腺病毒介导的线粒体融合素基因-2诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡

目的研究腺病毒介导的线粒体融合素基因2(mitofusin2gene,Mfn2)对大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells,VSMCs)凋亡的影响。方法建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,用携带大鼠Mfn2基因(rMfn2)的重组腺病毒Adv rMfn2GFP和含有绿色荧光蛋白基因的对照腺病毒Adv GFP分别感染球囊损伤动脉段,以磷酸缓冲液(PBS)作为未感染对照组,假手术组作为正常对照组,采用免疫组织化学方法检测外源基因表达水平;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)检测凋亡细胞;Image Pro图像分析系统进行血管定量组织形态学分析。结果病毒感染后5d,免疫组织化学证实Adv rMfn2GFP组Mfn2蛋白表达水平明显;TUNEL染色显示,Adv rMfn2GFP组的VSMCs凋亡率明显高于PBS组和Adv GFP组,假手术组未见TUNEL阳性VSMCs(n=10,P<0.01);感染后21d,Adv rMfn2GFP组的血管内膜面积及内膜中膜面积比明显低于对照组(n=10,P<0.01)。结论高表达Mfn2基因可诱导大鼠颈动脉球囊损伤后血管平滑肌细胞凋亡。     

瑞舒伐他汀对Medtronic球囊导管损伤大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

背景:球囊扩张及支架置入后再狭窄、管腔丢失等问题制约了支架置入治疗的进一步发展,血管内膜增殖和凋亡在再狭窄中的作用及干预方法尚在积极探索中.目的:采用Medtronic球囊建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,观察瑞舒伐他汀对球囊损伤大鼠颈动脉平滑肌细胞增殖及凋亡的影响.方法:将雄性SD大鼠随机数字表法分为球囊损伤组和治疗组.均采用Medtronic球囊建立大鼠颈动脉球囊损伤模型,并取球囊损伤组大鼠的右侧颈总动脉(未行球囊损伤)作为正常对照.治疗组于球囊损伤前3 d始连续给予瑞舒伐他汀5 mg/(kg·d)灌胃,球囊损伤组给予9 g/L氯化钠溶液灌胃.术后7,14 d取颈总动脉进行苏木精-伊红染色,免疫组织化学检测SM α-actin、增殖细胞核抗原,采用TUNEL法检测平滑肌细胞凋亡情况.结果与结论:与球囊损伤组比较,治疗组造模后14 d,损伤血管新生内膜面积、新生内膜,中膜面积比值明显减少(P<0.05),管腔面积增加26%;增殖细胞核抗原阳性细胞率降低,凋亡阳性细胞率增高(P相似文献   

胶质细胞源性神经营养因子修饰的骨髓间充质干细胞移植治疗脊髓损伤的效果

目的观察胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)分化为神经元样细胞对大鼠脊髓损伤的修复作用。方法以载GDNF基因的重组腺病毒转染BMSCs以诱导其分化。选取36只SD大鼠制成脊髓损伤模型,随机分成3组。对36只大鼠于造模后1、2、3、4周行BBB评分,并于造模后第4周取材行HE染色及免疫组化染色,观察脊髓损伤修复情况。结果载GDNF基因重组腺病毒转染后,BMSCs可持续、稳定表达较高水平的GDNF,并能成功诱导BMSCs向神经元样细胞分化。术后1~4周,C组BBB评分均明显高于其他2组,A组最低且无明显变化;术后4周HE染色结果显示,A组脊髓空洞面积最大,C组空洞面积最小;术后4周,A组脊髓损伤部位出现少量NF200、GFAP阳性细胞,C组较B组和A组则明显增多。结论 GDNF基因修饰的BMSCs能成功分化为神经元样细胞,移植后对大鼠脊髓损伤具有一定的修复作用。     

去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因与血管平滑肌细胞增殖(英文)

背景:线粒体融合素2基因作用于血管平滑肌细胞Ras蛋白,通过胞外信号调节蛋白激酶1/2通路抑制细胞增殖.线粒体融合素2基因氨基酸序列第442位丝氨酸为蛋白激酶A磷酸化位点,与其磷酸化状态密切相关,能参与其功能调控.目的:观察大鼠线粒体融合素2基因在去除蛋白激酶A磷酸化位点后对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响及其相关信号通路.方法:利用已构建的携带绿色荧光蛋白基因、线粒体融合素2基因和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因的3种重组腺病毒,感染大鼠主动脉血管平滑肌细胞,将其传代培养3～10代后以抽签法随机分为4组:①不加干预的对照组.②感染携带绿色荧光蛋白的对照组(Adv-GFP组).⑨感染携带线粒体融合素2基因的实验组(Adv-Mfn2组).④感染携带去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因的实验组(Adv-Mfn2-PKA(△)组).激光共聚焦显微镜观察完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在细胞中的定位.Westernblot检测p-ERK1/2表达水平及完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中的表达.MTT法绘制细胞生长曲线.结果与结论:完整的和去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因在血管平滑肌细胞中均表达蛋白特异性条带.两种基因表达产物都主要分布于线粒体外膜.与对照组和Adv-GFP组相比,Adv-Mfn2组吸光度值在第3,4,5,6天都显著降低(P＜0.01＝,Adv-Mfn2-PKA(△)组吸光度值无明显变化.与对照组和Adv-GFP组相比,Adv-Mfn2组p-ERK1/2表达水平显著降低(P＜0.01＝,Adv-Mfn2-PKA(△)组无明显变化.提示去除蛋白激酶A磷酸化位点的线粒体融合素2基因定位于线粒体外膜,对血管平滑肌细胞的增殖无拮抗作用,对胞外信号调节蛋白激酶1/2通路无抑制作用.     

高同型半胱氨酸血症对大鼠颈动脉损伤后MIP-1α及其受体CCR1表达的影响

目的通过制备高同型半胱氨酸血症(HHcy)大鼠颈动脉球囊拉伤模型,观察血管组织形态,检测巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、CC型趋化因子受体1(CCR1)的表达,以探讨HHcy促内膜增生和平滑肌细胞增殖的机制。方法健康雄性Wistar大鼠60只,随机分为2组,高同型半胱氨酸组30只,采用80mg·kg-1·d-1L-蛋氨酸皮下注射制备HHcy的大鼠模型,对照组30只,同剂量生理盐水(80mg·kg-1·d-1)皮下注射。4周后行颈动脉球囊拉伤,分别于术后7d、14d取材。酶法检测血浆Hcy浓度,苏木素-伊红(HE)染色、免疫组织化学染色检测血管损伤后内膜增生、平滑肌细胞增殖和MIP-1α、CCR1表达情况。结果 (1)HHcy组大鼠血浆Hcy显著高于对照组[(57.09±7.59)μmol/Lvs.(5.28±0.20)μmol/L,P<0.01]。(2)血管损伤组血管内膜较未损伤组明显增厚,HHcy组上述变化更为明显。(3)血管损伤组MIP-1α和CCR1阳性表达强于未损伤组,MIP-1α和CCR1蛋白在HHcy血管损伤组的阳性表达强于对照组。结论 (1)L-蛋氨酸皮下注射可成功制备HHcy大鼠模型。(2)HHcy诱导MIP-1α、CCR1表达增强,在血管损伤后促进内膜增生和平滑肌细胞增殖过程中发挥着重要作用。     

BACE-1修饰的人骨髓间充质干细胞对创伤性颅脑损伤大鼠脑组织的保护作用

目的 探究β-位点淀粉样前体蛋白剪切酶-1(BACE-1)修饰的人骨髓间充质干细胞(BMSCs)对创伤性颅脑损伤(TBI)大鼠脑组织的保护作用。方法 将敲低BACE-1基因的腺病毒及空载体腺病毒感染BMSCs,并检测绿色荧光和BACE-1表达。将100只大鼠随机分为假手术(Sham)组、TBI组、空载体腺病毒感染BMSCs(Ad-BMSCs)组和敲低BACE-1基因的腺病毒感染BMSCs(Ad-si-BACE-1-BMSCs)组,每组各25只。采用Marmarou′s自由落体方法建立大鼠TBI模型,Sham组仅切开、缝合头皮,不致伤。建模2 h后,Ad-si-BACE-1-BMSCs组和Ad-BMSCs组分别经尾静脉注射敲低BACE-1基因的腺病毒及空载体腺病毒感染的BMSCs, Sham组和TBI组均给予等体积生理盐水。BMSCs移植7 d后,Morris水迷宫实验检测大鼠认知能力;苏木精-伊红染色和尼氏染色评估大鼠海马组织损伤;TUNEL染色检测海马神经元凋亡;硫黄素-S染色、免疫组化染色检测海马组织β-淀粉样蛋白(Aβ)含量;硫代巴比妥酸法和全自动生化分析仪检测海马组织丙二醛(M...     

tMfn2基因抑制血管平滑肌细胞增殖的作用与机制

目的 比较线粒体融合素基因2(Mfn2)和去除穿膜区序列的大鼠线粒体融合素基因2(tMfn2)对大鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的作用,探讨tMfn2基因对VSMCs增殖的影响及其相关的信号通路.方法 用携带tMfn2基因和Mfn2基因的重组腺病毒(Adv-tMfn2和Adv-Mfn2)感染VSMCs,检测tMfn2蛋白和Mfn2蛋白在细胞中的表达水平;细胞计数法、四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测VSMCs的增殖;流式细胞术检测tMfn2基因对VSMCs周期的影响;Western blot分析各组磷酸化ERK1/2和磷酸化Raf-1蛋白表达水平的变化;采用方差分析对数据进行统计学处理.结果 Adv-tMfn2和Adv-Mfn2感染VSMCs后能有效表达出相应蛋白;细胞计数和MTT结果显示,tMfn2和Mfn2均使VSMCs增殖受到明显抑制(P<0.01),且前者较后者抑制效果更明显(P<0.01);流式细胞术结果表明tMfn2和Mfn2使多数VSMCs停滞于G0/G1期,细胞比例为(88.01±4.38)%和(67.43±6.21)%,可见tMfn2基因对细胞剧期的影响更明显(P<0.01).进一步研究表明tMfn2比Mfn2更能降低磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)和磷酸化Raf-1(p-Raf-1)的表达水平(P<0.01).结论 与Mfn2基因相比,tMfn2基因更能显著抑制VSMCs增殖,使细胞周期停滞于G0/G1期.这一作用主要通过抑制Ras-Raf-ERK1/2信号通路,下调磷酸化Raf-1蛋白表达,进而抑制ERK1/2的磷酸化而实现.     

赤芍对颈动脉球囊损伤术后兔血管内膜增生的干预作用研究

目的 探讨高脂喂养兔颈动脉球囊损伤术后增殖的血管内膜丝裂素活化蛋白激酶磷酸酶-1(MKP-1)、还原型辅酶I(NADPH)氧化酶亚单位p22phox表达、血管内皮功能及赤芍提取物的干预影响.方法 喂养高脂饲料,并给予高、中、低剂量赤芍提取物(75、50、25 ml,分别含生药75、50、25 g)10周.采用Clowes方法建立兔颈总动脉球囊损伤模型.免疫组化染色测定兔颈动脉新生内膜成分,增殖细胞核抗原(PCNA)及巨噬细胞表达,血管特殊染色观察I型胶原增生,图像分析系统测定新生内膜面积;张力换能器及血管环张力曲线Chart软件测定血管内皮功能;放射免疫法测定血浆血管紧张素Ⅰ(Ang Ⅰ)及醛固酮(ALD)含量;原位杂交染色及逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测增生的血管内膜中MKP-1及p22phox的mRNA表达.结果 赤芍提取物可抑制I型胶原增生,减少PCNA阳性细胞数,减轻新生内膜形成;降低血浆Ang Ⅰ水平及减弱血管对Ang Ⅰ的收缩反应;显著降低p22phox mRNA表达;上调高脂喂养兔颈动脉球囊损伤后MKP-1 tuRNA表达,其中以高剂量组作用最明显(P<0.05或P<0.01).结论 赤芍抑制血管内膜增生作用与保护血管内皮功能有关,其机制可能涉及抗氧化应激、抗血管内皮炎症反应及阻断丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)信号通路有关.     

高迁移率族蛋白B1修饰间充质干细胞对球囊损伤大鼠颈动脉的保护效应

目的 探讨高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1,HMGB1）修饰间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSC）对球囊损伤大鼠颈动脉的作用及分子机制.方法 HMGB1重组腺病毒（ad5 GFP-HMGB1）转染MSC后,实时定量PCR、Western blot和免疫组化法检测MSC中HMGB1、血管内皮生长因子（VEGF）、增殖细胞核抗原（PCNA）的表达水平.构建球囊损伤大鼠颈动脉模型,Evans Blue染色评价损伤血管再内皮化;ELISA检测血清中肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和C反应蛋白（CRP）水平.结果 与对照组和空载ad5 GFP组比较,HMGB1修饰增加MSC中VEGF和PCNA的mRNA和蛋白表达水平（P均＜0.05）.Evans Blue染色显示,与对照组（11.35 ±2.25）和空载ad5 GFP组（36.78 ±3.75）比较,ad5 GFP-HMGB1组（47.66±9.11）损伤血管再内皮化面积明显增加,差异均具有统计学意义（P均＜0.01）.ELISA结果显示,HMGB1修饰MSC能降低颈动脉损伤大鼠血清中TNF-α和CRP的表达水平（P均＜0.05）.结论 HMGB1修饰MSC对大鼠颈动脉损伤具有保护效应,其机制可能与上调VEGF和PCNA表达及抑制炎症反应有关.HMGB1可能是MSC修复内皮过程中的一个新的治疗靶点.     

颈动脉球囊损伤大鼠白细胞介素6、白细胞介素10及白细胞介素17A mRNA表达:罗格列酮干预的意义

背景:炎症在球囊损伤后血管增生中起重要作用,抑制炎症的发生、发展可以减少血管成形后再狭窄.研究表明PPAR_Y激动剂对抑制炎症发生有一定作用.目的:观察大鼠颈动脉损伤后炎症因子的变化及应用PPAR_Y激动剂罗格列酮干预后的表达变化.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2009-01/06在深圳市人民医院中心实验室完成.材料:SPF级雄性SD大鼠,体质量350 g左右,用于制备颈动脉球囊导管损伤模型.方法:36只SD大鼠随机数字表法分为3组,每组12只.对照组:生理盐水灌胃4 d后行假手术,术后13 d予生理盐水灌胃;球囊损伤组:生理盐水灌胃4 d后行左侧颈总动脉行球囊损伤,术后予生理盐水灌胃13d;罗格列酮组:罗格列酮灌胃4d后行左侧颈总动脉球囊损伤,术后罗格列酮灌胃13d.主要观察指标:术后14d麻醉处死并取左侧颈总动脉,损伤血管行苏木精-伊红染色,观察内膜变化.Real time RT-PCR检测大鼠损伤血管组织中自细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素17A mRNA水平.Western Blot检测大鼠损伤血管组织中核因子kB水平.结果:36只大鼠因造模失败和死亡排除5只,进入结果分析31只.①罗格列酮组白细胞介素6、白细胞介素17A mRNA表达水平明显低于球囊损伤组但高于对照组(P<0.05).罗格列酮组白细胞介素10 mRNA表达高于球囊损伤组和对照组(P<0.05).②罗格列酮组核因子kB水平明显低于球囊损伤组但高于对照组(P<0.05).③球囊损伤后,内膜面积增厚,内膜/中膜比率增长,与对照组相比,差异有显著性意义(P<0.05).罗格列酮治疗后内膜面积及内膜面积/中膜面积较球囊损伤减小但高于对照组(P<0.05).结论:罗格列酮通过核因子kB调节白细胞介素6、白细胞介素10、白细胞介素17A mRNA表达,调节炎症因子的平衡,抑制损伤血管的炎症反应,减轻损伤血管的狭窄.     

Dominant negative c-jun gene transfer inhibits vascular smooth muscle cell proliferation and neointimal hyperplasia in rats

We previously reported that activator protein-1 (AP-1), containing c-Jun, is rapidly activated in balloon-injured artery. Therefore, we examined the role of c-Jun in vascular smooth muscle cell (SMC) proliferation, by using in vitro and in vivo gene transfer techniques. (1) Serum (2%) stimulation significantly increased AP-1 DNA binding activity in aortic SMCs, followed by the increase in both 3H-thymidine incorporation and cell number. Aortic SMCs were infected with recombinant adenovirus containing TAM67, a dominant negative c-Jun lacking transactivation domain of wild c-Jun (Ad-DN-c-Jun), to specifically inhibit AP-1. Ad-DN-c-Jun significantly inhibited serum-induced SMC proliferation, by inhibiting the entrance of SMC into S phase. (2) The effect of DN-c-Jun was examined on balloon injury-induced intimal hyperplasia in rats. Before balloon injury, DN-c-Jun was transfected into rat carotid artery using the hemagglutinating virus of Japan-liposome method. In vivo transfection of DN-c-Jun significantly inhibited vascular SMC proliferation in the intima and the media and subsequently prevented intimal thickening at 14 days after balloon injury. We obtained the first evidence that DN-c-Jun gene transfer prevented vascular SMC proliferation in vitro and in vivo, and c-Jun was involved in balloon injury-induced intimal hyperplasia. Thus, AP-1 seems to be the new therapeutic target for treatment of vascular diseases.     

Local delivery of dexamethasone for prevention of neointimal proliferation in a rat model of balloon angioplasty.

A periadventitial polymer system is an alternative local drug delivery technique to obtain and maintain high tissue levels of the drug at the site of vascular injury. To determine if local periadventitial delivery of dexamethasone decreases neointimal proliferation after balloon vascular injury, in three groups of Sprague-Dawley rats, 5% dexamethasone, 0.5% dexamethasone, and placebo silicone polymers were implanted around the left common carotid artery after balloon injury. In a fourth group, placebo polymers were implanted without balloon injury. Dexamethasone serum and tissue levels after polymer implantation were significantly higher in the 5% dexamethasone group compared with the 0.5% dexamethasone group. There was no neointima formation in any of the arterial segments covered with placebo polymers for 3 wk, but without balloon injury. In the arterial segments covered by the 5 and 0.5% dexamethasone polymers, there was a 76 and 75% reduction in intima/media ratios, respectively, compared with the placebo group (5% dexamethasone, 0.26 +/- 0.04; 0.5% dexamethasone, 0.27 +/- 0.03; placebo, 1.09 +/- 0.16, respectively; P < 0.0001). These results suggest that: (a) silicone polymers wrapped around the common carotid arteries for 3 wk did not, without balloon injury, stimulate neointimal proliferation in the rat model; (b) the activity of the drug-eluting polymer for suppressing intimal proliferation was chiefly, but not exclusively, site specific; and (c) transadventitial local delivery of dexamethasone at two different doses markedly inhibits neointimal proliferation after balloon vascular injury.     

骨髓间充质干细胞移植后颈动脉损伤球囊核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达

背景:炎症反应在经皮腔内冠状动脉支架置入后再狭窄的发生中起了重要作用。近年的研究发现,骨髓间充质干细胞具有较强的免疫调节特性。然而骨髓间充质干细胞对损伤血管炎症反应影响的报道较少。目的:观察骨髓间充质干细胞移植对兔颈动脉球囊损伤后核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原表达的影响,分析其与内膜增殖作用的相关性。方法:制作颈动脉粥样硬化狭窄兔模型36只,随机分成2组,骨髓间充质干细胞移植组球囊损伤后接受4’,6-二脒基-2-苯基吲哚标记的骨髓间充质干细胞移植,对照组球囊损伤后接受等量的PBS液注射。造模前和细胞移植后7,14,28d分别抽取外周血,ELIAS法检测血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的质量浓度;细胞移植后14d取血管组织,采用免疫组织化学分析法测定局部组织核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达,细胞移植后28d对血管组织行苏木精-伊红染色检测血管形态学变化。结果与结论:细胞移植后14d骨髓间充质干细胞移植组损伤血管局部核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达均较对照组明显减少(P<0.05)。细胞移植后7,14,28d骨髓间充质干细胞移植组血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6质量浓度均较对照组显著降低(P<0.05)。细胞移植后28d骨髓间充质干细胞移植组新生内膜面积、新生内膜/中膜面积及血管狭窄率均较对照组显著降低(P<0.05)。提示骨髓间充质干细胞可能通过抑制损伤血管核转录因子κBp65活性,减轻炎症反应进而下调增殖细胞核抗原的表达,对抑制损伤血管新生内膜的增殖可能发挥有益作用。     

核因子κB对血管成形术后平滑肌细胞增殖和新生内膜形成的影响(英文)

背景:血管壁机械性损伤后的炎症和增殖效应是血管再狭窄的主要原因。核因子κB/Rel家族中的核因子κB在多种细胞类型中表达,激活一系列与血管壁病理生理相关的靶基因。目的:探讨核因子κB的反义和诱骗性寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖以及大鼠颈动脉球囊损伤后血管新生内膜和单核细胞化学趋化因子的作用。设计:随机对照动物实验。单位:上海交通大学医学院附属瑞金医院心内科。材料:3个月龄雄性SD大鼠126只,350～380g。引物合成和寡核苷酸合成:根据文献及国际互联网cDNA文库检索、设计,由上海生物工程公司合成;寡核苷酸合成:全硫代修饰,由上海生物工程有限公司合成。方法:实验于2001-05/2003-03在上海交通大学医学院细胞生物学实验室和瑞金医院心血管实验室完成。采用贴块法原代培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞,实验选用3～5代血管平滑肌细胞。检测增殖的平滑肌细胞内增殖细胞核抗原和核因子κB蛋白水平。制作大鼠血管球囊损伤模型。SD大鼠随机分为7组,正常组:除球囊损伤外,其余手术操作同其他组相同;反义组;正义组;诱骗组;Scramble组;反义 诱骗组;模型组。每组分为6个时相点(6h,1,3,5,7,14d),每个时相点3只大鼠。检测血管球囊损伤后新生内膜形成以及单核细胞化学趋化因子1、核因子κB p65和ERK2的表达水平。主要观察指标:①核因子κB p65寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖的效应。②核因子κB p65基因表达定位和蛋白合成。③大鼠颈动脉球囊损伤后病理形态学改变。④单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达。⑤免疫组织化学检测球囊损伤后血管壁单核细胞化学趋化因子1的蛋白质表达。⑥Western blot检测球囊损伤后血管壁核因子κB p65,ERK2的蛋白合成。结果:①增殖的平滑肌细胞内增殖标记物增殖细胞核抗原表达增加。②增殖的平滑肌细胞浆、细胞核内均有核因子κB p65的基因表达;核因子κB p65蛋白水平增加。观察核因子κB p65基因表达水平,反义核酸组较对照正义组降低53.66%,诱骗性寡核苷酸组较诱骗对照组降低57.35%,差异均有统计学意义(P<0.05)。③核因子κB反义和诱骗寡核苷酸抑制增殖细胞核抗原表达,较阳性对照组分别降低45.12%,45.05%。④大鼠血管球囊损伤后第5天,正义组、诱骗对照组、模型组内膜面积、中膜面积、内膜/中膜比值显著升高(P<0.05),7d后达到高峰。反义组、诱骗组显著降低内膜与中膜比值,反义 诱骗组较单独应用无统计学意义的降低效应。⑤反转录-聚合酶链反应显示球囊损伤后6h,单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达明显增加,1d后表达减少,3,5,7d单核细胞化学趋化因子1 mRNA持续而明显的表达增强,14d后略为降低。反义组、诱骗组、反义 诱骗组在各时间点均能减少单核细胞化学趋化因子1 mRNA表达。⑥Western Blot检测显示血管球囊损伤后6h,核因子κB p65、ERK2蛋白表达微弱,1d后ERK2蛋白表达略增强,核因子κB的蛋白合成明显增强。7d后p65,ERK2的蛋白合成达到高峰。第14天,ERK2与p65的蛋白合成较第7天减弱。反义组、诱骗组、反义 诱骗组较模型组、正义组、诱骗对照组各时相点蛋白合成均减弱。结论:增殖的平滑肌细胞核因子κB p65基因表达增加,核因子κB调控单核细胞化学趋化因子1的基因表达和蛋白质水平。血管球囊损伤后,血管平滑肌细胞增殖有动态性变化。局部转染核因子κB反义和诱骗寡核苷酸能抑制所调控靶基因表达。     

骨髓间充质干细胞移植后颈动脉损伤球囊核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达

背景：炎症反应在经皮腔内冠状动脉支架置入后再狭窄的发生中起了重要作用。近年的研究发现,骨髓间充质干细胞具有较强的免疫调节特性。然而骨髓间充质干细胞对损伤血管炎症反应影响的报道较少。目的：观察骨髓间充质干细胞移植对兔颈动脉球囊损伤后核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原表达的影响,分析其与内膜增殖作用的相关性。方法：制作颈动脉粥样硬化狭窄兔模型36只,随机分成2组,骨髓间充质干细胞移植组球囊损伤后接受4’,6-二脒基-2-苯基吲哚标记的骨髓间充质干细胞移植,对照组球囊损伤后接受等量的PBS液注射。造模前和细胞移植后7,14,28d分别抽取外周血,ELIAS法检测血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的质量浓度;细胞移植后14d取血管组织,采用免疫组织化学分析法测定局部组织核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达,细胞移植后28d对血管组织行苏木精-伊红染色检测血管形态学变化。结果与结论：细胞移植后14d骨髓间充质干细胞移植组损伤血管局部核转录因子κBp65和增殖细胞核抗原的表达均较对照组明显减少（P〈0.05）。细胞移植后7,14,28d骨髓间充质干细胞移植组血清肿瘤坏死因子α和白细胞介素6质量浓度均较对照组显著降低（P〈0.05）。细胞移植后28d骨髓间充质干细胞移植组新生内膜面积、新生内膜/中膜面积及血管狭窄率均较对照组显著降低（P〈0.05）。提示骨髓间充质干细胞可能通过抑制损伤血管核转录因子κBp65活性,减轻炎症反应进而下调增殖细胞核抗原的表达,对抑制损伤血管新生内膜的增殖可能发挥有益作用。     

兔颈总动脉损伤后普罗布考对血管再狭窄的抑制作用

目的 研究普罗布考减轻动脉成形术后再狭窄的作用.方法 将30只新西兰大白兔随机分为普罗布考治疗组和对照组各15只.以球囊损伤颈总动脉,用高胆固醇食物饲养8周后切取颈总动脉,HE染色观察血管管腔面积和内膜面积的变化.采用明胶酶谱法和酶法测定动物血清中基质金属蛋白酶2的酶原(pro-MMP-2)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)及血清胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)的水平.结果 普罗布考组TC、LDL-C、TG和HDDC水平较对照组低,但差异无显著性(P＞0.05);普罗布考组pro-MP-2、MMP-2水平较对照组低,两组比较均具有显著性差异(P＜0.05);普罗布考组颈总动脉新生内膜面积、最大内膜厚度明显低于对照组,两者比较差异具有显著性(P＜0.05);而普罗布考组颈总动脉管腔面积明显高于对照组后,两者比较差异具有显著性(P＜0.05).结论 普罗布考可通过抑制MMPs的途径减轻兔颈总动脉成形术后再狭窄的形成.     

颈动脉球囊损伤模型大鼠核转录因子κB变化与颈动脉血管内膜增生的关系

目的：新生内膜异常增殖是血管成形术后再狭窄的主要原因，但其机制目前还不清楚。观察大鼠颈动脉球囊损伤术后核因子κB表达的变化及其与动脉内膜增生和血管重塑的关系。 方法：实验于2007-01／05在深圳市人民医院动物实验中心完成。①实验材料：SPF级雄性SD大鼠36只，体质量350g左右。②实验方法：将大鼠一侧颈动脉行球囊损伤术作为实验组，另一侧颈动脉作为对照组，分别在颈总动脉球囊损伤后6h，3，7，14，28d后麻醉并处死大鼠，留取两侧颈总动脉标本。③实验评估：应用组织形态学方法检测内膜增生并进行计算机图像分析；同时通过凝胶电泳迁移率实验测定核因子κB的活性。 结果：纳入大鼠36只，因造模失败和死亡排除6只，进入结果分析30只。①球囊损伤后，内膜面积在7，14，28d逐渐增厚，内膜，中层比率增长，与对照组比较，差异显著（P〈0．05）。两组的中膜面积无明显变化。血管重塑指数在损伤后6h最大，之后不断减小。②核因子κB在对照组几乎不表达。而球囊损伤后6h即可见核因子κB表达，并于14d达高峰，28d仍有较强表达。实验组核因子κB各时间点与对照组比较差异均有显著性（P〈0．05）。 结论：大鼠颈动脉球囊损伤术后，核因子κB被迅速激活并持续增加，可能是内膜增生、血管重塑的重要机制之一。