S期细胞比率和细胞增殖指数等均显著高于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05),和雌激素组比较差异也无显著性.细胞凋亡率和G0-G1期细胞比率显著低于空白对照组(P＜0.01,P＜0.05).表明续断能有效促进成骨细胞的分化、增殖,防止成骨细胞凋亡,可能是该药促进骨折愈合、防治骨质疏松的机制之一.     

淫羊藿苷对人成骨细胞的作用

为探讨淫羊藿苷对人成骨细胞的影响,采用分次酶消化法做离体人成骨细胞培养,得到性状稳定、纯度高的成骨细胞;用MTT法做淫羊藿苷对成骨细胞增殖的研究。结果发现不同浓度的淫羊藿苷对成骨细胞的生长增殖均有促进作用,以10ng·ml-1浓度时其作用最强(P<0.05);生化方法测定淫羊藿苷浓度为100ng·ml-1和10ng·ml-1对成骨细胞分泌碱性磷酸酶(AKP)有促进作用。表明淫羊藿苷促进成骨细胞增殖的同时,增强了成骨细胞成骨活性。     

补肾中药对去卵巢大鼠骨组织ER、OPG表达的促进作用

通过检测去卵巢大鼠给予补肾中药后腰椎内ERmRNA及OPG mRNA的表达,进一步探讨补肾中药防治骨质疏松的分子机制.将雌性3月龄SD大鼠48只,随机分为卵巢切除 补肾中药防治(HDP),卵巢切除 雌激素(倍美力)防治(ER),骨质疏松(卵巢切除)(OVX)及正常对照组(SHAM)4组,每组12只.术后12周处死大鼠,取L3椎体,异硫氰酸胍一步法提取总RNA,嵌套式反转录聚合酶链反应(NRT-PCR),扩增待检测各组ERmRNA及OPGmRNA的表达.同时取L4椎体,行骨组织形态计量学检测.结果显示HDP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率分别为75.0%和66.7%;EP组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均为83.3%;OVX组各例ER mRNA均无表达,2例OPG mRNA呈弱阳性表达(阳性率为16.7%);SHAM组呈ER mRNA及OPG mRNA阳性表达.χ2检验,HDP组与ER组比较ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均无显著性差异(P＞0.05);该两组与OVX组比较,ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率均有高度显著性差异(P＜0.01);而与SHAM组比较,HDP组ERmRNA,ER组ER mRNA及OPG mRNA阳性表达率无显著性差异(P＞0.05),但HDP组OPG mRNA阳性表达率有显著性差异(0.01＜P＜0.05).骨组织形态计量学检测,OVX组骨体积、骨小梁厚度及骨小梁数目均比SHAM组显著减少,而骨小梁间隔显著增大.同EP组相似,HDP组骨体积、骨小梁厚度显著增加,虽也使骨小梁间隔稍有减少,但与OVX组比较无统计学差异.表明补肾中药通过直接作用于骨组织中ER,增强ER mRNA的表达,并刺激OPG的分泌,从而有望替代雌激素,对去卵巢大鼠的骨质疏松有明显的防治作用.     

通痹灵胶囊对体外培养的强直性脊柱炎成纤维细胞的影响

为观察中药通痹灵胶囊及含药血清对体外培养的强直性脊柱炎 (AS)成纤维细胞增殖的影响 ,探讨其药理作用机制 ,采用体外细胞培养技术 ,以AS患者髋关节囊成纤维细胞为材料 ,采用四甲基偶氮唑盐 (MTT)检测法、3 H TdR掺入法、流式细胞仪、绘制成纤维细胞生长曲线等方法观察中药通痹灵胶囊对AS成纤维细胞增殖、DNA合成及生长周期的影响。结果显示通痹灵胶囊浓缩液及含药血清不仅对成纤维细胞的增殖有明显抑制作用 (P <0 .0 1) ,还对其DNA的合成有抑制作用 (P <0 .0 1) ,流式细胞仪检测显示中药组G0 G1 期细胞增多 ,S期细胞明显减少 (P <0 .0 1)。说明中药通痹灵胶囊及其含药血清对体外培养AS成纤维细胞增殖所产生的明显抑制作用 ,可能是其治疗AS的药理机制之一。     

活络骨康丸对成骨细胞作用的研究

为了观察活络骨康丸对成骨细胞的直接刺激作用.采用酶消化法分离培养人成骨细胞,加入不同浓度的活络骨康丸药液,测定AKP、BGP、PYD的含量.结果AKP、BGP水平随药物浓度增加而升高,PYD反而减少(P《0.05).表明活络骨康丸对成骨细胞有直接刺激作用;对破骨细胞也有抑制作用.     

中药骨必康防治去卵巢大鼠骨质疏松的实验研究

为了探讨骨必康对绝经后骨质疏松症的防治效果及其作用机理,选用60只8月龄SD雌性大鼠,随机分为假手术组(SHAM)、模型组(OVX)、尼尔雌醇组(CEE3)、骨必康低剂量组(GBK-L)和骨必康高剂量组(GBK-H),每组12只.假手术组不切除卵巢,其余各组均切除双侧卵巢,术后第4天开始灌胃给药,12周后肝静脉取血,处死动物.分离血清和血浆,测定S-AKP、S-BGP、S-Ca、S-P及血浆ACP,摘取L3椎体及左侧股骨测定BMC、BMD.结果显示,与模型组比较,骨必康低、高剂量组均能明显提高L3椎体及左侧股骨BMD(P＜0.05～0.01),且高剂量组能明显降低血浆ACP(P＜0.001);与假手术组比较,中药组S-BGP、S-AKP含量明显升高(P＜0.05～0.001).提示骨必康对绝经后骨质疏松症具有肯定的防治作用,其作用机制在于抑制骨吸收,促进骨形成,阻止骨量丢失.     

含药血清对成骨细胞矿化结节及Ⅰ型胶原形成的影响

为了解骨康对成骨细胞及骨形成的影响,采用从新生大鼠颅骨中分离出的成骨细胞,用酶法建立成骨细胞体外培养体系,观到中药含药血清对成骨细胞矿化结节和Ⅰ型胶原的影响。结果发现成骨细胞培养加合药血清后,成骨细胞内Ⅰ型胶原表达升高。说明含药血清可促进成骨细胞合成Ⅰ型胶原,从而促进骨形成。